二十二碳六烯酸对大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活性钾电流的影响

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对大鼠冠状动脉平滑肌细胞(CASMCs)上大电导钙激活性钾电流(BK_(Ca))的影响。方法采用酶消化法获得大鼠CASMCs,并用单通道内膜向外(inside-out)模式及全细胞膜片钳技术记录,分别加入10、20、30、40、50、60、70和80μmol/L DHA后,大鼠CASMCs的BK_(Ca)变化。结果 (1)单通道inside-out模式下,测试电位-60 mV及DHA浓度>10μmol/L时,BK_(Ca)的开放概率(Po)增大,且呈浓度依赖性,Po从[(0.072±0.003)0μmol/L DHA,n=6]增至[(0.601±0.030)80μmol/L DHA,n=10,P<0.05],半效激活浓度为(36.110±0.080)μmol/L;当DHA浓度<10μmol/L时,Po增加不明显(P>0.05);(2)全细胞模式下,随着DHA浓度增加,BK_(Ca)电流密度逐渐增大,且呈浓度依赖性。测试电位+80 mV,BK_(Ca)电流密度从[(48.9±2.5)pA/pF 0μmol/L,n=6]增至[(226.3±11.3)pA/pF 60μmol/L,n=8,P<0.05]。结论随着DHA浓度的增加,BK_(Ca)Po及电流密度逐渐增大,DHA对BK_(Ca)的影响可能是舒张血管的机制之一。     

胺碘酮对模拟缺氧状态下大鼠心室肌细胞瞬时外向和内向整流钾电流的影响

目的通过观察胺碘酮对模拟缺氧状态下急性分离的大鼠心室肌单细胞复极相中瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(IK1)通道的影响,探讨其在该条件下抗心律失常的作用机制。方法使用酶解法分离获取大鼠单个心室肌细胞,通过持续通以模拟缺氧细胞外液建立体外模拟缺氧模型,采用全细胞膜片钳实验技术研究胺碘酮对该条件下Ito和IK1的作用。结果胺碘酮呈剂量依赖性降低Ito和IK1电流幅值,对Ito抑制效应的起始浓度为1μmol/L,100μmol/L时抑制作用达最大,最大抑制幅度为56.78%±4.27%(23.98±2.18pA/pFvs10.38±4.27pA/pF;测试电压为+70mV;P<0.01;n=5),IC50(半数抑制浓度)为74.35μmol/L,但Ito的I-V曲线趋势并没有发生变化,稳态激活和失活曲线几乎不发生移动。胺碘酮对IK1内向电流部分抑制起始浓度为1μmol/L,外向电流部分抑制效应的起始浓度为2μmol/L,其最大抑制幅度分别为58.77%±10.76%(56.32±7.24pA/pFvs23.22±7.30pA/pF;测试电压为-150mV;P<0.01)和33.29%±2.15%(6.70±0.89pA/pFvs4.46±0.93pA/pF;测试电压为+40mV;P<0.01;n=5)。对内向电流成分的IC50为63.75μmol/L,IK1通道的稳态激活曲线无明显改变。结论在大鼠离体心室肌单细胞模拟缺氧条件下,胺碘酮对Ito和IK1电流幅度呈剂量依赖性抑制,有对抗缺氧本身造成的动作电位时程缩短效应;对I内向电流成分的敏感性高于外向成分。     

血管紧张素Ⅱ对人心房肌细胞膜钾钙离子电流的作用

观察血管紧张素Ⅱ对人心房肌细胞膜主要离子流的作用,揭示其参与房性心律失常的细胞电生理机制。急性分离单个人心房肌细胞,采用全细胞膜片钳方法记录细胞膜短暂外向钾电流(Ito)、内向整流钾电流(Ik1)和L型钙电流(ICaL)。结果:0.1μmol/LAngⅡ使人心房肌细胞膜Ito峰值电流密度明显下降6.54±0.49pA/pFvs12.65±0.86pA/pF(P<0.05),在-100mV电压下使IK1峰值电流密度显著升高-8.93±1.12pA/pFvs-5.23±0.95pA/pF,(P<0.05),并明显促进人心房肌细胞膜ICaL-12.72±1.69pA/pFvs-5.79±0.84pA/pF(P<0.05)。结论:AngⅡ可促进人心房肌细胞膜IK1及ICaL,抑制人心房肌细胞膜Ito。     

