芪玉三龙汤对肺癌小鼠肿瘤组织TLR4/MyD88/NF-κB通路分子表达的影响

目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠肿瘤组织TLR4/MyD88/NF-κB通路相关分子表达的影响。方法:基于前期研究基础,采用LLC细胞构建肺癌移植瘤小鼠模型,造模成功后随机分为模型组、顺铂组、芪玉三龙汤20.1 g/kg、40.2 g/kg、80.5 g/kg、芪玉三龙汤80.5 g/kg+顺铂3.67 mg/kg组,每组20只移植瘤小鼠。灌胃相应药物或生理盐水,联合组灌胃及腹腔注射给予,连续治疗21天,剥离瘤组织,称取瘤质量,计算抑瘤率。HE常规染色,光镜下观察肿瘤组织病理形态学。RT-qPCR、Western Blot法检测各组小鼠肿瘤组织中TLR4/MyD88/NF-κB通路相关基因和蛋白表达水平。结果:芪玉三龙汤具有移植瘤抑制作用,量效关系明显,与顺铂联用具有明显协同作用。光镜下观察模型组肿瘤细胞排列紊乱,周围未见坏死肿瘤细胞,而芪玉三龙汤20.1 g/kg、40.2 g/kg、80.5 g/kg组可见不同程度的坏死肿瘤细胞,其中以80.5 g/kg组最为明显。同时该复方能够下调TLR4/MyD88/NF-κB通路中TLR4、MyD88、IRAK、TRAF6、NF-κB及IκB基因和蛋白的表达水平,量效关系明显,且与顺铂联用具有明显协同作用。结论:结合前期研究基础,芪玉三龙汤的抑瘤作用可能与其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,改善免疫功能有关。     

四君子丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织增殖及凋亡的影响

目的观察四君子丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织生长抑制作用及肿瘤细胞凋亡的影响。方法在小鼠右侧腋窝皮下,接种浓度为1×107个/ml的小鼠肺癌Lewis细胞悬液0.1ml,模型建立成功后将小鼠分为4组:Lewis肺癌组、Lewis肺癌中药治疗组、Lewis肺癌中药预防组、Lewis肺癌顺铂组。Lewis肺癌中药治疗组:成瘤后灌胃四君子丸0.0936g/10g,每天一次,连续14d;Lewis肺癌中药预防组:造模开始灌胃四君子丸0.0936g/10g,每天一次,成瘤后加14d;Lewis肺癌顺铂组:腹腔注射0.05mg/10g,每周一次,持续2次。采用游标卡尺测量移植瘤直径,并计算肿瘤体积、相对肿瘤体积和肿瘤增殖率,采用TUNEL法测定肿瘤组织细胞凋亡情况。结果和Lewis肺癌组比较,中药治疗组、中药预防组、顺铂组肿瘤体积、相对肿瘤体积显著降低(P0.01);中药治疗组、中药预防组和顺铂组相对肿瘤增殖率分别为42.35%、45.47%,41.02%,且和Lewis肺癌组比较有显著性差异(P0.01);tunel染色结果显示:Lewis肺癌组肿瘤组织有少量凋亡细胞,Lewis肺癌中药治疗组、Lewis肺癌中药预防组和顺铂组凋亡细胞数量显著增多,和Lewis肺癌组比较,中药治疗组、中药预防组和顺铂组凋亡指数显著升高(P0.01)。结论四君子丸促进Lewis肺癌小鼠模型肿瘤组织中细胞凋亡,进而抑制肿瘤增殖。     

姜黄素对急性肺损伤小鼠炎症反应的改善作用

目的考察姜黄素对急性肺损伤小鼠炎症反应的改善作用。方法 50只小鼠随机分为对照组、急性肺损伤组、姜黄素干预组(200 mg/kg)、TLR4激动剂组和TLR4抑制剂组,采用腹腔注射脂多糖(5 mg/kg)建立脓毒性休克致急性肺损伤小鼠模型。24 h后, ELISA检测血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及肺组织TLR4、MyD88、NF-κB水平,HE染色观察肺组织病理学形态,并计算肺损伤评分。结果与对照组比较,急性肺损伤组小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平,肺组织TLR4、MyD88、NF-κB表达,肺组织病理学评分显著升高(P0.01);与急性肺损伤组比较,姜黄素干预组小鼠上述指标均显著降低(P0.01);与姜黄素干预组比较,TLR4激动剂组小鼠上述指标均显著升高(P0.01),而TLR4抑制剂组则显著降低(P0.01)。结论姜黄素可通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路来改善急性肺损伤小鼠炎症反应。     

