2005年厦门市三起雪卡毒素中毒情况分析

目的 分析引发2005年厦门3起雪卡毒素中毒的原因及引发中毒的鱼种.方法 采集3起中毒案例中剩余的棕点石斑鱼及市场上其他深海鱼共7份,采用小鼠生物法、雪卡毒素免疫膜试剂盒测定雪卡毒素,同时提取中毒鱼肉组织中的mtDNA,采用PCR技术扩增细胞色素6(Cry b)部分序列片段并直接测序,将结果与CenBank数据库比对.结果 引发中毒的鱼肉中雪卡毒素检测呈阳性,小鼠生物实验毒性为0.11小鼠单位(MU)/g,提取的mtDNA扩增出475 bp大小的Cty b基因片段,与棕点石斑鱼(登录号 AY950695)的Cry b基因相似性达99%.其余6份样品均未检出雪卡毒素.结论 这3起中毒事件均是由于食用了含有雪卡毒素的棕点石斑鱼而引发的食物中毒.     

2005年厦门市三起雪卡毒素中毒情况分析

目的 分析引发2005年厦门3起雪卡毒素中毒的原因及引发中毒的鱼种.方法 采集3起中毒案例中剩余的棕点石斑鱼及市场上其他深海鱼共7份,采用小鼠生物法、雪卡毒素免疫膜试剂盒测定雪卡毒素,同时提取中毒鱼肉组织中的mtDNA,采用PCR技术扩增细胞色素6(Cry b)部分序列片段并直接测序,将结果与CenBank数据库比对.结果 引发中毒的鱼肉中雪卡毒素检测呈阳性,小鼠生物实验毒性为0.11小鼠单位(MU)/g,提取的mtDNA扩增出475 bp大小的Cty b基因片段,与棕点石斑鱼(登录号 AY950695)的Cry b基因相似性达99%.其余6份样品均未检出雪卡毒素.结论 这3起中毒事件均是由于食用了含有雪卡毒素的棕点石斑鱼而引发的食物中毒.

Abstract：

Objective To find out the reason of three eiguatem fish poisoning cases in Xiaman in 2005 and identify the fish species.Methods The grouper implicated in food poisoning and seven other coral reef fishes collected from market were tested by mice bioassay and ciguatoxin-test kit.The mtDNA was extracted from toxic grouper meat,and Cty b gene segment was amplified and the PCR products were sequenced.The sequences were compared with those in the GenBank.Results The result turned out to be positive by the ciguatoxin-test kit,while the toxicity of the toxic grouper implicated in food poisoning was 0.11 mouse unit(MU)/g by mice bioassay.A 475 bp segments of Cty b gene was amplified by PCR and the sequence was 99% homologous with Epinephelus fuscoguttatus(GenBank:AY950695).No ciguatoxin in six grouper species collected from market was detected.Conclusion All three food poisoning cases were caused by consumption of ciguatoxin-carrying groupers.     

小鼠生物检测法测定热带性珊瑚礁鱼毒性的研究

目的:研究小鼠生物检测法测定热带性珊瑚礁鱼毒性的检测方法,以预防雪卡毒素引起的食物中毒。方法:鱼肉组织在70℃蒸煮后经丙酮、乙醚、甲醇、正已烷等有机溶剂提取净化得到脂溶性毒素粗提液,对18~22 g雄性小白鼠进行腹腔注射,观察24 h,采用公式log(MU)=2.3 log(1 1/T)计算毒性大小。结果:有毒检体使小鼠产生行动迟缓、腹泻、呼吸困难、甚至死亡等症状。在采集的7份样品中,检出1份中毒样品毒性为0.11 MU/g。其余均未检出毒性。结论:小鼠生物检测法是目前检测珊瑚礁鱼中雪卡毒素的一种有效、简便、经济、实用的方法,适用于珊瑚礁鱼毒性大小的研究和可疑样品的快速初筛。     

海南省恶性疟原虫MSP1和MSP2等位基因分型研究

目的 对海南省恶性疟原虫分离株的裂殖子表面蛋白质1(MSPl)和裂殖子表面蛋白质2(NSP2)基因进行分型研究。方法 从海南省恶性疟流行区采集的恶性疟患者血样，用套式PCR方法分别扩增PfMSP1和PfMSP2基因中具有型特异性的片段，进行等位基因分型。结果(1)MSPl基因分型：94份恶性疟患者血样中有82份扩增出MAD20型基因片段(占87．2％)，27份扩增出K1型基因片段(占28.7％)，15份同时扩增出MAD20型和K1型基因片段(占16．0％)，未扩增出RO33型基因片段。(2)NSP2基因分型：94份血样中有75份扩增得到3D7型基因片段(79．8％)，28份扩增得到FC27型基因片段(29．8％)，10份同时扩增得到3D7型和FC27型基因片段(占10．6％)。结论 海南省恶性疟原虫的MSPl等位基因和MSP2等位基因分别以MAD20型和3D7型为优势基因型；不同等位基因型的混合感染率很低。     

