固相放射免疫试验检测鼠疫F1抗体

建立了固相放射免疫试验(SPRIA)检测鼠疫F1抗体的方法。被测抗体经F1抗原两次选择结合,提高了检测特异性。检测人和5种非鼠疫疫区动物血清205份,以及假结核菌等6株非鼠疫菌免疫动物血清,全部阴性。检测鼠疫康复人和接种鼠疫苗的7种动物血清8份,IHA和SPRIA全部阳性,放射免疫沉淀(SPA—RIP)有两种动物为阴性结果;阳性反应GMT、SPRIA比IHA高,比SPA—RIP低。试验表明SPRIA检测鼠疫F1抗体,具有良好的特异性和敏感性,操作简便、快速,可检测各种标本。     

2002年陕西省鼠疫F1抗体放射免疫监测结果分析

自1985年以来,陕西省连续18年在鼠疫疫区开展了放射免疫监测,用放射免疫沉淀试验(RIP)方法,来检查被检血清中是否存在鼠疫F1抗体。现将2002年放射免疫监测结果报告如下。1 材料和方法1.1 血清来源:2002年采自本省鼠疫疫区定边县各种鼠类血清246份,微量间接血凝试验(IHA)全部为阴性。1.2 试剂盒:放射免疫沉淀试验(RIP)试剂盒,由全国鼠疫布     

鼠疫菌F1抗原及抗体血清在不同保存条件下对RIP试验的影响

鼠疫抗体的放射免疫沉淀试验(RIP)已较普遍地应用于鼠疫监测工作中,为保证放免测定的准确性,我们对鼠疫菌F1抗原及抗体血清在不同保存条件下对放射免疫沉淀试验检测给果的影响进行了观察,现将结果报告于下。     

土壤保存鼠疫菌F1抗原的试验研究

本文报告利用放射免疫沉淀试验的竞争抑制原理,成功地从实验室保存了五年鼠疫菌的土壤中,检出F1抗原。检出F1抗原量可达340ng/ml。结果表明,该项试验较反向血凝方法敏感。     

马关县鼠疫F1抗体的发现及分析

云南省鼠疫流行历史悠久,据记载,马关县曾于1858～1904年多次发生过鼠疫大流行,属鼠疫远史流行县。在长期的鼠疫监测工作中,1984年从黄胸鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(SPA-血凝,1:40),1985年应用放射免疫沉淀试验(RIP),在同地区的黄胸鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(1:80),1996年从县城食品加工房捕获的2只褐家鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(1只 RIP1:5120,IHA1:40~(++),另1只RIP1:2560,IHA1:20~(++))。由此认为该县近年来曾发生过动物鼠疫流行,应加强鼠疫监测工作,密切监视疫情发展态势,检测结果如下。     

2015─2017年新疆青河县山区动物鼠疫血清学和病原学调查

目的通过鼠疫病原学和血清学的实验检测结果,了解新疆青河县山区存在鼠疫自然疫源地的潜在状况。方法采用鼠疫"四步检验"法分离青河县山区捕获的长尾黄鼠及灰旱獭脏器、自毙动物脏器及骨骼和寄生蚤中的鼠疫菌;间接血凝试验(HA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测动物脏器和寄生蚤悬液中的鼠疫F1抗原;长尾黄鼠、灰旱獭以及牧犬血清中的鼠疫F1抗体。结果经鼠疫"四步检验"和反向间接血凝(RIHA)检验长尾黄鼠脏器552份、灰旱獭脏器4份、自毙长尾黄鼠和灰旱獭脏器及骨骼13份、长尾黄鼠体外寄生蚤583只,均未检出鼠疫菌及F1抗原;检测长尾黄鼠血清552份,IHA法检出阳性1份、滴度1∶2~9,ELISA法检出阳性3份、平均滴度1∶2~8;检测牧犬血清129份,IHA法检出阳性6份、平均滴度1∶2^(3.83),ELISA法检出阳性8份、平均滴度1:26.75;其中牧犬鼠疫F1抗体阳性标本中检出鼠疫IgM抗体阳性2份,平均滴度1∶2^(5.5)。结论新疆青河县山区啮齿类动物间有鼠疫流行迹象,流行区域为花海子地区,存在潜在鼠疫自然疫源地,建议对该区域开展进一步鼠疫疫源性调查。     