胆囊收缩素在应激时胆汁反流中的作用及其相关机制

目的证实应激过程中胆汁反流的存在,探讨胆囊收缩素八肽(CCK-8)在应激所致胆汁反流中的作用及相关机制。方法放免法检测大鼠血浆 CCK-8和胃液胆汁酸水平,测定胃液 pH值并记录胃黏膜溃疡指数;多导生理记录仪记录离体肌条收缩活动;检测 Fura-2/AM 标记的胃窦平滑肌细胞(SMC)内钙离子浓度([Ca~(2+)]i)的变化;全细胞膜片钳记录 L-型钙通道电流(I_(Ca-L))。结果与正常对照相比,应激时血浆 CCK-8[从(2.23±0.88)pmol/L 到(10.80±3.82)pmol/L],胃液胆汁酸[从(37.93±23.76)μmol/L 到(1316.00±197.36)μmol/L],pH 值(从1.06±1.20到5.29±1.25)和溃疡指数(从0.62±0.23到32.01±16.11)均明显增高(P<0.01);CCK-8S 显著增强胃窦和幽门肌条收缩和胃窦 SMC 的[Ca~(2+)]i[从(65.8±7.4)nmol/L 升至(472.1±35.6)nmol/L,P<0.01]及 I_(Ca-L)[从(-56.42±6.57)pA 增至(-88.54±5.71)pA,P<0.01],但可被相应拮抗剂所抑制。结论与应激时 CCK-8升高所致的胃窦动力紊乱相关,胆汁反流存在于应激过程中,是应激性胃黏膜损伤的重要因素。     

Inhibitory effects of berberine on ion channels of rat hepatocytes

AIM:To examine the effects of berberine,an isoquinolinealkaloid with a long history used as a tonic remedy for liverand heart,on ion channels of isolated rat hepatocytes.METHODS:Tight-seal whole-cell patch-clamp techniqueswere performed to investigate the effects of berberine onthe delayed outward potassium currents(I_K),inward rectifierpotassium currents(I_(K1)) and Ca~(2 )release-activated Ca~(2 )currents(I_(CRAC))in enzymatically isolated rat hepatocytes.RFSULTS:Berberine 1-300 μmol/L reduced I_K in a concentration-dependent manner with EC_(50) of 38.86±5.37μmol/L and n_Hof 0.82±0.05(n=8).When the bath solution was changedto tetraethylammonium(TEA)8 mmol/L,I_K was inhibited.Berberine 30 μmol/L reduced I_K at all examined membranepotentials,especially at potentials positive to 60 mV(n=8,P<0.05 or P<0.01 vs control).Berberine had mild inhibitoryeffects on I_(K1)in rat hepatocytes.Berberine 1-300 μmol/Lalso inhibited I_(CRAC) in a concentration-dependent fashion.The fitting parameters were EC_(50)=47.20 10.86μmol/L,n_H=0.71±0.09(n=8).The peak value of I_(CRAC)in the Ⅰ-Ⅴrelationship was decreased by berberine 30 μmol/L at potentialnegative to-80 mV(n=8,P<0.05 vs control).But the reversepotential of I_(CRAC) occurred at voltage 0 mV in all cells.CONCLUSION:Berberine has inhibitory effects on potassiumand calcium currents in isolated rat hepatocytes,which maybe involved in hepatoprotection.     

