慢性间歇低氧激活载脂蛋白E基因敲除小鼠补体系统促进动脉粥样硬化进展的研究

目的:观察慢性间歇低氧(CIH)下载脂蛋白E(ApoE-/-)小鼠补体系统激活情况,探讨CIH激活补体系统的机制。方法:将18只ApoE-/-小鼠,随机分为常氧组(n=9)和低氧组(n=9),给予所有小鼠高脂饮食喂养,以电脑程序控制低氧舱内氧浓度在5%～21%内循环以建立CIH诱导的动脉粥样硬化模型。HE染色检测斑块面积,免疫印迹检测HIF1表达水平,转录组测序和RT-PCR检测补体系统成分及其受体mRNA水平。结果:与常氧组相比,低氧组小鼠主动脉HIF-1α水平明显升高、主动脉粥样硬化斑块面积增大(均P0.05)。转录组测序低氧组小鼠主动脉中补体成分(如C1qa, C1qb, C1qc, Cfb, Cfh)及C3受体mRNA表达明显上调;RT-PCR实验低氧组小鼠主动脉组织中HIF-1α、C3 mRNA水平明显升高(均P0.05),且二者呈正相关(r=0.74,P=0.015)。结论:CIH可能通过HIF-1α介导ApoE-/-小鼠补体系统激活,进而促进动脉粥样硬化发生发展。     

慢性间歇性低氧对心肌梗死急性期小鼠C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9的表达及对心功能的影响

目的:评价慢性间歇性低氧(CIH)对心肌梗死急性期小鼠心肌组织中C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)的表达及心功能的影响。方法:将36只,雄性,C57BL/6野生型小鼠,随机分为常氧(NOR)组(n=18)和CIH组(n=18)。将CIH组小鼠放入氧气浓度在6%~21%之间循环的低氧舱内28 d,同时NOR组在常氧环境中饲养。28 d后两组小鼠均结扎左冠状动脉建立心肌梗死模型。于结扎后3 d(n=6)、7 d(n=6)和14 d(n=6)时利用多普勒超声评估小鼠左心室结构与功能,然后将其处死。在结扎后3 d、7d时分别用免疫印迹法及RT-PCR法检测心肌中CTRP9表达、ELISA法检测血浆中CTRP9浓度以及用MASSON染色比较各组心肌纤维化面积。结果:NOR组和CIH组小鼠在冠状动脉结扎后3、7及14 d时的左心室内径均逐渐增加(P<0.001),LVEF和缩短分数(FS)均逐渐降低(P<0.001)。在结扎后3 d时,与NOR组相比,CIH组小鼠心肌组织中CTRP9的表达和血浆中CTRP9浓度明显升高(P<0.05;P<0.01),纤维化面积明显减小(P<0.001),LVEF和FS显著高于NOR组(P<0.05)。结论:与NOR组相比,CIH干预可以使心肌梗死急性期小鼠的心肌组织中CTRP9的表达增加,心肌纤维化面积减小,心功能改善。CIH引起的缺氧预适应可能在心肌梗死急性期发挥保护作用。     

脂联素对大鼠慢性间歇性低氧所致心肌重塑的影响

目的：探讨慢性间歇性低氧（chronic intermittent hypoxia,CIH）对心肌重塑的影响及脂联素（adiponectin, Ad）的干预作用。方法将45只Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组（NC）,CIH组和CIH＋Ad组。CIH 35d后,使用马松染色分析方法检测左室纤维化程度及使用Western blot方法来衡量Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白和TGF-β/smad2/3通路蛋白的表达。通过RT-PCR方法来研究基质金属蛋白酶-2（MMP2）/基质金属蛋白酶的组织抑制剂-2（TIMP-2）的mRNA表达比值情况。结果慢性间歇性低氧处理后,CIH组左心室的纤维化程度显著高于NC组和CIH＋Ad组（P＜0.05）,但NC组和CIH＋Ad组之间差异具有统计学意义（P＜0.05）。CIH组Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白和MMP2/TIMP-2的mRNA比值表达最高,NC组表达最低,CIH＋Ad组居中,3组之间均差异具有统计学意义（P＜0.05）。TGF-β/smad通路蛋白在CIH组中表达显著高于NC组和CIH组（P＜0.05）,且NC组和CIH＋Ad组差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论慢性间歇性低氧可引起左室重构,而Ad可能通过抑制TGF-β/smad2/3通路改善此损害。     

