抗纤复方Ⅰ号对酒精性肝病大鼠肝星状细胞活化的影响

目的观察抗纤复方Ⅰ号对酒精性肝病大鼠肝星状细胞活化的影响,以探讨中药治疗酒精性肝病的机制.方法给予Wistar大鼠乙醇8～10g·kg-1·d-1,分3次灌胃,12周制备酒精性肝病大鼠模型,对照组给予等量生理盐水,中药组在给予同酒精组等量乙醇的基础上,给予抗纤复方Ⅰ号水煎剂4.0ml·kg-1·d-1,分2次灌胃,共12周.实验4、8、12周末分批处死动物,HE及VG染色观察肝脏组织学改变,电镜下观察肝星状细胞形态学改变并检测肝内透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN)含量.结果造模12周时,酒精组大鼠肝脏呈现重度脂肪变性,点片状肝细胞坏死及炎性细胞浸润,纤维条索形成;而中药组大鼠仅呈现轻度脂肪变,无纤维条索形成.电镜下酒精组大鼠肝细胞失去正常结构,星状细胞增多、变形,细胞外可见较多胶原纤维.中药组大鼠肝细胞及星状细胞形态基本正常,基质内亦可见少量胶原纤维.实验8周末酒精组LN浓度开始升高,12周末达到最高,与正常组及中药组比较差异有显著性意义[(37.69±5.01)vs(22.34±3.51)、(28.07±4.11),P＜0.05];肝内HA浓度8周末各组间比较无统计学差异,12周末酒精组明显升高,与正常组及中药组比较,差异有显著性意义[(74.85±9.23)vs(41.26±8.34)、(53.62±4.85),P＜0.01].结论抗纤复方Ⅰ号能降低肝内HA和LN,抑制酒精性肝纤维化形成,这与其抑制肝星状细胞活化有关.     

大鼠酒精性肝病细胞凋亡与细胞色素P4502E1和氧化应激的关系

目的:观察大鼠酒精性肝病组织病理形态学改变,探讨细胞凋亡与细胞色素P4502E1的表达以及和氧化应激的关系.方法:用酒精灌胃法制备酒精性肝病大鼠模型,模型组给予酒精8 g/kg,每天分2次灌胃连续8 wk,对照组给予等量的生理盐水灌胃.实验8 wk末,观察肝组织的病理形态学改变,用原位末端标记法(TUNEL)检测肝细胞凋亡,用免疫组化法检测肝组织中Caspase-3蛋白表达,用全自动生化仪检测ALT和AST的含量,用PCR法测定肝细胞色素P4502E1的基因表达,分别用硫代巴比妥酸法(TBA法)和黄嘌呤氧化酶法测定肝组织丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力.结果:模型组凋亡的肝细胞明显增多,主要分布在中央静脉周围、点状和灶状坏死区;Caspase-3主要分布于中央静脉及肝细胞坏死灶周围细胞的胞质中.模型组肝细胞凋亡指数(AI)和Caspase-3蛋白表达强度明显高于对照组(AI:6.2%±1.7% vs 1.7%±0.8%;Caspase-3:66.7% vs 9.5%,P<0.05,P<0.01).CYP2E1表达:对照组c1基因频率为91.6%,c2基因频率为8.4%;模型组c1基因频率为53.4%,c2基因频率为46.6%,均有显著性差异(P<0.05).长期酒精摄入大鼠血清MDA含量增加(41.53±7.43μmol/L vs 15.72±2.06μmol/L,P<0.05),SOD活力下降(353.12±61.02 kU/L vs 636.82±138.60 kU/L,P<0.05),与酒精性肝病肝细胞凋亡程度有相关性(r=0.644,r=-0.511).结论:长期酒精摄入可引起大鼠酒精性肝病及及肝功能损伤,肝细胞凋亡明显增加.CYP2E1基因PstⅠ及RsaⅠRFLPs与酒精性肝病有关,其中c2基因可能与大鼠酒精性肝病的发生有关.MDA含量和SOD活力在酒精性肝病的肝细胞凋亡过程及脂质过氧化反应中发挥重要作用.     

