滤纸法测定淡色库蚊乙酰胆碱酯酶活性的实验研究

用滤纸法根据颜色变化测定淡色库敏感品系和抗性品系的乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）活性情况，以区分单个蚊虫的抗性情况，结果显示：敏感品系个体的ＡＣｈＥ随杀虫剂浓度的增高而被抑制（不显色）；抗性品系个体则不被抑制（显色明显）说明两品系间ＡＣｈＥ的含量和活性有所不同，此法可快速地测定淡色库蚊内的ＡＣｈＥ活性，简单易行，可作为一种淡色库蚊抗药性定性测定的方法，便于在现场中推广应用。     

沃尔巴克氏体与淡色库蚊溴氰菊酯抗性关系初步研究

目的 目的 探讨沃尔巴克氏体与淡色库蚊溴氰菊酯抗性间的相关性。 方法 方法 以PCR鉴定本实验室饲养的淡色库 蚊体内的沃尔巴克氏体, 采用实时定量PCR技术 （qRT?PCR） 测定并比较淡色库蚊溴氰菊酯抗性和敏感品系中沃尔巴克 氏体表达差异。 结果 结果 本实验室饲养的淡色库蚊体内含有沃尔巴克氏体。淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系卵、 一龄蚊、 二 龄蚊、 三龄蚊、 四龄蚊、 雌蚊、 雄蚊体内沃尔巴克氏体表达水平分别是敏感品系的18.42、 3.69、 4.43、 3.96、 6.31、 1.55、 3.76 倍, 差异均有统计学意义 （P均< 0.05）, 而抗性品系和敏感品系蛹中沃尔巴克氏体表达水平差异无统计学意义 （P > 0.05）。南京江心洲溴氰菊酯抗性雌蚊体内沃尔巴克氏体表达水平是敏感雌蚊的2.64倍。 结论 结论 沃尔巴克氏体可能与 淡色库蚊对溴氰菊酯产生抗性有关。     

不同品系及不同性别淡色库蚊非特异性酯酶活性比较

目的探讨不同品系及不同性别淡色库蚊非特异性酯酶（NSE）活性的差异,为应用生物化学方法检测蚊虫抗药性提供依据。方法以β-乙酸萘酯为底物,坚固蓝B盐为显色剂,测定单个蚊虫NSE活性。结果抗敌敌畏（Rd）和抗残杀威（Rp）品系淡色库蚊NSE活性水平明显高于敏感（S）品系,抗氯氰菊酯（Rc）品系淡色库蚊NSE活性水平与S品系相近。S、Rd、Rp、Rc4种品系淡色库蚊3日龄雌雄成虫NSE活性均为雌性大于雄性。结论测定NSE活性可判断蚊虫抗药性状况,不同性别蚊虫应分别制定判断标准。     

冰冻储存对淡色库蚊成虫乙酰胆碱酯酶活性的影响

-20℃冰冻0、7、14、21和28d的残杀威抗性品系和敏感品系淡色库蚊3d龄雌成虫AChE活性均无显著变化。表明-20℃冰冻不影响淡色库蚊AChE活性。因此可将现场采集的蚊虫带回实验室冻存后集中测定AChE。     

非特异性酯酶在淡色库蚊对不同杀虫剂抗性中的作用研究

目的　探讨非特异性酯酶（Non-specific esterase,NSE）在淡色库蚊对不同杀虫剂抗性中的作用。方法　以β-乙酸萘酯为底物,坚固蓝B盐为显色剂,测定室内5个品系淡色库蚊的NSE活力。结果　5个品系淡色库蚊中以抗DDVP品系NSE活力水平最高,其次为抗DDVP降解品系和抗残杀威品系。抗氯氰菊酯品系较低,与敏感品系相近。结论　NSE在淡色库蚊对有机磷类杀虫剂的抗性中起重要作用,也是对氨基甲酸酯类杀虫剂产生抗性的机制之一,与对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性关系不大。     