低氧对前列腺间质细胞活性氧、低氧诱导因子-1α、雄激素受体表达的影响及依达拉奉的干预作用

目的探讨低氧环境下活性氧(ROS)在前列腺增生中的作用及依达拉奉对其的干预作用。方法流式细胞仪检测前列腺增生组织及原代培养细胞中ROS的表达,低氧条件下观察前列腺间质细胞ROS及生长变化,荧光定量PCR法检测低氧诱导因子(HIF)-1α、雄激素受体(AR)的变化。低氧条件下用依达拉奉干预后,检测细胞生长及ROS、HIF-1α、AR的变化。结果前列腺增生组织及3%O_2条件下细胞ROS均明显升高(P<0.01),3%O_2条件下细胞增殖升高(P<0.01);HIF-1α、AR表达上调(均P<0.05);在3%O_2条件下依达拉奉干预后,ROS明显降低(P<0.01),HIF-1α明显下调(P<0.05);细胞增殖明显下降(P<0.01)。结论低氧及低氧环境刺激产生的ROS在前列腺增生中可能起关键作用。     

低氧对小鼠低氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的影响

目的研究低氧时小鼠肺组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化,探讨低氧与血管新生的关系。方法将哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸科2005年4月至6月实验用雄性昆明小鼠,分为低氧组与对照组,低氧仓浓度分别为10%,7%和5%。低氧时间分别为3d,6d和9d。用免疫组织化学技术检测小鼠在低氧条件下肺组织中的HIF-1α和VEGF蛋白表达的变化及微血管密度(MVD),用Western blotting法检测HIF-1α和VEGF的表达。结果低氧组HIF-1α和VEGF蛋白表达均增加,并且随低氧时间的延长及低氧浓度的降低而增强,而对照组HIF-1α无表达,VEGF有少量表达,P<0·05;低氧组的MVD也高于对照组;VEGF、MVD的表达均与HIF-1α表达呈正相关(r分别为0·730与0·691)。结论HIF-1α/VEGF通路在低氧致小鼠肺组织血管新生过程中起重要作用。     

低氧对小鼠低氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究低氧时小鼠肺组织中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）表达的变化，探讨低氧与血管新生的关系。方法将哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸科2005年4月至6月实验用雄性昆明小鼠，分为低氧组与对照组，低氧仓浓度分别为10％，7％和5％。低氧时间分别为3d．6d和9d。用免疫组织化学技术检测小鼠在低氧条件下肺组织中的HIF—1α和VEGF蛋白表达的变化及微血管密度（MVD），用Westem blotting法检测HIF-1α和VEGF的表达。结果低氧组HIF-1α和VEGF蛋白表达均增加，并且随低氧时间的延长及低氧浓度的降低而增强，而对照组HIF-1α无表达，VEGF有少量表达，P〈0、05；低氧组的MVD也高于对照组；VEGF、MVD的表达均与HIF-1α表达呈正相关（r分别为0、730与0．691）。结论HIF-1α/VEGF通路在低氧致小鼠肺组织血管新生过程中起重要作用。     

