淡豆豉中产γ-氨基丁酸微生物对产毒黄曲霉菌的拮抗作用和毒素合成关键基因mRNA表达的影响

目的 考察从淡豆豉Sojae Semen Praeparatum（SSP）炮制过程中分离的15株产γ-氨基丁酸微生物对产毒黄曲霉菌的拮抗能力并筛选出具有抑制产毒黄曲霉菌生长和降解黄曲霉毒素B₁（aflatoxin B₁,AFB₁）的高效拮抗菌,探究高效拮抗菌发酵产物对黄曲霉毒素（aflatoxins）合成关键基因mRNA表达量的影响。方法 运用平板对峙法与十字交叉法检测15株产γ-氨基丁酸微生物及其发酵产物对产毒黄曲霉标准株（简称：产毒标准株）生长的影响,超高效液相色谱-串联质谱法（ultra performance liquid chromatography mass spectrometry,UPLC-MS/MS）检测15株菌对AFB₁的降解效果,考察其对产毒黄曲霉菌的拮抗能力并筛选出高效拮抗菌;针对高效拮抗菌发酵产物分别运用菌丝干重法检测其对产毒标准株菌丝生长的影响,实时荧光定量PCR（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测其对黄曲霉毒素合成关键基因（aflR、aflD、aflM、aflP）mRNA表达的影响。结果 15株菌及其发酵产物对产毒标准株的生长抑制率分别在15.88%～56.05%和25.74%～52.12%,对AFB₁降解率在2.74%～57.87%,表明它们对产毒黄曲霉菌均有一定的拮抗作用,并筛选出具有高效拮抗作用的黑曲霉菌Aspergillus niger（JC2）和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis（Xd1）。当高效拮抗菌发酵产物加入量为2 000 µL时,JC2和Xd1对产毒标准株菌丝生长的抑制率分别为73.82%和63.34%,且能明显抑制黄曲霉毒素合成关键基因aflR、aflD、aflM、aflP的mRNA表达。结论 淡豆豉炮制中存在既能产γ-氨基丁酸又能明显抑制产毒标准株生长和产毒的拮抗菌,其拮抗作用可能通过抑制产毒标准株菌丝生长和毒素合成关键基因的mRNA表达。     

远志黄曲霉毒素检测及其贮藏过程中黄曲霉菌变化研究

目的 研究不同产地远志中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂（AFB₁、AFB₂、AFG₁、AFG₂）的污染情况及贮藏过程中黄曲霉菌的变化。方法 收集12批不同产地的远志药材,采用性状、显微及DNA分子鉴定方法对其表面的黄曲霉菌进行鉴定;利用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定其黄曲霉毒素含量;通过稀释平板法观察远志在北京贮藏6个月以来其表面黄曲霉菌的变化情况。结果 12批远志药材表面均分离鉴定出了黄曲霉菌,且全部检出黄曲霉毒素,其中33.3%的样品超过《中华人民共和国药典》2020年版中远志项下黄曲霉毒素B₁、黄曲霉毒素总量的限定标准。结合北京的气候条件分析,在温度、湿度较高的夏季,远志表面的黄曲霉菌数量最多,在温、湿度较低的秋冬季节,远志表面的黄曲霉菌数量较低。结论 远志表面黄曲霉毒素污染问题十分严重,贮藏条件的温度、湿度变化对远志表面的黄曲霉菌数量有很大影响,可作为优化远志贮藏条件的参考依据。     

栽培青蒿精油质量标准初步研究

 目的 研究制定栽培青蒿精油的质量标准。方法 水蒸气蒸馏法提取精油，GC-MS法分析精油的化学组成。结果 21批精油样品中共鉴定出72个相对百分含量大于1.00%化合物，其中樟脑（2.58%~37.50%）、龙脑（2.40%~40.58%）、β-石竹烯（2.02%~13.10%）、大根香叶烯-D（0.00%~10.85%），β-石竹烯氧化物（0.00%~10.33%）、匙叶桉油烯醇（0.00%~7.55%）、2-(4a，8-二甲基-1，2，3，4，4a，5，6，7-八氢-2-萘基)-2-丙烯-1-醇（0.00%~5.62%）、杜松醇（0.00%~4.83%）和β-芹子烯（0.00~3.25%）在精油样品中普遍存在；且在16个精油样品中总量均在50.00%以上，最高达85.21%。结论 据文献报道的上述化合物的药理活性并结合本实验的研究结果综合分析，初步制定青蒿精油的质量标准如下：9个化合物在精油中的总含量应该不低于50.00%。     

