肺癌诊断相关miRNA标志物的筛选和验证

目的 获得肺癌组织和正常肺部组织中差异表达的miRNA用于肺癌的早期诊断.方法 首先运用miRNA芯片比较5对来自临床的正常肺部组织和肺癌组织,筛选差异性表达的miRNA,然后用荧光实时定量PCR进行鉴定.最后用ROC曲线分析评价特定miRNA标志物区分肺癌组织与正常肺部组织的能力.结果 miR-10b-5p和miR-199a-5p在肺癌组织中的相对表达量(2.76±0.71;2.05±0.38)显著高于肺部正常组织中的相对表达量(1.00±0.17;0.96±0.18),差异有统计学意义(t=2.40、2.56,P＜0.05).ROC曲线评价miR-10b-5p和miR-199a-5p区分肺癌组织和肺部正常组织的能力,曲线下面积(AUC)分别为0.731和0.672.两个miRNA联合区分肺癌组织和肺部正常组织的AUC为0.773,灵敏度为57.9％,特异性为94.7％.结论 miR-10b-5p和miR-199a-5p联合可作为候选肿瘤标志物组合用于早期肺癌诊断.     

原发性干燥综合征患者血液中miR-146a-5p、miR-4484和miR-4687-5p的表达

目的通过检测3种原发性干燥综合征(PSS)相关的miRNA(miR-4687-3p、miR-4484、miR-146a-5p)在PSS患者和健康人群中的差异表达水平,探讨其在PSS诊断和临床检验中的作用和意义。方法采用荧光定量PCR(q PCR)法检测28例患者和30例健康志愿者血清中3种miRNA的差异表达水平,利用诊断价值评价使用受试者工作特征曲线(ROC)分析miRNA的敏感性和特异性。结果经过q PCR验证,PSS治疗前组与对照组比较miR-146a-5p、miR-4484和miR-4687-5p表达均上调(P0.05),治疗前组和治疗后组比较,miR-146a-5p和miR-4484表达均下调(P0.05),而miR-4687-5p表达依然上调(P=0.9930.05)。3种miRNA的灵敏性和特异性分别为miR-4484miR-4687-5pmiR-146a-5p。结论 miR-4687-3p、miR-4484、miR-146a-5p表达异常可能参与了PSS的发生和发展,miR-4484可能成为PSS的早期辅助诊断指标。     

高脂饲料诱导的胰岛素抵抗小鼠肝脏组织差异表达microRNAs的鉴定及生物信息学分析

目的采用茎环-逆转录实时荧光定量PCR方法,鉴定高脂饲料诱导的胰岛素抵抗小鼠肝脏组织中差异表达的mircoRNAs(miRNAs),即miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p,并预测分析miRNAs调控的靶基因和功能,探讨胰岛素抵抗与差异表达的miRNAs的相关性。方法 30只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和高脂饲料诱导的胰岛素抵抗模型组,设计茎环引物和实时荧光定量PCR特异引物,建立茎环-逆转录SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,检测小鼠肝脏组织中miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p的表达。统计学分析小鼠miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p表达的差异。利用生物信息学软件预测miRNAs调控的靶基因,分析靶基因富集的基因功能(gene ontology,GO)和涉及到的信号转导通路及其靶基因蛋白的相互作用。结果经实时荧光定量PCR鉴定分析,与对照组相比,胰岛素抵抗组小鼠肝脏组织中miR-1897-3p、miR-690、miR-7a-5p表达下调(P0.05)。生物信息学分析结果显示,有16种靶基因被两种差异表达的miRNAs调控,其中有8个靶基因可与4种以上的蛋白质相互作用,Rac1、Rhoa、Prkcz、Tgfbr2、Itch和Ube2d3蛋白位于网络的中心节点,且它们与胰岛素信号通路相关或存在交联。结论肝脏miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p可能参与了胰岛素抵抗的病理生理过程,其机制可能通过调节靶基因的表达,影响了胰岛素信号通路的正常级联反应。     