缬沙坦对血管紧张素Ⅱ引起人心房肌细胞离子电流改变的调节作用

目的:研究缬沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)引起人心房肌细胞离子电流改变的调节作用。方法:经典两步酶解法分离单个心房肌细胞,膜片钳全细胞法记录离子电流。结果:AngⅡ(300nmol/L)使快速内向钠电流(INa)从(-15.83±1.62)电流(pA)/电容(pF)降到(-6.35±1.83)pA/pF(P<0.01),其作用不能被缬沙坦(10μmol/L)抑制;使L型钙电流(ICa-L)从(-4.5±1.64)pA/pF增加到(-5.5±1.95)pA/pF(P<0.05),其作用能被缬沙坦抑制;指令电位-120mV时使内向整流性钾电流(IK1)从(-3.49±1.03)pA/pF增加到(-5.47±1.83)pA/pF(P<0.01),+10mV~+50mV时其外向电流成分随电压而增加,其作用不能被缬沙坦抑制。AngⅡ对超速激活延迟整流性钾电流(IKur)和瞬间外向钾电流(Ito1)无显著影响。结论:AngⅡ对人心房肌细胞ICaL有促进作用并可被缬沙坦抑制;增加IK1,抑制INa,其作用不能被缬沙坦抑制。     

IHC—72对心肌细胞慢钙通道的影响

为了解3,6二甲氨基二苯骈碘杂环依地酸盐(IHC-72)对家兔浦肯野纤维慢钙通道的浓度依赖性效应,采用双微电极电压钳制术,观察IHC-72对慢钙电流(I_(Ca))的作用.结果显示:2.54μmol/LHC-72对I_(Ca)无影响(P>0.05);25.4、101.6μmol/LIHC-72对I_(Ca)的抑制率分别为20%和54.6%(P均<0.01),但都不使I-V曲线的峰值发生偏移;而0.5、5μmol/L维拉帕米对I_(Ca)的抑制率分别为23%和57.48%.表明IHC-72能浓度依赖性阻滞I_(Ca),且25.4、101.6μmol/LIHC-72对I_(Ca)的抑制与0.5、5μmol/L维拉帕米相当.     

伊布利特对兔急性心肌梗死后梗死周边区心外膜心室肌细胞L型钙电流的影响

目的观察伊布利特对急性心肌梗死(AMI)后一周心室肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响。方法兔开胸,左前降支结扎造成AMI,1周后酶解分离梗死周边区心外膜心室肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录10-6mol/L伊布利特细胞外液(伊布利特组)对梗死周边区心外膜心室肌细胞ICa-L活性的影响,并与正常对照组(对照组)及AMI但未灌流伊布利特组(AMI组)比较。结果①AMI 1周时兔梗死周边区心室肌细胞ICa-L受到抑制,电流密度-电压曲线(I-V)上移,ICa-L电流密度峰值降低[-3.52±0.91 pA/pF(n=10)vs-5.68±1.53 pA/pF(n=10),P<0.05];伊布利特组电流密度峰值为-4.84±1.22 pA/pF(n=8),较AMI组显著增大(P<0.05),与对照组比较,虽有减小,但无差异(P>0.05)。②AMI组、伊布利特组ICa-L失活曲线明显左移,以AMI组左移更加明显,对照组半数失活电压(V0.5)为-32±4 mV(n=10),AMI组V0.5增加为-46±7 mV(n=10,P<0.05),伊布利特组V0.5为-36±6mV(n=8),与对照组比较无差异(P>0.05)。结论AMI后1周梗死周边带心室肌细胞L型钙通道受阻滞,伊布利特对缺血引起的ICa-L的异常有明显改善作用。     

氯氮平治疗对以阳性或阴性症状为主的精神分裂症患者血清一氧化氮含量的影响

阳性症状为主组32例(阳性组),阴性症状为主组30例(阴性组),单用氯氮平12.5～50.0mg/d,2周内达规定剂量300.0mg/d,共观察8周。治疗前阳性组、阴性组和健康组(28例)血清NO含量分别为(59±16)、(26±7)和(38±11)μmol/L(硝酸还原酶法),组间比较均P<0.01。治疗后阳性组血清NO降至(39±8)μmol/L,阴性组升至(32±8)μmol/L,     