人双突变型低氧诱导因子α促进骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的实验研究

目的 探讨人双突变型低氧诱导因子1α(HIF-1α)基因(HIF-1α-402-564)对与心肌细胞共培养的骨髓间充质干细胞(MSC)向心肌细胞分化的影响.方法 实验分为4组:HIF-1α组(MSC+心肌细胞+Ad-HIF-1α)、LacZ组(MSC+心肌细胞+Ad-Lacz)、Sham组[MSC+心肌细胞+胎牛血清(PBS)]、MSC+HIF-1α组(MSC+Ad-HIF-1α),前三组中MSC与心肌细胞按1:2比例共同培养,各组细胞培养24 h后分别感染不同病毒(MOI=100)或加入PBS液.病毒感染后7 d,免疫细胞化学分析共培养的MSC表达心肌细胞特异性标志物心肌肌钙蛋白T(cTnT)的情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析各组细胞HIF-1α、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad4、NKx2.5、GATA结合蛋白4(GATA-4)的mRNA表达量.结果 HIF-1α组MSc心肌细胞分化率为(32.68±6.52)%,显著高于LacZ组[(8.28±0.09)%]和Sham组[(10.25±2.20)%],P均<0.05,MSC±HIF-1α组仅为(0.32±0.05)%.LacZ组和Sham组间差异无统计学意义.MSC+HIF-1α组与Sham组比较,差异有统计学意义(P<0.05).HIF-1α组TGFβ1及Smad4 mRNA表达水平明显高于其余各组,P均<0.05.HIF-1α组NKx2.5和GATA-4 mRNA表达水平明显高于Sham组,P均<0.05.结论 HIF-1α能够促进与心肌细胞共培养的MSC向心肌细胞分化,TGF-β1/Smad4信号通路参与了该过程.     

常氧与低氧下CagA~+幽门螺杆菌对人胃癌SGC7901细胞系HIF-2α、ABCG2表达的影响

目的:观察常氧与低氧下CagA+幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)对人胃癌SGC7901细胞系低氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2alpha,HIF-2α)、ABCG2表达的影响,初步探讨H.pylori在胃癌发生发展中的干细胞机制,及其与肿瘤微环境低氧的协同作用.方法:内镜下采集胃黏膜标本,行H.pylori培养并鉴定,PCR方法检测H.pyloriCagA+基因.CagA+H.pylori与胃癌SGC7901细胞于常氧和低氧环境下共培养48h(分常氧对照组、低氧对照组、常氧CagA+H.pylori组、低氧CagA+H.pylori组).免疫细胞化学法检测HIF-2α和ABCG2蛋白的表达,RT-PCR法检测ABCG2 mRNA的表达.结果:免疫细胞化学结果显示:常氧下胃癌SGC7901细胞HIF-2α、ABCG2蛋白呈低水平表达,低氧和CagA+H.pylori均能显著诱导HIF-2α、ABCG2蛋白表达(与常氧对照组相比,均P0.01),与低氧对照组和常氧CagA+H.pylori组相比,低氧CagA+H.pylori组表达进一步升高(均P0.01).相关分析显示HIF-2α与ABCG2表达呈正相关(r=0.976,P0.05).RT-PCR检测ABCG2 mRNA表达结果与免疫细胞化学一致.结论:CagA+H.pylori可刺激胃癌细胞HIF-2α、ABCG2表达,低氧环境下其表达进一步增加,表明CagA+H.pylori和低氧对HIF-2α、ABCG2的表达有协同作用.提示CagA+H.pylori和低氧可能是诱导胃癌细胞干细胞化及化疗抵抗的重要原因.     

