白介素4对乙型肝炎病毒体外复制和表达的影响

目的 探讨IL-4对HepG2.2.15细胞表达HBsAg和HBeAg及HBV DNA复制的抑制作用,认识Ⅱ-4在抗HBV感染中的作用.方法 通过MTT比色法检测不同浓度重组IL-4(rIL-4)对HepG2.2.15细胞的细胞毒性作用,用ELISA检测rIL-4对HepG2.2.15细胞不同时相HBsag和HBeAs分泌的作用,用实时荧光定量PCR检测rIL-4对HBV DNA合成的影响.结果 rIL-4的各浓度对HepG2.2.15细胞无细胞毒性作用;rIL-4处理HepG2.2.15细胞后,不同浓度组HBsAg、HBeAg及HBV DNA含量在96 h的差异具有统计学意义(P＜0.05),但rIL-4的浓度低于100ng/mL的各组,HBsAg和HBV DNA含量在处理48 h时,各组间无明显差异(P＞0.05).此抑制作用随rIL-4浓度的增加而增强.结论 rIL-4在体外有直接的抗HBV作用.     

乙型肝炎病毒前S1抗原的检测及其与HBV血清标志物的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S1抗原抗体的临床意义及其与HBV血清标志物(HBVM)的关系。方法酶联免疫吸附试验(ELISA)法与荧光PCR法检测HBV前S1抗原、HBVM及HBVDNA含量。结果HBsAg( )乙型肝炎患者的S1抗原阳性率为80.6%,HBeAg( )与HBeAg(-)组HBV前S1抗原阳性率差异有统计学意义,S1抗原与HBVDNA的复制和含量关系密切,S1抗原在急慢性乙型肝炎中的阴转率差异有统计学意义。结论HBV前S1抗原与HBeAg及HBVDNA可同时作为HBV存在和复制的标志,前S1抗原持续阳性则预示乙型肝炎慢性化。     

乙型肝炎病毒前S2抗原抗体的表达及其与HBV血清标志物的关系

目的 进一步探讨乙型肝炎病毒前S2抗原抗体的临床意义及其与HBV血清标志物的关系.方法 用ELISA法与荧光PCR法检测HBV前S2抗原抗体、HBVM及HBVDNA含量.结果 HBeAg（＋）与HBeAg（-）组HBV前S2抗原阳性率分别为80.9%和31.9%,差异有非常显著性;HBsAg（＋）与HBsAg（-）组HBV前S2抗体阳性率分别为18.8%和65.6%,差异有非常显著性;S2抗原与HBVDNA的复制和含量关系密切;S2抗原在急慢性乙肝中的阴转率差异有非常显著性.结论 HBV前S2抗原与HBeAg及HBVDNA可同时作为HBV存在和复制的标志,前S2抗体可作为HBV被清除和病情好转的指标之一,前S2抗原持续阳性则与乙肝慢性化关系密切.     

乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV DNA及HBeAg关系

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)前S1抗原 (PreS1Ag)与HBVDNA和HBeAg之间的关系 ,以评价其在乙肝诊疗中的作用。方法　用ELISA法对 2 2 5例HBeAg阳性标本进行PreS1Ag和HBV血清标志物的检测 ,用PCR-ELISA法测定HBVDNA。结果　PreS1Ag在HBVDNA和HBsAg阳性组织中的检出率均明显高于相应的阴性组(均为P <0 0 1)。HBeAg阴性组中PreS1Ag的检出率为 4 3 0 % ,PreS1Ag与HBVDNA的符合率为 70 6 % ,与HBeAg的符合率为 6 8 4 %。结论　PreS1Ag与HBVDNA、HBeAg呈良好的相关性。作为反映HBV感染和复制的指标 ,PreS1Ag较HBeAg更敏感。     

乙型肝炎病毒宫内感染的分子流行病学研究

目的为了掌握乙型肝炎病毒宫内感染的发生率和危险因素,探讨HBV相关抗体在胎儿体内产生的作用。方法用ELISA法筛选出HBsAg阳性孕妇及引产胎儿153例 ,HBsAg阴性孕妇及胎儿65例 ,共218例。然后用多聚酶链技术对孕妇 -引产胎儿HBV宫内感染进行检测。结果HBsAg阳性孕妇HBVDNA宫内感染率为53.59 %(82/153) ,HBsAg阴性孕妇静脉血中6.15%(4/65)检出HBVDNA阳性 ,两者相比有显著性差异 (P<0.01) ;母亲血中HBsAg、HBeAg、抗 -HBc同时阳性其相应胎儿HBVDNA感染率为92.5%(74/80) ,46例抗 -HBs阳性的胎儿血有5例检出HBVDNA阳性。结论HBV宫内感染率较高 ,HBsAg阴性孕妇也可能发生HBV宫内感染 ,应引起人们的重视     

