腺苷A2A受体在过敏性哮喘发生、发展中的作用

目的:初步探讨腺苷A2A受体在过敏性哮喘疾病中的表达水平变化和在哮喘发生、发展过程中的作用。方法:分别选择18例对屋尘螨过敏的慢性持续期哮喘患者(过敏性哮喘组)和19名健康志愿者(正常对照组),通过荧光实时定量PCR方法检测研究对象外周血单个核细胞中A2A受体mRNA水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中屋尘螨特异性免疫球蛋白(Ig)E、白细胞介素(IL)-4、IL-17A和转化生长因子(TGF)-β水平。结果:过敏性哮喘组A2A受体mRNA明显高于正常对照组[(0.45±0.29)×10-3比(0.21±0.06)×10-3;t=3.611,P     

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白-1对肝星状细胞转化生长因子β3的mRNA表达及启动子活性的影响

目的 探讨大鼠肝星状细胞(HSC)中,环磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白-1(CREB-1)对转化生长因子β3 (TGFβ3)的mRNA表达及启动子活性的影响. 方法 将HSC分为CREB-1表达质粒转染组(C质粒组)、siRNA-CREB-1转染组(S质粒组)、阴性对照质粒组(N质粒组)、Forskolin处理组(FSK组)、H-89处理组(H-89组)及空白对照组,并根据加或不加入外源性TGFβ3重组蛋白将以上各组再分为(TGFβ3+)组和(TGFβ3-)组,实时荧光定量PCR法检测TGFβ3 mRNA的表达.上述各组共转染PGL3-basic-TGFβ3P (W质粒)或PGL3-basic-TGFβ3P-mCRE(M质粒),以pRL-SV40为空白对照,荧光素酶报告基因分析法检测各组TGFβ3启动子活性.双侧t检验进行组间数据比较. 结果 TGFβ3 mRNA表达结果显示,与N质粒(TGFβ3-)组比较,S质粒(TGFβ3-)组mRNA相对表达量降低至0.69±0.15(t=3.702,P＜0.05);与空白对照(TGFβ3-)组比较,H-89 (TGFβ3-)组降低至0.57±0.08(t=9.490,P＜0.05);N质粒(TGF β 3+)组与N质粒(TGFβ3-)组、S质粒(TGFβ3+)组与S质粒(TGFβ3-)组、空白对照(TGFβ3+)组与空白对照(TGFβ3-)组、H-89 (TGFβ3+)组与H-89 (TGFβ3-)组分别比较,差异均有统计学意义(t值分别为-7.404、-3.480、-2.831和7.875,P值均＜0.05).荧光素酶报告基因分析结果显示,S+W质粒组、N+W质粒组、C+W质粒组的TGFβ3启动子活性分别为0.062±0.013、0.122±0.011、0.165±0.016,C+W质粒组TGFβ3活性较N+W质粒组组明显升高(t=-3.823,P＜ 0.05),S+W质粒组较N+W质粒组明显降低(t=5.853,P＜0.01);H-89+W质粒组、空白对照+W质粒组、FSK+W质粒组TGFβ3启动子活性分别为0.154±0.010、0.188±0.016、0.276±0.031,FSK+W质粒组的TGFβ3启动子活性较空白对照+W质粒组明显升高(t=-4.419,P＜0.05),H-89+W质粒组的TGFβ3启动子活性较空白对照+W质粒组明显降低(t=-3.115,P＜0.05). 结论 增加HSC内CREB-1表达或提高CREB-1磷酸化水平可上调TGFβ3 mRNA表达及其启动子活性;CRE位点是TGFβ3启动子的关键位点,封闭该位点后,TGFβ3启动子活性明显降低.外源性TGFβ3可上调HSC中内源性TGFβ3 mRNA的表达.     