益气除痰方对肺癌A549移植瘤细胞凋亡途径Caspase-4及DNA-PK的影响

目的:探讨益气除痰方是否通过内质网UPR介导的细胞凋亡途径发挥抗肿瘤作用。方法:建立40只肺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型,于接种第7天将小鼠随机分为模型组(生理盐水组)、顺铂注射液组(0.002 g/kg)、益气除痰方(3.0 g/kg)+顺铂注射液(0.002 g/kg)组及益气除痰方低、高剂量组(3.0、6.0 g/kg),每组8只。中药灌胃给药,1次/d,连用21 d。顺铂注射液腹腔注射,1次/d,连用7 d。干预第22天,处死所有小鼠,测量瘤体质量、体积,采用免疫组化及Western blot法检测肿瘤组织中Caspase-4、DNA-PK的表达。结果:与模型组比较,益气除痰方各剂量组及益气除痰方+顺铂注射液组肿瘤体积、肿瘤质量显著降低,肿瘤组织中Caspase-4、DNA-PK表达均显著升高(P0.01);益气除痰方+顺铂注射液组效果优于顺铂注射液组(P0.05)。结论:益气除痰方对小鼠A549肺癌有一定抑制作用,其机制可能与通过升高Caspase-4、DNA-PK蛋白的表达介导细胞凋亡途径有关。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB 信号通路探讨白芍总苷抑制干燥综合征模型小鼠炎症的作用机制

目的研究白芍总苷（TGP）对干燥综合征NOD 小鼠的抗炎效果,并基于TLR4/MyD88/NF-κB 信号通路 探讨其可能的作用机制。方法将40 只NOD 小鼠随机分为模型组、羟氯喹（HCQ）组及白芍总苷低、中、高剂 量组,另取8 只同期BALB/c 小鼠作为正常对照组;干预组分别给予相应药物治疗,模型组和正常对照组给予 等量生理盐水。观察小鼠的平均摄水量、唾液流量及颌下腺组织学改变;ELISA 法检测小鼠血清中白细胞介 素（IL）-17、转化生长因子（IFN）-γ 和TNF-α 的含量;分别采用RT-PCR 和Western Blot 法检测小鼠颌下腺组 织中TLR4、MyD88 和NF-κB mRNA 及蛋白的表达。结果与模型组小鼠比,经白芍总苷和羟氯喹干预后小 鼠平均摄水量减少,唾液流量增加（P＜0.05,P＜0.01）,颌下腺病理损害减轻。模型组小鼠血清IL-17、 IFN-γ 和TNF-α 含量较正常对照组明显升高（P＜0.01）,白芍总苷低、中、高剂量和羟氯喹均可明显降低NOD 小鼠血清IL-17、IFN-γ 和TNF-α 的含量（P＜0.05,P＜0.01）。RT-PCR 和Western Blot 法检测结果显示,模 型组小鼠颌下腺TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 及蛋白的表达较正常对照组明显升高（P＜0.01）,白芍总苷低、 中、高剂量和羟氯喹均可明显降低NOD 小鼠TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 及蛋白的表达（P＜0.05,P＜ 0.01）。结论白芍总苷可明显减轻干燥综合征小鼠的炎症反应,其可能通过调节TLR4/MyD88/NF-κB 信号通 路活性,从而减少炎症因子分泌,最终发挥抗炎作用。     

