酒精性心肌病大鼠过氧化酶体增殖物激活受体α和类维甲酸受体α的表达以及肉毒碱干预

目的 探讨过氧化酶体增殖物激活受体(PPAR)α和类维甲酸受体(RXR)α在酒精性心肌病(ACM)中的表达以及肉毒碱干预疗效和可能机制.方法 雄性Wistar大鼠90只分为3组:酒精组、酒精+药物组和对照组.每组30只.6个月后使用免疫组化法检测心肌组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和信号转导蛋白-3(Smad-3)的蛋白表达,Western blot法测定心肌组织PPARα和RXRα蛋白表达.结果 酒精组和酒精+药物组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、MMP-9和Smad-3蛋白表达显著高于对照组(P<0.01和0.05).PPARα和RXRα蛋白表达(酒精组分别为0.156和0.192,酒精+药物组分别为0.248和0.385)显著少于对照组(P<0.01和0.05).酒精组与酒精+药物组比较,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、MMP-9、Smad-3、PPARα和RXRα蛋白表达具有显著差异(P<0.05).PPARα和RXRα与左心室射血分数和左心室短轴缩短率呈显著正相关(P<0.01),与左心室舒张末期内径、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、MMP-9和Smad-3呈显著负相关(P<0.01).结论 酒精性心肌病进展中PPARα和RXRα蛋白表达下调,心脏重构和心肌纤维化形成.肉毒碱可能通过PPARα和RXRα代谢途径改善心脏重构和心肌纤维化.     

瘦素对游离脂肪酸致大鼠胰岛β细胞脂毒性的保护作用

目的 探讨瘦素对于游离脂肪酸(FFA)导致的大鼠胰岛β细胞脂毒性的保护作用。方法体外分离Wistar大鼠胰岛进行培养,根据培养液中加入不同物质而分为4组:(1)对照组,(2)瘦素组,(3)FFA组,(4)FFA+瘦素组。培养72h后测定胰岛内甘油三酯(TG)含量,基础状态及葡萄糖刺激下胰岛素分泌情况,并用RT-PCR方法检测胰岛β细胞内脂肪酸氧化酶-肉毒碱软脂酰转移酶Ⅰ(CPT-Ⅰ)、脂肪酸合成酶-乙酰辅酶A羧化酶(ACC)以及过氧化质体增殖物激活受体α(PPARα)和PPARγ的mRNA表达情况 结果 (1)FFA使胰岛内TG含量增加(P<0.01),瘦素使胰岛内TG含量减少(P<0.01)。(2)瘦素抑制基础状态及高糖负荷后胰岛素分泌(均P<0.01);FFA使基础胰岛素分泌增加而高糖负荷后胰岛素分泌的增高幅度明显低于对照组(均P<0.01)。(3)瘦素使CPT-Ⅰ和PPARα表达增加(分别P<0.01和P<0.05),ACC和PPARγ表达减少(均P<0.01);FFA使CPT-Ⅰ和ACC表达增加,PPARα和PPARγ表达减少(均P<0.01)。结论 FFA使胰岛内TC聚集增加,基础状态胰岛素分泌增加而高糖负荷后胰岛素分泌减少,形成高胰岛素血症。而瘦素可以通过PPARα和PPARγ途径使胰岛内脂肪酸氧化酶表达增加,脂肪酸合成酶表达减少,胰岛内TG聚集减少,同时抑制胰岛素分泌,减轻高胰岛素血症,从而起到对于FFA导致的大鼠胰     

压力超负荷对大鼠心肌PPARα和MCAD mRNA表达的影响

目的 :了解压力负荷性肥厚心肌过氧化物酶体活化受体α(PPARα)和中链脂酰基辅酶A脱氢酶(MCAD)mRNA的表达变化 ,探讨PPARα对肥厚心肌脂肪酸 β氧化关键酶基因表达的调控作用及肥厚心肌能量底物的变化。方法 :观察大鼠腹主动脉缩窄术后 1、4、8、16周血流动力学参数、心室重塑指标、血清和心肌游离脂肪酸 (FFA)的含量及PPARα和MCADmRNA的表达变化。结果 :随着肥厚程度的增加 ,血清和心肌FFA蓄积增加 ,心肌PPARα和MCADmRNA的表达也逐渐下调 ,且与脂肪酸的利用下调相一致。结论 :肥厚心肌PPARα活性下调 ,与MCAD基因表达变化一致 ;PPARα在转录水平调控脂肪酸氧化酶基因的表达 ;PPARα与肥厚心肌能量底物转换密切相关     

