D-半乳糖致衰老模型大鼠脑组织Ach活性、NGF表达变化及山茱萸多糖的干预作用

目的 探讨山茱萸多糖对D-半乳糖致衰老模型大鼠脑组织神经生长因子(NGF) mRNA表达的影响及其可能的作用机制.方法 选用Wistar大鼠46只,随机分组,每组雌雄各半,其中青年对照组12只、衰老模型组10只、山茱萸多糖组24只(小剂量和大剂量组各12只).采用D-半乳糖法制作衰老模型,造模成功后按照0.14 g/kg体重和0.28 g/kg体重经胃灌服山茱萸多糖水溶液,连续给药30 d.分光光度法测定脑脂褐素( lipofuscin,LP)含量、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性,RT-PCR法检测脑组织NGF mRNA表达.结果 衰老模型组LP含量、AchE活性均较青年组明显增加(P＜0.01),而NGF mRNA表达明显低于青年组(P＜0.01);山茱萸多糖小剂最组和大剂量组NGF mRNA的表达明显高于衰老模型组(P＜0.01),而LP含量和AchE活性显著则明显低于衰老模型组(P＜0.05,P＜0.01),山茱萸多糖大剂量组上述作用明显好于小剂量组(P＜0.05).结论 山茱萸多糖可抑制脑的脂质过氧化,降低AchE活性、上调NGF mRNA表达而发挥抗衰老作用.     

山茱萸多糖对D-半乳糖致衰老小鼠肾组织中Klotho基因表达的影响

目的研究山茱萸多糖对D-半乳糖致衰老小鼠肾组纵中Klotho基因表达变化的影响。方法昆明小鼠60只,随机分为青年对照组、衰老模型组、山茱萸多糖组,每组20只。采用D-半乳糖法制作衰老模型,以灌胃法给山茱萸多糖组小鼠灌服山茱萸多糖。采用分光光度法检测总抗氧化能力（T—AOC）和Mn—SOD活性水平,RT—PCR法检测Klotho和Mn—SOD基闪表达水平,Westernblot法检测Klotho蛋白表达最。结果与对照组比较,衰老组小鼠肾组织中Klotho基因、Mn—SOD活性和基斟表达均下降（P〈0．01）,总抗氧化能力（T—AOC）下降（P〈0．01）;与衰老模型组比较,山茱萸多糖组小鼠Klotho基困和蛋白表达明显升高（P〈0．01）、Mn-SOD基因表达和Mn-SOD活性明显增高（P〈0．01）,总抗氧化能力也显著提高（P〈0．01）。结论山茱萸多糖可能通过上调衰老小鼠肾组织中的Klotho表达和提高衰老小鼠抗氧化能力岍发挥抗衰老的作用。     

海红果多糖对D半乳糖衰老模型小鼠骨髓端粒酶逆转录酶的影响

目的研究楸子果实海红果多糖(PFM)对衰老模型小鼠骨髓端粒酶逆转录酶mRNA的影响。方法采用荧光实时定量RT-PCR法测定小鼠骨髓中端粒酶逆转录酶mRNA的表达。结果骨髓中相对端粒酶逆转录酶表达测定结果显示,与正常组相比,D-半乳糖衰老模型组端粒酶逆转录酶mRNA表达明显减少(P0.01);与D-半乳糖衰老组相比,低、中、高剂量组端粒酶逆转录酶mRNA的表达均显著增加(P0.01),黄芪多糖对照组与模型组相比差异有统计学意义(P0.01)。结论 PFM能显著降低端粒酶逆转录酶mRNA表达,从而发挥抗氧化和抗衰老作用。     