反向血凝抑制试验(RIHI)检测鼠疫F1抗体在疫情监测和疫源地调查中的应用

在鼠疫疫情监测和疫源地调查工作中,将鼠疫 Fl 单克隆抗体致敏红细胞 (FlM_cAb-RBC) 用于反向间接血凝抑制试验 (RIHI),以间接血凝试验为对照,检测鼠疫 Fl 抗体,检测结果用 ELISA 和 SPRIA 验证,非鼠疫疫区6种动物血清1375份,RIHI 全部阴性,IHA 出现假阳性反应89份。鼠疫疫区3种动物血清713份,RIHI 检出 Fl 抗体阳性反应72份,未出现假阳性反应,IHA 检出 F1 抗体阳性反应44份,出现假阳性反应21份,几何平均滴度 RlHl 比 IHA 高2~(1.45)。RIHI 的特异性和敏感性均高于 IHA ,且简便、稳定、快速,是取代 IHA 检测鼠疫 Fl 抗体的理想方法。     

酶标鼠疫F1McAb在酶免疫染色法快速鉴定鼠疫菌中的应用

目的观察酶标鼠疫F1McAb在酶免疫染色法快速鉴定鼠疫菌中的应用效果.方法实验感染鼠疫强毒菌的病死小鼠和处死健康小鼠尸体,20℃以上室温放置,用鼠疫F1McAb酶免疫染色法检测,同时用细菌学检验方法分离鼠疫菌和反向血凝试验(RIHA)检测鼠疫F1抗原.结果直接培养仅从5d内的鼠尸分离检出鼠疫菌,阳性率为53.3%;动物实验检出鼠疫菌的最长时间为8d,阳性率为71.6%.存放13d内,酶免疫染色阳性率为99.1%,RIHA阳性率98.2%,用酶免疫染色法和RIHA检测健康动物腐败脏器全部阴性.以上方法检查鼠疫疫区自毙动物标本12份,酶免疫染色法阳性7份,RIHA阳性6份,动物实验阳性5份,直接培养未获得阳性结果.结论酶免疫染色法检查动物腐败脏器中的鼠疫菌具有较高的敏感性和特异性.     

一起炭疽疫情中鼠疫F1抗体胶体金检测阳性分析

目的通过对一起人间皮肤炭疽疫情中患者血清鼠疫F1抗体胶体金阳性分析,为鼠疫诊断提供借鉴。方法炭疽疫情处理过程中对患者血清鼠疫F1抗体进行鼠疫间接血凝试验(IHA)和胶体金检测。结果 2名皮肤炭疽患者2份血清鼠疫F1抗体胶体金检测阳性,鼠疫间接血凝检测试验复判结果显示阴性。结论在其他疫情处理过程中排除鼠疫时,应结合患者临床症状、流行病学调查结果及实验室检测结果综合诊断和分析。     

检测鼠疫抗体胶体金免疫层析试纸条的研制

目的建立快速、简易的检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析法(G ICA)。方法(1)采用胶体金颗粒标记纯化F1抗原,并将标记物喷于玻璃纤维;同时将纯化F1抗原喷线固定于硝酸纤维素膜上,用于F1抗体的捕捉;按常规组装成检测鼠疫抗体免疫层析试纸条。(2)采用该试纸条与血凝法对同一份兔抗F1抗体进行检测,以评价该试纸条的敏感性。(3)采用该试纸条对44株非鼠疫菌的免疫鼠血清进行检测,以评价该试纸条的特异性。(4)采用该试纸条、血凝法及ELISA对607份血清标本进行检测,以评价该试纸条对现场材料的检测效果。结果(1)该试纸条可在15 m in之内完成检测;(2)在敏感性上,该试纸条对同一份免疫兔血清的检测较血凝法高一个滴度;(3)对被试的44株所选菌株的免疫鼠血清的检测均为阴性;(4)在对607份血清标本的检测中,免疫层析试纸条、血凝及ELISA三种方法的符合率中度,而免疫层析试纸条的敏感性分别比血凝与ELISA高111%和90%。结论以纯化的鼠疫F1抗原为基础建立的G ICA检测鼠疫F1抗体的方法特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有较大的推广应用价值。     

