砷和氟对大鼠睾丸组织caspase-3和caspase-9表达的影响

目的研究慢性砷染毒、氟染毒及联合染毒大鼠睾丸组织中caspase-3、caspase-9表达的变化。方法将40只健康清洁级雄性SD大鼠随机分为4组,分别为对照(普通饲料)组、砷染毒(高砷饲料,含砷量为10.000 mg/kg)组、氟染毒(高氟饲料,含氟量为16.844 mg/kg)组和砷氟联合染毒(高砷高氟饲料,含砷量为10.000 mg/kg,含氟量为16.844 mg/kg)组,每组10只。采用自由进食饲料方式连续染毒12周。采用TUNEL染色法测定生精小管细胞的凋亡率;采用免疫组化法测定睾丸间质细胞caspase-3、caspase-9的阳性表达水平。结果与对照组比较,各染毒组大鼠生精小管生精细胞的凋亡率均较高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各染毒组大鼠间质细胞caspase-3、caspase-9的阳性表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05)。且砷氟联合染毒组大鼠间质细胞caspase-3、caspase-9的阳性表达水平高于氟染毒组高砷染毒组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论砷及氟联合染毒所致大鼠睾丸组织的损伤及凋亡可能通过激活caspase-3或caspase-9等途径实现。     

丙烯酰胺急性染毒对小鼠睾丸组织caspase-3与CK8表达的影响

目的研究丙烯酰胺染毒对小鼠睾丸组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)与角蛋白8(cytokeratin 8,CK8)表达的影响。方法将40只健康5～6周龄清洁级雄性昆明小鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量丙烯酰胺染毒组,每组10只。采用腹腔注射方法进行染毒,染毒容量为0.01 ml/g,连续染毒7 d。采用免疫组织化学方法测定caspase-3和CK8在小鼠睾丸组织中的表达,并进行病理学观察。结果各丙烯酰胺染毒组出现不同程度的生精小管管腔变形,生精细胞排列紊乱等。与对照组比较,高剂量丙烯酰胺染毒组小鼠睾丸组织CK8表达水平明显下降,而caspase-3表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。随着丙烯酰胺染毒浓度的升高,小鼠睾丸组织CK8表达水平呈下降趋势,caspase-3表达水平呈上升趋势。结论丙烯酰胺导致的小鼠睾丸组织细胞凋亡与caspase-3高表达,CK8低表达有关。     

硒对氟诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡及caspase-3和caspase-8 mRNA表达的影响

目的探讨硒对氟诱导大鼠肾小管上皮(NRK-52E)细胞凋亡及caspase-3和caspase-8 mRNA表达的影响。方法取处于对数生长期的肾小管上皮细胞,分别加入0(对照)、5、20 mg/L Na F溶液和(或)17.1、34.2μg/L亚硒酸钠溶液继续培养0、24、48、72、96 h,采用MTT法检测细胞存活率,采用流式细胞仪和Real-time PCR法分别检测染毒48 h时的细胞凋亡率和凋亡相关因子caspase-3和caspase-8 mRNA的表达水平。结果与对照组相比,20 mg/L Na F染毒肾小管上皮细胞存活率均较低,凋亡率较高;与相同剂量Na F染毒组比较,硒干预组细胞存活率均较高,各浓度Na F+17.1μg/L亚硒酸钠染毒组的细胞凋亡率较低。与对照组相比,Na F染毒组肾小管上皮细胞中caspase-3和caspase-8 mRNA的表达水平均较高;与相同剂量Na F染毒组比较,20 mg/L Na F+各浓度亚硒酸钠组细胞中caspase-3和caspase-8 mRNA的表达水平较低。结论一定浓度的硒可能通过下调凋亡相关因子caspase-3和caspase-8的表达来拮抗细胞凋亡。     

