戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖的影响及其调控机制

目的 探讨戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖、核因子(NF)-κΒ、环氧合酶(COX)-2表达的影响.方法 将常规培养的人肾小管上皮细胞分为正常糖、高糖和高糖加200 μmol/L戊地昔布组,72 h后收集细胞,采用流式细胞术检测细胞的增殖指数(PI);免疫细胞化学检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和NF-κB蛋白的表达变化,流式细胞术检测肾小管上皮细胞中NF-κB和COX-2蛋白的表达情况.结果 (1)与正常糖组比较,高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达增强和PI升高(P＜0.01或P＜0.05);而戊地昔布能够降低高糖培养的肾小管上皮细胞PCNA的表达和PI(P＜0.01).(2)正常糖组,NF-κB主要表达在肾小管上皮细胞的细胞浆内,而高糖组NF-κB表达增强,阳性表达主要定位于肾小管上皮细胞的细胞核内;高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-κB活化和COX-2蛋白的表达(P＜0.01);高糖加戊地昔布组NF-κB及COX-2表达均降低(P＜0.01).(3)NF-κB和COX-2呈显著正相关;同时COX-2蛋白表达与PI呈显著正相关(P＜0.01).结论 降低NF-κB活化、下调COX-2蛋白表达从而降低肾小管上皮细胞增殖可能是戊地昔布保护糖尿病时肾脏损伤的机制之一.     

重症急性胰腺炎模型大鼠促炎性因子和COX-2动态变化及塞来昔布干预效应的研究

目的探讨重症急性胰腺炎（SAP）模型鼠血清促炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α以及胰腺组织中环氧化酶2（COX-2）的变化及选择性COX-2抑制剂塞来昔布的干预效应。方法雄性SD大鼠120只，随机分为假手术组、SAP模型组、塞来昔布组和地塞米松组，每组各30只。各组于术后6、12和24h3个时相处死大鼠测血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平，每次10只；取各组术后24h处死大鼠的胰头组织，行HE染色及免疫组化染色，分别观察大鼠胰腺组织病理学变化及COX-2的表达情况。结果假手术组胰腺组织基本正常，SAP模型组胰腺腺泡结构严重破坏消失，血管消化，大片坏死灶周围大量炎性细胞浸润。塞来昔布组和地塞米松组各时相病理改变明显减轻。仅见腺泡和间质水肿，炎性细胞浸润或伴轻度出血和局灶性坏死；SAP模型组、塞来昔布组和地塞米松组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平随病程进展而升高（P〈0．05），各时相SAP组、塞来昔布组和地塞米松组水平明显高于假手术组（P〈0．01，P〈0．05），SAP模型组水平明显高于塞来昔布组和地塞米松组（P〈0．01），而塞来昔布组和地塞米松组之间无显著差异（P〉0．05）；SAP模型组、塞来昔布组和地塞米松组的COX-2阳性率分别为90％，60％和50％，假手术组中阳性率为0，SAP模型组COX-2阳性率高于两个组（P〈0．05）。结论IL-1β、IL-6和TNF-α介导了SAP的发生和发展，并且增加了COX-2在SAP中的表达活性；选择性COX-2抑制剂塞来昔布可以减轻SAP的炎症反应，间接抑制促炎症性细胞因子的产生。     

塞来昔布对大鼠重症急性胰腺炎的治疗作用

目的:探讨塞来昔布对大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)治疗效果及机制.方法:SD大鼠共135只,其中75只随机平均分为SAP组,低剂量及高剂量塞来昔布组,观察其生存率;60只SD大鼠随机平均分为对照组(假手术组),SAP组,低剂量及高剂量塞来昔布组.胆胰管内注射牛磺胆酸钠溶液造模,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β及IL-6的表达;RT-PCR检测胰腺组织COX-2 mRNA的表达;HE染色、胰腺组织半定量积分评价胰腺病理学改变.结果:塞来昔布可降低大鼠SAP的病理损害积分,高剂量组在造模后的24 h可显著减低组织水肿(2.28±0.30 vs 2.73±0.22,P<0.05);在12和24 h均可显著降低腺泡坏死(2.03±0.15vs 2.48±0.24,2.09±0.10 vs 2.65±0.25,均p<0.05)及炎性细胞浸润(1.80±0.22 vs 2.51±0.17,1.57±0.26 vs 2.20±0.22,均p<0.05).造模后COX-2 mRNA表达及TNF-α、IL-1β及IL-6产生增加.塞来昔布治疗组上述检测指标明显低于SAP组(均P<0.05),且随塞来昔布剂量的增加其抑制作用逐渐增强.塞来昔布高剂量治疗组可显著提高大鼠SAP的生存率(16%vs 52%,P<0.05).结论:塞来昔布可能通过抑制TNF-α、IL-1β及IL-6的表达,改善胰腺局部病理改变及预后.     

