lncRNA NEAT1调控miR-206对缺氧复氧大鼠心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1调控miR-206对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响和机制。方法 体外培养H9c2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧模型。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测缺氧复氧诱导后lncRNA NEAT1和miR-206的表达水平。将lncRNA NEAT1小干扰RNA(si-lncRNA NEAT1)、miR-206模拟物(miR-206 mimics)分别转染H9c2细胞,缺氧复氧诱导后,检测细胞中丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量以及细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)和cleaved Caspase-9蛋白表达。利用荧光素酶报告基因实验以及RT-qPCR验证lncRNA NEAT1和miR-206的靶向结合关系。结果 缺氧复氧诱导后H9c2细胞中lncRNA NEAT1的表达显著升高,miR-206的表达显著降低(P＜0.05)。转染si-lncRNA NEAT1或miR-206 mimics处理缺氧复氧H9c2细胞,细胞存活率显著升高,MDA、ROS含量以及LDH活性显著降低,cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9蛋白的表达显著降低,细胞凋亡率显著降低(P＜0.05)。lncRNA NEAT1靶向miR-206并负调控miR-206表达。抑制miR-206部分逆转沉默lncRNA NEAT1对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化损伤和凋亡的影响(P＜0.05)。结论 沉默lncRNA NEAT1通过上调miR-206可减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,进而发挥心肌保护作用。     

京尼平通过miR-499调节缺血缺氧诱导心肌细胞线粒体途径凋亡

目的研究京尼平对缺血缺氧诱导心肌细胞线粒体途径凋亡的调节作用及其分子机制。方法培养H9c2细胞并进行分组处理,对照组用不含药物的DMEM在常氧条件下培养,缺氧组用不含药物的DMEM在缺氧条件下培养,低、中、高剂量京尼平组在缺氧条件下分别用含有2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L京尼平的DMEM处理,NC抑制物组在常氧条件下转染NC抑制物,NC抑制物+缺氧组在缺氧条件下转染NC抑制物,NC抑制物+缺氧+京尼平组在缺氧条件下转染NC抑制物并用含有10.0μmol/L京尼平的DMEM处理,miR-499抑制物+缺氧+京尼平组在缺氧条件下转染miR-499抑制物并用含有10.0μmol/L京尼平的DMEM处理。比较组间心肌酶含量、细胞凋亡率、凋亡基因及miR-499表达的差异。结果京尼平组能够以剂量依赖性的方式降低细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量及细胞凋亡率和细胞中Bax、Caspase-3表达,增加细胞中Bcl-xL及miR-499的表达;转染miR-499的抑制物能够逆转10.0μmol/L京尼平降低细胞培养基中LDH、CK、CK-MB含量及细胞凋亡率、细胞中Bax、Caspase-3表达和增加细胞中Bcl-xL表达的效应。结论京尼平通过miR-499调节缺血缺氧诱导心肌细胞线粒体途径凋亡。     

二甲双胍对缺氧/复氧导致的乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的通过建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,观察二甲双胍对乳鼠心肌细胞凋亡的影响。方法选用原代培养72 h的乳鼠心肌细胞,随机分为4组:空白对照组、二甲双胍组、缺氧/复氧组、二甲双胍+缺氧/复氧组。流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,荧光定量PCR检测各组细胞caspase-3 mRNA表达,酶联免疫法检测各组细胞胞浆内细胞色素C(CytC)的含量。结果与空白对照组相比,缺氧/复氧组细胞凋亡、caspase-3 mRNA表达、胞浆CytC的含量均明显增高(P0.05)。与缺氧/复氧组相比,二甲双胍+缺氧/复氧组细胞凋亡率、caspase-3 mRNA表达、CytC含量均明显降低(P0.05)。结论二甲双胍可以抑制caspase-3表达,进而减轻缺氧/复氧所致的心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制mPTP的开放,减少线粒体内CytC的释放有关。     

