腹透液中人腹膜间皮细胞的原代培养

人腹膜间皮细胞 (ＨＰＭＣ)是腹膜表层主要的细胞群体 ,间皮细胞在腹膜透析 (ＰＤ)时对腹膜具有重要的保护功能。长期ＰＤ的患者 ,其腹膜间皮层微绒毛减少、脱落乃至间皮层消失[1] ,最终促进了腹膜纤维化的进展及腹膜失超滤的发生。建立间皮细胞的体外培养体系 ,对于开展ＰＤ领域的基础及临床研究 ,具有非常重要的意义。基于以上的认识 ,本研究建立ＰＤ流出液中原代培养ＨＰＭＣ的培养方法 ,并设法应用扫描电镜动态观察来自不同透龄培养的间皮细胞其形态学上的差异 ,以利用这种无创性的体外培养方法间接地判断ＰＤ患者体内腹膜间皮层的实际…     

高浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞生长和基质合成的影响

持续性不卧床腹膜透析（ＣＡＰＤ）时腹膜间皮层直接浸泡于含葡萄糖１．５０％～４．２５％的透析液中，为了探讨高浓度葡萄糖对腹膜间皮细胞生长和基质合成的影响，我们建立了人腹膜间皮细胞（ＨＭＣ）培养体系。ＨＭＣ在含葡萄糖浓度≥１．００％的培养基中生长时，￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入量较在０．１０％或不加葡萄糖的培养基中生长时明显降低。当介质中葡萄糖浓度≥０．５０％时ＨＭＣ培养上清的纤维连接蛋白（ＦＮ）水平明显增高。葡萄糖引起的细胞增殖抑制和ＦＮ分泌增加均呈时间与剂量依赖关系。用甘露醇代替葡萄糖进行试验得到相似结果，但其抑制细胞增殖的作用明显弱于相同渗量的葡萄搪。上述结果表明，周围介质中高浓度的葡萄糖对ＨＭＣ生长和基质合成具有直接影响。反复或长期使用高糖透析液引起的ＨＭＣ修复和代谢障碍可能参与了ＣＡＰＤ相关性腹膜硬化的发生。     

从网膜组织法培养人腹膜间皮细胞

腹膜结构与功能的稳定和维持是长期腹膜透析治疗的基础 ,腹膜间皮细胞是构成腹膜最大的细胞群体 ,对保持腹膜结构和功能稳定 ,防止腹腔感染和腹膜硬化等具有重要作用[1～ 4 ] ,腹膜透析时透析液长期与腹膜接触而损伤腹膜间皮细胞。因而探讨人腹膜间皮细胞生理功能及其在腹膜透析时的改变 ,对预防和减少腹膜透析相关性腹膜炎和腹膜硬化的发生 ,延长腹膜的使用寿命等具有重要意义。建立人腹膜间皮细胞培养体系 ,为体外研究人腹膜间皮细胞生理功能及其在腹膜透析时的改变提供了有效手段。早在 2 0世纪 80年代初 ,Ｗｕ等[5] 通过直接从患者腹水…     

替米沙坦抑制Mtdh表达激活自噬在改善腹膜纤维化中的作用

目的:探究替米沙坦对腹膜透析相关性腹膜纤维化的影响及异黏蛋白metadherin(Mtdh)和自噬在其中的作用.方法:采用4.25％葡萄糖腹膜透析液建立小鼠腹膜透析相关性腹膜纤维化模型和转化生长因子βl(TGF-β1)诱导的腹膜间皮细胞间质转分化模型.C57BL/6J小鼠按体重随机分为对照组、模型组及替米沙坦干预组;M...     

腹膜透析患者癌症相关抗原125水平及腹膜转运功能的纵向观察

腹膜功能的丧失是长期腹膜透析 (简称腹透 )患者面临的严重问题。腹膜间皮细胞是腹膜的重要细胞 ,担负着分泌、吸收、再生、防御功能 ,腹膜功能好坏与间皮细胞密切相关。癌症相关抗原 12 5 (ＣＡ 12 5 )是一种相对分子量为 2 2 0×10 6的糖蛋白 ,能被间皮细胞分泌 ,是反映间皮细胞数量的标记物[1] 。本研究的目的在于纵向观察腹透患者ｄ ＣＡ 12 5水平和腹膜转运功能及其变化与间皮细胞受损有无相关性。一、对象与方法1.对象 :本院腹膜透析患者 30例 ,男性 14例 ,女性 16例 ,平均年龄 (6 0± 16 )岁 ,平均腹透时间 (36± 18)个月。使用商品…     

辛伐他汀诱导肺成纤维细胞凋亡的研究

成纤维细胞过度增殖并产生过量细胞外基质可导致多种肺部疾病 ,如特发性肺间质纤维化、气道重建[1 ] ,目前对此类疾病尚缺乏有效治疗方法 ,羟甲基戊二酸单酰辅酶 Ａ(ＨＭＧ ＣｏＡ)还原酶抑制剂辛伐他汀是目前广泛应用于临床的降脂类药物。近年来 ,很多研究证实 ,ＨＭＧ ＣｏＡ还原酶抑制剂具有诱导多种细胞凋亡的作用[2 ,3] 。本实验在体外研究辛伐他汀对肺成纤维细胞凋亡的诱导作用。材料与方法　 (1 )肺成纤维细胞的原代培养 :取肺组织约 1ｃｍ3,剪成碎块 ,加入 0 2 5 %的胰蛋白酶 ,37℃消化30ｍｉｎ ,1 0 0目钢丝网过滤 ,离心混悬液 ,…     