Adr亚型乙型肝炎病毒转染细胞模型的构建

目的建立乙型肝炎病毒（HBV）复制状态的细胞模型。方法利用分子亚克隆技术。将9600bp的adr亚型HBV全基因克隆至pcDNA3的EcoRI和HindⅢ位点构建pcDNA3—3HBV，通过脂质体介导的方法转染HepG2细胞，G418筛选。结果成功构建了质粒pcDNA3—3HBV，稳定转染后培养上清，ELISA检测结果显示，HBSAg、HBeAg阳性，且PCR检测前S／S基因阳性。PCR证实转染细胞中有HBVcccDNA存在，RT—PCR证实HBVS基因mRNA的表达。结论重组质粒pcDNA3．3HBV能在HepG2细胞中表达、转录、复制。     

NAPP体外抗乙型肝炎病毒作用的实验研究

[目的]应用HepG2.2.15细胞株作为体外抗乙型肝炎病毒的实验模型,研究NAPP对乙肝病毒的抑制作用。[方法]以NAPP梯度浓度与HepG2.2.15细胞混合培养,通过MTT法检测药物的细胞毒性,9 d后取细胞培养上清液,用ELISA法测定HBsAg、HBeAg含量,荧光定量PCR检测上清液中病毒载量。[结果]NAPP浓度在1 mg/ml时,对细胞无明显毒性;NAPP在所稀释的各浓度下,对HBsAg、HBeAg均有抑制作用,对HBsAg、HBeAg的治疗指数分别大于188.7和64.5;NAPP可抑制HBV-DNA的复制。[结论]NAPP体外对HBV有显著的抑制作用。     

shRNA表达载体构建及其对HBV体外抑制作用

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)基因X区和P区的shRNA表达载体,通过纳米聚合物将其转入HBV感染的细胞模型,并检测其对HBV复制的抑制作用。方法设计3条针对HBV基因编码区的干扰RNA序列,合成3对64nt的寡核苷酸,插入载体pRNAT-U6,构建重组干扰质粒Sl、S2和S3,利用纳米转染剂转入HBV感染的HepG2细胞。用实时荧光定量法检测HBVmRNA含量。结果干扰质粒S1、S2对HBv的复制有明显抑制作用,荧光定量检测转染后HBVmRNA表达水平发现,HBVmRNA含量分别减少至空白对照组的70.2%和61.2%,无关对照质粒则无抑制作用。结论成功构建针对HBv编码区的shRNA表达载体,并能在体外有效抑制HBVmRNA。     

化学合成多肽体外抗HBV复制的研究

目的 观察人工设计并化学合成的多肽在体外乙型肝炎病毒（HBV）复制模型中对HBV-DNA复制、病毒标志物表达的影响，及其细胞毒性强弱，筛选高HBV抑制且低细胞毒性的多肽，探索多肽作为新型HBV抗病毒药物分子的潜力。方法 采用传统的甲基丙烯酸聚合物平台设计并合成的7种多肽（KBDT-1、2、3……7，以疏水性及阳离子电亲和力大小为依据），将7种化学合成多肽（10 mg/mL）、拉米夫定（1 mg/mL，阳性对照）、空白溶剂（阴性对照）作用于HepG 2.2.15细胞系，检测化学合成多肽对HBV的抑制作用，采用结晶紫染色法检测细胞存活率，比较各组药物对细胞毒性的强弱。选取HBV抑制作用最强的多肽，设置10、1、0.1 mg/mL浓度梯度，分别处理HepG 2.2.15细胞3、6、9 d后，收集细胞上清液，采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测病毒DNA拷贝量，化学发光微粒子免疫分析法检测HBsAg及HBeAg的变化。结果 从7种化学合成多肽中筛选出多肽KBDT-2，RT-PCR结果显示，KBDT-2具有体外抗HBV复制作用，且药物浓度越高，抑制效果越好；化学发光微粒子免疫分析法检测显示，KBDT-2对HBV生物学标志物HBsAg及HBeAg有抑制作用；结晶紫染色检测结果显示，KBDT-2对HepG 2.2.15无明显毒性作用。结论 KBDT-2具有抑制HBV复制作用，且无明显细胞毒性，可以有效降低HBsAg、HBeAg表达，为探索抗HBV新型药物提供了实验数据支持。     