血管紧张素Ⅱ在大鼠酒精性肝纤维化发病机制中的作用

目的:明确血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)在酒精性肝纤维化发生中的作用,为临床治疗提供新的靶点.方法:Wisar大鼠110随机分为对照组n=30),酒精组(n=50),Captopril组(n=30);酒精组采用乙醇灌胃法制备酒精性肝病动物模型,Captopril组在乙醇灌胃2 wk后,加和Captopril8g/(kg·d),日2次灌胃,同时继续乙醇灌胃,共12 wk.应用HE和VG染色观察肝脏病理组织学改变;放射免疫分析法检测血清HA、LN含量以及血浆和肝组织内AngⅡ水平;免疫组织化学染色检测肝组织内Ⅰ、Ⅳ型胶原含量.结果:酒精组血浆Ang Ⅱ水平在8 wk后开始升高,12 Wk时达到顶点,明显高于对照组(1250.50±170.06 VS 598.20±83.73,P＜0.0005).实验4,8,12 wk,肝组织内AngⅡ进程进行性升高,与对照组相比差异具有统计学意义(1083.4±197.45 VS 568.2±89.82,1382.5±154.88 VS 570.24±77.63,1504.00±173.12 VS 579.2±87.65,均P＜0.0005).Captopril组未见明显的肝细胞脂肪变性、坏死及炎性细胞浸润,无纤维奈索形成;而这些改变在酒精组均非常明显.12 wk末,酒精组血清LN和HA与对照组及captopril组比较差异具有统计学意义(33.9±2.77 VS 22.0±2.31,24.2±1.9;72.5±3.31 VS 54.4±3.15,56.7±3.22,均P＜0.05);Ⅰ、Ⅳ型胶原的定位在两组没有明显差别,但在染色强度及染色面积上,Captopril组明显低于酒精组(6.45±0.41,7.01±0.49 VS 17.23±0.62,18.04±0.89,均P＜0.0005).结论:酒精性肝纤维化时血浆及肝组织内AngⅡ增高,血管紧张素转换酶抑制剂Captopril能抑制酒精性肝纤维化的形成.AngⅡ具有促进酒精性肝纤维化发生的作用.     

Bcl-2、Bax蛋白表达在非酒精性脂肪性肝病中的作用

目的: 探讨凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax表达在大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用.方法: 采用高脂饮食建立大鼠NAFLD模型, 以正常饮食设立对照组. HE染色观察肝脏脂肪变、炎症活动和纤维化程度, 采用Western blot检测Bcl-2、Bax在肝脏组织中的表达.结果: 实验组大鼠4 wk可见轻度脂肪变, 8 wk呈单纯性脂肪肝改变, 至12 wk肝小叶内肝细胞弥漫性脂肪变, 伴大量炎性细胞浸润, 个别出现肝纤维化. Western blot结果显示, 实验组大鼠4、8、12 wk肝组织Bax蛋白表达显著高于对照组(0.61±0.03, 0.78±0.03, 1.02±0.03vs 0.51±0.03, 均P <0.01), Bcl-2蛋白随着造模时间的延长, 表达逐渐下降(0.39±0.01, 0.28±0.01, 0.15±0.01 vs 0.52±0.01, 均P <0.01),Bcl-2、Bax两者比率逐渐降低, 尤以12 wk降低明显.结论: 在NAFLD发生过程中, 细胞凋亡调节蛋白Bax表达上调, Bcl-2表达减少, 二者表达的相对比例发生异常. 这可能是NAFLD中肝细胞发生凋亡的重要原因之一.     