RIP和IHA检测人血清F1抗体的比较研究

检测鼠疫F_1抗体通常采用间接血凝试验(IHA)。80年代初放射免疫沉淀试验(RIP)被引入国内,并很快得到推广使用,本文采用这两种方法,检测了我省近两年发生的鼠疫患者,疑似鼠疫患者和部分健康人群血清F_1抗体,并通过直线回归比较了两法的敏感性,结果如下。     

鼠疫F1McAb酶免疫染色法快速检验鼠疫苗

为缩短检验鼠疫菌的时间，建立了酶免疫染色法检验鼠疫菌的方法，被检涂片标本用含过氧化物酶底物的固定液，固定标本同时，内源性过氧化物酶被消耗，辣根过氧化物酶标记鼠疫F1单克隆抗体和鼠疫菌菌体表面的特异性F1抗原结合，底物被酶催化生成有色沉淀物使鼠疫菌着色，用普通光学显微镜观察结果，常温1h出结果，Kaplow法鼠疫菌被蓝色晶体覆盖，DAB法鼠疫菌呈棕黄色，不含F1抗原的8株细菌均为阴性，酶免疫染色法具有特异，快速，简便的特点，可用于鼠疫菌的快速检验。     

放射免疫沉淀试验检测鼠疫FI抗体的研究——Ⅰ.特异性与敏感性

试验证明,用放射免疫沉淀试验(RIP)检测鼠疫抗体时,将被试血清与相应的阴性对照血清的结合比定为≥3作为反应标准是适宜的;用RIP检测假结核,小肠结肠炎菌等抗血清30份,这些抗血清在1:10到1:100的各种稀释度中与~(125)I-鼠疫FI抗原均无交叉反应,从非鼠疫疫区收集的2196份哺乳动物血清,亦未发现阳性反应,说明该法特异性强。由于RIP是用分离剂沉淀鼠疫抗原-抗体复合物,故能检出不完全抗体,检出率不仅高于常规的间接血球凝集试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA),且滴度往往高十几倍、几十倍,乃至几百倍。所以用RIP检测潜在性鼠疫疫源地、考核灭源效果以及在科研中用于检测微量鼠疫抗体具有重要意义。加之该法自动化程度高,测试信息以数字显示,因而指标客观,容易分析,适于大规模现场调查。     

云南家鼠鼠疫疫源地人群和指示动物血清鼠疫F1抗体调查

目的 了解云南省家鼠鼠疫疫源地静息期人和指示动物血清鼠疫F1抗体情况,分析鼠疫发生和流行的风险。方法 2019年7——8月,课题组选择云南省家鼠鼠疫疫源地弥勒市、芒市和梁河县作为研究区域,对8个曾经报告2次及以上鼠疫的自然村和8个从未报告鼠疫的自然村的人群及指示动物进行血清采集,每个自然村采集人血清不少于20份,指示动物血清不少于10份。用间接血凝法检测鼠疫F1抗体,并用上转发光法对阳性样本进行再次检测确认。结果 368份人血清中仅有1份鼠疫F1抗体阳性,307份犬血清和12份猫血清鼠疫F1抗体均为阴性。结论 云南家鼠鼠疫疫源地人群鼠疫F1抗体阳性率非常低,但鼠疫F1抗体阳性的自然村需要加强鼠疫监测。指示动物未检测出鼠疫F1抗体,当地发生鼠疫的风险不高。     