塞来昔布对人胃癌SGC-7901细胞系VEGF表达的影响

目的探讨选择性环氧合酶2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人胃癌SGC-7901细胞系血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法设置时效组和量效组,利用RT—PCR以及Western blot技术检测塞来昔布对SGC-7901细胞系VEGFmRNA和蛋白表达的影响。结果随着药物浓度的增加和时间的延长,VEGFmRNA和蛋白表达均呈现相应的下降趋势。结论塞来昔布可以在一定程度上有效地抑制人胃癌SGC-7901细胞系VEGF的表达。     

塞来昔布对胰腺癌的放疗增敏作用及其机制研究

目的研究环氧合酶-2选择性抑制剂塞来昔布联合放射治疗对胰腺癌的作用，并探讨其作用机制。方法克隆形成实验和裸鼠移植瘤模型观察塞来昔布、放疗和两者联合对胰腺癌细胞SW1990体内外增殖的影响。Western印迹法检测细胞增殖相关蛋白表达。原位缺口末端标记法（TUNEL）研究胰腺癌细胞凋亡。RT-PCR检测凋亡相关基因表达的变化。体外血管生成和体外侵袭力测定方法检测塞来昔布、放疗及两者联合对胰腺癌细胞新生血管生成和细胞侵袭力的影响，RT-PCR、明胶酶谱和反式酶谱方法检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9及其组织抑制剂（TIMP）-1、TIMP-2的表达。结果塞来昔布在体内外均有放射增敏作用。胰腺癌细胞增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达水平在塞来昔布组和联合放疗组均降低，联合组较塞来昔布组有进一步降低。塞来昔布诱导胰腺癌细胞凋亡，单独放疗并不能诱导SW1990细胞发生凋亡，两者联合凋亡细胞数明显增加。塞来昔布下调bel-2 mRNA表达，而放疗诱导bel-2 mRNA表达上调，联合组bel-2的表达最低。单剂量放疗时，裸鼠胰腺癌移植瘤的生长延迟时间为22d，联合塞来昔布为38d。单独放疗并不能抑制体外胰腺癌细胞的新生血管生成和侵袭，塞来昔布在体外抑制胰腺癌新生血管形成和侵袭，塞来昔布与放疗联合其抑制作用较单用塞来昔布无明显增强。塞来昔布抑制胰腺癌细胞合成、分泌和激活MMP-2、MMP-9，但对TIMP-1、TIMP-2的合成、分泌和激活无明显影响。结论COX-2选择性抑制剂塞来昔布对胰腺癌放疗有增敏作用，其机制涉及诱导细胞凋亡，并通过抑制胰腺癌细胞新生血管生成和细胞侵袭，间接对胰腺癌的放疗起增敏作用。     

PIAS1基因沉默对雨蛙肽诱导胰腺腺泡细胞凋亡的影响

活化STAT蛋白抑制物(PIAS)1基因沉默可增强雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞炎症反应。目的:探讨PIAS1基因沉默对雨蛙肽刺激胰腺腺泡细胞凋亡的影响。方法:AR42J胰腺腺泡细胞在Lipofectamine~(TM)2000介导下转染PIAS1-siRNA和阴性siRNA。将细胞分为PIAS1-siRNA+雨蛙肽组、阴性siRNA+雨蛙肽组、脂质体+雨蛙肽组、PBS+雨蛙肽组和对照组。以DNA Ladder、Hoechst 33258染色检测细胞凋亡情况,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR和蛋白质印迹法检测1353、Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果:与其余各组相比,PIAS1-siRNA+雨蛙肽组DNA梯度裂解条带明显增加,荧光着色阳性细胞数增多;G1期细胞数增多,S期细胞数减少,细胞凋亡率增加;p53、Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调(P均0.05)。结论:PIAS1基因沉默可增强雨蛙肽活化的caspase-3凋亡途径诱导的胰腺腺泡细胞凋亡,为通过调控PIAS1表达治疗急性胰腺炎提供新的理论依据。     