早产儿和足月儿母乳外泌体miRNA差异表达的研究

目的 初步评估母乳外泌体miRNA在早产儿和足月儿母乳中的差异表达,利用生物信息学分析调控途径,为早产儿生长发育和相关疾病防治提供指导和科学依据。方法 2020年8月—2021年6月在南京医科大学第二附属医院儿童保健科收集13例早产母乳喂养儿(早产组)和9例足月母乳喂养儿(足月组)的母乳样本,提取母乳中的外泌体,对外泌体miRNA进行高通量测序,分析两组母乳外泌体miRNA表达谱;筛选早产组和足月组母乳差异表达的外泌体miRNA;用生物学功能软件进行GO及KEGG分析。结果 母乳外泌体miRNA表达丰富,hsa-let-7b-5p、hsa-let-7g-5p、hsa-miR-148a-3p、hsa-miR-22-3p、hsa-miR-99a-5p、hsa-miR-200、hsa-miR-146b-5p、hsa-miR-26a-5p等miRNA在早产组和足月组母乳中均相对高表达。与足月组母乳相比,早产组母乳有7个上调(差异倍数对数值分别是2.803、2.714、1.632、2.360、1.350、3.387、2.137),5个下调(差异倍数对数值分别是-2.553、-2.197、-2.7...     

miR-200a-3p miR-98-5p及miR-34a-5p在支气管哮喘患儿中的表达及临床意义

目的 探讨微小RNA(miR)-200a-3p、mir-98-5p、miR-34a-5p在支气管哮喘患儿中的表达及临床意义。方法 选取2019年12月—2020年12月杭州市临安区妇幼保健院接诊的支气管哮喘患儿73例为支气管哮喘组,其中缓解期患儿47例、急性期患儿26例;另同期选择70例体检健康儿童为健康组。检测两组儿童miR-200a-3p、miR-98-5p、miR-34a-5p表达进行比较,并比较不同程度病情miR-200a-3p、miR-98-5p、miR-34a-5p表达,分析其与支气管哮喘的相关性。结果 支气管哮喘组患儿血清miR-200a-3p、miR-34a-5p表达高于健康组,miR-98-5p表达低于健康组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-200a-3p、miR-34a-5p、miR-98-5p在不同病情严重程度患儿中总体比较,差异有统计学意义(P<0.05),且随病情严重程度发展血清miR-200a-3p、miR-34a-5p表达逐渐升高,miR-98-5p表达逐渐降低。miR-200a-3p、miR-34a-5p与支气管哮喘患儿年龄、EOS百分比、FENO呈正相关,与FEV1呈负相关;miR-98-5p、miR-34a-5p与支气管哮喘患者年龄、EOS百分比、FENO呈负相关,与FEV1呈正相关。多元logistic回归分析显示,miR-200a-3p、miR-34a-5p、miR-98-5p为影响支气管哮喘发生的因素(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,miR-200a-3p、miR-98-5p呈负相关(r=-0.595,P=0.003);miR-200a-3p、miR-34a-5p之间呈正相关(r=0.426,P=0.047);miR-98-5p、miR-34a-5p之间呈负相关(r=-0.692,P=0.001)。结论 支气管哮喘患儿血清miR-200a-3p、miR-34a-5p表达升高,且与病情严重程度呈正相关;miR-98-5p降低,与病情严重程度呈负相关。说明miR-200a-3p、miR-98-5p、miR-34a-5p表达与支气管哮喘的发生存在关联,可通过其表达变化评估患儿病情发展,对改善患者预后具有重要意义。     