黄芪总黄酮对豚鼠心室肌细胞动作电位和延迟整流钾电流的作用

目的:研究黄芪总黄酮(TFA)对豚鼠心室肌细胞动作电位(AP)和延迟整流钾电流(IK)的作用。方法:实验采用标准玻璃微电极细胞内记录心室肌细胞AP和全细胞膜片钳技术记录IK。结果:应用TFA 20 mg/kg后心室肌AP的幅度从给药前的(70.25±5.97)mV降低到(58.73±4.86)mV(n=6,P<0.05);AP时程(APD90)从给药前的(236.08±17.63)ms延长到(282.13±22.01)ms(n=6,P<0.05)。应用TFA 40 mg/kg后心室肌AP的幅度从给药前的(72.65±5.12)mV降低到(48.32±8.76)mV(n=6,P<0.05);AP时程(APD90)的从给药前的(265.34±14.82)ms延长到(315.46±24.33)ms(n=6,P<0.05)。而应用TFA 20 mg/kg后,在+50 mV指令电压下,心室肌细胞的IK从(1.21±0.24)nA降至(0.96±0.27)nA(n=6P<0.01),应用TFA 40 mg/kg后心室肌细胞的IK从(1.45±0.36)nA下降到(1.01±0.27)nA,差异有显著性(n=6P<0.01)。结论:TFA可以降低心室肌AP幅值,延长AP时程,抑制心室肌细胞的IK幅值,并且有一定的剂量依赖性。     

5-HT4 受体部分激动剂RS67506可作为心肌IK1通道抑制剂

目的 验证5-HT4受体部分激动剂RS67506对心室肌内向整流钾通道（IK1）和动作电位（action potential，AP）的作用特征。方法 取成年雄性SD大鼠心脏经Langendorff离体灌流、胶原酶法急性分离单个左心室肌细胞，采用膜片钳技术检测1~30 μmol/L RS67506对心室肌静息电位（resting potential，RP）、动作电位（action potential，AP ）及IK1通道电流的影响。结果 1、10、30 μmol/L RS67506可剂量依赖性降低静息电位（由-75.2±0.4 mV 分别降低至-72.7±0.5 mV，-70.1±0.4 mV和-67.9±0.9 mV）（P<0.01），延长动作电位复极时间（APD）（APD90由31.1±1.1ms 分别延长至34.7±0.6 ms，40.4±1.2ms和45.0±0.5ms）（P<0.05 或P<0.01）；同时抑制IK1，30 μmol/L RS67506可使IK1外向电流密度（-60 mV）降低58.4%（P<0.05）；内向电流密度（-100 mV）降低53.2%（P<0.01）。结论 RS67506对大鼠心室肌IK1和AP的作用特征符合IK1抑制剂的特点，可能作为大鼠心肌IK1抑制剂，为临床防治心律失常提供新的药理学工具药。     