p,p'-DDE对青春前期大鼠睾丸组织半胱氨酰天冬氨酸酶mRNA表达及活力的影响

目的研究p,p’-DDE在诱导青春前期SD大鼠睾丸细胞凋亡中半胱氨酰天冬氨酸酶(caspase)的作用。方法将22日龄清洁级雄性SD大鼠20只随机分为低(20mg/kg)、中(60mg/kg)、高(100mg/kg)剂量p,p’-DDE染毒组和对照组(玉米油),每组5只。采用腹腔注射染毒,注射容积为10ml/kg,隔天染毒1次,共进行10天。染毒结束后,处死大鼠,分离睾丸、肝、肾、脾、肺器官,称重后计算脏器系数。取睾丸制备组织匀浆,实时荧光定量PCR测定睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9mRNA的表达;比色法检测睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9的活力。结果各组大鼠体重和睾丸、肾、脾、肺的脏器系数间比较,差异均无统计学意义(P0.05)。与对照组比较,高剂量p,p’-DDE染毒组大鼠肝脏系数较高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,高剂量p,p’-DDE染毒组大鼠睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9和中剂量p,p’-DDE染毒组大鼠睾丸组织caspase-9表达均升高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,高剂量p,p’-DDE染毒组大鼠睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9活力均较高,差异有统计学意义(P0.05)。结论p,p’-DDE可能通过启动caspase-8和caspase-9,进而激活下游效应caspase-3的级联反应而诱导睾丸组织细胞凋亡。     

壬基酚对大鼠前列腺细胞凋亡影响及机制

目的 探讨壬基酚对大鼠前列腺组织细胞凋亡及caspase-3、caspase-8和caspase-9 mRNA表达影响.方法 健康清洁级Wistar雄性大鼠50只,按体重随机分为5组,分别为12.5、25、50、100 mg/kg壬基酚染毒组和对照组(橄榄油),每组10只;皮下注射染毒(1 mL/kg),每天1次,连续染毒30 d;Tunel法观察前列腺前叶组织细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察组织中caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA表达.结果 12.5、25、50、100 mg/kg壬基酚染毒组大鼠前列腺细胞凋亡率分别为(3.07±1.31)％、(5.21±1.47)％、(6.31±1.29)％、(8.90±0.18)％,均低于对照组的(12.73±2.19)％(P＜0.05);与对照组比较,12.5、25、50、100 mg/kg壬基酚染毒组大鼠前列腺组织细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA表达均降低(P＜0.05).结论 壬基酚可致雄性大鼠前列腺细胞凋亡率下降,其机制可能与前列腺细胞caspase-3、caspase-8和caspase-9 mRNA表达降低有关.     

硒对氟致大鼠肝脏损伤的保护作用

目的探讨硒对氟致大鼠肝脏损伤的保护作用,探寻硒的最佳作用剂量及可能的作用靶点。方法将240只健康初断乳清洁级SD雄性大鼠随机分成8组,分别为溶剂对照(自来水,含氟量0.2 mg/L,含硒量1μg/L)组,氟(50 mg/L)单独染毒组,低(0.375 mg/L)、中(0.75 mg/L)、高(1.5 mg/L)浓度硒单独染毒组和低(0.375 mg/L)、中(0.75 mg/L)、高(1.5 mg/L)浓度硒+氟(50 mg/L)联合染毒组,每组30只。采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒6个月。实验期间,大鼠进食标准饲料(氟含量0.2 mg/kg,硒含量为0.1～0.2 mg/kg)。染毒结束后,测定肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量及核转录因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)表达水平。并观察氟中毒的一般症状和肝脏的病理学损伤。结果氟单独染毒组大鼠氟斑牙症状明显。与溶剂对照组相比,氟单独染毒组大鼠肝脏中GSH-Px、SOD活力降低,MDA含量升高,差异均有统计学意义(P0.05);高浓度硒单独染毒组SOD活力降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与氟单独染毒组相比,高浓度硒+氟联合染毒组大鼠肝脏中GSH-Px活力上升,差异均有统计学意义(P0.05);高浓度硒+氟联合染毒组MDA含量下降,差异均有统计学意义(P0.05)。各染毒组大鼠肝脏中T-AOC活力间比较,差异无统计学意义。与溶剂对照组相比,氟单独染毒组和低浓度硒+氟联合染毒组大鼠肝组织中NF-κB表达水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与氟单独染毒组相比,中浓度硒+氟联合染毒组和高浓度硒+氟联合染毒组大鼠肝组织中NF-κB表达水平有所降低,但差异无统计学意义。病理学结果显示,氟+硒联合染毒组大鼠肝细胞变性坏死程度明显减轻,且肝细胞变性坏死程度随着硒染毒浓度的升高而呈下降趋势。结论 1.5 mg/L是在本实验条件下硒对氟致肝脏损伤的最佳保护作用剂量,NF-κB可能是硒拮抗氟中毒的药物靶点。     