茶多酚对酒精性肝病大鼠TNF-alpha及肝细胞的影响

目的: 探讨茶多酚对酒精性肝病大鼠TNF-alpha表达及肝细胞病变的影响. 方法: 29只大鼠随机分为: 对照组、模型组、茶多酚干预组. 白酒ig建模, 茶多酚干预. 常规切片及特染评价肝组织病变, 检测血清AST、ALT、MDA含量, ELISA法检测血清TNF-alpha、RT-PCR检测肝组织TNF-alpha mRNA表达. 结果: 与模型组相比, 茶多酚干预组大鼠肝组织学评分(3.00±1.59 vs 4.50±1.31, P<0.05), 血清AST、MDA绝对值(87.33±61.00 vs 226.40±81.34, 2.75±0.72 vs 7.34±3.06, P<0.05), 肝组织TNF-alpha mRNA表达与TNF-alpha血清含量均降低(0.55±0.05 vs 0.73±0.07, 4.45±0.83 vs 14.33±1.87; P<0.05). 结论: 茶多酚保护肝细胞线粒体, 减轻脂质过氧化, 减少TNF-alpha的合成释放.     

阿魏酸钠抗大鼠肝纤维化

目的:研究阿魏酸钠对四氯化碳(carbontetrachloride,CCL4)中毒性肝纤维化的预防作用.方法:将96只成年♂健康SD大鼠随机分成正常对照组?CCL4组?阿魏酸钠(sodiumferulate,SF)保护组.后两组SC40ml·L-1CCL4油3ml·kg-1,每周两次,共12wk,SF保护组每天给予阿魏酸钠200mg·kg-1灌胃,于4,8,12wk,每组各处死8只,取肝组织测定脂质过氧化物代谢产物丙二醛(MDA)及测定羟脯氨酸(Hyp)和取下腔静脉血测定血清谷丙转氨酶(ALT)?乳酸脱氢酶(LDH),并观察肝脏显微结构的变化.结果:SF保护组肝组织Hyp和MDA含量明显低于CCL4组(3.0±0.7)mg·g-1vs(4.0±1.0)mg·g-1和(0.912±0.082)μmol·g-1vs(1.165±0.086)μmol·g-1(P<0.05);血清ALT?LDH含量明显低于CCL4组(48.05±5.34)nkat·L-1vs(79.12±7.50)nkat·L-1和(56.33±6.54)nkat·L-1vs(92.86±9.18)nkat·L-1(P<0.01),且肝细胞损害?肝脂肪变性?炎症细胞浸润及纤维组织增生均较CCL4组轻.结论:阿魏酸钠对CCL4所致的肝脏损伤有明显的保护作用,能明显抑制肝细胞中成纤维细胞及胶原纤维增生,预防肝纤维化.     

VEGF在大鼠慢性酒精性肝损伤中的表达

目的:观察大鼠慢性酒精性肝损伤过程中 VEGF的表达,探讨其在慢性酒精性肝损伤发生、发展中的作用．方法:56度的白酒(560 mL／L)平均以7 g／kg的剂量每日早晨灌胃一次制备肝纤维化模型,灌胃4 wk、12 wk及24 wk采用股静脉放血法分别处死大鼠,观察肝脏病理变化并采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF mRNA的表达．结果:对照组的VEGF未见表达,饲酒4 wk组表达VEGF mRNA比例最高,达到83．3％(5／6), 与对照组相比有非常显著性差异(P<0．01), 12 wk时下降到18．2％(2／11),且其表达与对照组相比无差异(P>0．05),而至24 wk VEGF表达阳性率上升到57．1％(4／7),与对照组相比有非常显著性差异(P<0．01)．另外,饲酒4 wk组 VEGF表达阳性率与12周相比差异也有非常显著性(P<0．01),而与24 wk相比无统计学差异．试验组大鼠肝细胞出现明显脂肪、空泡变性,坏死及胶原增生等病变．结论:VEGF可能在酒精性肝病中起重要作用,主要与酒精性肝炎及酒精性肝纤维化有关．     