肾素-血管紧张素系统和过氧化物酶体增殖物激活受体与酒精性心肌病关系的实验研究

目的 酒精性心肌病形成过程中发生肾素-血管紧张素系统(RAS)激活、能量代谢紊乱和心脏重构,本研究探讨RAS和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α和PPARγ在酒精性心肌病发病机制中的作用.方法 实验动物分为3组,即酒精组、酒精+厄贝沙坦组、对照组.采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹方法检测心肌RAS系统相关指标mRNA、PPARα和PPARγ蛋白表达,放射免疫法测定RAS系统活性,光镜、电镜和超声法检测心脏结构和功能.结果 (1)与对照组比较,酒精组心肌血管紧张素(Ang)Ⅰ、Ang Ⅱ和肾素浓度在酒精性心肌病形成过程中(0到6个月)渐次升高(P<0.05).(2)6个月时,酒精组心肌组织肾素、血管紧张素原、血管紧张素转化酶和血管紧张素Ⅱ1型受体表达高于对照组(P<0.05).(3)2、4和6个月时,酒精组和酒精+厄贝沙坦组心肌组织PPARα蛋白表达渐次减少(酒精组PPARα蛋白表达量分别为50.30%、34.3%和27.1%,酒精+厄贝沙坦组分别为86.4%、75.4%和59.4%),均少于对照组(P分别<0.01,0.05),且酒精组蛋白表达量低于酒精+厄贝沙坦组(P<0.05).(4)6个月时,酒精组、酒精+厄贝沙坦组PPARγ蛋白表达低于对照组(P分别<0.01,0.05),且酒精组表达量低于酒精+厄贝沙坦组(P<0.05).结论 RAS系统激活、PPARα和PPARγ蛋白表达异常与酒精性心肌病进展相关,RAS表达和PPARα及PPARγ蛋白改变可能存在紧密联系.     

积雪草酸通过SIRT3/β-catenin/PPARγ信号通路影响急性心肌梗死模型大鼠血管新生及心室重构

目的基于急性心肌梗死(AMI)发生发展过程中沉默信息调节因子3(SIRT3)/β-连环蛋白(β-catenin)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号通路的变化,探讨积雪草酸(AA)对AMI模型大鼠血管新生及心室重构的影响及作用机制。方法将72只SD大鼠按照体重均衡的原则随机分组,其中12只为空白对照组,剩余的大鼠制备AMI模型。造模成功后将大鼠采用随机数字表法分为5组:模型组、阳性对照组、AA高剂量组、AA中剂量组和AA低剂量组,每组12只。空白对照组和模型组给予生理盐水,阳性对照组给予阿司匹林肠溶片,药物干预组给予不同剂量的AA。28天后采用多普勒超声仪检测各组大鼠的血管新生和心室重构情况。采用逆转录-聚合酶链反应检测大鼠心肌SIRT3、β-catenin和PPARγmRNA表达。采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB(NF-κB)等炎症因子水平。结果与空白对照组相比,模型组大鼠的心脏功能变差,微血管密度(MVD)增加,心肌SIRT3、β-catenin、PPARγmRNA表达和血清IL-6、TNF-α、NF-κB水平均升高(P0.05);与模型组相比,各给药组大鼠的心脏功能明显改善,MVD增加,心肌SIRT3、β-catenin、PPARγmRNA表达均增加,血清IL-6、TNF-α、NF-κB水平降低(P0.05);与阳性对照组相比,AA高、中、低剂量组大鼠的心脏功能改善,MVD增加,心肌SIRT3、β-catenin、PPARγmRNA表达均升高,血清IL-6、TNF-α、NF-κB水平降低(P0.05)。结论积雪草酸抑制大鼠梗死心肌SIRT3/β-catenin/PPARγ信号通路,对AMI大鼠心肌组织具有一定的保护作用。     

非诺贝特对慢性心力衰竭大鼠心肌能量代谢和心室重构的影响

目的研究非诺贝特对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌能量代谢和心室重构的影响。方法健康雄性Wistar大鼠随机选为假手术组18只;采用腹主动脉缩窄术制备CHF、并成功存活的38只再随机分为对照组20只、非诺贝特组18只[非诺贝特150 mg/(kg·d)],干预10周。计算左心室心肌重构指数、胶原容积分数(CVF)、心肌线粒体损伤程度分级用Flameng评分,免疫印迹法测过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、中链酰基辅酶A脱氢酶(MCAD)、肌型肉碱棕榈酰转移酶1(MCPT 1)蛋白表达,RT-PCR测PPARα、MCAD和MCPT-1mRNA表达。结果与假手术组比较,对照组及非诺贝特组左心室心肌重构指数、CVF和Flameng评分均升高(P<0.05);非诺贝特组左心室心肌重构指数高于对照组、CVF和Flameng评分低于对照组(P<0.05);与假手术组比较,对照组、非诺贝特组心肌PPARα、MCPT-1、MCAD蛋白和基因表达均下调(P<0.05);非诺贝特组表达较对照组上调(P<0.05)。结论非诺贝特通过增强脂肪酸氧化,减轻线粒体损伤,改善心室重构,减轻心肌纤维化。     