国产氯沙坦钾片在中国健康志愿者的药动学及生物等效性研究

 目的 评价国产氯沙坦钾片在健康人体的生物等效性。方法 纳入20例中国健康成年男性志愿者，随机分为两组，按自身前后对比双周期交叉给药，晨起空腹口服试验制剂或参比制剂50 mg。使用HPLC-MS/MS法检测单次空腹口服试验制剂与参比制剂后血浆中氯沙坦及其活性代谢产物E-3174的浓度。药代参数的计算与处理及生物等效性评价使用DAS 2.1.1统计分析软件。结果 试验制剂与参比制剂中，原型药物的ρ_max分别为（207.50±68.14），（187.23±89.92）μg·L-1； t_max分别为（1.69±1.70 ），（1.53±0.76）h； AUC_{0-12 h}分别为（457.79±126.46），（442.08±137.48） μg·h·L-1；t_1/2分别为（2.09±0.59），（2.01±0.33） h。代谢产物E-3174的ρ_max分别为（642.05±280.08），（659.91±295.72） μg·L-1 ；t_max分别为（4.10±1.86），（4.23±1.69） h；AUC_{0-12 h}分别为（4 702.39±1 803.18），（4 703.28±1 959.33）μg·h·L-1；t_1/2为（4.82±0.84），（5.13±1.94） h。结论 试验制剂和参比制剂中相应的原型药物和E-3174的主要药代参数差异无统计学意义，试验制剂与参比制剂生物等效。     

HPLC-MS/MS研究国产磷酸奥司他韦胶囊在健康人体的生物等效性

 目的 建立测定血浆中国产磷酸奥司他韦胶囊（商品名：军科奥韦胶囊）活性代谢产物浓度的LC-MS/MS方法，研究军科奥韦胶囊在中国健康男性志愿者的主要药动学参数以及与参比制剂的生物等效性。方法 采用2制剂双周期交叉试验设计，24名受试者分别单剂量口服受试制剂军科奥韦胶囊和达菲参比制剂，用LC-MS/MS测定其活性代谢产物的含量，所得参数经BAPP2.0软件计算药动学参数并考察生物等效性。结果 口服参比制剂及受试制剂后，其活性代谢产物的ρ_max分别为（625.17±147.76）和（633.57±115.28）μg·L^-1；t_max分别为（4.5±1.0）和（4.5±1.2）h；t_1/2分别为（8.13±1.13）和（7.79±0.89）h；MRT分别为（12.09±1.38）和（11.95±1.03）h; AUC_0-τ分别为（7 247.02±1 720.33）和（7 506.16±1 454.36）μg·h·L^-1；AUC_0-∞分别为（7 428.75±1 793.94）和（7 659.99±1 477.83）μg·h·L^-1；受试制剂对参比制剂的相对生物利用度为（105.8±17.7）%。结论 利用方差分析及双单侧t检验分别对受试和参比制剂进行生物等效性评价，军科奥韦胶囊和已上市的达菲胶囊制剂具有生物等效性。     