Ic类抗心律失常药普罗帕酮对豚鼠心肌力学的影响

目的研究I c类抗心律失常药普罗帕酮的心肌变力性作用并从组织水平探讨其作用机制.方法采用离体乳头肌灌流的方法观察普罗帕酮对豚鼠乳头肌主动张力(DT)、主动张力上升最大速度(+dT/dtmax)、主动张力下降最大速度(-dT/dtmax)的影响.经钙通道阻滞剂尼卡地平及Na+/Ca2+交换阻滞剂KB-R7943预处理后,分别观察普罗帕酮的上述作用.结果(1)在场刺激引起收缩的乳头肌,0.1、1、10、30μmol/L普罗帕酮分别使DT由对照(0.176±0.050)g降至(0.141±0.032、0.116±0.029、0.083±0.018、0.053±0.015)g(P＜0.01),IC50为10μ mol/L;+dT/dtmax由对照(1.788±0.452)mg/s降至(1.580±0.371、1.458±0.289、1.235±0.189、0.970±0.149)mg/s(P＜0.01);-dT/dtmax由对照(1. 606±0.248)mg/s降至(1.452±0.276、1.255±0.190、0.915±0.262、0.784±0.221)mg/s.(2)尼卡地平(2.0μmol/L)阻断L型钙通道后,普罗帕酮(10 μmol/L)使DT、+dT/dtmax、-dT/dtmax由(0.099±0.017)g、(1.316±0.242)mg/s、(1.241±0.171)mg/s分别降低至(0.061±0.010)g、(1.107±0.226)mg/s、(0.894±0.234)mg/s(P＜0.01).(3)KB-R7943(1.0μmol/L)阻断Na+/Ca2+交换体后,普罗帕酮(10μmol/L)使DT、+dT/dtmax、-dT/dtmax由(0.177±0.021)g、(1.484±0.278)mg/s、(1. 631±0.234)mg/s分别降低至(0.087±0.009)g、(1.164±0.006)mg/s、(1.045±0.230)mg/s(P＜0.01).结论普罗帕酮剂量依赖性抑制豚鼠乳头肌力学特性各项指标,显示明显的负性肌力作用.普罗帕酮对L型钙通道及Na+/Ca2+交换体的抑制作用参与其负性肌力作用的产生,且前者作用较大.     

Effects of extracellular iron concentration on calcium absorption and relationship between Ca2+ and cell apoptosis in Caco-2 cells

AIM: To determine the method of growing small intestinal epithelial cells in short-term primary culture and to investigate the effect of extracellular iron concentration ([Fe3+]) on calcium absorption and the relationship between the rising intracellular calcium concentration ([Ca2+]i) and cell apoptosis in human intestinal epithelial Caco-2 cells. METHODS: Primary culture was used for growing small intestinal epithelial cells. [Ca2+]i was detected by a confocal laser scanning microscope. The changes in [Ca2+]i were represented by fluorescence intensity (FI). The apoptosis was evaluated by flow cytometry. RESULTS: Isolation of epithelial cells and preservation of its three-dimensional integrity were achieved using the digestion technique of a mixture of collagenase Ⅺ and dispase Ⅰ. Purification of the epithelial cells was facilitated by using a simple differential sedimentation method. The results showed that proliferation of normal gut epithelium in vitro was initially dependent upon the maintenance of structural integrity of the tissue. If 0.25% trypsin was used for digestion, the cells were severely damaged and very difficult to stick to the Petri dish for growing. The Fe3+ chelating agent desferrioxamine (100, 200 and 300 μmol/L) increased the FI of Caco-2 cells from 27.50±13.18 (control, n = 150) to 35.71±13.99 (n = 150, P<0.01), 72.19±35.40 (n = 150, P<0.01) and 211.34±29.03 (n = 150,P<0.01) in a concentration-dependent manner. There was a significant decrease in the FI of Caco-2 cells treated by ferric ammonium citrate (FAC, a Fe3+ donor; 10, 50 and 100 μmol/L). The FI value of Caco-2 cells treated by FAC was 185.85±33.77 (n = 150, P<0.01), 122.73±58.47 (n = 150, P<0.01), and 53.29±19.82 (n= 150,P<0.01), respectively, suggesting that calcium absorption was influenced by [Fe3+]. Calcium ionophore A23187(0.1,1.0 and 10 μmol/L) increased the FI of Caco-2 cells from 40.45±13.95 (control, n = 150) to 45.19±21.95 (n = 150, P<0.01), 89.87±43.29 (n = 150, P<0.01) and 104.64±51.07 (n = 150,P<0.01) in a concentration-dependent manner. The positive apoptotic cell number of the Caco-2 cells after being treated with A23187 increased from 0.32% to 0.69%, 0.90% and 1.10%, indicating that the increase in the positive apoptotic cell number was positively correlated with [Ca2+]i. CONCLUSION: Ca2+ absorbability is increased with the decrease of extracellular iron concentration Fe3+ and hindered with the increase of Fe3+ consistence out of them. Furthermore, increase of [Ca2+]i can induce apoptosis in Caco-2 cells.     

