肺癌诊断相关miRNA标志物的筛选和验证

目的 获得肺癌组织和正常肺部组织中差异表达的miRNA用于肺癌的早期诊断.方法 首先运用miRNA芯片比较5对来自临床的正常肺部组织和肺癌组织,筛选差异性表达的miRNA,然后用荧光实时定量PCR进行鉴定.最后用ROC曲线分析评价特定miRNA标志物区分肺癌组织与正常肺部组织的能力.结果 miR-10b-5p和miR-199a-5p在肺癌组织中的相对表达量(2.76±0.71;2.05±0.38)显著高于肺部正常组织中的相对表达量(1.00±0.17;0.96±0.18),差异有统计学意义(t=2.40、2.56,P＜0.05).ROC曲线评价miR-10b-5p和miR-199a-5p区分肺癌组织和肺部正常组织的能力,曲线下面积(AUC)分别为0.731和0.672.两个miRNA联合区分肺癌组织和肺部正常组织的AUC为0.773,灵敏度为57.9％,特异性为94.7％.结论 miR-10b-5p和miR-199a-5p联合可作为候选肿瘤标志物组合用于早期肺癌诊断.     

利用优化的显微技术观察和定位Merm1/Wbscr22在人肺癌细胞NCI-H1299中的表达

目的 优化细胞免疫荧光染色技术结合激光扫描共聚焦显微镜技术的实验步骤,观察并定位Merm 1/Wbscr22在人肺癌细胞NCI-H1299中的表达,以期对后续深入研究Merm1/Wbscr22的分子功能提供技术支持.方法 采用Western blot 及细胞免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术观察Merm1/Wbscr22在NCI-H1299细胞的表达与定位,改进并优化免疫荧光染色实验步骤.结果 Merml/Wbscr22蛋白在NCI-H1299细胞内过量表达,并定位于细胞核内.细胞免疫染色步骤显著地影响Texas Red-鬼笔环肽的非特异性染色及F-actin、Merm1/Wbscr22、细胞核DNA染色荧光的强度.结论 结合细胞免疫荧光染色技术与激光扫描共聚焦显微镜技术可以清楚地观察Merm1/Wbscr22在人肺癌细胞NCI-H1299的表达与定位,该技术的最优实验步骤是细胞固定、透膜、封闭、Texas Red-鬼笔环肽标记F-actin、一抗结合、二抗结合、DAPI标记细胞核DNA,最后共聚焦显微镜成像,这样既能减少Texas Red-鬼笔环肽的非特异性染色,各组分荧光强度又足够清晰利于观察.     

宫颈癌HeLa细胞内SKP2结合蛋白的筛选和功能预测

目的： 通过免疫共沉淀与质谱分析技术从宫颈癌HeLa细胞中获取与S期激酶相关蛋白2 （S-phase kinase-associated protein 2,SKP2）结合的蛋白质群体并预测其生物功能。 方法： 以免疫共沉淀与Western blotting技术建立SKP2免疫共沉淀体系, 以SDS-PAGE和银染技术获得SKP2结合蛋白的特异条带,通过质谱分析技术获得可能与SKP2结合的蛋白群体,应用生物信息 学技术对筛选得到的蛋白进行GO分析与KEGG分析。 结果： HeLa细胞内存在一定水平的SKP2蛋白表达,可进行免疫共沉淀 反应;成功建立了SKP2免疫共沉淀体系,并获得SKP2结合蛋白样品;针对差异的凝胶条带进行质谱分析,共鉴定出SKP2结合蛋 白563个;设定筛选条件后,获得可信度较高的SKP2蛋白270个,进行GO分析与KEGG分析后初步预测了结合蛋白参与的细胞 功能和信号通路。 结论： 从宫颈癌HeLa细胞中成功筛选获取SKP2 结合蛋白,为后续筛选靶标结合蛋白和寻找细胞靶向药物奠 定了基础。     

microRNA调控的病毒载体及其应用研究

microRNA是一类高度保守的不编码蛋白质的单链小分子RNA,主要通过与mRNA(少数DNA)相互结合使靶基因沉默.它参与调控生物体的各种活动,包括发育、分化、细胞凋亡、脂肪代谢、病毒感染和癌症形成等.基因治疗的成功应用依赖于有效的运载系统.目前为止,最有效的基因治疗载体来自多种方式多种步骤改造的病毒.此文就miRNA调控的病毒载体及其应用研究作了综述.     

自身抗体分子在肺癌早期诊断中的应用

肺癌居癌症病死率首位,早期无明显临床症状,80％的肺癌患者就诊时已属中晚期,其中约75％的患者发现有转移灶的存在,治疗预后较差,总的5年生存率不超过15％.美国国立癌症研究所统计资料显示,如在肺癌患者Ⅰ期发现并治疗,其五年生存率可达90％;而诊断治疗发现在Ⅱ期以后,则五年生存率急剧降至20％以下.因此,采用高度灵敏的检测方法,尽可能及早发现肺癌,是治疗肺癌的有效手段.     

定量PCR分析人肺癌细胞NCI-H1299基因表达的内参基因选择

目的 评价实时荧光定量PCR分析人肺癌细胞NCI-H1299中Merml/Wbscr22基因表达时6个候选内参基因表达的稳定性,筛选最适的内参基因.方法 选择ACTB、B2M、GAPD、HPRT1、RPL32及TBP作为候选内参基因,利用geNorm,NormFinder及RefFinder程序分析实时荧光定量PCR数据,评价6个候选内参基因在NCI-H1299细胞株中的表达稳定性,筛选最适内参基因,同时观察选用不同内参基因对目的基因相对表达量分析的影响.结果 6个候选内参基因在NCI-H1299细胞株中的表达稳定性由强至弱排序为:RPL32＞ HPRTl＞ GAPD＞ ACTB＞ TBP＞ B2M,选择不同内参基因影响目的基因Merml/Wbscr22的相对表达量.结论 RPL32+ HPRT1是实时荧光定量PCR分析人肺癌细胞NCI-H1299中Merml/Wbscr22基因表达的最适内参基因组合.     

乳腺癌耐药机制研究进展和应对策略

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其分型的多样性与临床治疗密切相关。近年来随着分子生物学的快速发展,乳腺癌的治疗进展迅速,效果显著,但治疗方案产生的耐药仍是临床一线治疗最常遇到的问题。本文就不同类型的乳腺癌及其临床特征进行了分类分析,针对不同分型的治疗方案和耐药机制进行了总结和探讨,旨在通过研究治疗的分子机制和可能存在的耐药机制,对临床治疗起到引导作用。