丹红注射液多元指纹图谱及多成分定量分析研究

目的 采用HPLC-UV-MS法建立丹红注射液多元指纹图谱,并对其中9种主要药效成分同时定量分析。方法 采用Atiantis T3色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为0.05%甲酸水溶液-50%乙腈水溶液,梯度洗脱;质谱检测采用负离子选择离子（SIM）模式。结果 该多元指纹图谱较全面地体现了制剂中2味处方药材丹参与红花的化学信息,11批制剂指纹图谱相似度均在0.988以上。5-羟甲基糠醛、丹参素钠、原儿茶醛、香豆酸、丹酚酸D、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、山柰酚-3-O-芸香糖苷9种成分在各自质量浓度范围内呈良好线性关系,r≥0.999 0;9种化合物的平均加样回收率分别为（99.0±1.4）%、（102.0±1.7）%、（99.3±1.6）%、（97.6±1.6）%、（100.0±1.8）%、（97.9±1.6）%、（100.5±4.4）%、（100.6±2.0）%、（106.0±4.7）%（n＝9）;方法重复性的RSD均小于1.45%;测定的11批制剂中9种成分总量在2.61～3.06 mg/mL。结论 该方法简单、准确、重复性好,多元指纹图谱结合定量测定能更全面地反映丹红注射液的质量,可用于制剂的质量控制。     

GC-MS-AMDIS结合保留指数分析花椒、竹叶花椒挥发油的组成成分

目的：研究不同产地的花椒和竹叶花椒挥发油组成成分及相对含量。方法：采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）和自动质谱退卷积定性系统（AMDIS）结合Kováts保留指数（Retention index,RI）对其化学成分进行检测分析。结果：8批样品共鉴定出86个化合物,其中2批四川产花椒含量最高的化合物为芳樟醇,其含量分别为36.25%,30.91%;2批陕西产花椒含量最高的化合物为柠檬烯,其含量分别为15.63%,17.23%;4批竹叶花椒含量最高的化合物均为芳樟醇,其含量在71.74%~75.03%。结论：花椒挥发油和竹叶花椒挥发油的组成结构之间差异显著;四川产花椒和陕西产花椒可能分属两个不同的化学型。     

水仙内生真菌的分离及抑菌和抗肿瘤活性研究

目的 分离纯化水仙根茎中的内生真菌,并对分离得到的真菌进行抑菌和抗肿瘤活性筛选。方法 用组织分离法分离纯化水仙内生真菌后,以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、大肠杆菌Escherichia coli、绿脓杆菌Pseudomonas aeruginosa、肺炎克雷伯菌Klebsiella pneumoniae和人肝癌细胞HepG2作为受试对象,采用滤纸片法和MTT法对内生真菌菌株发酵液的醋酸乙酯提取物进行抑菌和抗肿瘤活性检测。结果 从水仙根茎共分离到18株内生真菌,各菌株发酵液的醋酸乙酯提取物对4种供试细菌和HepG2细胞都有抑制作用。在质量浓度10 mg/mL时,SX-R202和SX-S102对大肠杆菌和绿脓杆菌抑菌圈直径分别达到18 mm和20 mm;在质量浓度1 mg/mL时,SX-R201、SX-R202、SX-R203和SX-R204对HepG2细胞增殖抑制率分别为（86.0±1.1）%、（89.8±1.3）%、（62.9±0.9）%和（90.6±1.0）%。结合形态学特征和分子生物学鉴定确定SX-R201为尖孢镰刀菌属Fusarium sp. 菌株、SX-R202和SX-R203为青霉属Penicillium sp. 菌株、SX-R204和SX-S102为曲霉属Aspergillus sp. 菌株。结论 水仙内生真菌的抑菌和抗肿瘤效果明显,值得进一步研究。     

苦参碱抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖作用研究

目的: 观察苦参碱对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。 方法: 取对数生长期SK-N-SH细胞,用磺酰罗丹明B（SRB）法检测苦参碱（0.5,1.0,2.0 g·L^-1）作用24,48,72 h后 SK-N-SH细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blot 检测半胱天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-9和Caspase-3蛋白的表达。 结果: 苦参碱对 SK-N-SH细胞增殖具有明显抑制作用,且表现出剂量和时间依赖性。0.5,1.0,2.0 g·L^-1苦参碱作用24,48,72 h后SK-N-SH细胞的抑制率分别为（19.06±3.17）%,（30.18±3.02）%,（38.55±6.12）%;（45.12±4.02）%,（60.45±5.51）%,（71.38±7.91）%;（58.91±4.36）%,（73.44±8.17）%,（88.37±4.57）%。流式细胞仪检测对照组及各浓度组凋亡率分别为（2.45±0.49）%,（12.56±2.21）%,（19.44±4.32）%,（30.12±3.35）%,与对照组比较,苦参碱组的凋亡率均显著性增高（P<0.001）;细胞周期结果显示苦参碱作用SK-N-SH细胞48 h后G₀/G₁期细胞明显增多（P<0.01）,S期细胞明显减少（P<0.01）。苦参碱可显著上调Caspase-9和Caspase-3蛋白表达（P<0.01,P<0.01）。 结论: 苦参碱对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的增殖具有抑制作用,这种作用与其阻滞细胞周期和激活Caspase-9和Caspase-3表达进而诱导产生细胞凋亡有关。     