维拉帕米治疗室上性快速型心律失常时红细胞钙泵和Ca~(2+)变化的研究

对维拉帕米(VR)治疗室上快速型心律失常(SVT)时红细胞钙泵和Ca~(2+)变化进行对比研究,正常人30名红细胞内Ca~(2+)为0.32±0.02μmol/gHb,红细胞膜钙泵为44.1±1.8μmolPi/gHb/h.SVT53例发病时,红细胞内Ca~(2+)为0.47±002μmol/gHb,膜钙泵为67.5±2.5μmolPi/glib/h,明显高于正常人(均为P<0.001),给VR后,红细胞内Ca~(2+)降至正常水平(P>0.05),但膜钙泵活力仍超出正常水平(P<0.01).结果表明VR主要阻滞细胞膜Ca~(2+)内流,并对钙泵有轻度抑制作用.SVT病人个体间血浆VR浓度差异较大,总的血浆VR浓度与临床效应无一致性变化。     

新型ATP敏感性钾通道开放剂Iptakalim对慢性缺氧大鼠肺内动脉平滑肌细胞钾电流的影响

目的探讨慢性缺氧对大鼠肺内动脉平滑肌细胞外向性钾电流的影响,及新型ATP敏感性钾(KATP)通道开放剂Iptakalim对此时钾电流的作用。方法SD雄性大鼠28只随机分成正常组、缺氧组[O2(10±0.5)%]、低剂量治疗组(每日缺氧前30min Iptakalim0.75mg·kg-1灌胃)、高剂量治疗组(每日缺氧前30min Iptakalim1.5mg·kg-1灌胃),将缺氧组和已灌胃的大鼠放入常压缺氧舱制作动物模型。4周后,急性分离大鼠动脉平滑肌细胞,用膜片钳全细胞记录技术记录细胞外向性钾电流;通过浴槽内给药,观察Iptakalim对钾电流的影响。结果Iptakalim0.1,1,10,100μmol/L呈浓度依赖性增加正常大鼠肺内动脉平滑肌外向钾电流,格列本脲30μmol/L可拮抗Iptakalim10μmol/L对钾电流的增强作用;与对照组大鼠相比,慢性缺氧大鼠肺内动脉平滑肌细胞钾电流下降,电流密度减小(690±450)pA/pFvs(420±250)pA/pF(P<0.01),膜电容增大到(4.29±1.78)pF(P<0.01),电流-电压(I-V)曲线下移;与缺血氧组相比,每日缺氧前口服Iptakalim,细胞膜电容减小为(3.09±1.71)(P<0.01),电流密度增大到(610±320)pA/pF(P<0.01)。结论慢性缺氧抑制大鼠肺内动脉平滑肌细胞钾通道,灌服Iptakalim可拮抗慢性缺氧对KATP通道的抑制作用。     