长期低水平铅作用对子代大鼠睾丸组织抑制素B亚基表达的影响

目的探讨低水平长期铅作用对雄性大鼠睾丸组织中抑制素B(inhibin B,INH B)亚基表达的影响。方法将12只9周龄SPF级SD雌性大鼠随机分为3组,分别为对照(去离子水)组和低剂量(800 mg/L)、高剂量(1 500 mg/L)乙酸铅染毒组。采用自由饮水方式连续染毒10 d后,按2∶1雌雄同笼。将孕鼠继续分笼喂养,孕期及哺乳期喂养方式同上。仔鼠断乳后,每组选择15只雄性仔鼠,对应分别给予0(去离子水)、300、900 mg/L乙酸铅溶液继续饮水染毒至6月龄。测定血铅和睾丸铅含量及睾丸组织抑制素Bα和βB亚基基因mRNA和蛋白的表达水平。结果与对照组相比,低、高剂量铅染毒组大鼠血铅和睾丸组织中铅含量均较高,而睾丸组织中抑制素Bα和βB亚基mRNA及蛋白的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。且随着铅染毒剂量的升高,大鼠血铅和睾丸组织中铅含量均呈上升趋势,而大鼠睾丸组织中INH Bα和βB mRNA及蛋白的表达水平均呈下降趋势。结论长期低剂量铅作用所致抑制素Bα和βB亚基表达下降可能参与了铅的雄性生殖毒性过程。     

慢性砷染毒对大鼠附睾上皮细胞凋亡的影响

目的探讨慢性砷染毒对大鼠附睾上皮细胞凋亡的影响。方法将40只健康清洁雄性SD大鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和2.4、12.0、60.0 mg/L亚砷酸钠染毒组,每组10只。采用自由饮用方式进行连续染毒6个月。采用TUNEL细胞凋亡染色法测定大鼠附睾上皮凋亡细胞的凋亡情况,采用Western blot法测定附睾组织内caspase-3、caspase-9蛋白的表达水平,并测定精子顶体完整率和精子畸形率。结果与对照组比较,各浓度砷染毒组大鼠附睾管的细胞凋亡率较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着砷染毒浓度的升高,大鼠附睾管的细胞凋亡程度加重。与对照组比较,各浓度砷染毒组大鼠附睾内caspase-3、caspase-9蛋白表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着砷染毒浓度的升高,大鼠附睾内caspase-3、caspase-9蛋白的表达水平呈上升趋势。与对照组比较,12.0、60.0 mg/L砷染毒组大鼠精子顶体完整率均较低,而精子畸形率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着砷染毒浓度的升高,大鼠精子顶体完整率呈下降趋势,而精子畸形率呈上升趋势。结论慢性砷染毒通过激活caspase-3或caspase-9等途径实现大鼠附睾组织的损伤及凋亡。     

Chronic Effect of Low Lead EXposure on Expression of INH B Subunit of Testis in Newborn Rat

目的 探讨低水平长期铅作用对雄性大鼠睾丸组织中抑制素B( inhibin B,INH B)亚基表达的影响.方法 将12只9周龄SPF级SD雌性大鼠随机分为3组,分别为对照(去离子水)组和低剂量(800 mg/L)、高剂量(1500 mg/L)乙酸铅染毒组.采用自由饮水方式连续染毒10d后,按2∶1雌雄同笼.将孕鼠继续分笼喂养,孕期及哺乳期喂养方式同上.仔鼠断乳后,每组选择15只雄性仔鼠,对应分别给予0(去离子水)、300、900 mg/L乙酸铅溶液继续饮水染毒至6月龄.测定血铅和睾丸铅含量及睾丸组织抑制素Bα和βB亚基基因mRNA和蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,低、高剂量铅染毒组大鼠血铅和睾丸组织中铅含量均较高,而睾丸组织中抑制素B α和βB亚基mRNA及蛋白的表达水平均下降,差异有统计学意义(P＜0.05).且随着铅染毒剂量的升高,大鼠血铅和睾丸组织中铅含量均呈上升趋势,而大鼠睾丸组织中INH B α和ββB mRNA及蛋白的表达水平均呈下降趋势.结论 长期低剂量铅作用所致抑制素Bα和βB亚基表达下降可能参与了铅的雄性生殖毒性过程.     