昆明市静脉注射吸毒人群丙型肝炎病毒基因型分析

目的 研究云南省昆明市静脉注射吸毒人群(IDUs)中丙型肝炎病毒(HCV)基因型的流行特点。方法 2014年4－7月在昆明市连续收集276份IDUs的血浆,其中199份样品为HCV抗体阳性,提取RNA后用巢式PCR对E1E2基因和NS5B基因的部分片段进行扩增。扩增产物经基因序列测定,所得序列通过构建系统进化树确定HCV的分子亚型。结果 结合2 个基因片段,共有125份样品获得了分型结果,3b为主要的亚型,占48.8%(61/125);其他亚型按照比例依次为3a(30.4%,38/125)、6n(14.4%,18/125)、6a(3.2%,4/125)和1b(3.2%,4/125)。各HCV亚型按性别、婚姻、民族和HIV-1抗体是否阳性差异无统计学意义,按年龄分布差异有统计学意义,45岁以下组亚型多样化。分别计算不同亚型在E1E2和NS5B基因区的基因距离,结果显示3a、3b和6a亚型的基因距离大于1b和6n亚型的基因距离。3a、3b、6a 3种亚型中3b亚型毒株的基因距离大于3a亚型毒株。结论 昆明市IDUs人群中HCV存在5种亚型,3b和3a是主要毒株且在该人群中具有较长的流行时间。     

武汉市美沙酮门诊治疗者丙型肝炎病毒基因分型

目的 探讨武汉市美沙酮门诊治疗者丙型肝炎病毒(HCV)及不同基因型感染状况.方法 用酶标记免疫(ELISA)法检测抗-HCV抗体,在86份抗-HCV抗体阳性的血清标本中,分别提取HCV RNA,通过逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)扩增C基因的羧基至E1基因的氨基端长度为474 bp的片段,测定其核苷酸序列,与GenBank中已知的HCV序列进行系谱分析,确定HCV基因型.结果 武汉市美沙酮门诊332名治疗者中抗-HCV IgG阳性率为94.3%;其中86份血清的HCV序列通过系谱显示6a型71例,占82.5%;3b 7例,占8.2%;1a 5例,占5.8%;1b 3例,占3.5%.结论 武汉市美沙酮门诊入组的吸毒者HCV感染以6a型为优势株,其次为3b,吸毒者中HCV感染率较高,且基因亚型呈现多样性.     

锰中毒性帕金森综合征与线粒体基因突变的关系

目的探讨线粒体DNA(mtDNA)基因突变与锰中毒性帕金森综合征之间的关系,以了解其是否为锰中毒性帕金森综合征发病中的一环。方法采用聚合酶链反应(PCR)、单链构象多态性分析(SSCP)、测序方法对临床诊断为锰中毒性帕金森综合征的18例患者和40名健康对照组的mtDNA点8344、11778及12SrRNA区域所在片段进行分析。结果有15例存在mtDNA 9bp片段缺失;在锰中毒性帕金森综合征患者中发现有4例存在mtDNA8175G>A点突变、3例存在mtDNA11914G>A点突变;所有研究对象均未检测到mtDNA点8344、11778及12SrRNA区域突变。结论广西人群mtDNA 9bp缺失率较高(25.9%);mtDNA 8175G>A和mtDNA 11914G>A点突变可能为锰中毒性帕金森综合征的1个致病突变;mtDNA点8344、11778及12SrRNA区域突变可能不是锰中毒性帕金森综合征的突变热点。     

线粒体DNA点突变与锰中毒性帕金森综合征的关系

目的 探索线粒体DNA (mtDNA)点突变与锰中毒性帕金森综合征之间的关系,为揭示锰中毒性帕金森综合征的发病机制提供依据.方法 试验分锰中毒组、锰接触组和正常组,分别提取各组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)、单链构象多态性分析(SSCP),测序方法对临床诊断为锰中毒性帕金森综合征的28例患者及30例锰接触未发病患者和30名健康对照组的mtDNA的细胞色素C氧化酶所在片段进行分析.结果 在3组88例研究对象中发现有19例存在mtDNA8281～8289 (ccccctcta)9 bp片段缺失,组间差异无统计学意义(P＞0.05);在锰中毒组中发现有8例存在7028C＞T,1例存在8119T＞C,6例存在8344A＞C,2例存在9540T＞C点突变;与锰接触组、正常组7028C＞T、8344A＞C点突变率差异具有统计学意义(P＜0.05),8119T＞C、9540T＞C点突变率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 线粒体DNA点突变与锰中毒性帕金森综合征有关.     