地西泮固体脂质纳米粒的制备及大鼠经鼻腔给药的药动学研究

 目的 制备地西泮固体脂质纳米粒,评价其制剂学性质,并探讨其经鼻腔给药后的药动学过程。方法 用高温乳化-低温固化法制备地西泮固体脂质纳米粒,考察了其包封率、体外释药、粒径分布、Zeta电位和形态;大鼠经鼻腔给予固体脂质纳米粒或静脉给予地西泮注射液后经股动脉插管采集血样,采用HPLC测定血药浓度,以DAS1.0软件估算药动学参数。结果 制备的地西泮固体脂质纳米粒形态为类球形,平均粒径为(104.4±0.56 nm;Zeta电位为(-18.50±0.98 mV;包封率为(98.8±3%。经鼻腔给药后,地西泮固体脂质纳米粒的t_max为11 min,ρ_max为(0.33±0.01 μg·mL^-1,绝对生物利用度为67.01%。结论 鼻腔给予地西泮固体脂质纳米粒后吸收迅速,绝对生物利用度较高,有望成为治疗癫痫持续状态的新型制剂。     

两种药用花椒挥发油的分析

采用气相色谱-质谱联用技术对两种药用花椒果皮挥发油的化学成分进行了分析。共鉴定出33种成分。并测定了各化合物在挥发油中的百分含量。     

花椒挥发油化学成分的GC-MS分析

用气相色谱-质谱法对山东济南及河南衡水产花椒挥发油化学成分进行了分析。山东济南产花椒共鉴定了36个成分,占挥发油总成分的87％以上;河南衡水产花椒共鉴定了20个成分,占挥发油总成分的74％以上。     

花椒、高良姜挥发油体外抗真菌活性研究

目的 研究花椒挥发油、高良姜挥发油对16株皮肤癣茵的体外抗真菌活性。方法 水蒸气蒸馏法提 取精油,采用培养基药物浓度稀释法对两种挥发油进行抗真菌实验。结果 高良姜挥发油对16株皮肤癣菌最小抑 茵浓度(MIC)为0．78-6．25 μL／mL,最低杀菌浓度(MFC)为3．13-50μL／mL。花椒挥发油除了对上海红色毛癣菌 株,石膏样毛癣菌株及武汉猴毛癣菌株三种菌株MIC为1．56μL／mL,对其余菌株MIC均在25-50μL／mL范围内,MFC 结果同抑菌实验。结论 高良姜挥发油有较强的抑真菌活性,花椒挥发油抗真菌活性次之。     

花椒温通散结作用初探

总结了近年来有关花椒的实验研究报道及古文献考证结果,提出花椒的主要功效在于温通散结,指出从心血管药理学角度探索花椒的功能对于认识花椒作用的本质、指导临床合理用药及花椒的开发利用意义重大     

色度分析花椒黄酮类成分含量与颜色值的相关性

目的:研究花椒黄酮类成分与外观颜色相关性,为花椒品质评价提供参考。方法:引入色度空间系统CIE L*,a*,b*对花椒药材粉末颜色进行客观量化,以总黄酮及黄酮类成分芦丁、金丝桃苷、槲皮素、橙皮苷为指标,研究其与颜色值的相关性。结果:花椒的总黄酮、芦丁、槲皮素含量与L*,a*显著正相关(P0.05),而总黄酮、芦丁与b*无显著相关性,金丝桃苷、槲皮素的含量与颜色值b*显著正相关(P0.05);青椒橙皮苷的含量与L*,a*,b*显著负相关(P0.05)。结论:花椒颜色值与总黄酮、芦丁、金丝桃苷、槲皮素、橙皮苷含量存在一定的相关性。     