刺囊酸对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 研究刺囊酸预处理对原代培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax及聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP 89 kDa)表达的影响.方法 实验随机分为6组:对照组,缺氧复氧损伤组,缺氧预处理组及低、中、高剂量刺囊酸组(0.5 μmol/L、5μmol/L和50 μmol/L),分别予以缺氧3h后再复氧2h,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western Blot杂交法检测心肌细胞Bcl-2、Bax及PARP(89 kDa)蛋白表达变化.结果 与对照组比较,缺氧复氧损伤组心肌细胞Bcl-2蛋白表达显著低于对照组(P＜0.01),Bax蛋白及PARP(89 kDa)表达显著高于对照组(P＜0.01),细胞存活率明显低于对照组(P＜0.05).与缺氧复氧损伤组比较,不同剂量的刺囊酸预处理能显著提高细胞存活率,降低LDH活性,呈剂量依赖性;中剂量刺囊酸显著增加Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),抑制Bax及PARP(89 kDa)蛋白表达(P＜0.05).结论 刺囊酸预处理可通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制PARP(89 kDa)及Bax蛋白表达,抑制细胞凋亡,对抗心肌细胞缺氧复氧损伤.     

右美托咪定对心肌收缩蛋白表达的影响

目的 研究右美托咪定(DEX)对心肌细胞收缩相关蛋白表达的影响及其分子机制。 方法 在50 ml/L浓度氧环境下培养H9C2细胞,建立心肌低氧损伤模型。实验分为对照组、低氧组、低氧+DEX (0.01 μmol/ml、1 μmol/ml、100 μmol/ml)组。除对照组培养在正常细胞环境中外,其余四组培养在低氧环境下,且其中三组按要求添加相应浓度的DEX。细胞存活率和细胞凋亡水平分别采用MTT法和流式细胞仪进行检测,采用ELISA试剂盒检测细胞培养液中心肌酶谱蛋白cTnI、LDH和CK-MB的漏出量,Western blot法检测H9C2细胞中titin、β-MHC、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白表达。 结果 低氧条件成功诱导心肌细胞缺氧损伤。低氧组细胞较对照组存活率低、凋亡增加、细胞培养液中cTnI、LDH和CK-MB蛋白水平增加;低氧+ DEX (0.01 μmol/ml、1 μmol/ml、100 μmol/ml)组较低氧组,细胞存活率增加、凋亡减少,cTnI、LDH和CK-MB蛋白水平降低,p-PI3K和p-Akt蛋白表达增加,β-MHC和titin蛋白表达降低,且随着DEX剂量增加,变化更显著。 结论 在低氧损伤心肌细胞中,DEX能抑制收缩相关蛋白表达,可能与PI3K/Akt信号通路有关,是否与激活PI3K/Akt信号通络相关,还有待进一步研究。     

低氧对无糖逆境中星形胶质细胞增殖和凋亡的作用

目的探讨星形胶质细胞对低氧的耐受程度;葡萄糖对其凋亡和增殖的影响及无糖逆境中低氧微环境对胶质细胞的是否具有保护作用及可能分子机制。方法通过三气培养箱构建低氧微环境,将星形胶质细胞(HAC)设为常氧常糖组(21%O2-G+)和常氧无糖组(21%O2-G-),低氧常糖组(0.1%O2-G+)和低氧无糖组(0.1%O2-G-)。分别在不同培养条件下培养24、48、72 h后通过MTT法及Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞增殖及凋亡情况,利用Western印迹法检测各组低氧诱导因子(HIF)-1α表达情况。结果在低氧常糖组星形胶质细胞各时间段无明显凋亡(P0.05),但可缓慢增殖。常氧无糖组及低氧无糖组48 h细胞开始发生明显凋亡,增殖被显著抑制(P0.05),48 h低氧无糖组细胞凋亡明显低于常氧无糖组(P0.05),至72 h凋亡率高于常氧无糖组(P0.05)。低氧可诱导HIF-1α表达水平增高,其中低氧常糖组HIF-1α表达水平最高,其次为低氧无糖组,常氧常糖及常氧无糖组表达量均较低。结论星形胶质细胞可耐受极度低氧;葡萄糖缺乏可诱导细胞发生明显的凋亡并抑制其增殖;低氧可在一定时限内部分对抗葡萄糖缺乏所诱导细胞凋亡。低氧可诱导HIF-1α的高表达,并且可能与低氧抗无糖逆境作用有关。     