酯酶滤纸法检测淡色库蚊抗药性的研究

为探讨简捷灵敏的蚊虫抗药性早期测报技术,以α-乙酸萘酯为底物,坚硬固蓝B盐为显色剂,用滤纸法测定实验室和现场淡色库蚊（Cx.pipien pallens)酯酶活力,结果显示三个抗性品系淡色库蚊以抗DDVP品系抗性个体频率最高,其次为抗残杀威品系,抗氯氰菊酯品系较低,与敏感品系相近;三个现场淡色库蚊均对DDVP和残杀威产生不同程度抗性,其抗性个体频率均较高,表明酯酶滤纸法可用于检测蚊虫对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性水平,该方法操作简便快速,观察结果直观灵敏,具有实用价值。     

用蚊虫酯酶单克隆抗体进行库蚊有机磷抗性的免疫学检测

对不同品系致倦库蚊或淡色库蚊分别用抗致倦库蚊酯酶单克隆抗体进行ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和夹心法ＥＬＩＳＡ测定，并与生物测试法和生化微量板法相比较。免疫学检测发现的抗性程度高于后两法，发现的抗性频率高于生化法。ＥＬＩＳＡ方法诊断抗性的阈值为ＯＤ４５０≥０．５，生化法阈值为β－Ｎ浓度≥２．５×１０－３μｍｏｌ／ｍｉｎ·ｍｇ蛋白。ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法适用于现场快速筛选抗性，对高酯酶活力抗性品系的检测优于夹心法ＥＬＩＳＡ。     

淡色库蚊氯菊酯抗性品系和敏感品系的生物学特性

目的　比较淡色库蚊氯菊酯抗性品系和敏感品系生物学特性的差异。　方法　在实验室观察淡色库蚊氯菊酯抗性品系及敏感品系的吸血、繁殖和发育等生物学特性 ,构建实验种群生命表。　结果　淡色库蚊氯菊酯抗性品系吸血率低于敏感品系 ,卵、幼虫和蛹的发育历期及成虫寿命均长于敏感品系 ,卵期死亡率高于敏感品系。以上各项 ,两种品系间差异均具有显著性意义 (P <0.01)。抗性品系相对于敏感品系的适合度为 0.58。　结论　淡色库蚊氯菊酯抗性品系表现出对生长发育和繁殖的不利性。     

不同品系淡色库蚊各发育阶段的非特异性酯酶和乙酰胆碱酯酶活力变化

研究并探讨非特异性酯酶（NSE）和乙酰胆碱酯酶（AChE）活力在不同品系淡色库蚊（Cules pipiens pallens）各发育阶段的变化，为应用生物化学方法检测蚊虫抗药性及科学合理地进行蚊虫化学防治提供依据。用微量滴定板法测定单个蚊虫NSE和AChE活力，结果显示，敏感品系、DDVP抗性品系和残杀威抗性品系淡色库蚊NSE活力水平在不同发育阶段有变化，I－Ⅲ龄幼虫较低，Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄雌成蚊较高，在各发育阶段均是DDVP抗性品系NSE活力最高，残杀威抗性品系次之，敏感品系最低，其中Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄雌成蚊阶段三个品系间NSE活力差别更明显；三个品系淡色库蚊AChE活力在I－Ⅳ龄幼虫和蛹期较低，3日龄雌成蚊较高，三个品系间AChE活力稍有差异，从高到低依次为残杀威抗性品系、DDVP抗性品系和敏感品系。测定蚊虫NSE活力判断抗药性可选择Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄未吸血雌成蚊；测定蚊虫AChE不敏感性判断抗药性可选择3日龄未吸血雌成蚊；蚊虫化学防治中应选择低龄幼虫阶段施药。     

淡色库蚊对残杀威抗性机制的研究--酯酶与抗性的关系

为探讨酯酶与抗性的关系，采用生物测定法和微滴定板法，检测淡色库蚊抗残杀威品系各世代的抗性指数及蚊体现人酯酶的活性。淡色库蚊经过43代的汰选，抗性指数达到11.26倍；蚊体内的乙酰胆碱酯酶（AchE)活性的平均抑制率随世代的增加而变低，低于30%的个体频率随世代的增加而增加，呈正相关关系；非特异性酯酶（NSE）的活力随世代的增加而增强，而高于或等于0.9的个体频率逐渐增高，与生物测试法基本一致。抗残杀威品系AchE的不敏感性与抗性呈正相关关系，NSE的活力与抗性亦呈相关关系。     