大黄素对荷A549肺癌小鼠肿瘤的疗效及其作用机理研究

目的探讨大黄素(emodin)对荷A549肺癌小鼠肿瘤生长的影响及抗肿瘤机制。方法以PBS作为阴性对照,顺铂作为阳性对照,分析大黄素对肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响;建立荷A549肺癌小鼠模型,随机分为模型组、大黄素组和顺铂组,大黄素组给予腹腔注射大黄素10 mg·kg-1,顺铂组给予腹腔注射顺铂5mg·kg-1,治疗30 d,观察各组小鼠肿瘤生长、生存率和体质量的变化。采用Western blot分析每组小鼠肿瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)和Caspase-3蛋白质的变化。结果在细胞水平上,与PBS组比较,大黄素组和顺铂组能显著抑制肺癌细胞A549的增殖,并促进肿瘤细胞的凋亡,差异有统计学意义(P0.05)。大黄素组、顺铂组肿瘤生长较模型组明显被抑制,而生存率较模型组明显增加(P0.05)。顺铂组小鼠体质量较大黄素组和模型组明显下降(P0.05),而大黄素组与模型组小鼠体质量比较无统计学意义(P0.05)。大黄素组和顺铂组小鼠肿瘤组织中PCNA的表达水平较模型组明显下降,而Caspase-3蛋白水平较模型组明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论大黄素能抑制A549细胞的生长,促进肿瘤细胞凋亡,具有明显抑制肿瘤组织生长作用,且毒副作用较小。     

理肺消积丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的:观察理肺消积丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的影响作用。方法:将50只小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、理肺消积丸组[240μg/(g·d)]、顺铂组[0.5μg/(g·d)]、联合组[理肺消积丸240μg/(g·d)+顺铂0.5μg/(g·d)]。采用皮下接种法建立Lewis肺癌小鼠模型,制备模型次日进行药物干预。2周后分别采用活体成像技术检测小鼠体内肿瘤生长情况,HE染色评价肿瘤组织病理学形态,免疫组化技术观察肿瘤细胞增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(gene of phosphate and tension homology deleted on chromosome ten,PTEN)的表达情况,TUNEL技术评价肿瘤细胞凋亡情况。结果:模型对照组小鼠体内肿瘤增殖明显,肿瘤细胞异型性明显、核分裂象多见,PCNA蛋白表达程度极高,而细胞凋亡率及PTEN蛋白表达量极低。与模型对照组对比,理肺消积丸组的肿瘤生长受到抵制,肿瘤细胞异型性及核分裂象减少,PCNA蛋白表达下降,肿瘤细胞凋亡率升高,PTEN蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。而顺铂组和联合组除PTEN蛋白表达较模型对照组差异无统计学意义外,其余指标均有统计学意义。结论:理肺消积丸可显著抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长,其机制可能与其抑制肺癌细胞增殖、上调细胞凋亡和PTEN蛋白表达有关。     

扶正抗癌方对Lewis肺癌荷瘤小鼠肺癌基因Bcl-2、抑癌基因Bax及血管内皮生长因子、表皮生长因子受体、金属蛋白酶表达的影响

目的:观察扶正抗癌方对小鼠Lewis肺癌抗转移机制的影响。方法:选取C57BL/6小鼠50只,雌雄各半,每只小鼠腋窝下接种肿瘤细胞0. 2 m L造模,24 h后,完全随机分为对照组、顺铂组、扶正抗癌方低、中、高剂量组,每组10只。分别给药21 d后取出完整肿瘤组织称重计算抑瘤率,同时用实时荧光定量PCR检测Lewis肺癌组织Bcl-2和Bax mRNA的表达,免疫组化检测Lewis肺癌组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达,用蛋白质印迹法(WB法)检测Lewis肺癌组织血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子受体(EGFR)的表达。结果:与模型组小鼠比较,扶正抗癌方药可以呈剂量依赖性抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长,显著升高Lewis肺癌组织中Bax mRNA表达,降低Bcl-2 mRNA、MMP-9蛋白表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P 0. 05),其中高剂量组在升高Lewis肺癌组织中Bax mRNA表达、降低Bcl-2 mRNA表达方面与顺铂组比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。同时模型组Lewis肺癌组织中VEGF、EGFR表达显著升高,扶正抗癌方药可显著降低Lewis肺癌组织中VEGF、EGFR表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P 0. 05),与顺铂组比较,无统计学意义(P 0. 05)。结论:虽然扶正抗癌方总体上较顺铂作用偏弱,但依然能有效抑制肺癌细胞增殖,抑制肺癌细胞Bcl-2基因的表达,激活Bax的高表达,下调肺癌细胞中VEGF、EGFR、MMP的表达。     