山茱萸多糖对AD大鼠c-fos和早老素1表达的影响

目的探讨阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马区Tau蛋白磷酸化、早老素(PS)1和c-fos的mRNA表达水平、乙酰胆碱酯酶(Ach E)的变化以及山茱萸多糖对其影响。方法 Wistar大鼠75只,分为青年组、假手术组、AD模型组、阳性对照组、山茱萸多糖组和水煎剂组,采用D-半乳糖与Aβ联合注射制作AD模型,选用多奈哌齐为阳性对照药物,采用经胃灌服法给予多奈哌齐、山茱萸多糖和水煎剂;Morris水迷宫法检测学习记忆能力;考马斯亮蓝法检测蛋白质含量;比色分析法测定Ach E活性;免疫组化法检测Tau蛋白磷酸化水平;RT-PCR法检测c-fos和PS1 mRNA的表达。结果与青年组和大鼠手术前比较,造模后大鼠学习记忆能力显著低于青年组(P0.01)和手术前(P0.01);山茱萸多糖和水煎剂显著提高AD模型大鼠学习记忆能力(P0.01),且与阳性对照组无明显差别(P0.05);与青年组比较,假手术组、Aβ对照组、阳性对照组、多糖组和水煎剂组大鼠海马组织中Ach E活性明显增加(P0.05或P0.01);与Aβ对照组比较,阳性对照组、多糖组和水煎剂组Ach E活性明显降低(P0.01或P0.05),其中多糖组未达到阳性对照组水平(P0.05),但多糖组与水煎剂组之间差异不显著(P0.05);与青年组和假手术组比较,Aβ对照组大鼠海马区P-tau蛋白水平显著增加(P0.05);与Aβ对照组比较,阳性对照组、多糖组和水煎剂组P-Tau水平明显降低(P0.05);与青年组和假手术组比较,Aβ对照组c-fos mRNA表达水平明显降低(P0.01),而PS1表达则明显增加(P0.01);山茱萸多糖和水煎剂可明显提高AD模型大鼠cfos表达水平,降低PS1的表达。结论 D-半乳糖与Aβ注射联合应用,可提高Tau蛋白磷酸化水平、降低c-fos的表达,提高Ach E活性和PS1的表达;山茱萸多糖和山茱萸水煎剂均可降低Tau磷酸化水平、提高AD模型大鼠学习记忆能力,其作用与多奈哌齐比较无明显差异;山茱萸多糖及水煎剂可降低AD模型大鼠海马PS1表达和Tau蛋白磷酸化水平,上调c-fos表达;山茱萸多糖是山茱萸能够改善AD模型大鼠学习记忆的一种有效成分。     

菟丝子醇提液对衰老模型大鼠肝细胞p16和cyclinD1基因表达的影响

目的 研究菟丝子醇提液对衰老模型大鼠肝细胞p16和cyclinD1基因表达的影响,探讨菟丝子延缓衰老作用的机制.方法 实验以50只Wistar大鼠为研究对象,采用D-半乳糖法制作衰老模型,采用经胃灌服法按照0.8g·kg-1 ·d-1给药,采用半定量RT-PCR法测定大鼠肝组织p16和cyclinD1 mRNA的表达,免疫组化SABC法检测p16和cyclinD1蛋白的表达,并观察菟丝子醇提液对其影响.结果 衰老模型大鼠p16 mRNA及蛋白表达较青年组明显增高(P＜0.01),而cyclinD1 mRNA及蛋白表达降低(P＜0.05).菟丝子醇提液可降低p16基因表达(P＜0,01),使cyclinD1基因表达增强(P＜0.05),并呈现时间渐进性改变.结论 菟丝子醇提液通过影响细胞调控因子p16、cyclinD1表达延缓肝细胞的衰老.     

