三种品系白纹伊蚊转铁蛋白基因表达量的比较分析

目的 进行不同品系白纹伊蚊转铁蛋白基因表达量的分析.方法 据二维电泳获得肽段序列设计引物扩增基因片段,荧光定量PCR检测在白纹伊蚊抗性品系、敏感品系、现场采集品系蚊体内的表达水平差异.结果 成功扩增白纹伊蚊转铁蛋白基因片段,荧光定量PCR表明转铁蛋白基因在抗性品系蚊体内的表达量是敏感品系的10.51倍,现场品系是敏感品...     

淡色库蚊CYP6F1基因的克隆及表达差异的鉴定

目的克隆淡色库蚊细胞色素P450（CYP6F1）基因并进行表达差异的鉴定。方法采用RT-PCR技术和RACE策略，从淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系Ⅳ龄幼虫中克隆细胞色素P450基因（CYP6F1），用相应的软件进行生物信息学分析，并用实时定量PCR和RT-PCR技术分析敏感、抗性品系蚊的CYP6F1表达水平及对蚊各期CYP6F1进行表达鉴定。结果成功克隆出CYP6F1基因，基因全长1639bp，开放阅读框为1527bp，编码508个氨基酸（GenBank登录号：AY662654）。序列分析显示该基因与已克隆的日本致倦库蚊细胞色素P450基因（CYP6F1）有99％的同源性，并具有所有的细胞色素P450基因的保守性特征，一个膜锚定信号、两个还原酶结合位点、一个的典型的血红素蛋白结合位点和ETLR基序等。实时定量PCR和半定量RT—PCR结果表明，CYP6F1在淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系中表达水平高于敏感品系，且．CYP6F1基因在淡色库蚊各个发育阶段有不同的表达。结论CYP6F1基因可能与杀虫剂抗药性相关，并且在各个发育阶段有不同的表达。     

家蝇抗溴氰菊酯的分子机制研究

目的研究家蝇抗溴氰菊酯的分子机制。方法在实验室选育家蝇抗溴氰菊酯品系,根据P450基因CYP6D1的保守序列设计合成引物;用PCR方法从敏感品系和抗性品系扩增特异性片段。结果用PCR方法从敏感品系和抗性品系个体都能扩增出一条约210bp的特异性片段,从片段大小和条带明亮程度上均未显示出二者之间的差异,初步表明抗性家蝇P450基因在DNA水平上没有明显的变化。RT-PCR结果多次重复显示抗性品系的扩增带明显比敏感品系的亮,揭示二者RNA的含量可能不同,抗性品系P450基因的反转录活性可能升高。结论家蝇对溴氰菊酯的抗性可能与其体内P450基因的反转录活性升高有关。     

家蝇拟除虫菊酯抗药性的分子生物学监测

目的　建立一种可以早期检测昆虫拟除虫菊酯抗药性的方法 ,以利于抗药性的控制。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)方法 ,用自行设计的特异引物 ,对昆虫的钠离子通道基因进行扩增。结果　共检测敏感家蝇和溴氰菊酯抗性家蝇各 2 0只 ,在所有抗性家蝇的钠离子通道基因中均扩增出特定大小基因片段 ( 183bp) ,表明基因发生了抗性突变。而在所有敏感家蝇的钠通道基因中均未扩增出该基因片段 ,表明未发生基因突变。结论　PCR能够在短时间内完成对昆虫拟除虫菊酯抗性的检测 ,为早期监测昆虫对拟除虫菊酯的抗药性提供了快速可行的方法。     