宁心解毒汤、血塞通、瑞舒伐他汀对ApoE－/－小鼠炎症因子和As斑块的影响

目的通过建立ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化(As)模型,探讨宁心解毒汤、血塞通、瑞舒伐他汀对小鼠血脂、炎性因子和斑块结构的影响。方法高脂喂养80只8周龄ApoE~(-/-)小鼠4周后,随机分为宁心解毒汤组、血塞通组、瑞舒伐他汀组和对照组。药物灌胃8周后处死。处死前测量体重、尾动脉血压,小鼠尾静脉取血,检测小鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度。分离主动脉,观察主动脉粥样硬化斑块特征。结果对照组ApoE~(-/-)小鼠血总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇较其他3组差异有显著性,且瑞舒伐他汀组与宁心解毒汤组、血塞通组差异也有显著性(P0.05)。对照组ApoE~(-/-)小鼠体重、血压较其他3组差异无显著性(P0.05)。对照组ApoE~(-/-)小鼠IL-6、IL-1β、TNF-α的血清浓度,明显高于较其他3组(P0.05);而宁心解毒汤组、血塞通组、瑞舒伐他汀组3组间差异无显著性(P0.05)。对照组动脉斑块分布弥漫,而其他3组的整个动脉也有斑块,明显轻于对照组(P0.05)。结论ApoE~(-/-)小鼠+高脂饮食能够理想构建动脉粥样硬化动物模型。宁心解毒汤、血塞通、瑞舒伐他汀可以通过调脂、减低炎性因子的表达来发挥抗As作用。瑞舒伐他汀控制斑块发展的效果更好,考虑与其调脂相关。     

慢性间歇性低氧对大鼠左心室功能的影响

目的 用间歇性低氧来模拟睡眠呼吸暂停反复低氧和复氧的病理生理改变,了解其对心功能的影响.方法 20只成年雄性SD大鼠随机分为间歇性低氧组(CIH组)和正常对照组(NC组),饲养5周后分别用超声心动图和心导管检查评价左室心功能.结果 NC组大鼠体质量增加高于CIH组;CIH组左室质量占体质量的比值高于NC组;CIH组动脉收缩压高于NC组;CIH组左心室射血分数低于NC组;CIH组平均动脉压高于NC组;CIH组左室舒张末内径及等容收缩期左心室内压力上升最大速率和等容舒张期左心室压力下降最大速率均低于NC组;两组心率无明显差别.结论 慢性间歇低氧可引起血压升高,左心室功能降低.     

慢性间歇性低氧和高脂饲养对兔胰岛β细胞功能的影响

目的观察慢性间歇性低氧（CIH）和高脂饲养对兔β细胞功能有无损害及两因素之间是否存在交互作用。方法24只新西兰兔随机分为对照组、CIH组、高脂饲养组、CIH并高脂饲养组。分别于0、4、8w时采血化验总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、游离脂肪酸（FFA）、空腹血糖（FPG）和空腹胰岛素（FINS）。8w末行静脉葡萄糖耐量试验,用析因分析评价CIH、高脂饲养对胰岛β细胞各项功能指标影响的主效应及交互效应。结果高脂饲养组、CIH并高脂饲养组血TC、LDL-C第4周时水平高于第0、8周（P〈0.05）,CIH并高脂饲养组血FFA及FPG第8周时水平均高于第0、4周（P〈0.05）。分析显示CIH对β细胞功能各指标（HOMA-β、FINS/FPG、AUCins0-10min、AIR）影响无统计学意义（均P〉0.05）;高脂饲养使β细胞功能受损,对HOMA-β、FINS/FPG、AUCins（0-10min）和AIR的显著性概率P分别为0.001、0.016、0.032、0.041;CIH与高脂饲养对β细胞功能4项指标不存在交互作用（均P〉0.05）。结论高脂饲养使胰岛β细胞功能下降;未发现CIH及其与高脂饲养存在交互作用以致明显损害胰岛β细胞功能。     