基于TCGA数据库构建肺腺癌预后相关的微小RNAs风险模型

目的寻找肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)特异性的预后相关微小RNAs(microRNAs, miRNAs),为LUAD患者预后预测及个性化治疗方案制定提供依据。 方法下载TCGA数据库中522例LUAD患者组织标本的miRNA-Seq数据和临床病理及生存时间数据,用R语言对LUAD与癌旁组织中差异miRNAs进行分析。采用LASSO & COX回归模型在训练集(245例LUAD)中进行LUAD预后相关miRNAs筛选,并构建基于7个miRNAs表达谱的线性风险模型。根据风险值的高低,以中位风险值为界将患者分为高、低风险组,并分别在测试集(245例LUAD)和总体标本(490例LUAD)中对风险模型预测患者预后的有效性进行验证。采用COX回归分析miRNAs风险模型是否是独立的预后因子。 结果LUAD组织与癌旁组织中共有72个差异表达的miRNAs(上调45个、下调27个)。从训练集中确定miR-101-3p、miR-148a-3p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-505-3p、miR-584-5p和miR-99a-5p 7个与总生存期相关的miRNAs构建预后风险模型。在训练集、测试集及总体标本中,高风险组患者与低风险组患者相比,总体生存时间均显著降低(P均<0.05)。经多因素COX回归分析,风险模型在训练集、测试集及总体样本中均是一个独立的预后因子(训练集HR=1.97,P=0.02;测试集HR=1.927,P=0.009;总体HR=1.909,P=0.001)。 结论研究确定了7个与LUAD患者预后相关的miRNAs,基于7个miRNAs构建的风险模型是1个独立的预后因子。     

宫颈癌患者血清miR-329-3p和miR-34a-5p水平检测及临床意义

目的探讨宫颈癌患者血清miR-329-3p和miR-34a-5p水平检测及临床意义。方法选取2011年3月-2014年8月义乌市中心医院宫颈癌患者154例为观察组,分别于手术前以及术后3～4周采集全血,另选健康体检者123例为对照组,体检时采血,测定其血清miR-329-3p和miR-34a-5p及癌胚抗原(CEA)表达水平。结果术前观察组miR-329-3p、miR-34a-5p水平低于对照组,CEA水平高于对照组(P0. 05);术后观察组miR-329-3p、miR-34a-5p水平高于术前观察组,CEA水平低于术前观察组(P0. 05);不同年龄、肿瘤最大径、肿瘤数目特征组中血清miR-329-3p、miR-34a-5p水平相近(P0. 05);而病理学分级越高、TNM分期越高、有淋巴血管间隙浸、有淋巴结转移、有复发,血清miR-329-3p、miR-34a-5p表达水平越低(P0. 05); CEA与miR-329-3p、miR-34a-5p呈负相关(P0. 05); miR-329-3p、miR-34a-5p两者AUC相近(P0. 05),两者诊断结宫颈癌的灵敏度、特异度相近(P0. 05); miR-329-3p、miR-34a-5p阳性组3年生存率及生存期均明显高于miR-329-3p、miR-34a-5p阴性组(P0. 01)。结论 miR-329-3p、miR-34a-5p在宫颈癌患者血清的表达量降低,miR-329-3p、miR-34a-5p在宫颈癌的发生发展过程中起抑制作用,miR-329-3p、miR-34a-5p高表达可提高宫颈癌患者预后; miR-329-3p、miR-34a-5p具有较高的灵敏度、特异度,可作为诊断宫颈癌的生物学标志物。     

不同剂量γ射线对人外周血miRNA的表达影响

目的 利用高通量miRNA测序和生物信息学技术，筛选人外周血中辐射敏感的miRNA分子，为辐射损伤提供早期诊断指标。方法 采集健康成年男性的外周血，给予0.2 Gy和2.0 Gy γ射线照射，于照射后6 h提取总RNA，应用高通量miRNA测序手段获得差异的miRNA，qRT-PCR方法验证部分差异的miRNA，通过mirdbV6和Target Scan7.1数据库预测共同差异miRNA的靶基因，并进行KEGG生物信息学分析。结果 人外周血经不同剂量 γ 射线照射后6 h，0.2 Gy组差异miRNA有10个，2 个表达上调，8 个表达下调；2.0 Gy作用后共鉴定出9 个表达上调、12 个表达下调miRNA分子，差异有统计学意义（P < 0.05）。其中有5个miRNA在2个剂量组均发生显著变化。RT-PCR实验结果表明有4个miRNA，miR-23c、miR-1287-5p、miR-219a-3p、miR-320d与测序结果一致。生物信息学结果表明，在2个剂量组均差异表达的miRNA可能通过参与调控MARK、RAS、P53、RIG-I等信号通路影响细胞增殖、凋亡、DNA损伤修复及免疫调控。结论 miR-23c、miR-1287-5p、miR-219a-3p、miR-320d分子有望成为辐射损伤新的血液标志物。     