山东省济宁市白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性与kdr等位基因突变观察

目的了解山东省济宁市白纹伊蚊现场群体对溴氰菊酯的抗药性,并检测击倒抗性(kdr)等位基因突变情况,为kdr突变作为杀虫剂抗性检测的生物标记提供理论依据。方法 WHO成蚊接触筒法测定白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性,PCR扩增电压门控钠离子通道(VGSC)基因部分片段,测序后检测kdr等位基因突变情况。结果 WHO成蚊接触筒检测济宁白纹伊蚊雌蚊死亡率为44.58%,在VGSC基因1534氨基酸位点检测到3种等位基因类型:野生型TTC (F1534)(71.43%)和突变型TCC(F1534S)(13.69%)、TTG(F1534L)(14.88%);检测到5种等位基因型:野生型纯合子TTC/TTC,突变型纯合子TCC/TCC、TTG/TTG,以及野生/突变型杂合子TTC/TTG、TTC/TCC。结论济宁市白纹伊蚊对溴氰菊酯已产生抗药性,并监测到其1534氨基酸位点上存在2种kdr等位基因点突变,可能与杀虫剂的长期选择压力有关。     

高分辨率熔解曲线分析检测家蝇kdr基因突变

目的探讨kdr基因在家蝇溴氰菊酯抗性增加中的作用。方法首次将高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析与半定量PCR相结合,用于分析家蝇抗性基因kdr扩增和突变情况。对扩增的PCR产物进行测序来验证HRM准确性。结果与敏感品系家蝇相比,kdr的mRNA表达量在现场品系家蝇中没有显著改变(P>0.05)。使用HRM对kdr进行突变分析,发现所有样本均为同一基因型。经核酸测序,该扩增片段没有突变位点。结论杭州家蝇溴氰菊酯抗性增加与kdr基因无关。     

正常细胞与镉转化细胞抑制消减cDNA文库构建

目的 构建正常人支气管上皮细胞(16HBE)与氯化镉诱导转化16HBE细胞间差异表达基因的消减cDNA文库.方法 以16HBE为驱动子,氯化镉诱导转化16HBE细胞为检测子,应用抑制性消减杂交(SSH)方法构建cDNA文库,经2次消减杂交和2次PCR后,将巢式PCR产物插入载体,随机挑选克隆进行鉴定.结果 得到纯度高及完整性好的总RNA和mRNA,并扩增出良好的双链cDNA,cDNA与接头的连接效率＞25％,最终使差异表达基因得到富集;经蓝白菌落筛选,获得1 200余个白色阳性克隆;随机挑选50个白色克隆进行PCR扩增,显示96％克隆均有100 ～ 600 bp的插入片段,这些片段可能是差异表达基因cDNA片段,提示用SSH法及T/A克隆技术有效构建了两细胞株间差异表达基因的消减cDNA文库.结论 成功创建正常16HBE细胞与镉转化16HBE细胞差异表达基因消减cDNA文库.     

淡色库蚊溴氰菊酯抗性与敏感品系单蚊杂交群体的构建

目的建立淡色库蚊溴氰菊酯抗性与敏感品系单蚊杂交群体,并对比观察杂交系与自交系的生物学特性,为鉴定抗性基因遗传多态性和遗传作图奠定基础。方法正交组以抗性品系为母本交配敏感品系雄蚊,即R-S组;反交组以抗性品系雄蚊交配敏感品系雌蚊,即S-R组;对照为抗性品系和敏感品系自交,即R-R组和S-S组。观察比较4组产卵率、孵化率及各发育阶段成活率。WHO蚊幼虫浸渍法检测各组幼虫对溴氰菊酯的抗性水平。结果产卵率:S-S组为94.44%,R-R组为100%,R-S组和S-R组分别为61.11%和72.22%;孵化率:S-S组和R-R组分别为94.12%和100%,R-S组和S-R组分别为36.36%和69.23%;各组幼虫成活率,成蛹率及羽化率均达到90%以上,无显著性差异;抗性水平:R-R组、R-S组和S-R组F2代的抗溴氰菊酯水平分别是敏感品系的53倍、29倍和10倍。结论杂交群体F2代的抗性水平位于两亲本之间,符合遗传学规律。     