酚氧化酶基因在3种淡色库蚊体内表达量比较

目的分析淡色库蚊抗性品系、敏感品系、微山湖现场品系蚊体内酚氧化酶基因表达量。方法根据酚氧化酶基因序列设计引物扩增基因片段,荧光定量PCR检测不同品系淡色库蚊体内的酚氧化酶基因表达水平差异。结果酚氧化酶在昆虫的正常发育过程中具有重要的生理作用,酚氧化酶基因在抗性品系蚊体内的表达量是敏感品系的6.74倍,微山湖现场品系是敏感品系的4.19倍。结论淡色库蚊酚氧化酶基因可做为新的抗性检测及治理基因靶标。     

非特异性酯酶在淡色库蚊对不同杀虫剂抗性中的作用研究

目的：探讨非特异性酯酶（Non-specific esterase,NSE)在谈色库蚊对不同杀虫剂抗性中的作用。方法：以β－乙酸萘酯为底物,坚固蓝B盐为显色剂,测定室内5个品系淡色库蚊的NSE活力。结果：5个品系淡色库蚊中以抗DDVP品系NSE活力水平最高,其次为抗DDVP降解品系和抗残杀威品系,抗氯氰菊酯品系较低,与敏感品系相近。结论：NSE在淡色库蚊对有机磷类杀虫剂的抗性中起重要作用,也是对氨基甲酸酯类杀虫剂产生的机制之一,与对拟除虫菊类杀虫剂的抗性关系不大。     

用核酸探针检测淡色库蚊溴氰酯抗性

目的：用淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关胰蛋白酶核针检测淡色库蚊溴氰菊抗性。方法：用逆Northern鉴定抗药性品系和敏感品系中中胰蛋白酶的表达差异，用随机引物法标记鉴定后的胰蛋白酶cDNA片段为探针Northern blot检测淡色库蚊的抗药性。结果：逆Northern显示胰蛋白酶在抗药性品系中的表达量是敏感品系的4．33倍。以其为探针Northern blot检测显示，胰蛋白酶基因在抗药性品系中高表达，抗药性品系中胰蛋白酶的表达量是敏感品系的3．90倍。结论：作为一种新的抗药性检测的分子生物学方法，胰蛋白酶核酸探针可用于区分抗药性品系和敏感品系。     

用RAPD-PCR鉴定抗溴氰菊酯淡色库蚊

用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ法对淡色库蚊抗溴氰菊酯品系和敏感品系的基因组ＤＮＡ进行了分析鉴别。结果表明：不同引物扩增出的产物数量不等，明显可分辨的带一般在４～１３条之间，带的大小在０．５～５．１ｋｂ之间；２２个引物在两品系中各扩增出１７０条可分辨带，绝大部分条带在两品系间是共同的；Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ７个引物的扩增产物在两者间共显示差异带２１条（２，３，７，４，１，１和３条），其中抗性品系特异带１２条（１，２，５，２，１，０和１条）；敏感品系特异带９条（１，１，２，２，０，１和２条）。这些特异片段可望作为抗性的分子标志用于抗性品系的鉴定以及进一步研究     

淡色库蚊对溴氰菊酯抗性的遗传分析

目的：对室内选育的淡色库蚊抗溴氰菊酯品系（抗性系数５１８）进行遗传分析。方法：采用ＬＣ－Ｐ值分析法研究淡色库蚊溴氰菊酯抗性的形式遗传。采用抑制剂增效试验探讨抗性机制。结果：正交和反交Ｆ１代的抗性系数分别为１５４．８和１５９．２。Ｆ１代的ＬＣ－Ｐ线靠近抗性亲本一方，Ｄ＝０．６２５；ＢＣ代在死亡率５０％处、Ｆ２代在死亡率２５％和７５％处未出现明显平坡，ＢＣ和Ｆ２的实测曲线和理论曲线均存在较大差异，Ｐ均＜０．０１；ＰＢ、ＤＥＦ和ＴＰＰ对抗性品系的增效比分别为２７．１３、１．２２和１．０５。结论：淡色库蚊对溴氰菊酯的抗性为多基因遗传，其主要基因为不完全显性，多功能氧化酶是抗性的主要因子。     

