核酸荧光染料在琼脂糖凝胶电泳中的染色特性

目的建立比溴化乙锭(EB)更为安全的核酸染色方法。方法对SYBR Gold,SYBR GreenⅠ,Gold-View和EB等4种核酸荧光染料在琼脂糖凝胶中的染色特性进行比较分析。结果SYBR Gold和SYBR GreenⅠ可改变核酸的电泳迁移率及相应的DNA大小判断,但二者是比EB更为完全和经济的核酸荧光染料;对于小片段DNA,SYBR Gold的灵敏度高于SYBR GreenⅠ。结论SYBR Gold和SYBR GreenⅠ是比EB更为完全和经济的核酸荧光染料,适合于分子生物学实验室的常规应用。     

两种核酸染料的应用比较研究

目的 研究GoldView核酸染料对于凝胶中DNA/RNA的染色效果及其取代EtBr用于常规电泳后凝胶中核酸染色的可能性。方法 将电泳后的SSCP凝胶和琼脂糖凝胶放入两种核酸染液中轻摇浸染30～45min，并注意避光，300nm紫外灯下观察并照相记录。结果 GoldView染色后，dsDNA呈绿色荧光，ssDNA呈红色荧光，可检测到少至5ng的dsDNA，灵敏度与EtBr大致相当。结论 GoldView是一种安全、灵敏的EtBr替代品，可用于常规核酸染色。     

聚合酶链反应银染色检测病原体DNA

聚合酶链反应(PCR)技术自问世以来,以惊人的速度应用于生物学和医学研究的各个领域,以其灵敏度高、特异性强、简便、快速广泛用于临床检验。PCR扩增后,通常进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)或琼脂糖凝胶电泳分离DNA,溴化乙锭(EB)染色,或用同位素标记显示DNA。同位素标记费用高,操作繁杂,受同位素半衰期限制,临床实验室不易开展,而EB染色,需立     

彗星试验非荧光染色研究

目的 为了建立一种非荧光染色的彗星试验。方法 将Feulgen法，甲基绿染色法，全染料（stains-all)法和银染法等几种非荧光DNA特异染色方法试用于慧量试验，并与溴化乙锭（EB）染色进行了比较。结果 在所试验的染色法中，侵银染法有满意的效果，染色清晰，“彗星”头和尾的边界易于判断，染色持久，敏感性高，可染出EB不能染出的DNA小片段，得到“慧星”头长和尾长均为EB染色的2倍以上，安全，价廉。结论 银染法摒弃了EB染色的不足，在彗星试验中可以替代EB染色，为彗星试验的进一步推广提供了可能。     

彗星试验银染法的优化及验证

在彗星试验中寻找一种最佳染色效果的银染法 ,拟取代溴化乙啶 (EB)染色。对选出的银染法从固定、染色、显色、脱色、染色温度等各个方面进行多次试验 ,达到最佳染色效果后 ,将优化的银染法用于检测两类化合物 -重铬酸钾 (K2 Cr2 O7)和 1,2—二氯乙烷 (1,2—dichloroethane,DCE)对两种类型细胞—小鼠脾细胞、人外周血淋巴细胞的DNA损伤作用 ,并与EB染色比较灵敏度。结果显示优化后的银染法是在彗星试验中成功建立的非荧光染色法 ,该法染色清晰、持久、背景颜色浅、染色对比度好、染色效果满意 ,方法操作简便、价廉 ;该法可检测出化合物对细胞的DNA损伤作用 ,与EB染色有相同阳性检出阈 ,可染出EB染色无法染上的DNA小片段。所以在彗星试验中该银染法可以取代EB染色     