低氧对无糖逆境中星形胶质细胞增殖和凋亡的作用

目的探讨星形胶质细胞对低氧的耐受程度;葡萄糖对其凋亡和增殖的影响及无糖逆境中低氧微环境对胶质细胞的是否具有保护作用及可能分子机制。方法通过三气培养箱构建低氧微环境,将星形胶质细胞(HAC)设为常氧常糖组(21%O2-G+)和常氧无糖组(21%O2-G-),低氧常糖组(0.1%O2-G+)和低氧无糖组(0.1%O2-G-)。分别在不同培养条件下培养24、48、72 h后通过MTT法及Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞增殖及凋亡情况,利用Western印迹法检测各组低氧诱导因子(HIF)-1α表达情况。结果在低氧常糖组星形胶质细胞各时间段无明显凋亡(P0.05),但可缓慢增殖。常氧无糖组及低氧无糖组48 h细胞开始发生明显凋亡,增殖被显著抑制(P0.05),48 h低氧无糖组细胞凋亡明显低于常氧无糖组(P0.05),至72 h凋亡率高于常氧无糖组(P0.05)。低氧可诱导HIF-1α表达水平增高,其中低氧常糖组HIF-1α表达水平最高,其次为低氧无糖组,常氧常糖及常氧无糖组表达量均较低。结论星形胶质细胞可耐受极度低氧;葡萄糖缺乏可诱导细胞发生明显的凋亡并抑制其增殖;低氧可在一定时限内部分对抗葡萄糖缺乏所诱导细胞凋亡。低氧可诱导HIF-1α的高表达,并且可能与低氧抗无糖逆境作用有关。     

缺氧条件下心肌组织的形态学改变及缺氧诱导因子-1在心脏内的表达

目的观察缺氧条件下心肌组织的形态学改变以及缺氧诱导因子-1(HIF-1α)在心脏内的表达情况。方法将40只SD大鼠随机分为正常对照组、低氧12 h组、低氧24 h组,低氧36 h组。其中低氧12 h、低氧24 h、低氧36 h组制备体内缺氧模型。采用95%氮气+5%氧气,制备缺氧模型,缺氧时间分别为12、24、36 h,每天缺氧时间为2 h,其他时间置于空气中。所有大鼠在实验结束时均实施腹腔注射麻醉,断髓法处死,制备心肌组织石蜡切片,HE染色镜下观察心肌组织的形态学变化。SABC免疫组化法检测各组大鼠心肌细胞HIF-1α的表达情况。结果正常对照组心肌组织切片心肌细胞结构完整,核大呈圆形;低氧组大鼠的心肌细胞结构逐渐变化,心肌细胞明显肿胀,细胞间隙明显增加,核变小而不规则。免疫组化染色切片HIF-1α蛋白阳性物质定位于细胞核和细胞质,呈弥散或颗粒状。与正常对照组心肌组织HIF-1α的蛋白IOD比较,各缺氧组HIF-1α的蛋白IOD明显增加,有统计学意义(P<0.05)。结论低氧可诱导大鼠心肌组织出现破坏。HIF-1α在缺血心肌组织中高表达,可能参加了心肌缺血的代偿机制,有助于改善心肌供血。     

急性高原低氧对于大鼠心功能及其心肌组织miR－144表达影响的研究

目的探讨急性高原低氧对于大鼠心功能及其心肌组织miR－144表达的影响。 方法应用低压氧舱模拟构建高原低氧大鼠模型。将6周龄雄性SD大鼠分为高原低氧3、7、14、28 d实验组以及常压常氧对照组,每组12只大鼠。超声心动图检测大鼠心脏结构和功能。qRT－PCR检测各组大鼠心肌组织miR－144表达。 结果超声心动图检查结果显示,高原低氧3 d和7 d组大鼠LVEF和FS均低于对照组。高原低氧14 d和28 d组大鼠LVEF和FS均高于对照组。高原低氧各组大鼠PV peak velocity和PV peak gradient数值均低于对照组。高原低氧各组大鼠左心室收缩末内径(LVIDS)和舒张末内径(LVIDD)均低于对照组。高原低氧3、7、28 d组大鼠心肌组织miR－144表达均高于对照组,高原低氧14 d组大鼠心肌组织中miR－144表达低于对照组。Spearman相关性分析提示,心肌组织miR－144表达丰度与左心室射血分数和短轴缩短率呈负相关。 结论急性高原低氧可导致大鼠左心室结构和功能发生变化,左心室内径缩小,室壁增厚,左心室舒张功能下降。高原低氧1周内左心室收缩功能下降,1周后左心室收缩功能恢复正常。急性高原低氧可导致大鼠心肌组织miR－144表达升高。miR－144表达与心功能变化呈负相关,推测miR－144可能参与调控高原低氧导致的心脏结构和功能变化。     