塞来昔布对人结肠癌细胞株HT-29MIF、PTEN和Caspase-3表达的影响

背景：塞来昔布为环氧合酶．2（COX-2）选择性抑制剂,近年研究发现其具有抗肿瘤作用。目的：观察塞来昔布对人结肠癌细胞株HT-29巨噬细胞游走抑制因子（MIF）、抑癌基因蛋白PFEN和凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响,探讨其防治结肠癌可能的分子机制。方法：25、50、100μmol／L塞来昔布分别作用于HT-29细胞24h后,以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HT-29细胞MIFmRNA表达,蛋白质印迹法检测MIF、PTEN、Caspase-3蛋白表达。结果：经25～100μmol/L塞来昔布处理后,HT-29细胞MIFmRNA和蛋白表达随塞来昔布浓度的增加而减低,PTEN和Caspase-3蛋白表达随塞来昔布浓度的增加而增加,与正常对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：塞来昔布的抗结肠癌作用可能与下凋MIF表达和上调PTEN、Caspase-3表达有关。     

塞来昔布对宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用观察及机制探讨

目的观察环氧合酶2（COX-2）抑制剂塞来昔布对宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用,并探讨其机制。方法将对数生长期的HeLa细胞分为3组,阴性对照组单纯培养液培养,单纯放射组采用6MV的x线照射治疗,放射加药组先用20、40umol／L塞来昔布作用72h,再行x线照射。采用克隆形成实验测算细胞放射敏感性参数平均致死剂量（Do）、准域剂量（Dq）、2Gy照射存活分数（SF2）及放射增敏比（SERDo）,采用免疫细胞化学法检测HeLa细胞中的COX-2、VEGF—C。结果放射加药组Do、Dq和SF2值小于单纯放射组（P均〈0．05）,其SERDo由2．01±0．06增至2．41±0．08;与阴性对照组、单纯放射组比较,放射加药组HeLa细胞的COX-2、VEGF—C表达显著降低（P均〈0．05）。结论塞来昔布能增强宫颈癌HeLa细胞的放射敏感性,可能与下调宫颈癌细胞的COX-2、VEGF—C表达有关。     

抗氧化剂对大鼠重症急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡的影响

目的探讨四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯（PDTC）对重症急性胰腺炎（SAP）胰腺腺泡细胞凋亡的影响。方法SD大鼠72只，随机分为：假手术组（sham operation，SO）、SAP组和PDTC组。SAP模型采用5％牛磺胆酸钠1ml/kg胰胆管逆行穿刺注射建立，PDTC组在造模前1h给予腹腔注射PDTC（1130mg/kg），术后分4个时段（1、3、6、12h）分批进行腹主动脉采血后处死，取胰腺组织作病理切片与液氮冻存。胰腺腺泡细胞的凋亡检测应用TUNEL法、电镜以及免疫组化法检测胰腺组织Caspase-3的表达；核因子（NF）-κB活化的检测应用免疫组化法。同时观察各组血清淀粉酶、脂肪酶水平及胰腺组织病理学评分。结果SAP组各时间点血清淀粉酶及脂肪酶水平及胰腺组织病理组织学评分较SO组显著增高（P〈0．05）。PDTC治疗组血清淀粉酶、脂肪酶水平较SAP组明显降低；胰腺组织病理组织学评分明显改善。PDTC治疗后3、6、12h胰腺组织Caspase-3的表达显著高于SAP组（P〈0．01），而在1h无统计学差异；各时间点胰腺腺泡细胞凋广指数显著高于SAP组（P〈0．01）；NF—κB的活化显著低于SAP组（P〈0．01）。结论SAP时，PDTC可能通过抑制NF—κB的活化，从而抑制NF—κB介导胰腺细胞的抗凋亡效应，减少胰腺腺泡细胞坏死。     

选择性环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对胃癌治疗作用的体内实验研究

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对体内胃癌生长的影响及作用机制。方法建立裸鼠胃癌模型,20只裸小鼠随机分为2组,对照组隔日腹腔注射生理盐水,塞来昔布组隔日腹腔注射塞来昔布30mg/kg,采用免疫组化法检测微血管密度(MVD),采用半定量-TRAP银染法检测端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率。结果塞来昔布组肿瘤生长明显受抑制,抑瘤率为61.3%,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);流式细胞仪检测到凋亡峰,细胞阻滞于G0/G1期。同时它也显著抑制胃癌细胞的端粒酶活性,肿瘤组织中的MVD较对照组显著降低。结论塞来昔布通过诱导细胞凋亡,降低端粒酶活性,减少血管生成,从而抑制胃癌生长。这可能是COX-2抑制剂塞来昔布体内抗胃癌的机制。     