山茱萸纳米水提液对衰老小鼠脑组织p66~(shc)表达的影响

目的 探讨山茱萸制剂对自然衰老小鼠脑组织的磷酸化酪氨酸信号适配蛋白(66kilodalton isoform of shcgene products,p66shc)表达的影响.方法 人工饲养自然衰老小鼠11～12月龄36只、青年鼠8只,分6组:青年对照组、衰老对照组和给药组,给药组又分为山茱萸纳米水提液和醇提液的大剂量、小剂量组;各组给药30 d,然后断头取小鼠肝组织做超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)检测,RT-PCR法测定小鼠脑组织p66shc的表达.结果 山茱萸纳米水提和醇提液给药组SOD活性与衰老对照组相比显著升高(P<0.01),而MDA含量和脑p66shc的表达显著降低(P<0.01);山茱萸纳米制剂水提液小剂量、大剂量组和醇提液比较上述作用均更显著(P<0.01) .结论 山茱萸能够明显降低衰老小鼠脑p66shc活性亚基的表达,从而影响p66shc活性起到延缓衰老的作用.山茱萸纳米水提取液小剂量组的作用优于山茱萸纳米醇提液各组.     

天冬总皂苷对D-半乳糖致衰老大鼠肾脏p53基因表达的影响

目的研究天冬总皂苷对大鼠衰老肾脏p53基因表达的影响,探讨其治疗衰老肾脏的作用及其机制。方法通过皮下注射D-半乳糖建立衰老大鼠模型的同时,以天冬总皂苷灌胃进行治疗,3个月后处死各组大鼠,应用全自动分析仪检测血清中肌酐(Cr)、尿素(UREA)含量;采用光镜观察各组大鼠肾脏的肾小球硬化程度的改变;采用硫代巴比妥酸和黄嘌呤氧化法分别检测血清和肾脏中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;应用Real-time PCR检测各组肾脏组织p53 mRNA的表达。结果与模型组相比,治疗组血清中Cr及UREA的含量均显著降低(P<0.05);治疗组肾小球硬化程度均明显改善;随着治疗组剂量的增加,血清与肾脏中SOD的活性均明显增高、MDA含量也显著降低(P<0.05);治疗组能够降低大鼠肾脏组织p53 mRNA的表达,且随着天冬总皂苷剂量的增加,其降低作用有增强趋势(P<0.01)。结论天冬总皂苷降低肾脏组织中p53基因的表达可能是其改善衰老肾脏的机制之一。     

SIRT1减弱对脂多糖致急性呼吸窘迫综合征小鼠的促炎作用

目的探讨SIRT1对脂多糖(LPS)诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠炎症反应的作用及其机制。方法采用SIRT1基因敲减小鼠SIRT1~(+/-)与野生型小鼠,qRT-PCR,Western Blot检测两种小鼠肺组织中的相关基因表达差异。两种小鼠用LPS腹腔注射法造模,同时设生理盐水对照组,观察肺组织病理形态学变化,测定肺湿干比(W/D比),BCA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白浓度,ELISA法测定BALF及血浆中炎症因子TNF-α、IL-6的含量,Western Blot检测肺组织p-p38MAPK、p38MAPK、p-ATF2的表达变化。结果与野生型小鼠相比,SIRT1~(+/-)肺组织中SIRT1在mRNA表达和蛋白表达均显著降低,差异有统计学意义(P0.01)。LPS致ARDS后,两种小鼠病理形态学观察均表现为肺组织炎症细胞浸润,肺泡结构破坏,间质水肿,肺泡间隔增厚,而SIRT1~(+/-)小鼠肺组织破坏更严重。在SIRT1~(+/-)小鼠中,肺W/D比值,BALF中总蛋白浓度,BALF及血浆中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量,均明显高于野生型小鼠(P0.05),肺组织p-p38MAPK/p38MAPK、p-ATF2的表达增加也更显著(P0.05)。结论 SIRT1基因在LPS致伤ARDS小鼠的炎症进程中起着非常重要的作用,其机制可能与Sirt1诱导的p38 MAPK-p-ATF2信号通路的活化增强有关。     