基于Caspase-3基因的RNA干扰对缺氧诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的 研究RNA干扰Caspase-3基因表达对缺氧诱导的心肌细胞凋亡的影响,探讨Caspase-3基因表达的RNA干扰方法在缺氧诱导的心肌细胞凋亡中的作用与机制.方法 以基于Caspase-3基因的small interferenceRNA(siRNA)处理缺氧诱导的心肌细胞,不同时期分别检测心肌细胞凋亡率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出、钙浓度、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot法分别检测Caspase-3基因表达水平和蛋白表达水平.结果 缺氧诱导心肌细胞后,心肌细胞、凋亡率随时间进程明显增加.缺氧诱导使心肌细胞LDH漏出、钙浓度、MDA含量增加而SOD活性降低.缺氧诱导下RNA干扰组心肌细胞Caspase-3基因mRNA转录水平、蛋白表达水平和心肌细胞凋亡率较空白对照组和错义RNA干扰组差异有统计学意义(P<0.05).结论 基于Caspase-3基因的RNA干扰显著抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡率,提示Caspase-3基因表达在缺氧诱导的心肌细胞凋亡中具有重要的作用.     

MicroRNA-181a调控缺氧/复氧诱导下心肌细胞的凋亡

目的:探讨microRNA-181a(miR-181a)对缺氧/复氧诱导下大鼠心肌细胞株H9c2凋亡的作用。方法:通过生物信息学软件筛选出可调控Bcl-2表达的miRNAs。建立H9c2细胞缺氧/复氧模型,通过Western blot检测Bcl-2蛋白表达变化,荧光定量PCR检测miR-181a表达变化。进一步构建Bcl-2的荧光素酶报告载体,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶的表达变化。采用体外合成的大鼠miR-181a的模拟物(mimic)和抑制剂(inhibitor),用脂质体转染培养的H9c2细胞48h后,缺氧/复氧处理细胞,实验分为4组:正常对照组(CTL)、缺氧/复氧组(H/R)、缺氧复氧加miR-181a的模拟物组(mimic)、缺氧复氧加miR-181a的抑制剂组(inhibitor)。TUNEL法检测各组细胞凋亡;Western blot分析各组凋亡关键蛋白cleaved caspase-3的表达量的变化。结果:生物学软件预测miR-181a可调控Bcl-2蛋白的表达,在缺氧/复氧模型中Bcl-2蛋白的表达明显下调,而miR-181a的表达上升近4倍。成功构建双荧光酶素报告载体以及突变体,实验组的报告荧光比对照组明显下降,而突变体的荧光强度下降不明显。与H/R组相比,inhibitor组cleaved caspase-3蛋白、凋亡率下降,mimic组却拮抗了上述变化。结论:miR-181a能够增加氧化应激条件下H9c2心肌细胞损伤,促进H9c2心肌细胞凋亡,miR-181a通过调控Bcl-2蛋白的表达,在H/R介导的凋亡途径中扮演了关键性的作用。     

miR-376b-3p通过靶向FGF21加重缺氧复氧心肌细胞的损伤

目的 探讨miR-376b-3p对缺氧复氧(H/R)心肌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法 培养心肌细胞H9c2,缺氧复氧法体外模拟H/R细胞损伤,建立心肌细胞损伤模型。用流式细胞术、免疫印迹(Western blot)、酶联免疫吸附(ELISA)检测正常对照组、H/R组、anti-miR-NC组、anti-miR-376b-3p组、anti-miR-376b-3p+si-NC组、anti-miR-376b-3p+si-成纤维细胞生长因子21(FGF21)组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)情况。双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光活性。结果 成功建立缺氧复氧损伤的细胞模型;模型组细胞中miR-376b-3p表达显著升高,FGF21表达显著降低,并且抑制miR-376b-3p可以减轻损伤细胞的凋亡和TNF-α、IL-6、IL-17的含量,以及上调Bcl-2,下调Bax。此外,miR-376b-3p还可靶向FGF21 mRNA。抑制FGF21后,抑制miR-376b-3p对缺氧复氧损伤的H9c2细胞的保护作用被减弱。结论 miR-376b-3p可促进缺氧复氧心肌细胞的凋亡和炎性反应,其机制与靶向FGF21 mRNA相关。     