雌二醇对肝纤维化大鼠Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGFβ1表达的影响

目的:观察雌二醇对肝纤维化大鼠肝脏胶原沉积和转化生长因子β_1(TGF β_1)表达的影响,研究雌激素对肝纤维化形成的抑制作用,并探讨其可能的机制。方法:设立模型组、治疗对照组、雌二醇组和正常对照组,以四氯化碳复合因素诱导大鼠肝纤维化动物模型,雌二醇组在四氯化碳应用的同时皮下注射苯甲酸雌二醇1mg/kg,2次/wk,共8wk。大鼠肝脏HE染色与Masson染色,分级观察肝组织的炎性坏死与胶原纤维沉积变化,并观察对大鼠肝纤维化形成过程中肝脏表达Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白及对TGF β_1的影响。结果:与正常对照组比较,四氯化碳模型大鼠出现典型的肝纤维化表现,肝脏胶原纤维间隔广泛形成,肝小叶与肝窦内胶原增生沉积明显,Ⅰ,Ⅲ型胶原(0.58±0.26vs 6.34±2.24,1.07±0.49 vs 5.28±1.28,P值均<0.001)及TGF β_1基因表达明显增多;雌二醇应用可以明显减轻肝脏内胶原纤维增生沉积P<0.05),抑制肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(2.47±0.76 vs 6.34±2.24,3.02±1.20 vs5.28±1.28,P值均<0.05)及TGF β_1的合成表达。结论:雌二醇可抑制肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白及TGF β_1的合成表达,发挥对肝纤维化的抑制作用。     

柴胡总皂苷对酒精性肝病大鼠肝脏转化生长因子-β1和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的 研究柴胡总皂苷对酒精性肝病大鼠肝脏转化生长因子(TGF)-β1和α-平滑肌肌动蛋白(SMA)表达的影响,以探讨柴胡皂苷防治酒精性肝病的机制.方法 SD大鼠45只随机分为正常组、模型组、柴胡皂苷保护组,利用白酒灌胃辅以高脂饲料制备大鼠肝损伤模型,同时给予柴胡总皂苷(200 mg/kg)保护,每天一次,连续8w,8 w末处死全部大鼠.测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性,观察肝组织病理形态学改变,检测肝组织TGF-β1和α-SMA的表达.结果 和模型组比较,柴胡皂苷能明显降低大鼠血清ALT、AST活性,减少肝细胞坏死和纤维组织增生;模型组肝组织中TGF-β1和α-SMA表达呈强阳性,给予柴胡皂苷后TGF-β1和α-SMA的表达明显降低.结论 柴胡皂苷对酒精性肝病具有一定的预防作用,其机制可能是通过抑制TGF-β1信号通路对肝星形细胞的活化,保护肝细胞的结构和功能,抑制细胞外基质在肝脏的分泌和沉积.     

全反式维甲酸对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏TGF-β1、CTGF和Col1a1表达的影响

目的:通过观察全反式维甲酸对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏TGF-β1、CTGF和Collal表达的影响,探讨该药物对酒精性肝纤维化形成的作用．方法:大鼠24只随机分为3组:酒精组(J组),给予酒精-玉米油混悬液灌胃;治疗组(A组),给予上述混悬液灌胃8 wk后加用0,15 mg／(kg·d) 的全反式维甲酸灌胃;对照组(N组),给予等量的生理盐水和玉米油灌胃．16 wk后处死大鼠．光、电镜下观察肝组织病理改变,高压液相色谱法(HPLC)测肝组织中维甲酸的含量,免疫组化法检测肝组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中TGF-β1、CTGF和Ⅰ型胶原前胶原α1(Collal)的mRNA水平．结果:光镜下酒精组及治疗组均呈不同程度的酒精性肝炎改变,电镜下酒精组肝细胞线粒体肿胀,内质网扩张,脱颗粒,而治疗组改变轻于酒精组．肝组织中维甲酸含量:酒精组低于正常组,治疗组接近对照组水平．Collal 的mRNA表达在酒精组中较对照组明显增高 (0．18±0．03 vs 0．10±0．02,P<0．01),治疗组较酒精组表达下降(0．14±0．03 vs 0．18±0．03,P <0．05)．TGF-β1的mRNA及蛋白表达在酒精组中增高(0．53±0．17 vs 0．34±0．05,105．93 ±10．12 vs 149．27±10．17,P<0．01),治疗组相对于酒精组有所下降(0．41±0．06 vs 0．53± 0．17,130．80±6.23 vs 105．93±10．12,P<0．05)． CTGF的mRNA及蛋白表达在酒精组中增高 (0．41±0．13 vs 0．17±0．05,130．84±5．72 vs 158.37±6．64,P<0．05),治疗组对于酒精组有所下降(0.30±0．04 vs 0．41±0．13,149．23± 6．65 vs 130．84±5．72．P<0．05)．结论:小剂量全反式维甲酸通过降低慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏致纤维化因子TGF-β1, CTGF和Collal的表达抑制早期酒精性肝纤维化的形成．     