淡色库蚊抗性种群和敏感品系中铁蛋白基因表达量的分析

目的对淡色库蚊抗性种群和敏感品系中的铁蛋白基因表达量进行分析。方法设计引物,扩增目的基因全长、纯化测序、序列分析,荧光定量PCR检测铁蛋白基因的表达水平;采用假设检验中的t检验方法,对2种不同处理的淡色库蚊样本体内铁蛋白基因表达量进行统计分析。结果成功扩增淡色库蚊铁蛋白基因片段,经荧光定量PCR测定,淡色库蚊敏感品系铁蛋白荧光定量(F敏)和抗性种群铁蛋白荧光定量(F抗)平均值分别为11.41和15.73,内参基因荧光定量(β敏和β抗)平均值分别为10.03和18.27,铁蛋白基因在淡色库蚊抗性种群中的表达量是敏感品系的15.08倍,t检验结果显示,两样本体内铁蛋白基因表达差异有统计学意义(t=26.100,P0.001)。结论淡色库蚊铁蛋白基因可作为蚊虫抗性检测及治理的靶标基因。     

河南省部分地区溴氰菊酯抗性中华按蚊代谢酶活性的调查研究

目的 了解河南省部分地区溴氰菊酯抗性中华按蚊的代谢酶活性,探讨中华按蚊对溴氰菊酯的代谢抗性机制.方法 2010年8月在河南省桐柏、淮滨县和永城市采集中华按蚊样本,子1代成蚊用接触筒内成蚊药膜滤纸接触法,按照WHO标准,区分溴氰菊酯抗性与敏感样本,并用微量滴定板法测定抗性样本的非特异性酯酶、谷胱甘肽S转移酶(GST)和P450单加氧酶活性.以实验室敏感品系蚊为对照.结果 淮滨、永城和桐柏三地中华按蚊抗性样本的A、B型非特异性酯酶活性均高于对照组(t=2.41,3.30,10.31,7.67,7.90,11.17,均P＜0.05);永城和淮滨地区中华按蚊抗性样本GST活性高于对照组的敏感品系(t=3.687,2.484,均P＜0.05);淮滨、永城及桐柏三地的中华按蚊抗性样本和敏感品系的P450单加氧酶活性的差异均无统计学意义(t=-1.489,0.397,-0.413,均P＞0.05).结论 永城、淮滨两个地区中华按蚊的溴氰菊酯抗性与酯酶和GST活性增高有关;桐柏地区中华按蚊的溴氰菊酯抗性与酯酶活性增高有关.     

广州地区流产妇女蜕膜组织中氧化应激指标评价

目的通过检测自然流产妇女蜕膜组织中丙二醛（MDA）、过氧化氢（H2O2）的含量,以及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）的活力,探讨氧化应激与自然流产的关系。方法于2010年10月至2011年4月在广州3家医院收集进行流产刮宫术的孕妇蜕膜,选取正常早孕妇女为对照组。用化学比色法对蜕膜组织中MDA、H2O2、SOD、CAT、GSH—Px进行测定。结果共收集流产刮宫术的孕妇蜕膜124例,包括62例自然流产妇女及62例正常早孕的对照组妇女。自然流产组与正常早孕组平均年龄分别为（28．63±6．08）、（25．16±5．41）岁,BMI分别为20．99±3．82、19．32±2．17。在自然流产组和正常早孕组中,无流产史妇女分别占41．9％、66．1％,流产1次以上的分别占24．2％、12．9％。自然流产妇女蜕膜中MDA、H202水平分别为（1．23±0．65）、（35。68±22．48）mmol／gprot,而正常早孕妇女分别为（0．96±0．41）、（26．42±11．74）mmol／gprot,自然流产组均高于正常早孕组（P〈0．01）;自然流产妇女蜕膜中SOD活力为（18．42±7．90）U／mgpro,而正常早孕组为（21．02±6．00）U／mgpro,自然流产组低于正常早孕组（P〈0．05）;2组CAT、GSH—Px活力差异无统计学意义（P〉0．05）。MDA与H202、CAT呈正相关（r=0．533、0．477,均P〈0．01）,而与SOD呈负相关（r=-0．199,P〈0．05）。H202与CAT呈正相关（r=0．475,P〈0．01）,与SOD呈负相关（r=-0．324,P〈0．01）。结论自然流产蜕膜组织中存在氧化应激,脂质过氧化增加和抗氧化酶活力减弱可能与自然流产的发生有关。     