PPARγ基因转染对兔骨髓间充质干细胞向脂肪细胞早期分化的调控作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因转染对骨髓间充质干细胞(MSC)向脂肪细胞早期分化的调控作用.方法 原代培养新西兰大白兔MSC,应用脂质体转染法将pEGFP-N1-PPARγ表达载体转入MSC中,G418筛选,成脂诱导剂诱导向脂肪细胞分化,分成不诱导组(A组)、空转染诱导组(B组)及转染诱导组(C组),采用RT-PCR方法检测PPARγ、脂蛋白脂酶(LPL)mRNA表达,免疫细胞化学染色检测PPARγ、LPL蛋白表达,油红O染色法行脂肪细胞计数和定量.结果 A组细胞内没有脂滴出现,C组成脂率和脂肪含量明显高于B组(P<0.05);A组PPARγ、LPL mRNA及蛋白均不表达,C组PPARγ、LPL mRNA及蛋白表达水平显著高于B组(P<0.01).结论 PPARγ基因转染可增强MSC向脂肪细胞早期分化的能力,缩短分化进程,提高分化效率.     

阿托伐他汀改善自发性高血压大鼠的心肌脂质代谢和抑制心肌肥厚

目的 通过研究阿托伐他汀对自发性高血压大鼠(SHR)心肌中PPARα、CPT-Ⅰ表达和心肌脂质代谢变化及心肌肥厚指标的影响,探讨阿托伐他汀对SHR心肌肥厚的改善作用及其机理.方法 观察阿托伐他汀灌胃10周的SHR心肌肥厚指标、血清和心肌游离脂肪酸含量及心肌PPARα、CPT-ⅠmRNA表达的改变.结果 与WKY(n=6)比较,SHR(n=6)心肌中PPARα mRNA(0.285±0.062比WKY:0.478±0.093,P＜0.01)与CPT-Ⅰ mRNA(0.795±0.139比WKY:1.115±0.109,P＜0.01)表达减少,血清及心肌中游离脂肪酸含量增加,分别为[(798.2±38.0比WKY:354.7±27.7)nmol/L,P＜0.01]和[(635.0±77.4比WKY:245.3±47.3)nmol/L,P＜0.01],心室质量指数增加(VWI)[(3.16±0.08比WKY:2.99±0.10)g/kg,P＜0.05],心肌细胞直径增加(TDM)[(21.3±1.3比WKY:18.18±0.75)μm,P＜0.01];阿托伐他汀50 mg/kg·d治疗10周后(n=6),心肌中PPARα、CPT-Ⅰ mRNA表达增加,心肌中游离脂肪酸含量明显降低、VWI降低,TDM降低.结论 阿托伐他汀能够增加心肌中PPARα、CPT-Ⅰ mRNA表达,降低心肌中游离脂肪酸含量,改善心肌脂质代谢障碍,可能是其抑制心肌肥厚发生与发展的机制之一.     

罗格列酮抑制肝星状细胞活化的作用机制研究

目的 探讨罗格列酮对大鼠肝星状细胞生物学特性的影响是否是通过PPARγ起作用.方法 设立10 μmol/L罗格列酮组、GW9662加10 μmol/L罗格列酮组、对照组、GW9662组.采用RT-PCR方法检测PPARγ及Ⅰ型前胶原mRNA表达;用Western blot法检测PPARγ及Ⅰ型胶原蛋白表达;电泳迁移分析法(EMSA)检测PPARγ蛋白的结合活性;用免疫细胞化学方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化.结果 10 μmol/L罗格列酮组PPARγ mRNA及蛋白表达显著高于其他各组(P<0.01),Ⅰ型前胶原mRNA及蛋白表达明显低于其他各组(P<0.01);10 μmol/L罗格列酮组PPARγ蛋白结合活性最强,α-SMA表达明显低于其他组(P<0.05).结论 罗格列酮对大鼠肝星状细胞的影响是通过PPARγ起作用的.     