内质网应激介导的凋亡途径在大鼠酒精性脂肪性肝病中的变化及意义

目的研究内质网应激相关因子及其介导的凋亡途径在酒精性脂肪性肝病大鼠发病过程中的变化及意义。方法 Wistar大鼠40只随机分为正常组(8只)、模型组(酒精混合液喂养);模型组又分为4、8、12、16周4个时相点(各8只);采集标本后检测血清生化指标,观察肝脏病理组织学改变,对肝脏脂肪变程度和炎症活动度评分及肝组织中GRP78、SREBP1-c、Caspase-3蛋白表达及动态变化。结果与正常组比较,模型组大鼠第8周时肝组织中GRP78、SREBP1-c、Caspase-3蛋白表达开始升高,于16周时达最强,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论由GRP78、SREBP1-c、Caspase-3等相关调控因子介导的肝细胞内质网应激和凋亡反应途径参与了酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏脂肪变性和炎症反应,并与酒精性脂肪性肝病发病机制关系密切。     

瘦素及硬脂酰CoA去饱和酶-1在高脂饮食大鼠非酒精性脂肪肝发病中的作用

目的:研究瘦素及SCD-1在高脂饮食引起非酒精性脂肪肝形成及其药物治疗中的作用．方法:42只SD大鼠分成正常组、高脂组和干预组(自高脂饮食喂养8 wk起用罗格列酮进行干预16 wk)．酶联免疫法测定血清瘦素,RT-PCR实时荧光分析大鼠肝 SCD-1 mRNA与β-actin mRNA的比值．结果:肝组织HE染色显示高脂组大鼠肝脏内有弥漫性肝细胞脂肪变性,8 wk达到脂肪肝诊断标准．8,24 wk高脂组大鼠血清瘦素水平升高,与正常组相比有显著性差异(8 wk:5．29±1．83 μg／L vs 3．06±1．35 μg/L, P<0．05;24 wk:7．89±3．01 μg/L vs 3．09±1．52 μg/L, P<0．05);肝SCD-1 mRNA与β-actin mRNA的比值明显下降(8 wk:0．37±0．25 vs 0．82±0．34,P<0．05)．干预组与高脂组相比,血清瘦素水平下降(5．95±3．31 μg/L vs 7．89±3．01 g／L,P>0．05);肝SCD-1 mRNA表达明显增强(SCD-1/β-actin:1．02±0．11 vs 0．52±0．22,P<0．01)．结论:长期高脂饮食可导致血清瘦素水平升高,其通过下调肝SCD-1表达促进非酒精性脂肪肝的形成．罗格列酮可降低血清瘦素水平,上调肝SCD-1的表达,减轻因高脂饮食引起的非酒精性肝脂肪变．     