艾灸神阙穴对衰老模型小鼠脑组织凋亡相关因子bcl-2、bax、caspase-3和p53表达的影响

目的研究艾灸神阙穴对衰老模型小鼠脑组织凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关的X基因(bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3和p53蛋白表达的影响,探讨艾灸神阙穴延缓衰老的作用机制。方法健康2月龄昆明雄性小鼠,将其随机分为青年组、衰老模型组、艾灸组;青年组不做任何处理,衰老模型组和艾灸组每日颈背部皮下注射D-半乳糖120 mg/kg,连续注射42 d;艾灸组从模型复制的第15天起开始对神阙穴进行施灸,每次灸15 min,每日1次,每周连续施灸5 d后休息2 d再灸,连续4 w。艾灸结束后取出各组小鼠脑组织,采用Western印迹法检测小鼠脑组织bcl-2、bax、caspase-3和p53的蛋白表达。结果与青年组比,衰老模型组bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.001),bax、caspase-3和p53的蛋白表达均显著升高(P<0.001,P<0.05);与衰老模型组比,艾灸组bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.001),bax、caspase-3和p53的蛋白表达均显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论艾灸神阙穴能延缓D-半乳糖所致衰老模型小鼠的衰老,其作用机制可能与调节脑组织bcl-2、bax、caspase-3和p53的蛋白表达有关。     

虫草提取物对高糖诱导的脐静脉内皮细胞损伤模型的保护作用

目的研究虫草提取物对人脐静脉内皮细胞损伤模型的影响,探讨其保护内皮功能的机制。方法原代培养人脐静脉内皮细胞,高糖(40mmol/L)孵育,建立细胞损伤模型。实验分组:空白组、高糖组、冬虫夏草组、蛹虫草组。MTT法检测细胞增殖;SA-β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法检测SA-β-gal染色阳性率;流式细胞术测定细胞周期及细胞内活性氧;实时荧光定量PCR检测衰老相关的p16、p21、沉默信息调节因子1(SIRT1)、Bcl-2mRNA表达水平。结果与空白组比较,高糖组细胞增殖明显下降,细胞内活性氧增加(P<0.05)。与高糖组比较,蛹虫草组及冬虫夏草组细胞增殖增加,S期细胞明显增多,SIRT1mRNA水平显著升高,细胞内活性氧和p21mRNA水平均显著降低(P<0.05)。结论虫草提取物对损伤内皮具有保护作用,其机制可能与促进SIRT1mRNA表达,减轻细胞氧化应激损伤,抑制p21mRNA表达,促进内皮细胞生长增殖有关。     

褪黑素通过沉默信息调节因子1减轻线粒体氧化应激对脑缺血-再灌注小鼠的作用

目的探讨褪黑素通过沉默信息调节因子1(SIRT1)减轻线粒体氧化应激机制对脑缺血-再灌注(IR)小鼠的作用。方法通过线栓法建立小鼠短暂性大脑中动脉阻塞(MCAO)IR模型,对190只小鼠经腹腔注射褪黑素和侧脑室注射SIRT1抑制剂EX527,剔除死亡小鼠30只,按随机数字表法分为IR组、褪黑素组、褪黑素+EX527组、EX527组各40只,通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定脑梗死体积、干湿比重法测定脑水肿并进行神经功能缺损评分。通过Western blot检测线粒体和胞质SIRT1、Ac-P53、Ac-核因子κB(Ac-NF-κB)、BCL2、BAX蛋白以及细胞色素C蛋白表达。多组间比较采用单因素方差分析。结果 (1)4组间脑梗死体积、神经功能障碍评分和脑水肿的差异均有统计学意义(F值分别为16.452、23.622和18.786,均P0.05)。4组SITR1、Ac-P53、Ac-NF-κB、BCL2、BAX表达差异均有统计学意义(F值分别为2 348.158、1 434.841、7 042.563、14 627.128和691.475,均P0.05)。4组小鼠线粒体膜电位、线粒体活性氧和复合体Ⅰ活性差异有统计学意义(F值分别为28.454、33.728和29.716,均P0.05)。(2)与IR组相比,褪黑素组的脑梗死体积缩小(32±5)mm~3比(57±5)mm~3,P0.05);神经功能障碍评分降低(2.4±0.3比3.5±0.3,P0.05);脑水肿减轻(80.2±0.9)%比(83.9±1.2)%,P0.05);SIRT1和抗凋亡蛋白BCL2的表达增加(P0.05);促凋亡蛋白BAX和Ac-P53、Ac-NF-κB的表达减少(P0.05);线粒体膜电位、线粒体复合体Ⅰ活性和细胞色素C水平提高(P0.05);胞质活性氧产物和细胞色素C水平降低(P0.05)。(3)与褪黑素组相比,褪黑素+EX527组的脑梗死体积增大[(42±5)mm~3比(32±5)mm~3,P0.05];神经功能障碍评分增高(3.2±0.3比2.4±0.3,P0.05);脑水肿加重[(83.4±0.8)%比(80.2±0.9)%,P0.05];SIRT1和抗凋亡蛋白BCL2的表达减少(P0.05);促凋亡蛋白BAX和Ac-P53、Ac-NF-κB的表达增加(P0.05);线粒体膜电位、线粒体复合体Ⅰ活性和细胞色素C水平降低(P0.05);胞质活性氧产物和胞质细胞色素C水平提高(P0.05)。结论在缺血性卒中模型小鼠中,褪黑素通过激活SIRT1信号通路,减轻线粒体氧化应激损伤和细胞死亡,从而发挥脑保护作用。     