代谢综合征大鼠心脏PPARs变化与心脏重构和功能改变的关系

目的研究心脏过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)变化与心脏重构和功能改变的关系.方法健康8周龄雄性Wistar大鼠,对照组(NC,n=10)和代谢综合征(MS)组(n=12),对照组予普食喂养,MS组予高脂(脂肪占总热能49%)高盐饮食,喂养24周.常规检测空腹血糖(FBG)、胰岛素(FINS)、血脂,葡萄糖耐量试验和高胰岛素正常血糖钳夹试验,并检测心肌组织的游离脂肪酸(FFA)水平.心脏重量和心脏组织形态学分析心脏结构改变,检测左室收缩末期压、左室舒张末期压(LVEDP)和左室压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)了解心脏功能变化.心脏PPARα、PPARδ和PPARγ蛋白表达检测采用Western blot方法.结果 1.MS组大鼠心脏重量明显增加[(1.81±0.15 vs 1.36±0.06)g,P<0.05],心脏/体重比明显增高[(3.6±0.2 vs 3.2±0.1)mg/g,P<0.05],组织形态学显示心脏重构明显;2.MS组大鼠心功能参数-dp/dtmax明显低于NC组(4860±716 vs 6321±449) mm Hg/s,而LVEDP明显增高[(3.5±0.7 vs 2.3±0.8)mm Hg,P<0.05];3.MS大鼠心肌组织FFA水平明显增高[(0.26±0.09 vs 0.15±0.03)mmol/L,P<0.05];4.MS大鼠心脏PPARα、δ和γ蛋白表达明显减低;5.葡萄糖输注率(GIR)与心脏/体重比呈显著负相关(r=-0.77,P<0.05),心肌组织内FFA的水平与心功能参数-dp/dtmax呈显著负相关(r=-0.74,P<0.05).结论 MS大鼠心脏重构和功能失调明显,而心脏PPARs (PPARα、PPARδ、PPARγ)蛋白表达减低,可能对心肌脂肪酸代谢和MS有一定的影响,这可能是心脏重构和功能失调的原因之一.     

Effect of ligand of peroxisome proliferator-activated receptor γ on the biological characters of hepatic stellate cells

AIM: To study the effect of rosiglitazone, which is a ligand of peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARγ), on the expression of PPARγ in hepatic stellate cells (HSCs) and on the biological characteristics of HSCs.METHODS: The activated HSCs were divided into three groups: control group, 3 μmol/L rosiglitazone group, and 10 μmol/L rosiglitazone group. The expression of PPARγ,α-smooth muscle actin (α-SMA), and type Ⅰ and Ⅲ collagen was detected by RT-PCR, Western blot and immunocytochemical staining, respectively. Cell proliferation was determined with methylthiazolyltetrazolium (MTT) colorimetric assay. Cell apoptosis was demonstrated with flow cytometry.RESULTS: The expression of PPARγ at mRNA and protein level markedly increased in HSCs of 10 μmol/L rosiglitazone group (tvalue was 10.870 and 4.627 respectively, P<0.01in both). The proliferation of HSCs in 10 μmol/L rosiglitazone group decreased significantly (t = 5.542, P<0.01), α-SMA expression level and type Ⅰ collagen synthesis ability were also reduced vs controls (tvalue= 10.256 and 14.627respectively, P<0.01 in both). The apoptotic rate of HSCs significantly increased in 10 μmol/L rosiglitazone group vs control (x2= 16.682, P<0.01).CONCLUSION: By increasing expression of PPARγ in activated HSCs, rosiglitazone, an agonist of PPARγ,decreases α-SMA expression and type Ⅰ collagen synthesis,inhibits cell proliferation, and induces cell apoptosis.     

Effect of ligand of peroxisome proliferator-activated receptor γ on the biological characters of hepatic stellate cells

AIM: To study the effect of rosiglitazone, which is a ligand of peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARγ), on the expression of PPARγ in hepatic stellate cells (HSCs) and on the biological characteristics of HSCs.METHODS: The activated HSCs were divided into three groups: control group, 3 μmol/L rosiglitazone group, and 10 μmol/L rosiglitazone group. The expression of PPARγ,α-smooth muscle actin (α-SMA), and type Ⅰ and Ⅲ collagen was detected by RT-PCR, Western blot and immunocytochemical staining, respectively. Cell proliferation was determined with methylthiazolyltetrazolium (MTT) colorimetric assay. Cell apoptosis was demonstrated with flow cytometry.RESULTS: The expression of PPARγ at mRNA and protein level markedly increased in HSCs of 10 μmol/L rosiglitazone group (tvalue was 10.870 and 4.627 respectively, P<0.01in both). The proliferation of HSCs in 10 μmol/L rosiglitazone group decreased significantly (t = 5.542, P<0.01), α-SMA expression level and type Ⅰ collagen synthesis ability were also reduced vs controls (tvalue= 10.256 and 14.627respectively, P<0.01 in both). The apoptotic rate of HSCs significantly increased in 10 μmol/L rosiglitazone group vs control (x2= 16.682, P<0.01).CONCLUSION: By increasing expression of PPARγ in activated HSCs, rosiglitazone, an agonist of PPARγ,decreases α-SMA expression and type Ⅰ collagen synthesis,inhibits cell proliferation, and induces cell apoptosis.     