B（a）P和DEHP联合染毒对HepG2细胞CYP1A1和CYP3A4酶活性的影响

[目的]研究邻苯二甲酸二乙基己基酯[di-（2-ethylhexyl）phthalate,DEHP]和苯并㈦芘[benzo（a）pyrene,B（a）P]联合染毒人肝癌细胞株（HepG2细胞）对其细胞色素P450酶系1A1（cytochrome 1A1,CYP1A1）和细胞色素P450酶系3A4（CYP3A4）酶活性的影响。[方法]分别用B（a）P64．0μmol／L和DEHP62．5、125．0、250．0、500．0、1000．0μmol／L单独染毒和两者联合染毒HepG2细胞48h和72h。溶剂对照组为二甲基亚砜（dimethyl suffoxide,DMSO〈1‰）。用CCK8法检测细胞活性;用7-乙氧基异吩嗯唑-O-去乙氧基酶和7-乙氧基香豆素O-去乙基酶（EROD和ECOD）实验评价细胞CYP1A1和CYP3A4酶活性;分别用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测CYP1A1和CYP3A4基因的mRNA和蛋白质表达水平。[结果]与DEHP单独染毒组相比,联合染毒组细胞的存活率明显下降（P〈0．01）;EROD和ECOD活性却明显增加（P〈0．05,P〈0．01）;联合染毒组CYP1A1基因仅有mRNA表达增加,但CYP3A4基因在mRNA和蛋白质表达水平均较DEHP单独染毒组明显升高（P〈0．01）。[结论]DEHP和B（a）P联合染毒诱导了HepG2细胞CYP1A1和CYP3A4酶活性,并在mRNA和蛋白质水平对CYP1A1和CYP3A4的表达量产生一定影响。     

槲皮素衍生物HPS5对酒精诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨槲皮素衍生物HPS5对酒精导致的PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法酒精诱导PC12细胞建立模型,MTT法检测细胞的抑制率,比较治疗后乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH)的水平,Western-Blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果与模型组比较,25、50、100 mmol/L HPS5能显著下调酒精对PC12细胞增殖的抑制作用[(28.87±2.34)%、(16.49±2.13)%、(10.31±1.17)%],减少LDH的漏出[(36.47±3.29)、(31.67±3.25)、(29.34±2.87)U/L],降低MDA水平[(1.89±0.14)、(1.61±0.51)、(1.48±0.41)nmol/mg],升高GSH[(81.25±8.33)、(92.14±9.34)、(96.24±11.24)mg/g]、SOD[(3.26±0.69)、(4.17±0.68)、(4.24±0.71)NU/mg]的水平,下调Bax蛋白[(0.31±0.03)、(0.29±0.03)、(0.27±0.03)]表达,升高Bcl-2蛋白[(0.34±0.01)、(0.31±0.02)、(0.28±0.02)]表达水平。尤其中高剂量组更加明显,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 HPS5对酒精诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,增强细胞的抗氧化能力以及上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达可能是其作用的机制之一。     

陕西省铜川市陈炉镇景区蚊媒监测分析

目的全面掌握铜川市陈炉镇景区蚊媒分布情况,分析蚊媒危害程度,为科学防制提供依据。方法成蚊调查采用诱蚊灯法和人帐诱法,幼虫检查民居外环境容器积水的阳性率,计算容器指数、房屋指数、百户指数评价幼虫密度。结果诱蚊灯法蚊密度为0.0874只/（灯·h）,成蚊密度7月最高为0.2018只/（灯·h）。各环境中以农家乐成蚊密度最高,为0.1429只/（灯·h）;其次为民居,为0.1078只/（灯·h）。帐诱法蚊密度为7.4419只/（帐·h）,成蚊密度以8月最高,为30.6000只/（帐·h）。民居容器指数平均为14.48%,以8月最高（21.87%）,房屋指数为35.88%,百户指数为76.08%。结论陈炉镇风景区环境中存在大量伊蚊孳生地,主要以各种储水容器为主,而且白纹伊蚊密度较高,应落实积水清除措施,控制白纹伊蚊密度。     