补肺化瘀汤对气虚血瘀证Lewis肺癌小鼠的影响

目的研究补肺化瘀汤对气虚血瘀证Lewis肺癌小鼠的影响。方法采用多因素刺激,通过疲劳、惊恐、高脂饮食等刺激方法建立气虚血瘀证,小鼠随机分为对照组、气虚血瘀组及补肺化瘀汤低、中、高剂量组(0.7、1.4、2.8 g/kg),灌胃给药15 d,1次/d,检测气虚血瘀证小鼠血液流变学指标。原位接种Lewis肺癌细胞于气虚血瘀证小鼠腋下建立气虚血瘀证小鼠Lewis肺癌模型,分为模型组、阳性药对照组(1 mg/kg顺铂)及补肺化瘀汤低、中、高剂量组(0.7、1.4、2.8 g/kg),灌胃给药15 d,1次/d,记录Lewis肺癌气虚血瘀证小鼠体质量、肿瘤体积、肿瘤重量、脏器指数,TUNEL染色考察肿瘤组织凋亡,Western Blot检测肿瘤组织中凋亡蛋白。结果补肺化瘀汤能显著改善气虚血瘀证小鼠血液流变指标(血液黏度、血浆粘度、凝血功能)(P0.05,P0.01)。补肺化瘀汤能显著减小气虚血瘀证Lewis肺癌小鼠肿瘤重量、体积(P0.05,P0.01),诱导肿瘤组织凋亡,显著抑制Bcl-2蛋白表达(P0.01),促进cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达(P0.01)。结论补肺化瘀汤抑制Lewis肺癌气虚血瘀证小鼠肿瘤生长,其机制可能与诱导肿瘤组织凋亡有关。     

平喘方对哮喘小鼠NF-κB信号通路的调控及对TLR4 mRNA和蛋白表达的影响

目的研究平喘方通过调节核因子-K B(NF-K B)信号通路对哮喘小鼠的作用及其对Toll样受体4(TLR4)mRNA和蛋白表达的影响。方法将60只SPF级雄性Balb/c小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组、平喘方组,每组15只。除空白组外,其余组均采用先卵清蛋白(OVA)+氢氧化铝凝胶[AI(OH)3]腹腔注射致敏,采用OVA雾化激发的方法来建立哮喘模型。地塞米松组、平喘方组分别予0.075 mg/mL地塞米松溶液、5.33 g/mL平喘方灌胃治疗1周,空白组、模型组给予等量生理盐水灌胃。末次给药24 h后,采用HE、Masson染色观察肺组织病理变化,ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,Western Blot观察肺组织中NF-κB亚单位(p65)、NF-κB的抑制蛋白(IκBα)、TLR4、髓样分化因子(MyD88)蛋白表达,RT-PCR法观察p65、IκBα、TLR4、MyD88 mRNA水平。结果HE及Masson染色可见模型组小鼠肺组织明显炎症细胞浸润,上皮基底膜增厚,胶原纤维增多,平喘方组小鼠肺部炎性细胞浸润明显减轻,胶原纤维面积减小;与空白组比较,模型组小鼠BALF中IL-6、TNF-α浓度,肺组织中p65、MyD88蛋白表达及mRNA水平,气管中TLR4mRNA及蛋白表达水平均升高(均P<0.01),IκBα蛋白表达及mRNA水平降低(P<0.01);与模型组比较,地塞米松组和平喘方组BALF中IL-6、TNF-α浓度均降低,MyD88、p65、TLR4蛋白表达及mRNA水平下调(P<0.01,P<0.05),地塞米松组IκBα蛋白表达及mRNA水平升高(均P<0.01),平喘方组IκBαmRNA水平升高(P<0.01),IκBα蛋白表达上调,但差异无统计学意义(P>0.05)。与地塞米松组比较,平喘方组BALF中IL-6、TNF-α因子水平、p65 mRNA水平、TLR4 mRNA水平、MyD88蛋白表达及mRNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),p65及TLR4蛋白表达升高(P<0.05)。结论平喘方对OVA诱导哮喘小鼠的气道炎症有较好的改善作用,其机制可能与降低TLR4及MyD88活性,调控NF-κB信号通路有关。     