高糖和抗生素对大鼠腹膜间皮细胞表达PAI和TGF—βmRNA的影响

为探讨腹膜硬化的发生机制，采用腹膜间皮细胞培养、纤维蛋白平板方法和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术观察了不同浓度葡萄糖和抗生素庆大霉素与头孢唑啉钠对大鼠腹膜间皮细胞纤溶酶原激活物抑制物（ＰＡＩ）产生和转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）ｍＲＮＡ表达的影响。结果表明腹膜间皮细胞可表达ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ和产生活性ＰＡＩ；培养１２小时，１１．２ｍｍｏｌ／Ｌ的高渗葡萄糖、庆大霉素和头孢唑啉钠可增强腹膜间皮细胞ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ的表达和增加活性ＰＡＩ的分泌；培养至２４小时，１１．２ｍｍｏｌ／Ｌ的高渗葡萄糖继续诱导腹膜间皮细胞产生活性ＰＡＩ增加，庆大霉素既可以继续引起ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ表达增加，而且还可以使腹膜间皮细胞活性ＰＡＩ产生增加。同时在培养２４小时，１１．２ｍｍｏｌ／Ｌ的高渗葡萄糖和庆大霉素与头孢唑啉钠均可引起腹膜间皮细胞ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达增加。结果提示：１１．２ｍｍｏｌ／Ｌ的高渗葡萄糖和庆大霉素与头孢唑啉钠可以导致间皮细胞表达ＰＡＩ和ＴＧＦ－β上调，在腹膜硬化发生机制中起着重要作用。     

表皮生长因子对腹膜间皮细胞增殖的影响

为探讨表皮生长因子（ＥＧＦ）对腹膜间皮细胞增殖的影响，以了解其在损伤腹膜修复中的作用及其机制，建立了人腹膜间皮细胞（ＨＭＣ）培养体系。采用真空负压ＡＢＣ免疫组化法分析了ＨＭＣ表面表皮生长因子受体（ＥＧＦ－Ｒ）的表达，并以３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法对６例ＨＭＣ在不同培养时间和不同剂量ＥＧＦ作用下的细胞增殖程度进行了检测。结果表明，ＨＭＣ表面有ＥＧＦ－Ｒ存在，ＥＧＦ能促进ＨＭＣ增殖，当ＨＭＣ在含２０μｇ／ＬＥＧＦ的培养基中生长时，其３Ｈ－ＴｄＲ掺入量与对照组比较明显增加（Ｐ＜０．０１），而ＥＧＦ浓度５０μｇ／Ｌ时，ＨＭＣ增殖指数最大（ＰＩ＝８．１６），ＨＭＣ的增殖程度和ＥＧＦ呈时间与剂量依赖关系。提示，ＥＧＦ可能通过与ＨＭＣ表面的ＥＧＦ－Ｒ结合，促进细胞内的ＤＮＡ合成，加速细胞的增殖，对损伤腹膜的修复起重要作用。     

肝星状细胞与凋亡

肝星状细胞 (ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌ,ＨＳＣ)在肝纤维化形成过程中起关键作用。近年来研究发现 ,活化的ＨＳＣ主要通过凋亡方式减少 ,且有多种途径影响其凋亡[1 11] 。一、自发凋亡Ｓａｉｌｅ等[7] 报道 ,培养的ＨＳＣ在 2ｄ时不发生凋亡 ;4ｄ时凋亡率为 8%± 5 % ;7ｄ后则为 18%± 8%。而胆道结扎术后 2 1ｄ ,ＨＳＣ的自发凋亡率为 1%～ 3% [2 ] 。体内研究表明 ,肝组织急性损伤阶段 ,ＨＳＣ出现激活、增殖而无凋亡迹象 ;恢复阶段ＨＳＣ的凋亡与组织中ＨＳＣ总量的减少相平行[7,10 ] 。由此显示 ,自发凋亡可能是机体清除…     

细胞因子诱导人胸膜细胞释放纤溶酶原激活物抑制剂 …

目的 研究细胞因子对人胸膜间皮细胞（ＨＰＭＣ）释放纤溶酶原激活物抑制剂（ＰＡＩ－１）的诱导效应。方法 取材于渗出性胸膜腔积液的６份原代ＨＰＭＣ，置于ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液中体外孵育，观察白细胞介素（ＩＬ）－１β，肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）和转化生长因子（ＴＧＦ）－β１对ＨＰＭＣ纤溶活动的影响。对分离细胞的纯度进行光镜下细胞学形态、电镜下超微结构和免疫组化染色的鉴定，加入ＩＬ－１β、ＴＮＦα及ＴＧＦ