慢性间歇性低氧对颈动脉体缺氧诱导因子-α亚型的影响

目的探讨缺氧诱导因子(HIF)-α亚型在颈动脉体可塑性中的作用。方法给SD大鼠慢性间歇性低氧每天8 h,处理3 w后,收获颈动脉体,提取RAN,用RT-PCR方法检测HIF-α亚型在颈动脉体的表达。结果大鼠颈动脉体表达HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α mRNA。慢性间歇性低氧处理后,大鼠颈动脉体HIF-2α和HIF-3α mRNA表达量增高,但是HIF-1α mRNA表达量无变化。结论大鼠颈动脉体表达三种HIF-α亚型,即HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α,其中HIF-2α和HIF-3α参与慢性间歇性低氧引起的颈动脉体化学感受性反射的可塑性。     

慢性间歇低氧对大鼠糖代谢及肝脏 TRB3、P-AKT 表达的影响

目的：通过建立慢性间歇低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)大鼠模型,观察CIH 对大鼠糖代谢的影响以及肝脏胰岛素相关信号通路 Tribbles 同源蛋白3(TRB3)、磷酸化蛋白激酶 B (P-AKT)的变化。方法将40只健康雄性 SD 大鼠随机分为5组,每组8只。正常对照组(NC组)、慢性间歇 低 氧 2 周 组(CIH2组)、慢 性 间 歇 低 氧 4 周 组(CIH4组)、慢性间歇低氧6周组(CIH6组)、慢性间歇低氧8周组(CIH8组),实验组每天给予8 h 间歇低氧处理。实验结束后检测5组大鼠空腹血糖,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测空腹胰岛素,用稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)系统评价胰岛素抵抗。采用 HE 染色观察各组肝脏组织形态变化,SABC 法免疫组织化学试剂盒检测大鼠肝细胞 TRB3蛋白以及胰岛素信号通路中关键激酶蛋白激酶 B (AKT)磷酸化水平蛋白的表达,以平均灰度值表示 TRB3、P-AKT 的蛋白表达量。结果随着间歇低氧暴露时间延长,各组与 NC 组比较,其空腹血糖水平(F =116.185,P <0.05)、胰岛素水平(F =45.189,P <0.05)、HOMA-IR (F =110.876,P <0.05)、TRB3蛋白表达水平(F =11 5.253,P <0.05)升高,而 P-AKT 蛋 白 表 达 水 平(F =99.553,P <0.05) 降 低,且以 CIH8组 最 为 显 著 (P <0.05)。Pearson 相关分析显示： HMOA-IR 与 TRB3平均灰度值呈负相关(r =-0.828,P <0.05),与P-AKT平均灰度值呈正相关(r =0.903,P <0.05)。结论 CIH 可导致大鼠肝细胞受损,糖代谢异常,发生胰岛素抵抗,并随着间歇低氧暴露时间的延长,胰岛素抵抗程度加重。CIH 使肝脏中 TRB3蛋白表达增加,P-AKT 显著降低,且与 HOMA-IR 具有明显的相关性,TRB3的激活可能在 CIH 所致的糖代谢异常中起重要作用。     