消岩汤对肺癌恶病质小鼠肿瘤生长的影响

目的 研究消岩汤对肺癌恶病质小鼠肿瘤生长的影响,并探讨其可能作用机制.方法 将40只小鼠分为健康小鼠组(健康组)、Lewis肺癌小鼠组(肺癌组)、Lewis肺癌小鼠消岩汤组(消岩汤组)、Lewis肺癌小鼠醋酸甲地孕酮组(孕酮组),每组10只.连续给药12d后,测定血清瘦素水平及瘤组织中p53分子表达及C-myc蛋白表达.结果 除健康组外,消岩汤组、孕酮组小鼠反应性及体毛较肺癌组明显改善,进食量明显增加(P＜0.01),其中消岩汤组进食量多于孕酮组(P＜0.05).肺癌组小鼠反应性及体毛情况恶化最明显.3组进食量均低于健康组(P＜0.01).给药后处死各组小鼠,肺癌组、消岩汤组、孕酮组小鼠体重均比健康组小鼠体重减轻(P＜0.05或P＜0.01).至给药第12天,消岩汤组、孕酮组瘤重明显较肺癌组轻(P＜0.01),消岩汤组瘤重低于孕酮组(P＜0.01).肺癌组、消岩汤组、孕酮组血清瘦素水平均低于健康组,其中肺癌组、孕酮组与健康组比较下降明显(P＜0.05);而孕酮组低于消岩汤组(P＜0.05).消岩汤组、孕酮组的p53及C-myc蛋白表达水平与肺癌组比较差异均有统计学意义(P＜0.01),消岩汤组与孕酮组比较差异亦有统计学意义(P＜0.01).结论 中药消岩汤具有增加恶病质小鼠食量和体重、改善机体机能、升高血清中瘦素受体水平、促进p53的表达并抑制C-myc表达的作用,达到抑制肿瘤生长的作用.     

消癌解毒方联合顺铂通过调控组蛋白去甲基化酶抑制4T1荷瘤小鼠肿瘤生长

目的:观察消癌解毒方联合顺铂抑制4T1荷瘤小鼠肿瘤生长的作用及机制。方法:BALB/c小鼠皮下接种4T1乳腺癌细胞形成荷瘤模型,分别单独给予顺铂(2 mg·kg-1)、消癌解毒方(1×104mg·kg-1)及两者联合用药进行治疗,给药期间称量并记录小鼠体质量和瘤体积,15 d后脱颈处死,剥离并称量瘤块质量,计算抑瘤率,苏木素-伊红(HE)染色观察心、肝、脾、肾和瘤块的病理情况,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)观察肿瘤细胞凋亡情况并统计凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),组蛋白去甲基化酶1(LSD1),组蛋白H3(Histone H3),组蛋白H3第4位赖氨酸二甲基化(Histone H3K4me2),组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(Histone H3K9me2)的表达水平。结果:与模型组相比,顺铂给药组小鼠体质量均有下降,其中消癌解毒方+顺铂组较单用顺铂组体质量增加(P0.01);消癌解毒方+顺铂较单用顺铂更能缩小移植瘤体积,提高抑瘤率(P0.01);更明显提高了肿瘤细胞凋亡率(P0.05,P0.01);更明显下调肿瘤组织Bcl-2表达水平,上调Bax表达水平(P0.05,P0.01);各给药组均能下调LSD1蛋白的表达,增加组蛋白H3K4,H3K9的二甲基化,消癌解毒方+顺铂组作用最为明显(P0.05,P0.01)。结论:消癌解毒方+顺铂用药对于4T1荷瘤小鼠抑瘤作用明显,其机制可能与下调组蛋白去甲基化酶水平有关。     

补中益气汤联合顺铂对小鼠移植性肺癌增效减毒的协同作用研究

目的:探讨补中益气汤联合顺铂对小鼠移植性肺癌增效减毒的协同作用。方法:建立Lewis肺癌细胞荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、顺铂组、补中益气汤组、联合给药组,每组10只。各组给药22 d后解剖小鼠,称重瘤块质量计算抑瘤率,并在显微镜下计数肺转移瘤灶的个数;ELISA检测小鼠血清中IL-2、IL-10、IFN-γ、TNF-α的水平;流式细胞术检测小鼠外周血CD4+CD2+5Foxp3+调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)的表达比例; WB检测小鼠移植性肺癌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、Fas、Fasl和耐药相关蛋白MRP1、ERCC1的表达情况。结果:与模型组相比,补中益气汤以及联合顺铂均能有效抑制肿瘤的生长和肺转移灶的数量(P 0. 05)。补中益气汤、顺铂以及联合给药均能显著调节IL-2、IL-10、IFN-γ、TNF-α的表达水平,且联合组的IL-2、IL-10、TNF-α水平差异极显著(P 0. 01)。流式分析结果显示各组给药后均能显著降低小鼠外周血CD4+CD2+5Foxp3+Treg细胞比例,且联合给药组的降低效果最明显,与顺铂组相比差异显著(P 0. 05)。WB结果显示补中益气汤、顺铂以及联合给药均能促进促凋亡相关蛋白Bax、p53、Fas、Fasl的表达,降低抑凋亡相关蛋白Bcl2的蛋白表达(P 0. 05)。此外,与模型组相比,顺铂组的多药耐药相关蛋白MRP1、ERCC1的表达显著升高(P 0. 05),而补中益气汤联合顺铂给药后能显著降低MRP1、ERCC1的蛋白表达(P 0. 05)。结论:补中益气汤联合顺铂对Lewis肺癌细胞荷瘤小鼠抗肿瘤具有增效减毒的作用,其机制可能与调节细胞因子IL-2、IL-10、IFN-γ、TNF-α表达和Treg细胞比例,以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、Fas、Fasl和耐药相关蛋白MRP1、ERCC1的表达有关。     