黄山药总皂苷对晚期糖基化终产物诱导心肌老化的保护作用及机制

目的研究黄山药总皂苷(TSDP)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导的心肌老化产生的作用并初步探讨其机制。方法用不同浓度TSDP干预原代心肌细胞,以CCK-8试剂盒(CCK-8)检测细胞活性。细胞预先TSDP干预2 h后加入AGEs,通过免疫印迹实验检测沉默信息调节因子(SIRT3)、超氧化物歧化酶-2 (SOD2)、及衰老相关蛋白p53和p16水平的表达;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯探针(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)。结果与对照组比较,AGEs干预组β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)活性增加,p53和p16蛋白水平增加, SOD2和SIRT3蛋白表达下降,ROS产生增多,差异有统计学意义(P0.05)。与AGEs组相比,TSDP预干预组SA-β-Gal活性降低,SIRT3和SOD2蛋白水平增加,p53和p16下降,ROS增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论 TSDP对AGEs诱导的心肌细胞老化起保护作用,其机制可能与升高SIRT3和调节氧化应激有关。     

外源性睾酮对雄性小鼠心功能和心脏衰老的影响

目的:探讨外源性睾酮对雄性小鼠心功能和心脏衰老的影响。方法:15个月龄C57/BL6雄性小鼠分为4组:安慰剂组、睾酮组、沉默信息调节因子1(Sirt1)抑制剂EX-527组(EX-527组)和睾酮+EX-527组,每组7只。干预3个月后超声心动图检测小鼠心功能指标,ELISA法检测小鼠血清睾酮浓度,分离小鼠左心室,组织化学染色法检测衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal),Western blot检测心肌组织B型利钠肽(BNP)、Sirt1蛋白表达水平,实时定量RT-PCR检测心肌组织肌球蛋白重链(MYH)6、MYH7、肌浆网钙ATP酶2(SERCA2)和α-肌动蛋白1(ACTA1)mRNA表达水平。结果:睾酮组及睾酮+EX-527组血清睾酮水平较安慰剂组及EX-527组明显升高(P均0.05)。与安慰剂组相比,睾酮组SA-β-gal染色阳性面积比例明显减少[(17.13±7.12)%对(35.88±10.74)%,P0.05],BNP蛋白表达水平、MYH7和ACTA1 mRNA表达水平明显降低(P均0.05),Sirt1蛋白表达水平、MYH6和SERCA2 mRNA表达水平明显升高(P均0.05)。EX-527组和睾酮+EX-527组上述各指标与安慰剂组相比无统计学差异,与睾酮组相比有显著性差异(P均0.05)。超声心动图结果示各组左室舒张末期内径、室间隔厚度、左室后壁厚度、左室缩短分数、左室射血分数及E/A值无显著性差异(P均0.05)。结论:外源性睾酮可能通过Sirt1途径延缓雄性小鼠心肌细胞衰老,改善心衰相关的基因表达异常。     