微囊藻毒素-LR对活性氧产生及细胞色素P450各亚型表达的影响

[目的]探讨低剂量微囊藻毒素-LR（MCLR）诱导细胞内活性氧（ROS）产生的潜在来源。[方法]采用转染有机阴离子转运多肽OATP1B3的人胚肾细胞株HEK293-OATPIB3,设3个浓度的MCLR处理组（10、20、50nmol／L）和未处理对照组（0．1％二甲基亚砜）。染毒4、24h后,测定乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,用荧光探针法检测细胞内ROS水平,采用实时荧光定量聚合酯链反应检测细胞色素P4501A1（CYP1A1）、1A2、2E1 mRNA的表达水平。[结果]低浓度（10-50nmol／L）的MCLR作用HEK293-OATP1B3细胞4h未产生明显细胞毒性;24h后,LDH漏出率随着处理浓度的增加而增加。50nmol／LMCLR处理细胞4h后引起ROS水平明显升高（P〈0．01）。同时,MCLR还上调了CYP2E1的mRNA表达水平（P〈0．01）;但未影响CYP1A1 mRNA的表达;对照组和MCLR处理组的CYP1A2 mRNA表达水平均非常低。[结论]低剂量MCLR可诱导细胞内ROS产生和上调CYP2E1 mRNA表达,提示CYP2E1可能是MCLR诱导ROS产生的一个潜在来源。     

西藏察隅县营区蚊虫的组成及分布特征

目的 调查察隅县营区室内外蚊虫的组成及其空间分布情况。方法 采用二氧化碳诱蚊灯法和帐诱法,对院落、畜圈外周和野外林地3种栖息环境内的蚊虫进行调查取样、分类鉴定和计数,所获资料分别应用数量和分布型进行统计分析。结果 本次调查共捕获蚊类2亚科4属6种共822只,其中,伪杂鳞库蚊数量最多,占捕获总数的86.25%;其次是多斑按蚊和骚扰阿蚊,分别占5.47%和5.23%;在不同栖息环境捕获次数中,人房中最高是伪杂鳞库蚊,占分布类型0.476,畜圈周围较高的是带足按蚊、多斑按蚊和骚扰阿蚊,占分布类型0.750、0.818和0.615,刺扰伊蚊仅在林地捕获。结论 伪杂鳞库蚊不仅在数量上占优势,并偏好入室活动;提示在防治时室内采取滞留喷洒,室外重点进行孳生地治理;带足按蚊和多斑按蚊偏向于在畜圈活动,畜圈应是该2种蚊虫的重点防治区域。     

广州市蚊虫密度与气候因素的相关性

目的分析气候因素对蚊虫密度的影响,为蚊虫介导传染病的监测和防控提供科学依据。方法将1995-2002年广州市主要城区人工小时捕蚊数监测资料与同期的月平均气压、月平均气温、月平均相对湿度、月平均绝对湿度、月平均蒸发量、月平均降雨量、月日照时间、月平均风速等气候资料进行等级相关和多元回归分析。结果广州市在连续7年里人工小时捕蚊总数(包括多种蚊虫)即总蚊虫密度与同期的蒸发量、相对湿度、绝对湿度、日照、温度、降雨量均呈正相关关系(P0.05),而与气压有负相关关系(P0.05);而人工小时捕获白纹伊蚊数即白蚊伊蚊密度与同期的蒸发量、相对湿度、日照、温度、降雨量均呈正相关关系(P0.05),与气压呈负相关关系(P0.05)。在回归分析中,对人工小时捕蚊总数有影响的仅绝对湿度一个因素,复相关系数为0.835,决定系数为0.697;而对人工小时捕获白纹伊蚊数有影响的因素为日照、绝对湿度和温度,复相关系数为0.850,决定系数为0.723。结论绝对湿度对总蚊虫密度有明显的影响,日照、绝对湿度和温度对白纹伊蚊密度有明显影响。     