双氢青蒿素干预实验大鼠肺纤维化机制的研究

目的研究双氢青蒿素干预肺纤维化的作用机制。方法构建博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型[1],造模后行灌胃治疗。用HE染色、Masson染色法观察大鼠肺组织病理变化,碱水解法检测羟脯氨酸含量,Ellisa法检测血清中TGFβ1(转化生长因子β1)含量,荧光定量PCR法检测TGFβ1、SMAD2、SMAD3基因表达,免疫组化法检测大鼠肺组织中TGFβ1、SMAD2/3、p SMAD2/3蛋白表达。结果双氢青蒿素可减轻肺纤维化模型大鼠肺组织炎症和纤维化程度,抑制TGFβ1、SMAD2、SMAD3基因表达和TGFβ1、SMAD2/3、p SMAD2/3蛋白表达。结论双氢青蒿素可能通过抑制TGFβ1-SMAD2/3通路干预肺纤维化。     

内皮素-1对人腹膜间皮细胞合成细胞外基质及转化生长因子β1的影响

目的:研究内皮素1(ET1)及非特异性内皮素受体拮抗剂即ETA/ETB拮抗剂PD142893对人腹膜间皮细胞(HPMC)分泌细胞外基质(ECM)及转化生长因子β1(TGFβ1)产生的影响。方法:以人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)为研究对象,采用放免法、半定量逆转录多聚酶链反应(RTPCR)观察不同浓度的葡萄糖及PD142893对HPMCET1、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤连蛋白(Fn)分泌和基因表达的影响,及TGFβ1蛋白水平(ELISA),基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达(RTPCR)。结果:①葡萄糖对ET1的影响:高浓度葡萄糖增加HPMCET1的分泌及基因表达,葡萄糖浓度为50、100、150mmol/LET1分泌分别为(2.57±0.18)、(2.82±0.89)、(4.12±0.83)pg/ml·105cell,呈剂量依赖。②ET1促进HPMC分泌ColⅣ,增强ColⅣ、MMP2mRNA的表达。PD142893可下调高糖诱导的ColⅣ、Fn和MMP2。③ET1刺激HPMC分泌TGFβ1呈剂量依赖,ET1浓度为0、10、50、100nmol/L时分泌TGFβ1分别为(2141.74±45.16)、(2181.6±95.13)、(4360.58±139.74)、(6966.88±444.93)pg/ml·105cell,PD142893可明显抑制高糖诱导TGFβ1的分泌。结论:ET1促进HPMC分泌ECM,高糖诱导间皮细胞ECM合成与ET1及TGFβ1途径有关。     

大肠癌患者血清转化生长因子β1水平与细胞免疫的关系

目的 探讨大肠癌患者血清TGFβ1水平与外周血T细胞亚群、NK细胞活性的相关性及临床意义.方法50例经病理证实的大肠癌,用ELISA法检测血清TGFβ1水平,用SAP法检测T细胞亚群,用LDH释放法检测NK细胞活性;分析TGFβ1与T细胞亚群、NK细胞活性的相关性及其临床意义.结果大肠癌患者血清TGFβ1水平为40.4±17.6(μg.L-1),高于对照组的19.2±7.9(μg.L-1)(P＜0.05);CD8+细胞明显高于正常对照组45.3±9.9(%)va32.2±7.8(%),P＜0.05;CD3+和CD4+细胞、CD4+/CD8+比值、NK细胞活性明显低于正常对照组,分别是46.2±8.6(%)vs61.3±9.5(%),36.4±7.6(%)vs47.3±6.9(%),1.2±0.3vs1.7±0.4,24.6±6.6(%)vs31.3±7.1(%),P＜0.05.Ⅲ、Ⅳ期大肠癌患者血清TGFβ1水平、CD8+细胞明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者,分别是50.5±16.1(μg.L-1)vs34.3±9.8(μg.L-1),49.7±9.1(%)vs38.4±9.8(%)(P＜0.05);CD3+和CD4+细胞、CD4+/CD8+比值、NK细胞活性明显低于Ⅰ、Ⅱ期患者,分别是37.2±9.2(%)vs49.6±8.4(%),28.5±8.3(%)vs42.3±6.7(%),0.6±0.4vs1.5±0.2,16.2±5.9(%)vs28.3±7.8(%)(P＜0.05);TGFβ1与CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值、NK细胞活性呈负相关,与CD8+细胞呈正相关.结论TGFβ1通过抑制患者的免疫功能而促进肿瘤的发生发展、浸润转移,检测血清TGFβ1的水平可为临床治疗提供参考.     