坎地沙坦对家兔快速心房刺激所致缝隙连接蛋白40重构的影响

观察血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂坎地沙坦(Candesartan)对快速心房起搏刺激时家兔心房肌连接蛋白40(Cx40)重构和组织钙(Ca2+)含量的影响,探讨其防治心房颤动的可能机制。32只家兔随机分为3组:对照组(n=8)、快速刺激组(Ⅰ组,n=12)、Candesartan+快速刺激组(Ⅱ组,n=12)。经颈内静脉将电极置入右房,对照组不给予心房刺激,后两组以600次/分行快速心房刺激,并且Ⅱ组于快速刺激前30min开始按0.5mg·kg-1·min-1分持续静脉给予Candesartan8h,另外两组则给予等量的生理盐水。用免疫荧光标记激光共聚焦显微镜检测Cx40的含量和分布,用生化方法检测右心耳组织Ca2+含量。结果:与对照组相比,Ⅰ组和Ⅱ组心房组织Cx40含量降低(0.83±0.14μm2/μm3,2.05±0.36μm2/μm3vs2.35±0.26μm2/μm3,P<0.01或0.05)、分布不均一,Ⅰ组Ca2+含量升高(5.5±1.6μmol/gvs2.9±0.8μmol/g,P<0.01);与Ⅰ组相比,Ⅱ组心房Cx40含量增加(P<0.01)、分布不均一的程度减轻,Ca2+含量降低(3.2±1.1μmol/gvs5.5±1.6μmol/g,P<0.01)。结论:坎地沙坦能有效减轻心房快速刺激所致Cx40重构,其机制之一可能与降低心房Ca2+含量的异常升高有关。     

起搏通道HCN2基因稳定转染HEK293细胞的电生理特点

目的了解超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型HCN2(hHCN2)稳定转染人胚肾细胞(HEK293)的离子通道电生理特点。方法采用全细胞膜片钳技术测定hHCN2稳定转染HEK293细胞的通道电流(IhHCN2)电生理特点。结果人全长起搏通道HCN2(hHCN2)基因稳定转染HEK293,记录到一系列超极化内向离子流,该电流激活缓慢,呈电压、时间依赖性,没有明显失活过程,激活电位、半最大激活电位分别为-87±8mV(P>0.05)、-98±2mV(n=20),激活时间常数为196±36ms。起搏电流阻断剂ZD7288和Cs+灌流,IhHCN2峰值幅度均降低,半效抑制浓度分别为23.9±5.9μmol/L、126.8±27.1μmol/L,ZD7288的作用冲洗后抑制作用不能恢复,Cs+的作用在冲洗后基本恢复。结论稳定转染HEK293细胞的克隆起搏通道hHCN基因具有起搏电流的特点。     

肾上腺素诱导的血管平滑肌细胞C1~-电流及其与Ca2+运动的关系

为观察肾上腺素对主动脉平滑肌细胞C1-电流的影响及其与Ca2+内流的关系,采用膜片钳单离子通道(细胞贴附式)技术和Fura-2荧光法测定细胞内游离Ca2+浓度变化.结果发现,10 μmol/L肾上腺素可引起氯通道开放概率由对照组的0.061±0.0042增加到0.690±0.011;平均开放时间由1.08±0.23 ms延长到6.44±0.57 ms.此Cl-电流可被硝苯地平和EGTA抑制.肾上腺素可引起平滑肌细胞内游离Ca2+浓度由静息时77±13 nmol/L快速升高达峰值随后维持在高水平的内流平台相,达216±27 nmol/L.Cl-通道阻断剂尼氟灭酸在一定范围内呈浓度依赖性抑制肾上腺素诱发的Cl-电流及Ca2+内流,8 μmol/L 尼氟灭酸对细胞内游离Ca2+浓度的抑制率达27%±8%.结果表明,Cl-通道开放在调节平滑肌细胞Ca2+内流中起重要作用.     

乌头碱阻断表达在卵母细胞上的HERG通道的电药理特性

目的观察乌头碱对表达在卵母细胞上的HERG电流的影响。方法HERG通道表达在非洲爪蟾卵母细胞上,利用双电极电压钳技术测量其电流。结果①HERG通道可以稳定表达在卵母细胞上;②乌头碱以浓度和电压依赖性方式阻断表达在卵母细胞上的野生型HERG通道,阻断的半数抑制浓度值是1.801±0.332μmol/L;③乌头碱对HERG电流的阻断呈时间依赖性;④峰电流幅值被1μmol/L乌头碱显著降低,而稳态失活的半数失活电压(-39.10±1.04 mV vs-41.61±2.66 mV,P>0.05,n=6)没有被乌头碱的阻断显著改变,而斜率k(32.37±1.04 mV vs 41.05±4.19 mV,P<0.05,n=6)出现正向移动。结论乌头碱对HERG电流呈浓度、电压和时间依赖性阻断,而其对失活状态下的HERG通道无明显阻断作用,HERG通道可能是乌头碱致心律失常的关键离子靶点之一。     