PPARα、PPARy在左卡尼汀改善结肠癌小鼠恶病质中的作用

左卡尼汀（Lc）改善恶病质的作用已日渐受到关注。目的：探讨PPARα、PPARy在Lc改善结肠癌小鼠恶病质中的作用。方法：建立结肠癌小鼠恶病质模型，并分为Lc组、左卡尼汀棕榈酸酰基转移酶（CPT）抑制剂（ILC）组、阴性对照组（NST），另设立正常对照组（NTB）。实验第19d处死所有小鼠。测定小鼠体质量、去瘤体质量、摄食量，以全自动生化仪检测血清白蛋白、血糖、胆固醇含量，ELISA法检测血清TNF-α、IL-6含量，实时定量PCR和蛋白质印迹法分别检测肝组织PPARa、PPARy,／mRNA和蛋白表达。结果：与NST组、ILC组相比，LC组小鼠体质量、去瘤体质量、摄食量、血清白蛋白、血糖均显著升高（P〈0．05），血清胆固醇、TNF-α、IL-6含量均显著降低（P〈0．05），PPARα、PPAR7mRNA和蛋白表达均显著升高（P〈0．05）。结论：PPARα、PPARy可能参与结肠癌小鼠恶病质的发生；LC可能通过PPARα、PPARy相关肝脏脂质代谢信号通路来改善肿瘤恶病质。     

球形脂联素和葡萄糖对INS-1细胞内PPARα、CPT1与ACO基因表达的影响

以3、11、20 mmol/L葡萄糖或在5 mmol/L葡萄糖浓度时以2.5 mg/L球形脂联素孵育INS-1细胞24 h,RT-PCR检测PPARa、肉毒碱棕榈酸转移酶1(CPT1)和酰基辅酶A氧化酶(ACO)mRNA的表达.结果 显示,随着葡萄糖浓度的升高,INS-1细胞PPARa和CPT1、ACO mRNA的表达降低(均P＜0.05),球形脂联素增加PPARα(0.945±0.153 vs 0.749±0.069)、CPT1(0.590±0.029 vs 0.388±0.037)和ACO(1.553±0.131 vs 1.287±0.224)mRNA的表达(均P＜0.05),可被AMP活化的蛋白激酶(AMPK)抑制剂阿糖腺苷所抑制(分别为0.360±0.113、0.248±0.037和0.942±0.303,均P＜0.05).     

PPARγ受体在大鼠缺氧性肾小管上皮细胞损伤中的表达及意义

目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（ PPARγ）在大鼠缺氧性肾小管上皮细胞（ RTEC）损伤中的表达及意义。方法将体外传代培养的大鼠RTEC 随机分为正常对照组、缺氧模型组、罗格列酮（ RGZ ）组和GW9662组。 RGZ组加入15μmol／L RGZ,GW9662组加入25μmol／L GW9662,将缺氧模型组、RGZ组、GW9662组放入真空罐中制作RTEC缺氧模型。正常对照组细胞不做处理。造模36 h后,采RT-PCR法和Western blot法检测各组RTEC PPARγ、转化生长因子-β1（ TGF-β1）的mRNA及蛋白表达。结果与正常对照组比较,缺氧模型组、RGZ组、GW9662组RTEC PPARγmRNA表达显著升高、蛋白表达显著降低（P均＜0．05）;与缺氧模型组相比,RGZ组RTEC PPARγmRNA表达降低,GW9662组表达上升（ P均＜0．05）。与正常对照组比较,缺氧模型组、RGZ组、GW9662组RTEC TGF-β1 mRNA表达显著降低、蛋白表达显著升高（P均＜0．05）;与缺氧模型组比较,RGZ组RTEC TGF-β1 mRNA表达上升,GW9662组表达降低（P均＜0．05）。相关性分析显示,缺氧性RTEC损伤中PPARγ的蛋白表达与TGF-β1的蛋白表达呈显著负相关（r＝－0．91,P＜0．05）。结论 PPARγ蛋白的低表达可能参与了缺氧性RTEC损伤的发生;RGZ可能通过上调PPARγ蛋白的表达而减轻缺氧性RTEC损伤。