基于Toll样受体4/髓样分化因子88/核因子-κB通路探讨电针对溃疡性结肠炎大鼠的干预机制

目的:探讨电针对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的保护作用以及对Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、柳氮磺吡啶组、低强度电针组、高强度电针组,每组8只。采用2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠复制UC模型。两个电针组电针"天枢""关元""足三里"("天枢""足三里"双侧交替取穴),低强度电针组电流强度1 mA,高强度电针组电流强度5 mA,每次15 min,每日1次,柳氮磺砒啶组大鼠每天给予柳氮磺砒啶混悬液灌胃1次,每次3 mL,均治疗15 d。HE染色法观察结肠病理情况,评估组织学损伤指数(TDI);ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-4、IL-10、IL-17及前列腺素E_2(PGE_2)水平;采用免疫组织化学法及荧光定量PCR法检测结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及mRNA的表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量、血清IL-4和IL-10水平明显降低(P0.05),TDI、血清IL-17和PGE_2水平、结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及mRNA表达明显升高(P0.05)。与模型组比较,柳氮磺砒啶组及电针各组大鼠的体质量、血清IL-4和IL-10水平升高(P0.05),TDI、血清IL-17和PGE_2水平、结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及mRNA表达明显降低(P0.05)。与柳氮磺砒啶组比较,低强度电针组大鼠TDI、结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB的蛋白及mRNA表达明显升高(P0.05);高强度电针组大鼠体质量明显升高(P0.05),TDI、结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB的蛋白及mRNA表达明显降低(P0.05)。与低强度电针组比较,高强度电针组大鼠的体质量升高,TLR4、MyD88、NF-κB蛋白和mRNA表达均明显降低(P0.05)。结论:电针可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路并减少致炎细胞因子的释放达到保护UC大鼠结肠黏膜组织的目的,且高强度电针效果更优。     

调气消积汤对Lewis肺癌移植瘤MVD、MMP-9影响的实验研究

目的:探讨调气消积汤对Lewis肺癌移植瘤MVD、MMP-9表达的影响。方法:将48只C57BL/6J小鼠常规接种Lewis肺癌,5天后选取荷瘤成功的小鼠随机分4组:荷瘤对照组(MG)、调气消积汤组(TG)、顺铂组(DG)、综合组(调气消积汤+顺铂组)(ZG),每组10只。每天分别予饮用水、调气消积汤各0.4ml,灌胃12天;隔日1次腹腔注射生理盐水、顺铂0.13ml共3天。停药后24小时取材,应用免疫组化法检测Lewis肺癌小鼠肿瘤组织的微血管密度(MVD)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的蛋白表达。结果:各治疗组的MVD和MMP-9蛋白的表达均低于荷瘤对照组,差异具有统计学意义(P0.05或P0.01);调气消积汤组MVD和MMP-9蛋白的表达与顺铂组相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论:调气消积汤能降低Lewis肺癌移植瘤的微血管密度(MVD);并通过下调基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达抑制肿瘤血管形成。     