邻苯二甲酸二丁酯暴露对大鼠卵巢PPARγ mRNA表达的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对青春期雌性大鼠卵巢PPARγmRNA表达的影响.方法 将32只健康21日龄SPF级SD雌性大鼠按体重随机分为对照(玉米油)组和低(250 mg/kg)、中(500 mg/kg)、高剂量(1 000 mg/kg)DBP染毒组,每组8只.采用灌胃方式进行染毒,染毒容积为5 ml/kg,连续染毒8周.在动情前期处死大鼠,采用RT-PCR法检测大鼠卵巢组织过氧化物酶体增生物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-y,PPARy)mRNA的表达水平.结果 与对照组比较,500及1 000 mg/kg DBP染毒组大鼠卵巢PPA RγmRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).且随着DBP染毒剂量的升高,大鼠卵巢PPARy mRNA的表达水平呈上升趋势.结论 DBP有可能通过激活卵巢PPARy mRNA表达而对雌性大鼠产生生殖毒性.     

氟化钠对大鼠骨组织碱性磷酸酶和骨形态发生蛋白-2 mRNA表达的影响

目的探讨氟化钠(NaF)对大鼠骨组织碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)mRNA表达的影响。方法将96只8周龄SD雄性大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(自来水)组和50、150、250 mg/L NaF染毒组,每组24只。采用自由饮水进行染毒,连续染毒24周。分别于染毒第8、16、24周时,每组选择8只大鼠,检测尿氟、血氟水平和氟斑牙及ALP、BMP-2 m RNA的表达水平。结果与对照组相比,不同浓度NaF染毒不同时间大鼠的尿氟、血氟浓度均升高,差异均有统计学意义(P0.05);与第8周相比,不同浓度NaF染毒第16、24周大鼠的尿氟、血氟浓度均升高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着NaF染毒时间的延长和染毒浓度的升高,大鼠尿氟和血氟的浓度均呈上升趋势。与对照组相比,不同浓度NaF染毒不同时间大鼠的氟斑牙检出率均较高,除50 mg/L NaF染毒第8周外,差异均有统计学意义(P0.05);随着染毒浓度的升高和染毒时间的延长,大鼠氟斑牙的检出率均呈上升趋势,损伤程度趋于严重。与对照组相比,不同浓度NaF染毒不同时间大鼠骨组织ALP m RNA的表达水平均较高,除50 mg/L NaF染毒第24周外,差异均有统计学意义(P0.05);随着染毒浓度的升高,大鼠骨组织ALP m RNA的表达水平均呈上升趋势;与第8周比较,50、150 mg/L NaF染毒第16、24周大鼠骨组织ALP m RNA的表达水平均较低,而250 mg/L NaF染毒第16、24周大鼠骨组织ALP mRNA的表达水平均高,差异均有统计学意义(P0.05);随着染毒时间的延长,50、150 mg/L NaF染毒大鼠骨组织ALP mRNA的表达水平均呈下降趋势,而250 mg/L NaF染毒大鼠骨组织ALP mRNA的表达水平呈上升趋势。与对照组比较,除50、150 mg/L NaF染毒第24周大鼠骨组织BMP-2 m RNA的表达水平较低(P0.05)外,不同浓度NaF染毒不同时间大鼠骨组织BMP-2 m RNA的表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);随着染毒浓度的升高,染毒第8、16周大鼠骨组织BMP-2 m RNA的表达水平均呈上升趋势,而染毒第24周大鼠骨组织BMP-2 mRNA的表达水平呈先下降后升高的趋势;与第8周比较,50、150 mg/L NaF染毒第16、24周大鼠骨组织BMP-2 mRNA的表达水平均较低,而250 mg/L NaF染毒第16、24周大鼠骨组织BMP-2 m RNA的表达水平均高,差异均有统计学意义(P0.05);随着染毒时间的延长,50、150 mg/L NaF染毒大鼠骨组织BMP-2 m RNA的表达水平均呈下降趋势,而250 mg/L NaF染毒大鼠骨组织BMP-2 mRNA的表达水平呈先上升后下降的趋势。结论摄入过量的氟可促进大鼠骨组织ALP、BMP-2 mRNA的表达;而随着氟摄入时间的延长,大鼠骨组织ALP、BMP-2 m RNA的表达均不同程度地下降。     