罗格列酮对大鼠重症急性胰腺炎NF-κB和ICAM-1的作用

目的探讨大鼠重症急性胰腺炎（SAP）时罗格列酮对核因子-κB（NF-κB）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的作用。方法急性胰腺炎模型组（SAP组）逆行胆胰管注射牛磺胆酸钠建立大鼠SAP模型;假手术组（SO组）逆行胆胰管注射等量生理盐水;罗格列酮组（R组）于造模前30min给予罗格列酮。检测血清淀粉酶（AMY）的变化,取胰头部胰腺组织行病理学检查;免疫组化检测胰腺组织NF-κB和ICAM-1的表达情况。结果SAP组各时间点AMY、胰腺组织病理评分及NF-κB和ICAM-1的表达较SO组增高（P〈0．01）;R组各时间点上述指标较SAP组均下降,但仍高于SO组（P〈0．01）;NF-κB和ICAM-1两者在SAP组和R组具有相关性（P〈0．01）。结论罗格列酮能减轻大鼠SAP胰腺病理损伤,其机制可能与通过抑制NF-κB的活性、降低ICAM-1的表达有关。     

microRNA-101和环氧合酶-2在胃癌中的表达及其临床意义

背景：microRNAs是一类对靶基因表达具有转录后调控作用的非编码小RNA。microRNA-101（miR-101）在多种恶性肿瘤中呈低表达,而过表达外源性miR-101可发挥肿瘤抑制作用。前期体内、外实验发现外源性miR-101可抑制胃癌细胞增殖和环氧合酶-2（COX-2）表达。目的：检测胃癌组织中的miR-101、COX-2表达并探讨其临床意义。方法：收集手术切除胃癌组织和配对癌旁非癌组织标本30例,以实时荧光定量RT—PCR检测miR-101、COX-2mRNA表达,分析两者间以及两者与胃癌主要临床病理特征的关系。结果：绝大多数胃癌组织中miR-101表达低下,COX-2mRNA则呈过表达。胃癌组织与癌旁非癌组织间miR-101、COX-2mRNA表达量差异显著（P〈0．01）,且两者表达在癌组织和癌旁组织中均呈负相关（癌组织：r=-0．767,P=0．000;癌旁组织：r=-0．718,P=0．000）。TNMⅢ、IV期胃癌和伴淋巴结转移的胃癌中,miR-101表达分别显著低于TNMI、Ⅱ期病例和无淋巴结转移病例（P〈0．05）,COX-2mRNA表达分别显著高于TNMI、Ⅱ期病例和无淋巴结转移病例（P〈0．05）。结论：miR-101与COX-2之间的负相关性可能有助于胃癌的临床诊断;miR-101表达低下伴COX-2过表达与胃癌临床进展和转移有关,对预后判断有一定参考价值。     

Pancreatic lysosomal enzyme secretion is changed by hepatectomy in rats.

To explore the effect of hepatectomy on the secretion of lysosomal enzymes into the pancreatic juice when stimulated by gut hormones, we evaluated the cerulein-stimulated amylase output and cathepsin B output into pancreatic juice, the amylase and cathepsin B content in pancreatic tissue, and the distribution of cathepsin B in acinar cells in the regenerating (4 days) and recovering (8 days) stages after about 70% hepatectomy in rats. Amylase output was significantly higher after hepatectomy than in the control groups. Cathepsin B was secreted into the pancreatic juice after stimulation by cerulein in both the control and the hepatectomized groups, but, particularly 4 days after hepatectomy, cathepsin B output was significantly higher than in the controls, and in the acinar cells redistribution of cathepsin B was found. These changes in cathepsin B disappeared in the recovery stage (8 days) after hepatectomy. In addition, the amylase content in pancreatic tissue was significantly greater in the hepatectomized than in the control rats, but the cathepsin B content did not show any significant change. These results indicate that cerulein can stimulate the secretion of lysosomal enzyme into the pancreatic juice, as it does the secretion of digestive enzymes. Moreover, it appears that the synthesis and secretion of amylase in and from the acinar cells is increased after hepatectomy and that a redistribution of lysosomal enzyme occurs in the acinar cells.     