血管紧张素转换酶抑制剂治疗慢性移植肾肾病的疗效观察

目的:探讨血管紧张素转换酶抑制剂 (ACEI)依那普利 (enalapril)能否改善早期慢性移植肾肾病(CAN)患者的肾功能及其机制。　方法:对病理诊断为CANⅠ级的 23例患者(A组)于肾功能不全 2个月内开始服用依那普利(10mg/d),持续 1年以上,与同期内未服用ACEI的 25例CANⅠ级患者(B组)进行对比,比较两组患者 1年后肾功能、血和尿转化生长因子β1 (TGF β1 )水平(ELISA法测定);及治疗后移植肾组织中TGF β1mRNA表达量的变化(RT PCR法)。　结果:治疗 1年后,A组 15例(65 .2% )患者移植肾功能好转或稳定,B组中 4例(16. 0% )移植肾功能稳定,两组相比差异显著(P<0. 05)。观察终点时,A组肌酐清除率(Ccr)减损量[ (6 .6±5. 6 )vs(16 .3±9 .3)ml/min,P<0 01]、尿TGF β1 浓度(268 .2±82. 2vs458. 9±78 8pg/mg·Cr,P<0 .01)均明显低于B组;两组患者血TGF β1 浓度无明显差异。A组治疗后移植肾TGF β1mRNA表达量由 1 58±0 33降至 0 96±0 28(P<0 01)。　结论:依那普利能改善早期CAN患者的肾功能,抑制移植肾内TGF -β的表达。     

双黄连抑制流感病毒甲1型基因的研究

目的通过对实时荧光定量RT—PCR检测流感病毒甲1型多聚酶蛋白（PA）基因,了解烈黄连作用病毒的效应。方法采用实时荧光定量RT—PCR法标准曲线测药物抑制甲。型PA病毒基因效应。结果以实时荧光RT-PCR法,重复测7次取平均值,对照组病毒基因为3．62×10^6±0．90拷贝数／ug,试验组病毒基因为4．57×10^5±1．23拷贝数／mg。发现病毒对照组基因明显高于试验组（P〈0．001）。结论提示双黄连可抑制流感病毒甲1基因。     

粒细胞集落刺激因子动员自体骨髓源性细胞对博来霉素致小鼠肺损伤的治疗作用

目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员自体骨髓源性细胞(BMDC)对博来霉素所致小鼠肺损伤的修复作用.方法 采用随机数字表法将60只骨髓重建后小鼠分为重建动员组(博来霉素+G-CSF)和重建对照组(博来霉素+生理盐水),每组30只;75只健康小鼠分为未重建动员组30只(博来霉素+G-CSF)、未重建对照组30只(博来霉素+生理盐水)和空白对照组15只(生理盐水+生理盐水).各组分别在实验第3、第7和第14天处死1/3小鼠取材.通过HE染色、Masson胶原染色、肺通透指数和羟脯氨酸含量评价疗效.免疫组织化学方法检测肺组织中转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、γ-干扰素、基质金属蛋白酶_9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)的表达;流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测肺组织内BMDC表达.将20只健康小鼠分为观察动员组(博来霉素+G-CSF)和观察对照组(博来霉素+生理盐水),每组10只,不设终点,观察小鼠存活时间.计量资料比较采用t检验(两组间)和单因素方差分析(多组间),组间两两比较采用LSD法;等级资料比较采用Mann-Whitney μ检验(两组间)和Kruskal-Wallis H检验(多组间);采用Kaplan-Meier法进行生存分析.结果 实验第7天,重建动员组肺泡炎程度的平均秩次为15.3,肺间质纤维化程度的阳性面积(×10~3)为46士8,肺羟脯氨酸含量为(O.44±0.09)μg/mg,TGF-β_1、γ-干扰素和MMP-9表达的积分吸光度值(×10~3)分别为111±23、250±72和59±19,均明显低于重建埘照组[28.0、(73±10)×10~3、(0.52±0.07)μg/mg、(161 ±35)×10~3、(299±31)×10~3和(314±77)×10~3];未重建动员组肺泡炎程度的平均秩次为22.7,肺间质纤维化程度的阳性面积(×10~3)为27±15,肺羟脯氨酸含量为(0.41±0.05)μg/mg,肺通透指数为(43.8 ±9.9)×10~(-3),TGF-β_1、γ-干扰素和MMP-9表达的积分吸光度值(×10~3)分别为132±55、178±23和101±54,均明显低于未重建对照组[33.9、(56±13)×10~3、(0.49±0.08)μg/mg、(53.6±8.7)×10~(-3)、(320±98)×10~3、(409±61)×10~3和(288±75)×10~3].重建动员组在第7大肺内BMDC表达的绿色荧光蛋白阳性细胞比例(0.65±0.13)明显高于重建对照组(0.46±0.11).结论 G-CSF动员BMDC对博来霉素所敛肺损伤有一定的保护作用,本实验方法尚不能明显延长小鼠的存活时间.     