委陵菜酸对幽门螺杆菌诱导GES-1细胞损伤的保护作用

目的探索委陵菜酸对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响。方法 GES-1细胞与Hp共培养,给予委陵菜酸和NOD样受体家族3 (NOD-like receptor family 3,NLRP3)抑制剂MCC950,考察各组细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率、集落形成、凋亡率、线粒体膜电位和活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)变化;采用ELISA法检测各组细胞上清液中单核细胞趋化蛋白-1 (monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、角质细胞趋化因子(keratinocyte chemokines,KC)、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-Iβ (interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-18、IL-4和IL-10水平;采用试剂盒检测各组细胞谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用 qRT-PCR 检测各组细胞 Toll 样受体 4 (toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子 88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、Bcl-2、Bcl-xl、Bax和BadmRNA表达情况;采用 Western blotting 法检测各组细胞TLR4/NLRP3/核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)和线粒体凋亡信号通路相关蛋白表达情况。结果委陵菜酸显著抑制Hp诱导的GES-1细胞LDH释放率(P0.05、0.01),促进细胞集落形成(P0.05、0.01),抑制细胞凋亡(P0.05、0.01);升高细胞线粒体膜电位(P0.01),降低ROS水平(P0.01);降低上清液中MCP-1、KC、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18水平(P0.01),升高IL-4和IL-10水平(P0.01);升高细胞GSH-Px、SOD和CAT活性(P0.01),降低MDA含量(P0.01);降低细胞TLR4、MyD88、Bax、Bad mRNA表达水平(P0.01),升高Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达水平和Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bad (P0.01);下调细胞 TLR4、MyD88、磷酸化 IκB激酶β (phosphorylated inhibitor kappa B kinase β,p-IKKβ)、p-IκBα、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1 前体(pro-Caspase-1)、Caspase-1、硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)、pro-IL-lβ、pro-IL-18、Bax、Bad、细胞色素 C、凋亡酶激活因子-1 (apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)、剪切型 Caspase-9 (cleaved Caspase-9)、cleaved Caspase-3 和胞核 p65 蛋白表达水平(P0.01),上调 Bcl-2、Bcl-xl、pro-Caspase-9、pro-Caspase-3 和胞质 p65 蛋白表达水平(P0.01)。结论委陵菜酸对Hp诱导的GES-1细胞损伤具有明显保护作用,其作用机制可能与增强内源性抗氧化系统功能、抑制氧化应激、炎性反应及TLR4/NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路激活,从而减少线粒体介导的凋亡密切相关。     

加味当归贝母苦参丸对MFC胃癌荷瘤小鼠瘤组织Toll样受体通路分子的影响

目的观察加味当归贝母苦参丸对MFC胃癌荷瘤小鼠瘤组织Toll样受体(TLR2、TLR4、TLR6)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和髓分化因子88(My D88)表达的影响,探讨其相关的作用机制。方法建立MFC胃癌荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤试验。将筛选合格的48只MFC胃癌荷瘤小鼠随机分为模型组,阳性对照组(顺铂组),加味当归贝母苦参丸高剂量组(当高组)、低剂量组(当低组)和顺铂联合加味当归贝母苦参丸高剂量组(顺高组)、低剂量组(顺低组),各给药组给予相应药物灌胃,连续14 d,观察肿瘤生长情况及小鼠一般情况、肿瘤大体标本及HE染色后组织形态;RT-q PCR和免疫组化分别检测肿瘤组织TLR2、TLR4、TLR6、TRAF6和My D88的表达。结果模型组肿瘤细胞丰富,细胞大小不一、体积大、核大深染、异型明显,可见小灶性坏死,间质血管丰富;各给药组肿瘤细胞数量减少、排列疏松、细胞体积明显缩小、核固缩,细胞坏死明显增加,间质血管数量减少,胶原纤维增多,其中以顺低组、顺高组较为明显。与模型组比较,各给药组TLR2、TLR4、TLR6、TRAF6和My D88 m RNA和蛋白表达均降低,顺低组、顺高组TLR2、TLR4、TLR6、TRAF6和My D88蛋白着色变浅,呈弱阳性表达,较顺铂组、当高组、当低组蛋白改变更加明显。结论加味当归贝母苦参丸可能通过下调荷瘤小鼠肿瘤组织TLR2、TLR4、TLR6、TRAF6和My D88 m RNA和蛋白的表达,发挥抗肿瘤作用。     