慢性氟中毒大鼠骨组织中AC-cAMP-PKA信号转导通路的表达

目的观察慢性氟中毒大鼠骨组织中AC、cAMP、PKA的表达。方法将48只断乳2周的Wistar大鼠按体重随机分为4组,分别为对照组(自来水)和低剂量组(含50 mg/L NaF自来水)、中剂量组(含150mg/L NaF自来水)、高剂量组(含250 mg/L NaF自来水),每组12只,雌雄各半。采用自由饮用的方式进行染毒,连续染毒6个月。检测大鼠尿氟、骨氟浓度及氟斑牙发生率以及骨组织中AC、cAMP、PKA的水平。结果与对照组比较,各剂量染毒组大鼠尿氟、牙氟及骨氟浓度均较高(P<0.05),斑牙检出率随染毒时间延长而增高,随染毒剂量的增加氟斑牙程度越严重;而各组骨组织中AC、cAMP、PKA含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论在本次实验中未观察到氟化钠引起大鼠骨组织AC、cAMP含量的改变。     

氟砷联合染毒对大鼠牙齿组织BMP-2、RANK、PI3K、Akt1基因转录水平的影响

[目的]通过建立慢性氟砷联合染毒大鼠模型,观察骨形态发生蛋白2(BMP-2)、核因子κB受体活化因子(RANK)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B1(Akt1)基因mRNA相对表达水平在氟砷联合染毒大鼠牙齿组织中的变化情况。[方法]选取清洁级Wistar大鼠作为研究对象,按析因设计随机分为16组,每组10只,雌雄各半,采用不同浓度Na F(0.0、5.0、10.0、20.0 mg/kg)和Na As O2(0.0、2.5、5.0、10.0 mg/kg)单独和联合灌胃染毒,每周连续灌胃染毒6 d,停灌1 d,连续染毒6个月。实验结束后处死大鼠。采用氟离子选择电极测牙氟含量,原子荧光光谱法测牙砷含量,实时荧光定量PCR检测大鼠牙齿组织BMP-2、RANK、PI3K和Akt1mRNA相对量表达。[结果]无氟染毒的4组大鼠均无氟斑牙发生,余12组大鼠均出现氟斑牙。牙氟、牙砷含量随单独氟、砷染毒剂量升高而增加。大鼠牙齿组织BMP-2和Akt1mRNA表达水平呈现随氟染毒剂量增加而升高的趋势(P0.05),但并未随砷染毒剂量的改变而发生变化(P0.05)。RANK和PI3K mRNA表达水平呈现随氟染毒剂量增加而下降的趋势(P0.05),各砷染毒剂量组间差异则无统计学意义(P0.05)。氟染毒剂量、牙氟含量与BMP-2和Akt1mRNA表达水平呈正相关(r=0.382、0.302,0.292、0.246,均P0.05),与RANK和PI3K mRNA表达水平呈负相关(r=-0.323、-0.332,-0.193、-0.185,均P0.05),氟斑牙与牙齿组织RANK、PI3K mRNA表达呈负相关(r=-0.283、-0.273,均P0.05),其余无相关性。[结论]过量氟暴露可上调大鼠牙组织BMP-2和Akt1转录水平,下调RANK和PI3K转录水平,从而参与牙齿釉质发育或矿化过程,导致牙齿损伤。氟砷联合暴露致牙齿损伤主要表现为氟的主效应,砷间接参与氟致牙齿损伤作用。     