重组人生长停滞特异性蛋白6对缺氧/复氧原代心肌细胞及H9c2细胞损伤的影响

目的研究外源重组人生长停滞特异性蛋白6(rhGas6)对缺氧/复氧(H/R)诱导的原代乳鼠心肌细胞及H9c2细胞损伤的影响。方法体外培养新生Wistar大鼠心肌细胞及H9c2细胞,随机各分为3组:正常组、H/R组及rhGas6预处理组(rhGas6组)。观察各组细胞形态及心肌细胞搏动频率,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)浓度及半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)活性变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果原代心肌细胞及H9c2细胞H/R组均较正常组细胞活力下降,凋亡率、LDH及Caspase-3水平均较正常组增高。而Gas6组与H/R组比较,细胞活力增加,凋亡率、LDH及Caspase-3水平均减低(P<0.05)。结论 rhGas6对H/R诱导的原代心肌细胞及H9c2细胞损伤均发挥着潜在的保护作用,并可能是通过抑制Caspase-3活性减少细胞凋亡发挥的。     

长链非编码RNA SNHG15可通过靶向miR-24-3p/Atg12减轻缺氧诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨长链非编码RNA （lnc RNA） 小核仁RNA宿主基因15（SNHG15）通过miR-24-3p/Atg12对缺氧诱导的心肌细胞损伤的影响。 方法 采用RT-qPCR检测 SNHG15和miR-24-3p在缺氧诱导的心肌细胞中表达,细胞设为对照组、缺氧组、缺氧+si-SNHG15组、缺氧+si-NC组、缺氧+miR-24-3p inh组、缺氧+inh-NC组、si-SNHG15+miR-24-3p inh组。采用MTT法、流式细胞术、Caspase-3试剂盒和Transwell法检测SNHG15和miR-24-3p对心肌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,目的基因预测与筛选、荧光素酶报告基因检测验证SNHG15和miR-24-3p下游目的基因,Western blot检测Atg12蛋白及相关自噬基因的表达。 结果 随着过氧化氢处理持续时间的延长,心肌细胞内SNHG15水平明显升高,miR-24-3p水平明显降低,且呈时间依赖性（P<0.05）;与对照组相比,缺氧组细胞活力、迁移和侵袭性明显降低（P<0.05）,Caspase-3活性和细胞凋亡率均明显增加（P<0.05） ;与缺氧组相比,缺氧+si-SNHG15组细胞活力、迁移和侵袭性明显升高（P<0.05）,Caspase-3活性和细胞凋亡率均明显降低（P<0.05） ;miR-24-3p与SNHG15呈负相关,通过在线软件预测miR24-3p与SNHG15、Atg12可能的靶点,并用荧光素酶检测,结果显示,miR-24-3p与SNHG15、Atg12存在靶向调控关系;与缺氧组相比,缺氧+miR-24-3p inh组细胞活力、迁移和侵袭性明显降低（P<0.05）,Caspase-3活性和凋亡率明显升高（P<0.05）;与缺氧+miR-24-3p inh组相比,si-SNHG15+miR-24-3p inh组细胞活力、迁移和侵袭性明显升高（P<0.05）,Caspase-3活性和凋亡率明显降低（P<0.05）;与对照组相比,缺氧组Atg12、LC3蛋白的表达明显上调,p62表达明显下调（P<0.05）;与缺氧组相比,缺氧+miR-24-3p inh组Atg12蛋白和LC3表达均明显上调,p62表达明显下调（P<0.05）,与缺氧+miR-24-3p inh组相比,si-SNHG15+miR-24-3p inh组Atg12蛋白和LC3表达均明显下调,p62表达明显上调（P<0.05）。 结论 lnc RNA SNHG15可以通过调控miR-24-3p/Atg12轴来调控心肌细胞的增殖,减轻缺氧诱导的心肌细胞损伤。     