靶向HBx小干扰RNA表达载体构建及其功能探讨

目的:设计和构建乙型肝炎病毒(HBV)X基因(HBx)特异性的小干扰RNA(siRNA)体内表达载体,筛选抑制X基因表达的有效siRNA,并初步探讨其对HBV复制功能的影响。方法:以X基因为目的基因,以产生siRNA质粒载体pSilencerTM-U6为表达模板,细胞内转录合成3条siRNA,并构建携带荧光素酶报告基因的重组质粒载体plucF-HBx。将重组质粒载体plucF-HBx与产生siRNA的质粒pSilencerTM-U6共转染HepG2细胞,检测荧光素酶活性以筛选出抑制荧光素酶表达的有效siRNA,逆转录聚合酶链反应检测HBx mRNA的表达,进一步证实siRNA对HBx表达的抑制效果,然后将siRNA转染HepG2.2.15,酶联免疫吸附法和荧光定量PCR检测siRNA对HBV复制的影响。结果:合成的3条siRNA中有1条抑制荧光素酶表达,抑制效率为76.3%,并能特异性抑制HBV的复制。结论:成功构建并筛选到针对X基因表达的有效siRNA质粒,为HBV的基因治疗奠定基础。     

“大三阳”患者HBeAg浓度与HBV复制水平的关系

目的分析“大三阳”患者的HBeAg浓度与HBV复制水平的关系，并探讨用化学发光法检测HBeAg浓度用于HBsAg阳性病例与HBV复制水平的相关性。方法随机抽取其中血清“大三阳”患者共143例，应用荧光定量PCR（fuorescence quantitative PCR，FQ—PCR）和化学发光法（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）测定乙型肝炎病例的血清HBeAg浓度。比较不同DNA复制水平病例的HBeAg浓度，以及不同HBeAg浓度病例的DNA水平，同时进行HBeAg浓度与DNA水平相关性分析。结果血清HBeAg浓度与HBVDNA复制水平呈正相关，结论血清HBsAg和HBeAg阳性乙型肝炎病例血清HBeAg浓度与HBV复制水平有一定相关性，相关性R≥0．95。     

乙型肝炎病毒前S1抗原与其血清标志物及DNA的关系分析

目的 探讨HBV前S1抗原(Pre-S1)与HBV血清标志物(HBV-M)及HBV DNA的关系.方法 采用ELISA法检测880例乙型肝炎患者血清Pre-S1和HBV-M,采用荧光定量PCR法检测HBV DNA载量,并分析三者间的相关性.结果 在880例乙型肝炎患者中,前S1抗原和HBeAg的阳性率分别为56.25％...     

HBsAg和HBeAg定量检测在急慢性乙型肝炎患中临床意义

目的 探讨HBsAg和HBeAg定量检测在急慢性乙型肝炎患中的临床意义.方法 选取2009年6月-2011年6月在某院治疗的156例急慢性乙型肝炎患者为研究对象,随机将156例乙肝患者分为两组,每组各78例患者,一组服用拉米夫定(A组),一组服用干扰素(B组).分别检测两组肝炎患者治疗前后的HBsAg及HBeAg值,探讨HBsAg和HBeAg定量检测在急慢性乙型肝炎患中临床意义.结果 治疗后4周A组HBsAg定量值为(2.875±0.317) ng/ml,HBeAg定量值为(2.912±0.168) ng/ml,HBV DNA定量值为(8.22×104±3.13×103)拷贝/ml;治疗后8周A组HBsAg定量值为(2.127±0.305) ng/ml,HBeAg定量值为(2.739±0.154) ng/ml,HBV DNA定量值为(2.51×104±1.11×103)拷贝/ml;治疗后24周A组HBsAg定量值为(2.012±0.265) ng/ml,HBeAg定量值为(2.153±0.047) ng/ml,HBVDNA定量值为(4.29×103±3.66×102)拷贝/ml.与B组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 通过检测HBsAg、HBeAg定量检测值的水平,能够反映出HBVDNA复制的具体情况,同时能够对临床不同方法治疗乙型肝炎的效果进行判断,从而对于下一步的治疗方法起到指导作用.     