持续氟铝联合暴露对子代大鼠骨组织蛋白激酶R样内质网激酶-酸化真核细胞起始因子2α-激活转录因子4信号通路的影响

目的了解妊娠期、哺乳期及成年前持续氟铝联合染毒对子代大鼠骨组织内蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-酸化真核细胞起始因子2α(e IF2α)-激活转录因子4(ATF4)信号通路的影响。方法将36只健康成年清洁级SD孕鼠随机分为9组,分别为对照(自来水)组和氟化钠(60、240 mg/L)组、氯化铝(600、1 000 mg/L)单独染毒组及氟化钠+氯化铝联合染毒组,每组4只。采用自由饮水方式染毒,母鼠从妊娠第0天至子代大鼠出生第21天(postnatal day 21,PND21)染毒;每组随机选取8只子代大鼠继续以同组剂量染毒至PND90。染毒结束后,收集大鼠骨组织,以qRT-PCR法检测骨组织中ATF4和e IF2α的mRNA表达水平,ELISA测定骨组织中p-PERK、ATF4蛋白含量。结果与对照组比较,除低铝、高氟+低铝联合染毒组外,其余各染毒组子代大鼠骨组织中p-PERK蛋白含量明显升高(P0.05);低氟组和低氟+高铝联合染毒组的ATF4蛋白含量高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。氟铝联合染毒对p-PERK蛋白含量的影响表现为拮抗型交互作用(P0.05);ATF4蛋白含量除高氟+低铝联合染毒组表现为协同型交互作用外,其他联合染毒组均表现为拮抗型交互作用(P0.05)。除低氟组大鼠骨组织中e IF2αmRNA的表达明显升高外,其余染毒组明显降低(P0.05)。除高氟+低铝联合染毒组大鼠骨组织中ATF4的mRNA表达明显升高外,其余各染毒组明显降低(P0.05)。单独高氟或高铝染毒组比单独的低氟或低铝染毒组ATF4 mRNA表达量高,差异有统计学意义(P0.05)。氟铝联合染毒对e IF2α及ATF4 mRNA表达水平的影响存在拮抗型交互作用(P0.05)。结论氟铝联合可通过亲代胎盘屏障、乳汁及子代大鼠自身摄入等途径进入子代大鼠体内,诱发骨细胞内质网应激,PERK-e IF2α-ATF4信号通路参与了氟铝联合持续暴露的子代大鼠骨损伤机制。     

香烟烟雾暴露对大鼠睾丸转铁蛋白mRNA及蛋白表达水平的影响

目的探讨香烟烟雾暴露对大鼠睾丸结构及睾丸组织转铁蛋白(Tf)mRNA及其蛋白表达水平的影响。方法清洁级成年雄性SD大鼠160只,随机分为对照组及低(10根香烟)、中(20根香烟)、高(30根香烟)剂量染毒组,各染毒组大鼠分别染毒2、4、6、8、12周,共16组,每组10只。染毒组大鼠采用呼吸道静式染毒,1次/d,30 min/次。观察大鼠睾丸组织结构,采用RT-PCR及Western blot法检测睾丸组织Tf mRNA及其蛋白表达水平。结果染毒组大鼠睾丸病理切片可见生精上皮层次减少,生精细胞排列疏松,支持细胞空泡化。染毒4、8、12周时高剂量组大鼠睾丸组织Tf mRNA表达水平低于对照组和低剂量组,染毒8周时高剂量组大鼠睾丸组织Tf蛋白表达水平低于对照组,染毒12周时中、高剂量组大鼠睾丸组织Tf蛋白表达水平低于低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论香烟烟雾暴露可导致雄性大鼠睾丸组织损伤,并抑制Tf基因及蛋白表达。     

二氧化硫对大鼠肝和肺细胞色素P4502B1和2E1 mRNA表达及活性的影响

目的探讨二氧化硫(SO2)对肝、肺微粒体细胞色素P450两种亚型CYP2B1和CYP2E1mRNA表达及活性的影响。方法采用SO2动式染毒技术使雄性Wistar大鼠染毒7天,每天6h,SO2的染毒剂量分别为14、28和56mg/m3。采用分光光度法测定大鼠肝、肺微粒体CYP2E1活性,采用荧光分光光度法测定肝、肺微粒体CYP2B1活性,采用RT-PCR方法测定各组大鼠肝、肺组织中CYP2B1和CYP2E1mRNA表达水平。结果在肝中,较高剂量的SO2(28和56mg/m3)可使CYP2B1活性及mRNA水平降低,肝微粒体CYP2E1活性及mRNA在各剂量组均未发生显著改变。肺组织中CYP2B1活性在56mg/m3剂量组显著降低,但其mRNA水平在28及56mg/m3剂量组均显著降低;肺微粒体CYP2E1活性及mRNA水平在28及56mg/m3SO2处理组均降低显著。结论SO2可降低大鼠肝中CYP2B1和2E1及肺中CYP2B1和CYP2E1的活性及mRNA水平。     