脉络宁对老年性痴呆模型大鼠脑组织SIRT1基因表达的影响

目的观察中药复方脉络宁和谢海洲方,西药维生素(C+E)和阿托伐他汀药物干预对老年痴呆(AD)模型大鼠脑组织SIRT1基因表达的影响。方法用去卵巢同时腹腔注射D-半乳糖大鼠模拟早期AD模型,予以中药复方脉络宁和谢海洲方,西药维生素(C+E)和阿托伐他汀干预,采用Morris水迷宫检测大鼠用药前后学习记忆能力的变化,采用RT-PCR,Western印迹技术检测大鼠颞叶右侧皮层SIRT1基因表达的变化。结果与假手术组相比,去卵巢并注射D-半乳糖组逃避潜伏期明显延长;给药后,与病理组相比,四个给药组总逃避潜伏期明显缩短。与假手术组相比,病理组的SIRT1 mRNA和蛋白质的相对表达量明显降低,而与病理组相比,四个给药组的SIRT1 mRNA和蛋白质的相对表达量均有不同程度的升高。结论本模型大鼠颞叶皮层SIRT1 mRNA和蛋白质表达水平均降低;而脉络宁,谢海洲方,维生素(C+E),阿托伐他汀均可以不同程度的升高SIRT1 mRNA和蛋白质的表达水平,提示SIRT1表达的增加可能是这些药物对AD大鼠模型的神经保护作用分子机制之一。     

车前子多糖对衰老模型大鼠脑氧化-非酶糖基化影响的实验研究

目的 探讨车前子多糖对D-半乳糖致衰大鼠氧化-非酶糖基化作用的影响,明确车前子抗衰老作用及机制.方法 选用D-半乳糖衰老模型Wistar大鼠作研究对象,观察不同剂量车前子多糖对衰老模型大鼠总抗氧化能力(T-AOC)、抑制羟自由基能力(AHR)、脑单胺氧化酶B活性(MAO-B)、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSH)比值、羰基化蛋白、醛糖还原酶(AR)和晚期糖基化终末产物特异性受体(RAGE)mRNA表达水平的影响,并与衰老模型组和车前子水煎剂组进行比较. T-AOC、AHR、MAO-B活性、GSH/GSSH、羰基化蛋白含量采用分光光度法,AR mRNA 和RAGE mRNA检测采用RT-PCR法.结果 衰老模型组羰基化蛋白含量、MAO-B活性较青年组明显增加(P＜0.01),而T-AOC、GSH/GSSG比值降低(P＜0.01),AR mRNA表达明显低于青年组(P＜0.01),而RAGE mRNA表达明显高于青年组(P＜0.01).车前子多糖和车前子水煎剂组各组T-AOC、GSH/GSSG、AHR,AR mRNA表达明显高于衰老模型组(P＜0.05,P＜0.01),而羰基化蛋白含量、MAO-B和RAGE mRNA表达显著低于衰老模型组(P＜0.05,P＜0.01).以车前子多糖大剂量组效果最明显.结论 车前子及其多糖可通过提高机体抗氧化能力和清除羰基能力而发挥抗脑老化作用,车前子多糖是其作用的重要成分.     