低氧诱导因子-1α减轻七氟烷处理小鼠心肌缺血再灌注损伤中的研究

目的:探究HIF-1α对于使用七氟烷后处理的小鼠减轻其心肌缺血/再灌注损伤的相关机制。方法:将8周龄小鼠随机分为四组分别进行假手术,心肌缺血/再灌注, HIF-1α稳定剂+心肌缺血/再灌注,HIF-1α抑制剂+心肌缺血/再灌注。对心肌缺血/再灌注模型采取经典的结扎冠状动脉左前降支,之后对小鼠进行七氟烷后处理。分别检测四组大鼠的心肌组织中HIF-1α,NF-κB,TLR4,SOD的蛋白表达水平以及相关mRNA水平,凋亡相关蛋白Bax,BCL2的表达水平,心肌组织MPO活性等。结果:在进行处理之前,四组小鼠的AAR/LV以及An/AAR差异无统计学意义(P0.05);经过处理后,I/R组小鼠的AAR/LV以及An/AAR均显著高于对照组(P0.001),DMOG+I/R组相比I/R组,AAR/LV以及An/AAR均发生了显著降低(P0.001),YC-1+I/R组相比I/R组,AAR/LV以及An/AAR又均发生了显著升高(P0.01);当小鼠发生心肌缺血/再灌注时,小鼠体内的HIF-1α蛋白水平显著下调,炎症因子NF-κB和TLR4显著上升,抗氧化蛋白SOD显著下降,促凋亡蛋白Bax显著升高,抗凋亡蛋白BCL2水平显著下降;而当在此基础上加入HIF-1α增强剂DMOG时,可以使炎症因子NF-κB和TLR4显著下调,抗氧化蛋白SOD显著上升,促凋亡蛋白Bax显著下降,抗凋亡蛋白BCL2水平显著升高,加入HIF-1α抑制剂YC-1现象相反;I/R组小鼠的NF-κB和TLR4水平显著升高(t=4.687,5.124,P0.05),DMOG+I/R组相比I/R组,其NF-κB和TLR4水平发生显著下降(t=4.112,4.197,P0.05),YC-1+I/R组相比I/R组,其NF-κB和TLR4水平发生显著回升(t=2.335,2.138,P0.05);经过处理之后,对照组小鼠的MPO活性为(0.28±0.54),I/R组小鼠的为(1.45±0.31),显著升高(t=3.875,P0.05),DMOG+I/R组的为(0.88±0.23),相比I/R组发生了显著降低(t=3.224,P0.05);而YC-1+I/R组的为(1.98±0.39),相比I/R组发生了显著回升(t=3.015,P0.05)。结论:HIF-1α可有效减轻大鼠在心肌损伤/再灌注所致的炎性损伤并避免心肌细胞凋亡,对心肌细胞起到良好的保护作用。     

NVP-BEZ235对低氧诱导下大鼠心肌及主动脉的影响

目的:评价磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路双重抑制剂NVP-BEZ235对于低氧诱导下大鼠心肌及主动脉的影响。方法:低氧组和NVP-BEZ235干预组置于实验室特制的低压低氧仓内饲养,对照组于常氧环境中饲养。NVP-BEZ235干预组给予35 mg/kg NVP-BEZ23隔天灌胃,低氧组及对照组隔天给予生理盐水灌胃。21 d后计算大鼠右心室质量(RVW)/体质量(BW)值;各组大鼠左心室心肌组织行苏木素伊红染色,并测量心肌血管数量及血管内径;胸主动脉行苏木素伊红染色、Russell Movat染色及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学染色;检测大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果:(1)低氧组大鼠较对照组RVW/BW明显升高(P=0.0002),NVP-BEZ235干预组大鼠较低氧组RVW/BW明显降低(P=0.0021)。(2)左室心肌组织HE染色可见低氧组大鼠心肌细胞排列紊乱,细胞间隙增宽;NVP-BEZ235干预组心肌排列较整齐,细胞间距倾较低氧组有所减小;3组大鼠心肌血管数量及管径差异无统计学意义(P均0.05)。(3)病理染色可见低氧组大鼠胸主动脉弹性纤维排列紊乱,局部胞浆空泡变;NVP-BEZ235干预组大鼠胸主动脉的改变较低氧组有所减轻。低氧组大鼠胸主动脉管壁中层α-SMA表达较对照组不均匀增加;NVPBEZ235干预组大鼠胸主动脉α-SMA表达较低氧组相对减少。(4)低氧组大鼠血清VEGF水平较对照组明显升高(P=0.0027),NVP-BEZ235干预组较低氧组VEGF水平明显降低(P=0.0060)。结论:NVP-BEZ235可以抑制低氧诱导下大鼠心肌及主动脉的改变,并抑制低氧诱导的血清VEGF的升高。     