用核酸探针检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性

目的　用淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关胰蛋白酶核酸探针检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性。方法　用逆Northern鉴定抗药性品系和敏感品系中胰蛋白酶的表达差异 ,用随机引物法标记鉴定后的胰蛋白酶cDNA片段为探针Northernblot检测淡色库蚊的抗药性。结果　逆Northern显示胰蛋白酶在抗药性品系中的表达量是敏感品系的 4 33倍。以其为探针Northernblot检测显示 ,胰蛋白酶基因在抗药性品系中高表达 ,抗药性品系中胰蛋白酶的表达量是敏感品系的 3 90倍。结论　作为一种新的抗药性检测的分子生物学方法 ,胰蛋白酶核酸探针可用于区分抗药性品系和敏感品系     

用RAPD—PCR鉴定抗溴氰菊酯淡色库蚊

用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ法对淡色库蚊抗溴氰菊酯品系和敏感品系的基因组ＤＮＡ进行了分析鉴别。结果表明：不同引物扩增出的产物数量不等，明显可分辨的带一般在４￣１３条之间，带的大小在０．５￣５．１ｋｂ之间；２２个引物在两品系中各扩增出１７０条可分辨带，绝大部分条带在两品系间是共同的；Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ７个引物的扩增产物在两者间共显示差异带２１条（２，３，７，４，１，１和３条），其中抗性品系特异带１２条     

用微量板法测定淡色库蚊非特异性酯酶判别抗药性

抗药性检测是抗性治理工作的基础 ,是预防抗性产生和发展的前提[1] 。我们根据抗性产生的生化机制 ,利用微量滴定板法对实验室和现场淡色库蚊进行了单个蚊虫非特异性酯酶测定 ,以判断其抗性。材料与方法1　供试蚊虫敏感 (Ｓ)品系 :室内常规饲养的淡色库蚊。抗性品系 :在室内分别用ＤＤＶＰ、残杀威、氯氰菊酯逐代汰选的抗ＤＤＶＰ(Ｒｄ)、抗残杀威 (Ｒｐ)、抗氯氰菊酯 (Ｒｃ)品系淡色库蚊。Ｒｄ降解品系 :Ｒｄ品系淡色库蚊连续 2 0代未用药物选育 ,进行常规饲养 ,其抗性自然减退的种群。现场种群 :分别在济宁市的李营、唐口、长沟三地采集的…     

淡色库蚊酯酶活性频率与有机磷酯剂抗性关系

本文报告了采用生物测定法（ＬＣ５０）和改进的Ｐａｓｔｅｕｒ＆Ｇｅｏｒｇｈｉｏｕ（１９８１）滤纸片法测定的淡色库蚊对有机磷酯剂的抗药性．结果证实：１．我国淡色库蚊对有机磷醋剂的抗药性，酯酶Ａ和酯酶Ｂ都在其中起了重要作用．２．α－醋酸萘酯为酯酶Ａ和Ｂ的共同底物．因此，用α－醋酸萘酯为底物的方法检测单个蚊虫对有机磷酯的抗药性是成功的．３．从全国１１个城市检测结果分析，淡色库蚊对有机磷酯的抗药性同酯酶的聚集频率是一致的，而与生物测定法检出的ＬＣ５０与酯酶活性频率的聚集度不完全平行，特别是在中低度抗性时如此。因此，淡色库蚊对有机磷酯的抗性在高抗性区可用测定酯酶的频率来代替毒效生物测定法，而在低抗性区则不能。     

淡色库蚊抗性品系生态习性的探讨

实验观察淡色库蚊敏感品系的化蛹率显著高于抗DDVP品系及抗氯氰菊酯系 (χ2值为25.98和20.64,P＜0.05),而抗性品系幼虫历期略短于敏感品系;亚致死剂量氯氰菊酯对抗氯氰菊酯品系及敏感品系的Ⅲ～Ⅳ龄淡色库蚊幼虫化蛹有显著影响,抗性品系蚊虫寿命略有延长.表明长期使用单一的杀虫剂蚊虫易产生抗性.