阿维菌素原药诱导大鼠肝组织热应激蛋白70基因表达的研究

目的研究阿维菌素原药诱导大鼠肝组织HSP70基因表达的变化,为阿维菌素原药环境污染早期监控及暴露人群的保护提供依据。方法将清洁级Wistar大鼠随机分成3个染毒组和1个对照组,每组12只,雌雄各半,3个染毒组每日经口灌胃不同浓度阿维菌素原药植物油稀释液,最终染毒剂量分别为2.5、1.25、0.625 mg/kg,连续染毒14 d,对照组给予等量花生油。观察大鼠一般状况,测定血清总蛋白(TP),并运用RT-PCR扩增技术观察肝组织HSP70 mRNA表达的变化。结果2.5 mg/kg剂量组雌性大鼠血清TP低于对照组(P<0.05);各染毒组动物肝组织HSP70 mRNA表达呈剂量-效应关系,2.5 mg/kg及1.25 mg/kg剂量组HSP70 mRNA表达明显增加(P<0.05)。结论阿维菌素原药能够敏感地诱导HSP70基因的表达,提示检测HSP70基因表达可作为阿维菌素原药早期监控的指标之一。     

香烟烟雾暴露对大鼠睾丸组织雄激素结合蛋白mRNA及蛋白表达水平的影响

目的探讨香烟烟雾暴露对大鼠睾丸结构及睾丸组织雄激素结合蛋白(ABP)mRNA及蛋白表达水平的影响。方法清洁级成年雄性SD大鼠160只,随机分为对照组和低(10支)、中(20支)、高(30支)剂量染毒组,各组大鼠分别染毒2、4、6、8、12周,共16组,每组10只。实验组采用呼吸道静式染毒,每日1次,每次30 min。观察大鼠睾丸组织结构,采用RT-PCR及Western Blot法检测睾丸组织ABP mRNA及蛋白表达水平。结果染毒组大鼠睾丸病理切片可见,生精细胞排列紊乱疏松,支持细胞呈现空泡化。大鼠睾丸组织ABP mRNA和蛋白表达水平均随染毒剂量的增加而降低,染毒4周及12周后中、高剂量组ABP基因mRNA表达水平低于对照组,染毒6周后高剂量组ABP基因mRNA表达水平低于对照组,染毒4~8周后高剂量组ABP蛋白表达水平低于对照组,染毒12周后低、中、高剂量组ABP蛋白表达水平低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论香烟烟雾暴露可引起雄性大鼠睾丸组织受损,且睾丸组织ABP基因mRNA及蛋白的表达水平下降。     

百草枯中毒大鼠肾脏病理变化及caspase-3的表达

目的观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肾脏病理变化和肾脏caspase-3的表达,探过PQ中毒肾损伤病理生理机制。方法 36只健康SD大鼠随机分为对照组和染毒组,染毒组合予80 mg/kg PQ一次性灌胃染毒建立急性中毒模型,对照组等量生理盐水灌胃。分别观察24、48、72 h肾组织病理学变化,同时采用免疫组织化学法观察caspase-3蛋白表达。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间单因素方差分析,结果以P<0.05为差异有统计学意义。结果对照组肾组织结构清晰,染毒组肾组织结构清晰度明显下降,染毒24 h可见充血、水肿等病理变化,随时间延长而加重;肾小球亦可受累。对照组caspase-3蛋白多不表达;染毒组染毒24 h在皮质部肾小管上皮细胞的胞膜及胞浆中caspase-3蛋白呈阳性表达,免疫组织化学评分(IHS)升高,与对照组各时间点比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 caspase-3蛋白高表达提示其可能参与PQ中毒肾损伤病理生理过程。 更多还原     

锰对大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-9和凋亡抑制蛋白表达的影响

为研究锰对大鼠睾丸生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-9(caspase-9)、凋亡抑制蛋白(livin)表达的影响,将24只健康雄性清洁级SD大鼠随机分为3组,分别为对照(生理盐水)组和15、30 mg/kg氯化锰染毒组,每组8只。采用腹腔注射方式进行染毒,每天1次,每周5 d,连续染毒6周。采用免疫组化SP法检测睾丸生精细胞caspase-9、livin蛋白的表达情况。结果显示,与对照组比较,15、30 mg/kg氯化锰染毒组大鼠睾丸生精细胞caspase-9的阳性细胞率均升高,livin的阳性细胞率均下降,差异有统计学意义(P0.05)。且随着氯化锰染毒剂量的升高,大鼠睾丸生精细胞caspase-9的阳性细胞率呈上升趋势,livin的阳性细胞率呈下降趋势。提示锰可通过上调大鼠生精细胞caspase-9表达和下调livin表达诱导生精细胞凋亡。