野生型p53诱导的磷酸酶1基因缺失对小鼠心功能的影响

目的:探讨敲除野生型p53诱导的磷酸酶1(Wip1)基因对小鼠心功能的影响及心脏组织中基因和蛋白表达水平的变化。方法:随机选取野生型(WT)小鼠和Wip1基因敲除(Wip1-KO)小鼠各10只,分别检测两组小鼠的心功能和心重/体重比,应用苏木精伊红(HE)染色观察小鼠心肌组织的病理形态,应用实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心肌组织中心房利钠肽(ANP)、B型利钠肽(BNP)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的基因表达水平,并应用蛋白免疫印迹(Western blot)检测凋亡相关蛋白包括B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(c-Caspase3)的表达水平。结果:与WT组小鼠相比,Wip1-KO组小鼠心肌组织中Wip1 mRNA表达明显降低(P0.05),左心室射血分数和左心室缩短分数降低(P0.05),左心室收缩末期内径增大(P0.05)。虽然Wip1-KO组小鼠与WT小鼠的心脏重量没有差异,但Wip1-KO组小鼠体重较WT组小鼠减轻(P0.05),心重/体重比增加(P0.05)。HE染色显示Wip1-KO组小鼠的心肌形态与WT组小鼠之间没有明显差异。心肌组织中ANP、BNP、MCP-1和α-SMA基因表达水平在两组小鼠之间差异无统计学意义(P0.05)。Wip1-KO组小鼠心肌组织中凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2和c-Caspase3表达水平与WT组小鼠之间没有明显差异(P0.05)。结论:敲除Wip1基因可以损害小鼠心功能,但相关的机制还有待进一步阐明。     

慢性间歇低氧对大鼠肝细胞IRS-2、 FoxO1表达的影响

目的 观察慢性间歇低氧条件下,大鼠肝细胞形态学变化及胰岛素受体底物-2 (IRS-2)、叉头框蛋白O1(FoxO1)的蛋白表达,并探讨IRS-2、FoxO1与胰岛素抵抗的相关性.方法 取24只6周龄健康雄性Sprauge-Dawley大鼠,采用随机数字表法分为正常对照组(NC组)、慢性间歇低氧4周组(CIH4组)、慢性间歇低氧8周组(CIH8组),每组8只.CIH4组和CIH8组暴露于间歇低氧舱内:最低氧浓度6％ ～ 8％,持续时间8 h/d.NC组无间歇低氧暴露正常饲养,CIH4组、CIH8组和NC组分别于第4周、第8周及第8周禁食12 h后测定空腹血糖、空腹胰岛素水平,并采用稳态模型评估-胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感性指数(ISI)评价胰岛素抵抗,对肝组织行HE染色观察形态学变化,采用免疫组织化学方法测定肝细胞IRS-2、FoxO1蛋白表达,以平均灰度值表示其蛋白表达量,二者成反比关系.结果 与NC组相比,CIH4组、CIH8组空腹血糖、胰岛素、HOMA-IR升高,ISI降低,且CIH8组更为显著,差异有统计学意义(F=50.23 ～90.26,P均＜0.05).与NC组相比,CIH4组与CIH8组IRS-2蛋白表达降低,FoxO1蛋白表达增高且在核内重新分布,CIH8组更为显著,差异有统计学意义(F=69.46,618.94,P均＜0.05).Pearson相关分析显示:HMOA-IR与IRS-2平均灰度值呈正相关(r=0.857,P＜0.05),与FoxO1平均灰度值呈负相关(r=-0.926,P＜0.05),ISI与IRS-2平均灰度值呈负相关(r=-0.823,P＜0.05),与FoxO1平均灰度值呈正相关(r=0.848,P＜0.05).结论 慢性间歇低氧条件下,大鼠肝细胞受损并发生胰岛素抵抗,同时IRS-2和FoxO1蛋白表达异常,且随暴露时间延长肝细胞损伤程度及胰岛素抵抗程度均逐渐加重.