小鼠日本血吸虫性肝纤维化组织TGF-β1及Smads的表达

目的: 探讨小鼠日本血吸虫病纤维化肝组织中转化生长因子(transforming growth factor-beta1, TGF-β1)、Smad2/3、Smad4和Smad7的表达和肝纤维化的发病机制.方法: 清洁级6-8 wk龄ICR小鼠80只, 雌雄各半, 随机分为模型组和正常对照组, 用血吸虫尾蚴腹部贴附法制成动物模型, 正常组未予处理. 感染后wk 4、6、8和12末分批处死2组小鼠且称肝脾质量, 取部分肝做病理学观察, HE染色和猩红染色, 制作组织芯片, 免疫组化检测TGF-beta1、Smad2/3、Smad4和Smad7在各组的表达状况. 结果: 与正常组相比, 模型组小鼠肝脾质量和肝指数均高(肝, 12 wk: 2.99±0.28 g vs 1.83±0.13 g; 脾, 12 wk: 0.87±0.15 g vs 0.14±0.02 g; 肝指数, 12 wk: 0.09±0.01 vs 0.04±0.00; 均P<0.01), TGF-beta1和Smad2/3表达也均高于正常对照组(TGF-beta1, 12 wk: 0.105±0.008 vs 0.024±0.002; Smad2/3, 12 wk: 0.094±0.009 vs 0.003±0.001, 均P<0.01), 以上指数分别与肝纤维化程度呈正相关(r = 0.635, 0.482, 0.646, 0.347, 0.662; 均P<0.01); Smad4表达高于对照组且随着纤维化的发展表达量在逐渐下降(4 wk: 0.075±0.011 vs 0.023±0.006, 6 wk: 0.043±0.008 vs 0.010±0.002, 8 wk: 0.038±0.009 vs 0.003±0.002, 12 wk: 0.028±0.004 vs 0.013±0.006; 均P<0.01), Smad7仅8 wk表达增强. 结论: TGF-beta1和Smad2/3表达增强在肝纤维化的发生中起重要作用, Smad4可能主要在纤维化的早中期发挥效应.     

瘦素及其受体在大鼠酒精性肝病形成过程中的动态变化及意义

目的:观察酒精性肝病形成中大鼠血清瘦素水平、肝组织瘦素及其受体表达的动态变化,探讨瘦素及其受体在酒精性肝病形成中的发病机制.方法:SD雄性大鼠随机分为正常组和模型组,以白酒-玉米油-吡唑混合液灌胃建立酒精性肝病动物模型,分别在4、8、14周末光镜观察大鼠肝脏组织学变化情况,免疫组化法检测肝组织瘦素及其受体的表达,ELISA法检测大鼠血清瘦素水平.结果:模型组大鼠肝组织在4周时出现轻度脂肪变及腺泡内个别点状坏死灶,8周时脂肪变程度加重、腺泡内点状坏死灶增多、门管区炎细胞浸润,14周脂肪变和炎症程度进一步加重;模型组大鼠4周时,肝组织瘦素及其受体表达、血清瘦素水平与同期正常组比差异无显著性意义(P＞0.05),随着肝脏损伤程度的加重,三者均明显增加(P＜0.05,P＜0.01);肝组织中瘦素及其受体表达水平与肝脏脂肪变及炎症程度均呈明显正相关.结论:在白酒-玉米油-吡唑混合液灌服复制的大鼠酒精性肝病形成过程中,瘦素及其受体表达增加,且随肝脏损伤程度的加重而逐渐增加,提示其参与了酒精性肝病的发生发展.     

细胞凋亡与酒精性肝病

细胞凋亡与许多肝病的发生有关，酒精性肝病也不例外。在临床和实验性酒精性肝病中，细胞凋亡常被描述为“嗜酸性小体”。Ｋａｗａｈａｒａ等用Ｔｕｎｅｌ法研究ＬｅｗｉｓＹ抗原的表达，以评估人类酒精性肝病中的细胞凋亡现象。结果发现含Ｍａｌｌｏｒｙ小体的肝细胞呈ＬｅｗｉｓＹ抗原的阳性表达，提示含Ｍａｌｌｏｒｙ小体的肝细胞至少部分以细胞凋亡的方式被清除。在正常大鼠肝脏，肝细胞凋亡仅散在见于中央静脉周围两排的肝细胞，而长期以酒精饲养的大鼠，其肝脏肝细胞凋亡比例显著高于正常大鼠，并且肝细胞凋亡程度与肝损伤的轻重密切…     