南京市城区蚊虫综合治理效果的研究

目的研究在城市生态环境中采取针对蚊幼防治的蚊虫综合治理效果。方法在南京市的试验区，开展健康教育和蚊虫孳生地处理，采用诱蚊灯法和诱蚊诱卵器法分别监测库蚊和伊蚊密度。结果采取综合治理措施后，试验区库蚊和伊蚊的相关密度指数分别为0．123和0．132，与对照区相比，密度下降率分别为87．7％和86．8％，蚊虫密度平均为1．2只／灯，阳性孳生地下降率为95．5％。结论针对蚊幼的综合治理有较好的防治效果。采取政府机构开展人群的健康教育、居民清除自家的各种蚊幼孳生地、专业除害队伍清除公共地段的蚊幼孳生地，并对无法清除积水的区域投加灭蚊幼缓释剂的蚊虫综合治理策略，可在城市灭蚊工作中推广应用。     

灯盏花素液促进大鼠深Ⅱ度烧伤愈合的实验研究

目的观察灯盏花素注射液促大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合的效果,探讨其可能机制。方法设计大鼠深Ⅱ度烧伤创面模型,以灯盏花素注射液治疗为实验组,对照记录创面痊愈时间,并取伤后7d创面组织,测定组织中羟脯氨酸、胶原酶-1、一氧化氮、超氧化物歧化酶和丙二醛含量,统计分析各项结果。结果实验组创面愈合时间[（12±1．428）d]显著短于对照组[（14．75±1．291）d]（P〈0．05）;实验组创面组织羟脯氨酸[（3．17±1．136）mg／g]、胶原酶-1[（1．28±0．651）mg／g]、一氧化氮[（2．62±0．30）μmol／gprot]、超氧化物歧化酶[（221．25±25．94）U／mgprot]含量均高于对照组[（7．324-2．173）mg／g、（5．38±0．363）mg／g、（7．28±0．40）p,mol／gprot、（296．364-29．29）U／mg—prot]（P〈0．05或P〈0．01）;而丙二醛含量[（6．36±0．93）nmolfmgprot]则低于对照组[（1．25±0．59）nmol／mgprot]（P〈0．05）。结论灯盏花素注射液可以缩短大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合时间,可能与扩张血管、改善循环、清除氧自由基及降低脂质过氧化反应有关。     

血清NT-proBNP及心肌酶谱与先天性心脏病的相关性

目的研究先天性心脏病患者血清中NT-proBNP、CK-MB、CK、AST、LDH及α-HBDH的表达水平,进一步分析血清中NT-proBNP及心肌酶谱表达水平与先天性心脏病的相关性。方法入选30例由先天性心脏病导致心力衰竭的患者和30例正常健康体检者,采集所有入选者外周静脉血2 ml,用电化学发光免疫分析法测定NT-proBNP,DS-301型全自动生化分析仪测定心肌酶谱。结果先天性心脏病患者血清中NT-proBNP水平,随着心功能的分级不同(Ⅰ^Ⅳ分别为:92.1、146.7、200.8、232.6 pg/ml),呈明显的上升趋势,与正常体检者对照组(46.7 pg/ml)比较有显著的差异。患者血清中心肌酶谱水平(包括CK、CK-MB、LDH、以及α-HBDH)与NT-proBNP水平呈相同的上升趋势。结论先天性心脏病患者血清中NTproBNP、CK-MB、CK、AST、LDH及α-HBDH的表达水平与先天性心脏病相关,同时对心功能有良好反映。