鼠疫F1McAb酶免疫染色法快速检验鼠疫菌

为缩短检验鼠疫菌的时间 ,建立了酶免疫染色法检验鼠疫菌的方法 ,被检涂片标本用含过氧化物酶底物的固定液 ,固定标本同时 ,内源性过氧化物酶被消耗 ,辣根过氧化物酶标记鼠疫 F1单克隆抗体和鼠疫菌菌体表面的特异性 F1抗原结合 ,底物被酶催化生成有色沉淀物使鼠疫菌着色 ,用普通光学显微镜观察结果 ,常温 1h出结果 ,Kaplow法鼠疫菌被蓝色晶体覆盖 ,DAB法鼠疫菌呈棕黄色 ,不含 F1抗原的 8株细菌均为阴性 ,酶免疫染色法具有特异、快速、简便的特点 ,可用于鼠疫菌的快速检验     

鼠疫FI单克隆抗体致敏红细胞用于反向血凝抑制试验检测鼠疫FI抗体的试验研究

本文介绍了鼠疫FI MCAb致敏红细胞用于反向血凝抑制试验检测鼠疫FI抗体的试验。结果表明,用该法检测95份正常人和8种动物血清,7种非鼠疫菌免疫动物血清,全部阴性;检测9份抗鼠疫强毒株和1份弱毒株血清及1份接种鼠疫菌苗的人血清,全部阳性,滴度比间接血凝试验(IHA)高2~1～2~3。该法可省去另做一排抑制试验的操作程序,较IHA简便、快速,在鼠疫疫源地调查和疫情监测中有良好的应用前景。     

中蒙边境阿尔泰山区鼠疫调查研究

目的 探索中蒙边境阿尔泰山区鼠疫自然疫源地，为做好边境地区疫情防控提供依据。方法 在中蒙边境阿尔泰山区建立野外帐篷实验室鼠疫监测点，用1日弓型夹法在自毙鼠洞、洞旁、周边洞群布局捕鼠，采用胶体金免疫层析(GICA)、上转发光(UPT-3A)、微量血凝(IHA)或(RIHA)、酶联免疫吸附(ELISA)4种方法，检测所获标本鼠疫菌F1抗原和抗体携带情况。结果 监测中共捕获小兽类5科7属7种163只。首次从中蒙边境阿尔泰山花海子区捕获的长尾黄鼠中检出鼠疫菌F1抗原阳性1份、抗体4份，在9只林鼬中检出鼠疫菌F1抗体阳性8份、在赤狐中检出F1抗体阳性2份。阳性检出点分为3片，总面积约0.357 hm²。为控制疫情扩散，启动了鼠疫预警应急预案，及时开展了处置。结论 首次发现中蒙边境阿尔泰山区存在动物鼠疫，应进一步加大调查研究，查清该区域鼠疫分布和流行规律，为当地做好鼠疫防控提供科学依据。     

辣根过氧化物酶标记不同表型鼠疫F1单克隆抗体的效果观察

目的观察用辣根过氧化物酶(HRP)标记4种鼠疫F1抗体的效果。方法使用过碘酸钠改良法制备酶结合物,酶标抗体的效价和最适工作浓度用双抗体夹心法测定。结果3株鼠疫F1单克隆抗体中B12标记成功;鼠疫γ球蛋白标记效果较鼠疫F1单克隆抗体B12差。结论过碘酸钠改良法制备辣根过氧化物酶标记鼠疫F1单克隆抗体B12效果优于另外3种鼠疫F1抗体。     

鼠疫菌质粒缺陷株的建立及66Mdal质粒的功能

本文报道了应用吖啶黄诱变鼠疫菌获得了53株缺失66Mdal 质粒的鼠疫菌突变株。经反相间接血凝试验证实66Mdal 质粒决定 F1和 F2抗原(鼠毒素)的产生。     

胶体金免疫层析法快速检测鼠疫耶尔森菌F1抗体

目的建立检测鼠疫耶尔森菌F1抗体的胶体金标记免疫层析方法。方法胶体金标记纯化鼠疫F1抗原,双抗原夹心法原理制成免疫层析检测试纸条,并对兔、羊、人和黄鼠血清进行检测评价。结果用80份不同动物种属的阴性血清进行检测,未出现非特异性反应,对5份恢复期病人血清、13份免疫兔血清和2份免疫羊血清检测也取得阳性结果,对于8份I HA临界阳性(滴度1∶20)的达乌尔黄鼠血清检出阳性6份。结论建立了可以用于现场快速检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析方法。