miR-146a-5p及miR-9-3p对炎症反应及脂代谢调节因子的作用

目的 通过检测microRNA-146a-5p(miR-146a-5p)、microRNA-9-3p(miR-9-3p)对HepG2细胞白介素受体相关激酶-1(interleukin receptor-associated kinase-1,IRAK-1)、ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding gassette transporter A1,ABCA1)蛋白水平表达的影响，探讨miR-146a-5p及miR-9-3p对炎症反应及脂代谢调节因子作用。方法 以HepG2细胞为试验对象，分别进行miR-146a-5pmimics转染及miR-9-3pmimics转染，采用Westernblot检测miR-146a-5p对HepG2细胞IRAK-1蛋白表达的影响及miR-9-3p对HepG2细胞ABCA1蛋白水平表达的影响。结果 miR-146a-5p转染组IRAK-1蛋白水平显著低于对照组；miR-9-3p转染组ABCA1的蛋白水平显著低于对照组，差异均具有统计学意义（P=0.001）。结论 miR-146a-5p能够显著下调HepG2细胞IRAK-1蛋白表达，miR-9-3p能...     

MicroRNA 在多囊卵巢综合征中的表达及作用

非编码微小RNAs（microRNAs,miRNAs）主要在转录后水平上调控基因表达,异常miRNA表达与胰岛素抵抗、糖尿病、炎症及各种癌症形成有关。多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）患者血清及卵泡液中miRNAs表达谱存在差异,其异常的miRNAs表达能够通过影响基因转录后水平,参与PCOS的发生发展。综述miR-93、miR-222、miR-92a/b、miR-224、miR-320、miR-9、miR-483-5p、miR-513a-3p、miR-24、miR-133b、miR-26b和miR-378在PCOS患者的胰岛素抵抗、性激素合成和分泌、颗粒细胞增生、卵泡发育异常及排卵障碍中的作用,探讨miRNA在PCOS发病机制中的作用。     

Study on the preventive effect of tea on DNA damage of the buccal mucosa cells in oral leukoplakias induce by cigarette smoking]

In order to study the preventive effect of tea on DNA damage induced by cigarette smoking and to provide further evidence on the protective effects of tea in human cancer, a 6-month, double-blind and randomized placebo-controlled intervention trial was carried out. The effect of tea on micronuclei frequency in exfoliated oral buccal mucosa cells in 36 oral leukoplakias of smokers was investigated. A kind of mixed tea given in an oral dose of 3 g/day and a concentration of 0.1% smeared on mucosa lession three times a day for 3 months and 6 months, significantly decreased the micronuclei formation in exfoliated oral buccal mucosa cells in subjects with oral leukoplakias. In contrast, there was no change in the micronuclei frequency after 6 months in the placebo group. The results indicate that mixed tea may reduce the oral cancer risk by preventing DNA damage in oral leukopiakias induced by cigarette smoking.     

Studies in oral leukoplakias. Prevalence of leukoplakia among 10,000 persons in Lucknow, India, with special reference to use of tobacco and betel nut

Oral carcinoma has been shown to be correlated with the use of tobacco in various parts of India. In a large-scale dental survey conducted in Lucknow, Bombay and Bangalore various precancerous conditions were investigated and studied for their possible relation to smoking and chewing habits. This paper reports the prevalence of oral leukoplakia among 10 000 dental-clinic patients in Lucknow and the correlation of the condition with the use of tobacco and betel nut in the study population.