小鼠食管癌前病变组织P53表达及化浊润燥降气方的干预作用

目的观察小鼠食管癌前病变组织P53的表达及中药复方化浊润燥降气方的干预作用。方法将130只小鼠分为正常组、模型组、阳性对照组、中药预防组、中药治疗组,采用4-硝基喹啉-氧化物(4-NQO)制备小鼠食管癌前病变模型,采用流式细胞检测、免疫组织化学方法观察各组食管组织中P53的表达。结果 14 w末食管癌前病变模型成功。流式细胞检测:模型组小鼠P53表达水平与正常组相比明显升高(P<0.05);阳性对照组、中药预防组、中药治疗组P53较模型组明显降低(P<0.05);中药预防组与阳性对照组P53表达无明显差异(P>0.05);中药预防组P53表达明显低于中药治疗组(P<0.05)。免疫组织化学检测示阳性对照组与模型组P53表达无明显差异(P>0.05);中药预防组、中药治疗组分别与模型组及阳性对照组明显降低(P<0.05);中药预防组低于中药治疗组(P<0.05)。结论小鼠食管癌前病变组织存在P53高表达。化浊润燥降气方能降低食管癌前病变小鼠P53的表达。     

HCV感染者直接抗病毒药物治疗前后CD8+T淋巴细胞衰老和功能相关指标的变化

目的观察HCV感染者DAA治疗前后CD8+T淋巴细胞衰老、功能相关指标变化,并探讨其临床意义。方法选取2017年1月-2018年12月于空军军医大学第二附属医院就诊的HCV感染者26例,患者接受索磷布韦联合达卡他韦片治疗。并纳入治愈者22例,健康对照者20例。采用流式细胞仪检测CD8+T淋巴细胞上SIRT1、CD57、PD-1、Tim-3等相关分子表达,并采用RT-PCR方法检测p21、p53表达水平,Luminex液相悬浮芯片检测样本外周血衰老相关分泌表型。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 SIRT1、PD-1、Tim-3在3组间表达差异均有统计学意义(F值分别为6. 712、4. 202、4. 575,P值均0. 05)。与健康对照组相比,HCV组CD8+T细胞上SIRT1、PD-1、Tim-3表达水平明显上升(P值均0. 05),HCV治愈组Tim-3表达水平明显上升(P 0. 05),HCV治愈组SIRT1、PD-1表达水平无明显变化(P值均 0. 05)。p53、p21在3组间表达差异有统计学意义(F值分别为11. 144、6. 594,P值均0. 05)。与健康对照组相比,HCV治愈组和HCV组p53表达水平明显下降(P值均0. 001),p21表达水平明显下降(P值均0. 05),HCV组和HCV治愈组比较差异均无统计学意义(P值均 0. 05)。IL-6、TNFα在3组间差异均有统计学意义(F值分别为3. 920、6. 337,P值均0. 05),与健康对照组相比,HCV组外周血的IL-6和TNFα表达水平明显升高(P值均0. 05),HCV治愈组IL-6和TNFα表达水平无明显变化(P值均 0. 05),与HCV组相比,HCV治愈组TNFα表达水平明显下降(P=0. 007)。结论 HCV感染者CD8+T淋巴细胞衰老,经DAA治疗后衰老缓解,CD8+T淋巴细胞功能部分恢复。     

灵芝多糖抗H2O2诱导的HDF细胞衰老及其机制的研究

目的 探讨不同剂量灵芝多糖(GLP)对抗H2O2诱导的HDF细胞衰老及可能的细胞周期调控机制.方法 将HDF细胞培养至24代时分成6组:即青年组、对照组、衰老模型组及GLP小剂量(50 mg/L)、中剂量(100 mg/L)、大剂量(150 mg/L)组,体外DMEM培养,各GLP组和衰老模型组自30代始添加 H2O2诱导HDF细胞衰老,直至38代.采用MTT法检测细胞活力;Dimri法检测β-半乳糖苷酶活性;RT-PCR法检测p16INK4a、CyclinD1、CDK4的表达;Western印迹法检测Rb蛋白表达和磷酸化Rb.结果 与青年组及对照组比较,衰老模型组细胞活力下降(P＜0.01),β-半乳糖苷酶活性升高(P＜0.01),CyclinD1 mRNA表达升高(P＜0.01),CDK4 mRNA表达下降(P＜0.01),p16INK4a表达升高(P＜0.01),Rb磷酸化减少(P＜0.01);与衰老模型组细胞比较,中剂量和大剂量GLP细胞活力明显提高(均P＜0.01),而β-半乳糖苷酶活性降低(均P＜0.01),CyclinD1 mRNA表达降低(均P＜0.01),CDK4 mRNA表达升高(均P＜0.01),p16INK4a表达降低,Rb磷酸化增多(均P＜0.01),但两组之间差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 GLP可通过改变细胞周期调控因子CyclinD1/CDK4/p16INK4a进而调节Rb的磷酸化状态,发挥抗H2O2诱导的HDF细胞衰老作用.     