体外非酒精性脂肪肝细胞模型线粒体通透转换孔的变化及其与细胞凋亡的关系

目的探讨线粒体通透转换孔（PT孔）与肝细胞脂肪变和细胞凋亡的关系。方法采用油酸诱导肝细胞株L02细胞建立非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）体外模型，油红O染色观察细胞脂肪变情况，应用荧光显微镜法观察各组荧光下降百分比（反映PT孔的开放程度），流式细胞仪Annexin V／P1法检测细胞凋亡情况。结果荧光显微镜观察结果显示，油酸可诱导L02细胞PT孔开放（72．58％±2．78％），与对照组（8．28％±4．98％）比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；并可于24h后引起肝细胞脂肪变，至72h后肝细胞脂肪变持续存在；随NAFLD体外模型造模时间延长，细胞凋亡比例逐渐增加，以48h和72h（分别为11．09％±4．95％和15．24％±2．45％）最为显著，与对照组（4．56％±1．25％）比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论PT孔开放程度与NAFLD体外模型细胞凋亡密切相关，并与肝细胞脂肪变有一定关系。     

T辅助细胞亚群在大鼠非酒精性脂肪性肝病模型中的变化

目的:探讨T辅助细胞亚群Th1/Th2和Treg在非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)发病机制中的意义.方法:SD大鼠正常喂养1 wk后,随机分为正常组(n=20)和高脂饮食组(n=20).正常组大鼠以普通饲料喂养,高脂饮食组以高脂饲料喂养.实验第8、16周分批处死大鼠.观察肝组织的病理改变.荧光定量PCR方法检测肝脏TNF-α、IFN-γ、IL-4和Foxp3的基因表达.结果:高脂饮食8 wk大鼠肝细胞脂肪变明显,无明显炎症改变,IFN-γ、IL-4在肝脏的基因表达与正常组比较无明显变化,TNF-α稍升高,但无统计学意义,Foxp3 mRNA的表达比正常组明显降低(ct值:26.12±0.69 VS 24.22±0.62,P<0.05).高脂饮食16 wk大鼠脂肪肝明显,炎症明显,IFN-γ和TNF-α基因表达均显著升高(ct值:24.52±0.87 vs 29.94±1.44,24.31±1.13vs28.88±1.95,均P<0.05),IL-4与正常组相比较无明显变化,Foxp3基因表达较正常组和高脂饮食8 wk时均显著降低(ct值:32.57±1.54 vs 24.29±1.08,26.12±0.69,P<0.05).结论:高脂饮食大鼠肝脏Foxp3和Treg表达减少可能是高脂饮食NAFLD发生发展的重要因素.IFN-γ和TNF-α的联合作用加重了肝脏的炎症损伤.     

小檗碱对高果糖饲养诱导胰岛素抵抗大鼠肝组织HNF-4α表达的影响

目的: 探讨小檗碱对高果糖饲养诱导胰岛素抵抗大鼠肝细胞核因子(hepatocyte nuclear factor-4alpha, HNF-4alpha)表达的影响以及其改善胰岛素抵抗的分子机制. 方法: 高果糖饲料喂养SD大鼠6 wk, 建立胰岛素抵抗模型; 大鼠分为4组: 正常对照组(普通饮食)、普通饮食+小檗碱处理组、高果糖饮食组及高果糖饮食+小檗碱组; 小檗碱按187.5 mg/(kg·d)灌服4 wk; 测定血糖、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数及甘油三酯的变化; 用RT-PCR法及免疫印迹法观察肝脏HNF-4alpha基因及蛋白的表达. 结果: 高果糖饮食组胰岛素、胰岛素抵抗指数HOMA及甘油三酯水平较正常对照组均明显升高(均P<0.01), 而高果糖饮食+小檗碱组与高果糖饮食组比较上述指标明显下降(51.62±5.68 vs 64.91±7.87, P<0.01; 12.40±1.76 vs 16.06±3.32, P<0.01; 11.16±1.58 vs 14.46±2.99, P<0.05), 小檗碱可促使肝脏表达下降的HNF-4alpha恢复. 结论: 小檗碱可改善胰岛素抵抗, 其机制可能与促 进HNF-4alpha的表达有关.     