辛伐他汀对T淋巴细胞抗炎机制的研究

目的:探讨他汀类药物对人外周血T淋巴细胞的抗炎机制。方法:体外培养人外周血T淋巴细胞,用不同浓度的辛伐他汀进行处理,实时荧光定量PCR法检测T细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)mRNA表达水平,免疫细胞化学S-P法检测T细胞核因子-kappaB(NF-κB)移位情况。结果:辛伐他汀呈剂量依赖性抑制TNF-α、IL-2mRNA表达,抑制NF-κB移位入核。结论:辛伐他汀可对人外周血T淋巴细胞有抗炎作用,且可能是通过抑制NF-κB的转位入核实现的。     

高脂血症兔主动脉NF-κB、VCAM-1和VEGF的表达及氟伐他汀的影响

目的观察高脂饮食后兔主动脉NF-κB、VCAM－1、VEGF的表达及氟伐他汀的影响，探讨高脂血症引起动脉粥样硬化可能的分子生物学机制和氟伐他汀的作用。方法健康雄性新西兰大耳白兔30只，随机分为5组，高脂饮食4周、6周、8周组，正常饮食和高脂饮食加氟伐他汀组。到规定时间点，处死动物取主动脉标本，观察组织形态学变化，用免疫组化的方法检查NF-κB、VCAM－1和VEGF的表达。结果①高脂血症可以引起NF-κB、VCAM－1、VEGF增加，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。②LDL水平与NF-κB表达呈显著正相关（r=0．922，P〈0．01）；NF-κB与VCAM－1、VEGF呈显著正相关（r＝0．937，P〈0．01，r=0．894，P〈0．01）。③氟伐他汀可以减少NF-κB、VCAM－1和VEGF的表达（P＜0．05）。结论NF-κB、VCAM－1和VEGF参与了动脉粥样硬化的进程，炎症是高脂血症的伴随因素，引起了细胞增殖，与动脉粥样硬化密切相关：氟伐他汀可以减少其表达起到抗动脉粥样硬化作用。     

IKKβ和NF-κB p65在食管癌及癌前病变中的表达

目的探讨IKKβ和NF-κBp65在食管癌和癌前病变组织中的表达及意义。方法采用免疫组化PV-9000法检测正常食管上皮、基底细胞增生、间变和鳞状细胞癌中IKKβ和NF—κBp65的表达情况,以及在食管癌不同分化、淋巴结转移、浸润程度中的表达情况。结果IKKβ、NF—κBp65在不同组织中阳性表达率分别为：正常上皮（19．7％／12．8％）、基底细胞增生（46．7％／43．3％）、间变（76．0％／64．0％）和鳞状细胞癌（84．8％／75．8％）,且随着食管病变进展,阳性表达率明显升高,正常上皮与鳞状细胞癌之间有明显差异（P〈0．05）;IKKβ、NF—κBp65的表达与食管癌组织的淋巴结转移和浸润程度呈正相关（P〈0．05）。结论IKKβ、NF—κBp65在食管癌和癌前病变表达激活,可能与食管癌的发生发展及转移浸润密切相关。     

Treg及IL-4对重症急性胰腺炎时枯否细胞M2极化状态的调节作用

目的探讨雨蛙肽联合脂多糖诱导小鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)的方法和Treg(CD4+CD25+FoxP3+T调节淋巴细胞)及IL-4(白介素-4)对SAP时枯否细胞(Kupffer cells)M2极化状态的调节作用的比较。方法 (1)正常组予腹腔注射生理盐水(NS);SAP组予腹腔注射雨蛙肽联合脂多糖。SAP组细分为3组:造模后9 h、12 h和24 h组,比较胰腺病理情况。(2)比较正常组与模型组(SAP 8 h+NS组)肝脏炎症因子的基因表达水平。(3)模型组分3组:SAP生理盐水对照组(SAP16 h+NS组)、SAP IL-4治疗组(SAP 16 h+IL-4组)、SAP Treg治疗组(SAP 16 h+Treg组)。RT-PCR检测肝脏炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-10 mRNA表达水平;免疫荧光技术检测肝脏CD163、CCR7的表达。结果 (1)HE病理结果造模后24 h可见胰腺片状坏死。(2)模型组IL-1βmRNA的表达显著高于正常组(P0.05)。(3)SAP Treg治疗组IL-1β、TNF-αmRNA的表达显著低于SAP生理盐水对照组(P0.05);SAP Treg治疗组IL-1βmRNA的表达显著低于SAP IL-4治疗组(P0.05)。结论雨蛙肽联合脂多糖成功诱导小鼠SAP。IL-4和Treg对SAP具有一定的治疗作用。