209例HIV-1阳性静脉吸毒者中HCV基因型研究

目的了解2007—2012年广东省内HIV-1感染的静脉吸毒者(IDUs)中HCV基因型的种类和亚型分布情况。方法对2007—2012年HIV-1抗体阳性IDUs样本进行HCV抗体检测,对HCV抗体阳性样本提取RNA,用反转录巢式聚合酶链反应方法扩增HCV核心基因Core片段和非结构基因NS5B片段,目的片段测序后通过分子系统发育树进行基因型分析。结果 209份样本分别来自惠州、东莞、阳江、云浮、清远、佛山、中山和江门,以阳江和东莞为主,占36.84%(77/209),以男性为主,占93.78%(196/209),年龄在18~49岁之间。HCV抗体阳性166份,阳性率为79.4%。进化树显示样本序列分别与标准株1a、1b、2a、3a、3b和6a等6种亚型聚集在一起,la、lb、2a、3a、3b、6a基因亚型构成比分别为10.6%、9.9%、1.4%、22.7%、11.3%、44.0%。结论 6a是广东省内被检测HIV-1感染IDUs中HCV主要流行亚型,其次为3a亚型。     

新疆地区鼠类汉坦病毒核酸检测和基因分型

目的 了解新疆地区鼠类中汉坦病毒感染状况及其基因分型.方法 于2010年对新疆3个区域(阿拉山口、石河子、乌鲁木齐)捕获鼠类(沙鼠、田鼠、褐家鼠)采集肺脏提取总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增汉坦病毒M基因片段;将扩增片段克隆和测序分析,确定病毒基因型.结果 在312份沙鼠和31份田鼠样本中均未检测到目标基因,在72份褐家鼠样本中,检出阳性样本11份,占15.28％,其基因型均为汉城型.结论 首次发现新疆乌鲁木齐市褐家鼠携带汉城型汉坦病毒,应加强该地区肾综合征出血热病例监测和防治工作.     

食品中产气荚膜梭菌α毒素基因快速检测方法的研究

目的建立分子信标荧光PCR体系检测产气荚膜梭菌的快速检测方法,应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检验。方法根据GenBank公布的保守序列,针对α毒素基因设计一对引物和分子信标探针,用FAM荧光剂标记探针的5’端,并进行特异性和灵敏度分析,同时以10种细菌作对照。结果分子信标荧光PCR反应体系检测10种细菌,只有产气荚膜梭菌出现特异荧光信号,其他均无荧光信号,而且与其他细菌无交叉反应。对40份食品样品进行检测,3份产气荚膜梭菌PCR阳性,其余样品为阴性,检测仅需2 h。3份阳性样本经传统方法培养,2份有检出产气荚膜梭菌。结论分子信标荧光PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于产气荚膜梭菌食物中毒的快速诊断和食品污染物及感染性腹泻等监测工作中,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

多重实时PCR快速同时检测沙门菌和志贺菌

目的 建立改良分子信标，多重实时PCR同时检测沙门菌和志贺菌的快速方法，应用于食源性致病菌的快速诊断。方法 根据GenBank公布的沙门菌侵袭性基因invA和ssaR基因，分别设计一对引物和改良分子信标探针，用同色荧光标记，用于同体系检测沙门菌。志贺菌根据ipaH基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，加入沙门菌检测体系中，建立三重实时PCR一改良分子信标检测体系，应用于同时对沙门菌、志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果 改良分子信标一多重实时PCR反应体系DNA灵敏度为69～93fg/μl。菌液灵敏度为32～64CFU／ml或1～2CFu／PCR反应体系，无交叉反应。该反应体系同时检测134株沙门菌和67株志贺菌，均出现特异的荧光信号，两种细菌检测互不干扰。对细菌性食物中毒样本等共1100份同时进行沙门菌和志贺菌检测，569份沙门菌实时PCR阳性，其中551份沙门菌培养阳性；42份志贺菌实时PCR阳性，其中41份志贺菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需时间2h至1d。结论 改良分子信标-多重实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于沙门菌和志贺菌食物中毒的快速诊断，伤寒、痢疾等肠道传染病的初筛及预防医学门诊的健康人群体检，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