干扰STX18-AS1通过靶向miR-204保护心肌细胞

目的 探讨干扰长链非编码RNA STX18-AS1(long non-coding RNA, LncRNA STX18-AS1)是否通过上调微小RNA-204(miR-204)的表达从而影响心肌细胞缺氧损伤。方法 体外培养心肌细胞H9C2,采用二氯化钴(CoCl₂)处理心肌细胞建立细胞缺氧损伤模型,采用qRT-PCR检测CoCl₂处理不同时间点STX18-AS1、miR-204的表达量;实验设置对照组、模型组、si-NC组、si-STX18-AS1组、miR-NC组、miR-204组。采用甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖活性;流式细胞术与TUNEL检测细胞凋亡率;采用生化试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性;双荧光素酶报告实验验证STX18-AS1、miR-204的靶向关系。结果 与对照组比较,在CoCl₂处理6 h、12 h、18 h、24 h时模型组和si-NC组STX18-AS1表达水平升高(P<0.01),miR-204表达水平...     

缺氧后处理对缺氧复氧心肌线粒体活性氧及细胞凋亡的影响

目的 观察缺氧后处理对缺氧复氧心肌线粒体活性氧及细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨其调控心肌细胞凋亡的机制.方法 构建大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型,将细胞分为对照组、缺氧/复氧纽(缺氧3h后复氧6h)、缺氧后处理组(缺氧3h后行复氧5min、缺氧5 min,反复3次,再复氧6 h).应用荧光酶标仪测定线粒体活性氧量,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,Western blot检测细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 缺氧/复氧组和缺氧后处理组心肌细胞线粒体活性氧量较对照组显著升高(P＜0.01).缺氧后处理组心肌细胞线粒体平均荧光强度为30.74±1.88a.u./μg,显著低于缺氧/复氧组(63.17±2.75a.u./μg,P＜0.01),仍高于对照组(14.41±2.15a.u./μg).缺氧/复氧组和缺氧后处理组心肌细胞凋亡率较对照组显著升高(45.86％±3.29％和26.99％±3.35％比5.72％±1.63％,P＜0.01),缺氧后处理组低于缺氧/复氧组(P＜0.01).细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白在缺氧后处理组显著上调,在缺氧/复氧组显著下调;Bax蛋白在缺氧后处理组显著下调,在缺氧/复氧组显著上调.结论 缺氧后处理抑制线粒体活性氧爆发,减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡,其抗凋亡机制可能与线粒体和细胞膜Bcl-2蛋白表达上调及Bax蛋白表达下调有关.     

生长阻滞和DNA损伤诱导基因153在慢性缺氧诱导心肌细胞凋亡中的表达

目的研究慢性缺氧诱导心肌细胞发生凋亡的情况,探讨生长阻滞和DNA损伤诱导基因(CHOP/GADD153)蛋白表达变化与心肌细胞凋亡的关系。方法将体外培养的心肌细胞置于95%N_2/5%CO_2混合气体培养箱内进行慢性缺氧处理,随机将心肌细胞分为对照组及缺氧6、12、24、48、72 h组。采用流式细胞术及DNA梯度技术检测心肌细胞凋亡情况.RT-PCR检测CHOP/GAD153 mRNA水平变化,western blot检测细胞凋亡过程中CHOP/GADD153蛋白表达变化。结果缺氧6 h组心肌细胞出现典型的凋亡特征;与对照组比较,缺氧12、24、48、72 h组心肌细胞凋亡数量明显增多(P<0.05):CHOP/GADD153 mRNA和蛋白表达水平也明显增加(P<0.05)。结论慢性缺氧可诱导心肌细胞发生凋亡,CHOP/GADD153可能参与了慢性缺氧诱导心肌细胞凋亡的信号传导通路。     