GW4064激活FXR受体下调肝星状细胞Ⅰ型胶原及TGFβ1的表达

目的探讨法尼酯衍生物X受体(FXR)配体GW4064对TNF-α作用后HSC-T6细胞系I型胶原及TGFβ1表达的影响。方法 TNF-α作用于HSC-T6后,应用实时荧光定量PCR法和Westernblot法检测FXR、I型胶原及TGFβ1表达的变化;再运用GW4064作用已被TNF-α作用的HSC-T6,再次应用实时荧光定量PCR法和Westernblot法检测FXR、I型胶原及TGFβ1表达的变化。结果 TNF-α能使HSC-T6表达FXR减少,而I型胶原及TGFβ1表达增加;GW4064作用HSC-T6后则明显增加FXR表达,从而减少I型胶原及TGFβ1表达。结论 GW4064通过激活FXR抑制HSC表达I型胶原及TGFβ1,为FXR配体治疗肝纤维化提供实验依据。     

链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠骨转换变化及其分子机制的研究

目的 探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠骨转换变化及其分子机制.方法 单次尾静脉注射STZ制造糖尿病大鼠模型.成模后与正常对照组大鼠同步饲养8周,处死后测定两组大鼠血钙、磷、碱性磷酸酶、骨钙素、24 h尿钙水平和尿I型胶原氨基末端交联肽(NTx)/肌酐(Cr)比值,双能X线吸收法(DEXA)测定大鼠离体腰椎和股骨骨密度.骨形态计量学方法分析大鼠骨量和骨转换变化情况,并用实时荧光定量RT-PCR方法检测骨组织中标志骨吸收的NF-κB受体活化因子配体(RANKL)/骨保护素mRNA比值和标志骨形成的骨钙素以及调控成骨的核结合因子1(Cbfa1)、osterix(OSX)mRNA表达水平.结果 与正常对照组相比,糖尿病大鼠血钙、磷、碱性磷酸酶水平无显著差异,骨钙素水平显著减低[(3.03±0.52)对(6.18±0.71)ng/ml,P<0.01],24 h尿钙水平显著增加[(16.84±0.71)对(4.98±0.58)mg/24 h,P<0.01],尿NTx/Cr比值显著下降[(5.67±0.86)对(5.23±0.98)nmol/g Cr,P<0.05].糖尿病大鼠腰椎骨密度显著减低[(0.107±0.011)对(0.149±0.009)g/cm~3,P<0.01],股骨骨密度亦显著减低[(0.099±0.013)对(0.139±0.013)g/cm~3,P<0.01].骨形态计量学分析提示糖尿病大鼠骨小梁骨量减少,骨小梁矿化表面减少,骨形成速率减低[(0.44±0.11)对(0.78±0.14)μm/d,P<0.01].实时荧光定量RT-PCR提示糖尿病大鼠骨组织中RANKL/骨保护素mRNA比值[(0.57±0.11)对(0.89±0.13),P<0.01]、骨钙素[(2.25×10~(-4)±1.19×10~(-4))对(3.43×10~(-4)±1.63×10~(-4)),P<0.01]、Cbfa1[(26.68×10~(-4)±6.53×10~(-4))对(37.21×10~(-4)±7.14×10~(-4)),P<0.01]、OSX[(1.93×10~(-4)±0.65×10~(-4))对(4.19×10~(-4)±0.71×10~(-4)),P<0.01]mRNA水平均较正常对照组显著减低.结论 糖尿病大鼠是一种低转换型骨量减少,其骨组织中调控破骨的RANKL/骨保护素mRNA水平和调控成骨的Cbfa1、OSX、骨钙素mRNA水平均下降.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.