花椒水提取物HPLC指纹图谱研究

目的:建立花椒水提取物的HPLC指纹图谱分析方法,为其质量控制提供可靠的依据。方法:采用HPLC方法,色谱柱为COSMOSIL C18柱(4.6μm×250 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长270 nm,流速0.8 mL/min,柱温25℃,进样量10μL。运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会2012 A版)进行相似度评价。结果:15批花椒水提取物指纹图谱中呈现6个共有峰,并指认出两个化学成分羟基-α-山椒素和羟基-β-山椒素,相似度为0.984～0.999,表明花椒水提取物指纹成分具有良好的一致性。结论:所建立的指纹图谱稳定可靠,可以为花椒药材指纹图谱的系统研究提供有益借鉴,同时有助于花椒药材的质量控制和评价。     

花椒“温中止痛”药理研究

对花椒醚提物和水提物进行了“温中止痛”药理研究,结果表明花椒的抗溃疡、保肝、对抗炎性和功能性腹泻及纠正胃肠道功能紊乱作用是花椒“温中止痛”的内涵,而它的镇痛作用对缓解各种腹痛起了加强作用。     

川椒外用配合祛霉胶囊内服治疗霉菌性阴道炎疗效分析

目的 观察川椒外用配合祛霉胶囊内服治疗霉菌性服道炎的疗效。方法 １２０例霉菌性服道炎患者随机分组,治疗组６０例口服自制祛霉胶囊,每次６粒,每日３次,配合川椒粉阴道上药及川椒水坐浴;对照组６０例每晚睡前阴道纳入两性霉素Ｂ泡腾片２片。结果 治疗组治愈３１例（５１．６６％）,对照组治愈２２例（３６．６７％）,总有效率治疗组９６．６７％,对照组８６．６７％;经学处理,χ＾２值分另为２．７４、３．９３,Ｐ值     

花椒多糖抗阿尔茨海默病作用及其糖谱法结构特征分析

目的：建立阿尔茨海默病(AD)小鼠模型，评价花椒多糖对AD的治疗作用并采用糖谱法分析其结构特征。方法：采用腹腔注射D-半乳糖联合灌胃三氯化铝建立快速衰老的AD小鼠模型，通过Morris水迷宫实验评价小鼠的学习记忆能力，苏木素-伊红(HE)染色和尼氏染色观察小鼠脑组织病理学状况和神经元损伤情况。对花椒多糖进行酸水解和不同糖苷酶酶解后，采用高效薄层色谱法(HPTLC)和荧光辅助凝胶电泳法(PACE)分析水解产物的结构特征。HPTLC色谱条件为采用硅胶60高效薄层色谱板，点样量5μL，展开剂乙酸乙酯-冰乙酸-水(2∶2∶1)，展开2次，苯胺-二苯胺-磷酸溶液显色，在105℃加热10 min后日光下检视。PACE检测条件为34%分离胶和8%浓缩胶，电泳缓冲液为0.1 mol·L^-1三羟甲基氨基甲烷(Tris)-硼酸缓冲液(pH 8.2)，电泳在0℃环境下进行，上样量3～6μL，用15 mA恒流跑至样品达凝胶前端，紫外灯365 nm下检视。结果：Morris水迷宫实验结果表明，花椒多糖明显改善了AD模型小鼠的学习和记忆能力，逃避潜伏期缩短，穿梭平台次数和目标象限停留时间明显...     

麻口皮子药挥发油成分的GC-MS分析

目的:分析麻口子皮子药的挥发油成分。方法:采用水蒸气蒸馏法提取麻口皮子药中挥发油,用GC-MS法测定和分析其化学组分。结果:共鉴定了26个成分,占总峰面积的91.45%。结论:该研究为麻口皮子药资源的深入开发提供了科学依据。