吡格列酮对缺氧复氧大鼠心肌细胞凋亡及低氧诱导因子1α的影响

目的观察吡格列酮对缺氧复氧大鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨吡格列酮对低氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响。方法原代培养的SD乳鼠心肌细胞随机分为4组：溶媒组、缺氧复氧＋溶媒组、缺氧复氧＋吡格列酮0．1μM组、缺氧复氧＋吡格列酮1μM组,建立缺氧复氧模型,利用Annexin—v与PI双染法及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,RT—PCR及Westernblot方法检测HIF-1αmRNA及蛋白表达的变化。结果缺氧复氧后,溶媒组心肌细胞发生明显凋亡,吡格列酮以剂量依赖方式减少心肌细胞凋亡（P〈0．05）;缺氧复氧组HIF-1α表达上调,吡格列酮各组促进其进一步上调（P〈0．05）,与剂量无关。结论吡格列酮对缺氧复氧大鼠心肌细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与上调HIF-1α表达有关。     

ENST00000418539.1调控miR-24对H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA ENST00000418539.1(LncRNA ENST00000418539.1)是否通过调控miR-24的表达影响过氧化氢(H₂O₂)诱导心肌细胞氧化应激损伤。方法体外培养大鼠心肌细胞H9c2,200μmol/L H₂O₂处理心肌细胞48 h建立模型,分别将乱序无意义阴性序列(si-NC)、ENST00000418539.1小分子干扰RNA(si-ENST00000418539.1)、si-ENST00000418539.1与阴性对照(anti-miR-NC)、si-ENST00000418539.1与miR-24特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-24)转染至心肌细胞,使用H₂O₂处理心肌细胞。实时荧光定量聚合酶链反应检测ENST00000418539.1、miR-24的表达量;流式细胞术检测细胞凋亡率;检测丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;双荧光素酶报告实验验证ENST00000418539.1、miR-24的靶向关系;蛋白免疫印迹法检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9(Caspase-9)的表达。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Caspase-3、Caspase-9蛋白水平明显升高(P<0.05),MDA、LDH水平明显升高(P<0.05);与模型组、si-NC组比较,si-ENST00000418539.1组细胞凋亡率明显降低(P<0.05),Caspase-3、Caspase-9蛋白水平明显降低(P<0.05),MDA、LDH水平明显降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实ENST00000418539.1可靶向结合miR-24。与si-ENST00000418539.1+anti-miR-NC组比较,si-ENST00000418539.1+anti-miR-24组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Caspase-3、Caspase-9蛋白水平明显升高(P<0.05),MDA、LDH水平明显升高(P<0.05)。结论干扰ENST00000418539.1表达可负向调控miR-24的表达,从而抑制H₂O₂诱导心肌细胞凋亡及减轻氧化应激损伤。     

调控自噬对H9c2心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响

目的探讨调控自噬水平对H9c2心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的影响及意义。方法将H9c2心肌细胞缺氧2h／复氧4h,建立H／R损伤模型。以3-甲基腺嘌呤（3-MA）为自噬特异抑制剂和雷帕霉素为自噬增强剂,试验随机分为四组：正常对照组（C组）、H／R组、H／R＋100mol／L3-MA组（M＋H／R组）、H／R＋100nmol／L雷帕霉素（R＋H／R组）,应用MTT法检测细胞活力,透射电镜检测心肌细胞自噬小体,流式细胞技术检测细胞凋亡比例,Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9、Caspase-3蛋白表达。结果H／R组明显诱导H9c2心肌细胞自噬发生、细胞活力下降、凋亡增加（P〈O．01）．Westernblot检测发现,Bax、Caspase-9、Caspase-3活性片段蛋白表达明显增加,Bcl-2表达明显抑制,Bax／Bcl-2比值、活化蛋白Caspase-3、Caspase-9表达增加（P〈O．01）;M＋H／R组H／R损伤作用明显减弱,线粒体凋亡通路及下游蛋白表达抑制（P〈O．01）;而R＋H／R组线粒体凋亡通路进一步激活,促进细胞凋亡发生（P〈O．01）。结论自噬在H9c2心肌细胞H／R损伤中起到致命性作用,抑制自噬可保护心肌细胞H,R氧化应激损伤,其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。     