乙型肝炎病毒表面抗原在慢性乙型肝炎病毒感染后不同临床阶段的定量检测及临床意义

目的 测定慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染后不同临床阶段患者血清乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）定量,同时探究其与患者血清HBV DNA水平和年龄的相关性.方法 将未经抗病毒治疗的774例慢性HBV感染患者按照临床特征分为六组：慢性HBV携带组（102例）、非活动性HBsAg携带组（211例）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）阳性慢性乙型肝炎组（236例）、HBeAg阴性慢性乙型肝炎组（114例）、HBeAg阳性乙型肝炎肝硬化组（52例）、HBeAg阴性乙型肝炎肝硬化组（59例）,采用化学发光微粒子免疫分析法测定患者血清HBsAg定量,实时荧光定量聚合酶链反应法测定患者血清中HBV DNA定量,血清HBsAg和HBV DNA需要经常用对数转换后进行组间比较.结果 HBsAg定量由高到低分别为慢性HBV携带组、HBeAg阳性慢性乙型肝炎组、HBeAg阴性慢性乙型肝炎组、非活动性HBsAg携带组、HBeAg阴性乙型肝炎肝硬化组和HBeAg阳性乙型肝炎肝硬化组[7.80（6.69 ～ 8.32）、7.11（5.42～8.27）、6.57（5.66 ～ 7.53）、6.38（4.39～ 7.40）、6.22（4.84～ 6.91）、6.13 （5.48～7.01）].HBeAg阳性慢性乙型肝炎组和HBeAg阴性慢性乙型肝炎组HBsAg定量与HBV DNA呈正相关（r=0.714和0.390,P＜0.01）.慢性HBV感染患者血清HBsAg的定量与年龄呈负相关（r=-0.416,P＜0.01）;监测年龄≥40岁非活动性HBsAg携带者的血清HBsAg定量有重要的临床价值.结论 慢性HBV感染后不同临床阶段患者血清HBsAg定量不同,血清HBsAg定量与患者HBV DNA水平和年龄相关,临床上应重点监测年龄≥40岁非活动性HBsAg携带患者血清HBsAg定量.     

乙型肝炎病毒DNA复制水平与HBeAg、HBsAg的相关性研究

目的分析乙肝病毒(HBV)DNA复制水平与HBeAg、HBsAg的相关性。方法选取2015年1月至2016年12月我院收治的150例乙肝患者,以化学发光免疫法测定HBeAg与HBsAg,以荧光定量PCR测定HBV DNA水平。统计HBeAg、HBsAg阳性率,比较HBeAg、HBsAg阴性与阳性患者的HBV DNA阳性率与平均拷贝数。结果HBeAg阳性患者的HBV DNA阳性率与平均拷贝数均高于HBeAg阴性患者(P<0.05)。HBsAg阳性患者的平均拷贝数高于HBsAg阴性患者(P<0.05)。HBeAg和HBsAg均阳性患者的HBV DNA阳性率与平均拷贝数均高于HBeAg、HBsAg单一阳性患者(P<0.05)。HBeAg阳性与HBsAg阳性均与HBV DNA水平呈正相关(P<0.05)。结论HBeAg与HBsAg能在一定程度上反映HBV DNA复制水平,特别是高水平HBeAg,与HBV DNA密切相关。     

Clinical significance of serum HBeAg and HBV-DNA-specific values of virus replication in chronic hepatitis-B virus infection.