羟基喜树碱对肺癌细胞A549抑制作用的研究

目的:研究羟基喜树碱对人肺癌A549细胞的抑制效果,探讨抗癌药物对细胞凋亡与周期的调控作用.方法:CCK-8法测定不同浓度的HCPT对A549细胞的生长抑制作用,AO/EB染色观察细胞生长情况;琼脂糖凝腔电泳验证细胞调亡的特征性DNA条带;用流式细胞仪测定抗癌药物羟基喜树碱对细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:CCK-8结果表明不同浓度的HCPT对A549细胞的生长抑制作用不同;琼脂糖凝胶电泳可见调亡细胞DNA的梯状条带;荧光显微镜下观察到经AO/EB染色的典型凋亡细胞;在相同浓度下,随时间的延长细胞的凋亡率也逐渐增加,1μmol/l的HCFT作用于A549细胞对其抑制效果最为明显,细胞凋亡率为32.03%.结论:抗癌药物羟基喜树碱对A549有抑制效果,促进其细胞凋亡,参与细胞周期调控.     

逆转录聚合酶链反应在轮状病毒肠炎诊断中的应用研究

1 .材料与方法 :15 0份粪便标本于 1999年 11月至 2 0 0 0年 2月取自本院住院的急性腹泻患儿。 15 0例患儿年龄为4 0天龄～ 2岁 ;病程 1～ 14天。收集每例腹泻患儿的新鲜粪便标本 2份 ,1份立即进行乳胶凝集试验 ,1份置于 - 2 0℃冰箱待行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测。RT PCR参照Taniguchi等[1] 的方法抽提RNA并做HRVRT PCR反应 ,引物由上海生工合成。DNA聚合酶由美国Promega公司生产。扩增产物以 1%琼脂糖凝胶电泳 ,溴化乙锭染色 ,紫外灯下观察结果并照相。乳胶凝集试验以英国MicrogenBioproductLtd公司的Rotascreen试剂测…     

用高分辨率熔解曲线做PCR条件优化

目的:确定高分辨率熔解曲线分析方法可用于PCR条件优化。方法:对家蝇抗性基因cyp6d1和kdr进行温度梯度PCR,其产物分别使用高分辨率熔解曲线分析和溴化乙锭琼脂糖凝胶电泳方法判定最佳退火温度,并将结果进行比较分析。结果:根据高分辨率熔解曲线判定cyp6d1和kdr基因的最佳退火温度分别为65℃和63.8℃,与根据溴化乙锭琼脂糖凝胶电泳判定的退火温度相同。结论:可用高分辨率熔解曲线判断PCR最佳退火温度。     

尿沉渣微卫星DNA分析在膀胱癌早期复发监测中的应用价值

[目的]研究尿沉渣微卫星DNA分析在膀胱癌早期复发监测中的应用价值. [方法]对51份膀胱癌术后随访尿液标本进行微卫星DNA序列分析,包括选择适合中国人种的13对微卫星位点的诊断组合,对尿沉渣和白细胞的DNA行PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳及溴化乙锭(EB)染色,分析餐带图像结果.随访同时进行膀胱镜复查(术后每3个月1次). [结果]随访过程中复发17例,复发率为30%(17/51),膀胱癌复发患者中16例患者尿沉渣中有一个或多个微卫星位点有异常改变(包括LON和MSI),未复发患者中3例患者微卫星异常,两者差异有统计学意义.复发监测中尿沉渣微卫星异常改变早于膀胱镜下检查阳性表现(16.42±4.237)周. [结论]①尿沉渣微卫星DNA序列分析是监测膀胱癌术后早期复发的一个较好的无创性检查方法,有一定的临床应用价值.②在复发监测中微卫星序列改变早于膀胱镜下阳性表现.     

利用爬片支架来制备细胞爬片的一种新方法

[目的]利用自制爬片支架来改进细胞爬片的制备.[方法]以塑料胶片为原料制作爬片支架,然后利用爬片支架(实验组)和常规方法(对照组)来制备乳腺癌细胞MCF-7的细胞爬片,HE染色观察细胞生长状态,比较两种制备方法的差异.[结果]利用爬片支架制备细胞爬片操作简便,细胞单面生长,细胞生长状态良好.[结论]利用爬片支架能更简便地制备出满足实验需求的细胞爬片,是一种更好的制备细胞爬片的方法.