二陈汤加沙参、麦冬对Lewis肺癌小鼠免疫功能及肿瘤血管生成的影响

目的观察二陈汤加沙参、麦冬对Lewis肺癌小鼠免疫功能及肿瘤血管生成的影响,探讨其抗肿瘤的可能作用机制。方法 30只C57BL/6小鼠腋窝皮下注射Lewis肺癌细胞造模。随机分为模型组、中药组和顺铂组,每组10只。模型组予0.4 mL/20 g生理盐水灌胃,中药组予0.4 mL/20 g二陈汤加沙参、麦冬药液灌胃,顺铂组予3 mg/kg顺铂溶液200μL/20 g腹腔注射,每日1次,连续3 d,并予0.4 mL/20 g生理盐水灌胃,每日1次,连续14 d。称定小鼠体质量、瘤质量、胸腺质量和脾质量,计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数;流式细胞术检测脾脏淋巴细胞亚群水平;Western blot检测肿瘤组织血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)-1、VEGFR-2、p-p38、p-JNK的表达。结果与模型组比较,各给药组小鼠瘤质量显著降低(P0.01),组间差异无统计学意义(P0.05),中药组和顺铂组抑瘤率分别为33.64%、46.53%,中药组胸腺指数、CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+、B细胞水平均显著升高,VEGFR-2、p-JNK表达明显降低,顺铂组CD8~+明显升高(P0.05,P0.01);与顺铂组比较,中药组胸腺指数、CD3~+、CD4~+、CD8~+均显著升高,VEGFR-2、p-p38、p-JNK表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论二陈汤加沙参、麦冬可提高Lewis肺癌小鼠免疫功能,同时抑制肿瘤血管生成,其抗肿瘤作用机制可能与抑制VEGFR-2表达、降低p-JNK活性相关。     

益气除痰方对小鼠lewis肺癌细胞凋亡的影响

目的 探讨益气除痰方对小鼠Lewis肺癌生长的抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法 复制C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型,将96只接种Lewis肺癌的小鼠随机分为6组:益气除痰方高、低剂量组,顺铂对照组,顺铂联合中药高、低剂量组,模型组,每组16只。给药1周后停药观察1周,其中一半动物处死观察细胞凋亡相关指标,另一半动物用于观察生存期。结果 与模型组比较,益气除痰方高、低剂量组均能明显降低瘤质量指数,差异有统计学意义(P < 0.05,P < 0.01)。益气除痰方低剂量组肺转移抑制率为 28 %、高剂量组为 52 %,顺铂对照组为 50 %,顺铂联合低剂量组为40 %、高剂量组为50 %,与模型组比较,差异均有统计学意义(P < 0.05)。与模型组比较,益气除痰方组高、低剂量组和顺铂对照组、联合用药组均能明显提高肿瘤细胞凋亡率,差异均有统计学意义(P < 0.05,P < 0.01,P < 0.001)。与模型组比较,益气除痰方低剂量组及顺铂对照组能有效延长模型小鼠的生存期,差异均有统计学意义(P < 0.01)。结论 益气除痰方有抑制肿瘤生长、延长肿瘤动物生存期及促进Lewis肺癌细胞凋亡的作用。     

电针预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠“内关”穴区Toll样受体4、髓样分化因子88及核转录因子-κB基因表达的影响

目的:观察电针预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠"内关"穴区Toll样受体4(TLR 4)、髓样分化因子88(MyD 88)以及核转录因子-κB(NF-κB)mRNA表达的影响,探讨"内关"抗心肌缺血再灌注的作用与TLR 4/MyD 88/NF-κB信号通路的关系。方法:Wistar大鼠随机分成正常组、正常电针组、假手术组、模型组、电针组和假电针组,每组8只。采用左冠状动脉前降支结扎法制备MIRI大鼠模型,造模前5d开始电针预处理,电针组、正常电针组、假电针组针刺"内关"穴,并给予相应的电针干预,每次30min,每日1次,连续5d。Real-time PCR法检测大鼠"内关"穴区TLR 4、MyD 88和NF-κB mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组心电图(ECG)-J点显著升高(P0.01),电针组与模型组和假电针组相比,ECG-J点高度降低(P0.01)。与正常组相比,模型组大鼠"内关"穴区TLR 4、MyD 88和NF-κB mRNA表达水平显著升高(P0.01);电针组与模型组、假电针组相比,"内关"穴区TLR 4、MyD 88和NF-κB mRNA的表达水平降低(P0.05)。结论:电针预处理能降低MIRI大鼠"内关"穴区TLR 4、MyD 88和NF-κB mRNA的表达水平,因此针刺信号的启动-传递-放大可能与TLR 4/MyD 88/NF-κB信号通路有关。