广州市售贝类麻痹性贝毒和腹泻性贝毒污染状况分析

目的对广州市售双壳经济贝类麻痹性贝毒(PSP)和腹泻性贝毒(DSP)污染状况进行为期一年的抽样调查,了解其食用安全性。方法采用AOAC推荐的小鼠生物检测法进行PSP和DSP的毒力测定,采用HPLC进行PSP成分分析,根据FAO、日本和欧盟水产食品卫生要求及我国渔政渔港监督管理局制订的贝类安全食用标准对贝类水产品的食用安全性进行评价。结果在所调查的7种贝类中,有2种染有PSP,毒素含量在安全食用范围内,毒力大小随季节而变化,春冬两季含量相对较高;7种贝类中有6种共计36个样品染有DSP,有10个样品毒素含量超出安全食用标准,春冬两季染毒率较高。结论广州市售贝类PSP含量和检出率整体水平较低;DSP检出率稍高,毒素含量也较高,应引起有关部门的关注,加强DSP监测工作。     

改良分子信标-实时PCR快速检测产单核李斯特菌

目的：建立改良分子信标-实时PCR检测产单核李斯特菌（LMO）的快速方法，应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断。方法：根据GenBank公布的LMO hlyA基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，建立改良分子信标-实时PCR检测体系，应用于食品中LMO检测。结果：改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110fg，菌液灵敏度为99cfu／ml或4cfu／PCR反应体系，无交叉反应。以此反应体系检测28株LMO，均出现特异的荧光信号。上述方法可将检测时问由原来的至少4d缩短至1d。对228份食品进行LMO检测，8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性，其中6份1310细菌培养阳性。结论：改良分子信标-实时PCR反应体系快速、灵敏度高，特异性强．能提高LMO的检出率和准确性，可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断。     

22起食用织纹螺中毒事件的分析

目的了解宁德市织纹螺中毒发生规律与特点,为防控织纹螺中毒提供科学决策。方法对22起织纹螺中毒事故报告的资料进行综合分析。结果织纹螺中毒发生在笫二、三季度共占中毒起数、人数的95.5%和93.6%;发生在渔村和渔排占86.4%;均为家庭误食中毒;临床症状轻重不一;采取去除毒素、支持疗法和对症处理,轻者预后良好;重症病死率为12.7%。结论应建立健全沿海地区织纹螺的食用安全监测网、市场准入制度、食用安全预警机制和食用安全知织宣传长效制度。     

蜡样芽胞杆菌食物中毒分离株分子分型分析

目的建立蜡样芽胞杆菌的分子分型方法,应用于蜡样芽胞杆菌食物中毒的溯源研究。方法从2000-2009年广东省深圳市食物中毒暴发和散发病例的临床分离株中挑选47株蜡样芽孢杆菌进行鉴定及生化分型,同时进行vrrA基因PCR扩增并对产物进行测序,用Bio-edit和MEGA软件对DNA序列进行同源性比较。结果传统生化分型:47株蜡样芽胞杆菌中有5株菌不能分型,其余42株菌可分为2型、10型和4型,其中2型16株,占34.04%,10型16株,占34.04%,4型10株,占21.28%;分子分型:47株菌可分为13个基因型MT1-MT13,其中MT13型19株,占40.43%,MT1型8株,占17.02%,MT10型4株,占8.51%。结论 vrrA基因作为蜡样芽胞杆菌分子分型的一个多态性遗传标记,可用于蜡样芽胞杆菌DNA分子分型研究,对食物中毒溯源有重要意义。     

湖南省1例猪链球菌2型菌株的PCR检测

目的从分子水平鉴定湖南省一例疑似猪链球菌病病原菌的种、型及毒力基因,为流行病学和临床提供诊断分析依据。方法采用猪链球菌2型多重PCR快速诊断试剂盒以及另外合成的四对引物进行聚合酶链反应。结果用三重PCR试剂盒检出该菌携带cps2以及mrp基因,用合成的16srRNA、cps2j、mrp以及sly引物进行PCR扩增电泳后均显示阳性条带。结论2006年8月湖南省一例疑似猪链球菌病例确为猪链球菌2型感染,并且该菌携带多种毒力基因。     

1986-2010年宁德市有毒动植物食物中毒分析

目的掌握宁德市有毒动植物食物中毒发生规律与特点,为防控其中毒提供科学决策。方法对1986-2010年宁德市有毒动植物食物中毒事故报告资料进行综合分析。结果 25年间共发生有毒动植物食物中毒101起,中毒人数591人,死亡36例。第二、三季度为全年中毒高发季节,中毒地点和场所均以农村和家庭居首,致病因素以毒蘑菇和河豚鱼为主,病死率以断肠草、河豚鱼和有毒贝类为高。结论应针对有毒动植物食物中毒发生的重点季节、重点地区、重点人群、重点场所和重点食物,有的放矢和适时采取科学有效的防控对策。