胆石性胆道梗阻病程中一氧化氮、内皮素的变化及意义

目的了解NO,ET在胆石性胆道梗阻病程演进过程中的作用及其临床意义.方法对无急性胆管炎的150例胆石胆道梗阻患者,按梗阻性黄疸发生时间(Ⅰ组:67例,黄疸时间4.24 d±1.74 d.Ⅱ组:37例,黄疸时间10.41 d±1.82 d.Ⅲ组:46例,黄疸时间38.02 d±29.67 d)和血内毒素检测结果(内毒素阳性组112例,内毒素阴性组33例)分组比较NO,ET内毒素和肝功能变化关系,同时检测20例正常人做对照.结果在梗阻性黄疸Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组和正常对照组,各项检测值依序为:清蛋白(g/L):39.66±4.50,35.67±5.19,34.40±7.83,42.91±2.87(四组比较:F=15.4107,P<0.01);ALT(U/L):123.45±154.64,139.04±192.59,160.87±114.03,24.65±12.61(F=4.2348,P<0.01);总胆红素(μmol/L):97.39±116.61,108.67±113.84,105.88±102.51,12.99±4.29(F=4.3955,P<0.01);直接胆红素(μmol/L):25.06±20.38,30.18±21.71,8.12±33.38,2.85±1.31(F=10.5229,P<0.01);NO(μmol/L):70.00±48.97,82.52±41.24,73.63±48.15,25.06±7.22(F=7.9100,P<0.01);ET1(pg/mL):55.18±25.46,69.14±45.60,56.48±38.91,39.0±8.19(F=3.5837,P<0.05);内毒素(Eu/mL):0.0533±0.0937,0.0954±0.0970,0.1175±0.1237,……(F=5.2084,P<0.01).对各时间段梗阻性黄疸患者各指标行相关分析发现:Ⅰ组NO与ET1、清蛋白呈负相关(γET1＝-0.289,P<0.05;γA=-0.348,P<0.01),与内毒素、总胆红素呈正相关(γet=0.774,P<0.01;γtb=0.368,P<0.01).Ⅱ组NO与ET1、清蛋白呈负相关(γET1=-0.417,γA=-0.438,P均=0.01);内毒素与ET1、直接胆红素呈正相关(γET1=0.385,γdb=0.364,P均<0.05).Ⅲ组NO与内毒素呈正相关(γ=0.406,P<0.01);NO与ET1无统计学意义的相关关系按血内毒素检测结果比较见,内毒素阳性组和阴性组黄疸时间(18.95 d±24.49 d对8.33 d±8.84 d,t=3.8191,P<0.01)、清蛋白(g/L,36.17±6.68对39.87±4.21,t=3.8261,P<0.01)、直接胆红素(μmol/L,32.89±27.32对23.21±20.05,t=2.2309,P<0.05)、NO(μmol/L,83.62±47.95,44.03±28.19,t=5.9283,P<0.01)有统计学意义的差别;相关分析见:内毒素阴性组,NO与清蛋白、ET1呈负相关(γA=-0.421,P<0.05;γET1=-0.527,P<0.01).内毒素阳性组,NO与内毒素呈正相关(γ=0.437,P<0.01)与ET1无统计学意义的相关关系结论①胆石性胆道梗阻时内毒素等导致NO与ET1的协调关系发生紊乱、NO的正常保护机制受损,这在胆道梗阻所致肝功能衰竭、肝纤维化、肝肾综合征发病机制中可能起了重要作用.②NO与ET1原有的负相关关系,随着黄疸时间延长、肝功能损害程度加重、内毒素血症出现而消失,提示检测比较NO/ET1的变化关系,有可能作为了解肝细胞损害程度、肝储备功能的参考指标.