乳果糖对大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型形成的影响

目的　探讨肠道环境改变与非酒精性脂肪性肝炎的关系。方法　 4 2只SD大鼠随机分为模型组 (n =2 4 )、治疗组 (n =12 )和正常组 (n =6 )。模型组和治疗组大鼠以高脂饲料喂养。治疗组大鼠高脂饮食 8周后以乳果糖治疗。正常组大鼠以正常饲料喂养。实验 8周处死 12只模型组大鼠 ,16周处死模型组剩余大鼠和治疗组、正常组大鼠。测定血清转氨酶 ,HE染色观察肝脏病理改变。结果　 16周模型组大鼠血清ALT、AST明显升高 ,肝脏表现为脂肪性肝炎 ,治疗组大鼠血清ALT、AST明显下降 ,接近正常组水平 ,肝组织炎症活动计数也明显下降 (5 .83± 2 .0 2比 3.6 3± 0 .6 4 ) ,但仍显著高于 8周模型组大鼠水平 (3.6 3± 0 .6 4比 1.98± 0 .90 )。治疗组肝细胞脂肪变性程度无显著变化。结论　乳果糖可以改善高脂饮食诱发的脂肪性肝炎大鼠肝组织炎症损伤 ,但不能完全阻止炎症的进展 ,提示肠道细菌过度生长等肠道环境的改变是非酒精性脂肪性肝炎发病的重要机制之一     

慢性乙醇中毒所致大鼠肝损伤和肝细胞凋亡

目的:研究肝细胞凋亡在实验性大鼠乙醇性肝病(ALD) 发生、发展中的作用．方法:给大鼠饮用220 g／L的乙醇,并结合540 g／L乙醇分次、少量灌胃的方法建立大鼠肝损伤模型;常规HE 染色,光镜观察大鼠病理学形态改变,用TUNEL法检测肝细胞凋亡,速率法检测血清ALT,AST水平．结果:灌乙醇5 wk大鼠肝脏出现轻到中度脂肪变性,脂滴为以大泡型为主的混合脂滴,脂变率为40％(8／20); 10 wk,85％(17／20)大鼠发生肝脂肪变,45％(9／20)大鼠出现乙醇性肝炎的病理变化．5,10 wk大鼠血清 ALT,AST均较同期对照组有显著升高(5 wk:1017 ±267 VS 550±133,P<0．05;1350±333 vs 967±150, P<0．05;10 wk:1500±267 vs 767±250．P<0．05;2167 ±533 vs 850±183,P<0．05);灌乙醇10 wk血清ALT, AST较5 wk升高(P<0．05),有统计学意义．5,10 wk大鼠 TUNEL指数分别为0．33±0．49％、2．03±1．61％,与同期对照组相比,5 wk无显著差异,10 wk有显著性差异 (P<0．05);灌乙醇10 wk TUNEL指数较5 wk高,有显著性差异(P<0．05)．按病理损伤程度,将实验组分成乙醇性肝炎(AH)组和乙醇性脂肪肝(AFL)组,结果显示AH 组TUNEL指数也较AFL组高(3．24±1．50％ vs 1．12± 0．63％,P<0．05),差异显著．结论:过量饮用乙醇可以引起中毒性肝脏疾病,饮用乙醇及持续时间与肝损伤的发生有密切关系．细胞凋亡在乙醇诱发肝损伤时可能起着重要作用．