山茱萸多糖对衰老模型大鼠学习记忆能力影响的研究

目的 以山茱萸多糖对D-半乳糖致衰大鼠抗脑老化及学习记忆能力的影响,探讨其在改善脑老化方面的作用及可能机制.方法 采用D-半乳糖诱导的衰老模型Wistar大鼠为实验对象,经胃灌服不同剂量山茱萸多糖(0.14、0.28 g/kg),连续灌服30 d.测定各组大鼠学习记忆能力、脑组织丙二醛(MDA)、脂褐素(LF)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和单胺氧化酶B(MAO-B)活性,同时观察不同剂量山茱萸多糖对衰老模型大鼠上述指标的影响.结果 衰老模型组MDA、LF含量、MAO-B活性较青年组明显增加(P＜0.01),而学习记忆能力、SOD活性明显低于青年组(P＜0.01);不同剂量山茱萸多糖组学习记忆能力、SOD活性明显高于衰老模型组(P＜0.05,P＜0.01),而MDA、LF含量、MAO-B活性显著低于衰老模型组(P＜0.05,P＜0.01),以山茱萸多糖大剂量组效果更显著,山茱萸多糖大剂量组作用优于小剂量组.结论 山茱萸多糖可通过提高机体抗氧化能力、抑制脂质过氧化、提高老化相关酶活性发挥抗脑老化作用,提高大鼠学习记忆能力.     

长链非编码RNA牛磺酸上调基因1靶向miR-34a-5p/沉默信息调节因子2相关酶1对糖尿病肾脏疾病氧化应激损伤调控作用的研究

目的探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)靶向miR-34a-5p/沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)对DKD氧化应激损伤的调控作用。方法采用体外实验,将小鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组(Con)、高糖组(HG)、过表达空白对照组(pcDNA-NC)、过表达TUG1组(pcDNA-TUG1)、沉默空白对照组(si-NC)、沉默TUG1组(si-TUG1),沉默SIRT1组(si-SIRT1)、模拟物空白对照组(mimics NC)、miR-34a-5p模拟物组(miR-34a-5p mimics)、抑制空白对照组(inhibitor NC)、miR-34a-5p抑制组(miR-34a-5p inhibitor)、过表达TUG1联合miR-34a-5p模拟物组(pcDNA-TUG1+miR-34a-5p mimics)、过表达TUG1联合沉默SIRT1组(pcDNA-TUG1+si-SIRT1);体内实验将小鼠分为假手术组(S)、模型组(DKD)、慢病毒载体(LV)空白对照组(LV-NC)、LV-TUG1组、LV-TUG1+miR-34a-5p组和LV-TUG1+LV-si-SIRT1组。采用qRT-PCR检测TUG1、miR-34a-5p、SIRT1 mRNA水平,ELISA法检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)含量,HE染色观察肾组织病理学改变。结果与Con组比较,HG组TUG1表达水平降低(P0.01)。与S组比较,DKD组TUG1表达水平降低(P0.01)。过表达TUG1后,肾组织和肾小球系膜细胞ROS、MDA表达水平降低(P0.01),SOD表达水平升高(P0.01)。沉默SIRT1或过表达miR-34a-5p均可逆转过表达TUG1对氧化应激损伤的抑制作用。结论 TUG1靶向miR-34a-5p/SIRT1调控DKD氧化应激损伤。