The prevalence of serum HBV-DNA and that of HBeAg was evaluated in 44 subjects (27 males and 17 females) aged between 3 and 59 years. They were divided in two groups: (A) chronic asymptomatic HBsAg carriers; and (B) chronic HBsAg carriers with a history of HBV infection. The patients had been chronic HBV carriers between 8 months and 15 years. All underwent clinical and biochemical evaluation. The serological markers of HBV infection were tested using ABBOTT assay kits. The serum HBV-DNA was quantified using a hemiluminiscence molecular hybridization assay (Digene-Murex). HBV-DNA+ were 13 patients (29.55 +/- 6.88%). The highest level of viral replication (up to 50%) was measured in the patients aged from 3 to 29 years while in the others a 3 to 4-fold decrease of the viral replication was detected. HBV-DNA+ were 8 (23.53 +/- 6.39%) of the chronic asymptomatic hepatitis B carriers and 5 (50.00 +/- 7.5%) of the chronic HBV carriers with former acute hepatitis B infection. Similar results were obtained for the other index of viral replication--HBeAg/anti-HBe. Eight (23.53 +/- 6.39%) patients from group I and 4 (40.00 +/- 7.38%) patients from group II were HBeAg+ while anti-HBe+ were 26 (76.47 +/- 6.39%) and 6 (60.00 +/- 7.38%) patients from group I and II, respectively, i.e., about a quarter of the chronic asymptomatic HBsAg carriers and half of the chronic HBV carriers that had had an acute hepatitis B virus infection had HBV replication in their bodies. HBeAg+ patients had high levels of serum HBV-DNA (625.70-3328.00 pg/ml) which indicated extremely intensive viral replication. The presence of HBeAg and especially of HBV-DNA as markers of viral replication in chronic asymptomatic HBsAg carriers and chronic HBsAg carriers with a prior acute hepatitis B virus infection provide important information for the clinical decisions.     

HBV—DNA定量与HBV血清学标志物的相关性探讨

目的探讨HBV—DNA定量与HBV血清学标志物（HBV—M）的相关性。方法采用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）检测449例乙肝感染者血清的HBV—DNA含量,并用酶联免疫吸附试验（ELISA）对其血清学标志物进行检测。结果在不同HBV—M模式中,HBV—DNA与preS1总检出率无显著差异。在模式HBsAg（＋）、HBeAg（＋）和HBcAb（＋）中血清HB—DNA含量明显高于其他模式。在278例HBV—DNA阳性的标本中,HBV—DNA与preS1检出率无显著差异（P〉0．05）,HBV—DNA与HBeAg检出率有显著差异（P〈0．01）,同时preS1阳性组HBV～DNA定量值显著高于preS1阴性组。结论HBV—DNA或preS1与HBV复制密切相关,preS1较HBeAg更能敏感反映HBV在体内的复制状况,联合检测HBV—DNA与HBV血清学标志物,在乙型肝炎的诊断治疗中更有重要的临床指导价值。     

High circulation of hepatitis B virus (HBV) precore mutants in Tunisia, North Africa

Hepatitis B Virus (HBV) e antigen (HBeAg), HBV DNA and precore mutations affecting HBeAg expression during active replication were studied in 72 Tunisian hepatitis B surface antigen (HBsAg) positive individuals: 30 asymptomatic carriers of the virus, 37 with chronic hepatitis and 5 with acute hepatitis. HBV DNA was detected in 44 patients, but only 20% of them expressed HBeAg. Precore mutant strains, with mutations at position 1896 or at positions 1896 and 1899, were detected by PCR-hybridization in 86 and 36% of patients, respectively. Wild-type strains were detected in 54% of patients. Precore mutants were found in chronically and in acutely infected individuals, in patients with severe and asymptomatic infections, in HBeAg positive as well as HBeAg negative individuals.These results show the high frequency of HBV precore mutants in Tunisia.     

乙型肝炎病毒核心基因启动子变异与患者血清病毒载量和标志物及肝功能的关系

目的探讨乙型肝炎病毒核心基因启动子(HBV BCP)变异与患者血清病毒载量(HBV DNA)和标志物及肝功能的关系。方法采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对176例HBV慢性感染者血清进行检测BCP区核苷酸(nt)1762A→T和1764G→A联合突变。结果BCP变异在HBeAg阴性病例的阳性率为49.4%,显著高于HBeAg阳性病例的阳性率33.3%(P<0.05);BCP变异阳性组的HBV DNA含量显著高于阴性组的含量(P<0.01);BCP变异阳性组HBV DNA含量在HBeAg阳性病例及HBeAg阴性病例中均较BCP变异阴性组高(P<0.01);BCP变异阳性组对肝功能的损害明显高于阴性组(P<0.01)。结论BCP变异可引起HBeAg阴转,病毒复制水平提高;HBV血清标志物联合HBV DNA同步检测,具有重要的临床应用价值;对HBsAg阳性、HBeAg阴性患者需要进一步检测HBV DNA,以免由于基因变异导致将HBeAg阴性者误认为病毒的免疫清除或静息而延误抗病毒治疗时机;BCP变异可使病情加重。