过表达肌浆网钙三磷酸腺苷酶抑制缺氧诱导心肌细胞凋亡的研究

目的研究过表达肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)能否提高心肌细胞对缺氧的耐受性,评价其对心肌细胞凋亡的影响。方法体外培养的SD乳鼠心肌细胞随机分为对照组、缺氧组、过表达SERCA2a组和SERCA2a+缺氧组,以携带SERCA2a基因的重组腺病毒转染心肌细胞48 h后对其进行缺氧处理。Western blot法检测细胞质内SERCA2a蛋白及Caspase-3表达的变化;膜联蛋白V/碘化丙啶双染色法及流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜检测细胞质内Ca~(2+)浓度变化。结果与对照组比较,缺氧组SERCA2a蛋白表达水平显著降低,过表达SERCA2a组蛋白含量升高2.5倍(P<0.05),缺氧组Caspase-3蛋白表达升高53.1%,过表达SERCA2a后给予缺氧处理,Caspase-3蛋白表达降低39.7%(P<0.05)。与对照组比较,缺氧组心肌细胞凋亡率显著升高,与缺氧组比较,SERCA2a+缺氧组细胞凋亡率显著下降(P<0.05)。与对照组比较,缺氧组细胞质内Ca~(2+)荧光强度显著升高;与缺氧组比较,SERCA2a+缺氧组细胞质内Ca~(2+)荧光强度显著降低(P<0.05)。结论过表达SERCA2a可减轻细胞内Ca~(2+)超载和抑制Caspase-3激活,进而减少缺氧诱导的心肌细胞凋亡。     

X染色体连锁凋亡抑制蛋白对缺氧-复氧诱导的新生大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:采用X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)对缺氧-复氧诱导心肌细胞凋亡模型进行干预,以探讨脂质体介导XIAP基因转染对缺氧-复氧诱导的新生大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法:体外培养新生大鼠心肌细胞,分为4组,①XIAP组:将pDsRed2-XIAP以脂质体转染到心肌细胞48 h后进行缺氧2 h-复氧1 h;②预处理组:先将心肌细胞进行缺氧预处理,然后进行缺氧2 h-复氧1 h;③单纯缺氧-复氧组:将心肌细胞直接进行缺氧2 h-复氧1 h;④常氧组:将心肌细胞在CO2孵箱中培养3 h.各组最后用流式细胞仪Annexin V FITC检测心肌细胞凋亡率结果组间差异.结果:①pDsRed2- XIAP可以通过脂质体转染的方式转染到心肌细胞;②与单纯缺氧-复氧组比较,XIAP组和预处理组心肌细胞凋亡率明显减低,P<0.01;③XIAP组与预处理组比较二者心肌细胞凋亡率相似,P>0.05.结论:以物理性的缺氧2 h-复氧1 h的方式能诱导所培养的心肌细胞发生凋亡;XIAP能明显减少缺氧-复氧诱导新生大鼠心肌细胞的凋亡;XIAP抑制凋亡的效应与缺氧预处理抑制凋亡的效应相似.     

热休克蛋白70抑制c-Jun氨基末端激酶通路对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的观察热休克蛋白70(HSP70)对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法培养大鼠心肌细胞,随机分为5组:对照组、H_2O_2组、热休克组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂组、热休克 JNK抑制剂组。生化法测定各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)活性和丙二醛(MDA)水平,流式细胞仪分析心肌细胞凋亡,噻唑蓝(MTr)法测定心肌细胞相对活力,Western blot法检测JNK的表达。结果H_2O_2组LDH、MDA水平和CK活性明显高于其他组(P<0.01),而SOD活性则明显低于其他组(P<0.01)。细胞凋亡率H_2O_2组明显高于其他各组(P<0.01)。细胞活力H_2O_2组明显低于对照组(P<0.01),而热休克组、JNK抑制剂组、热休克 JNK抑制剂组的细胞活力明显高于H_2O_2组(P<0.01)。JNK只在H_2O_2组有表达。结论HSP70对H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用,其机制可能是HSP70大量表达后抑制了JNK信号的转导。