高分辨率熔解曲线分析检测家蝇kdr基因突变

目的探讨kdr基因在家蝇溴氰菊酯抗性增加中的作用。方法首次将高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析与半定量PCR相结合,用于分析家蝇抗性基因kdr扩增和突变情况。对扩增的PCR产物进行测序来验证HRM准确性。结果与敏感品系家蝇相比,kdr的mRNA表达量在现场品系家蝇中没有显著改变(P>0.05)。使用HRM对kdr进行突变分析,发现所有样本均为同一基因型。经核酸测序,该扩增片段没有突变位点。结论杭州家蝇溴氰菊酯抗性增加与kdr基因无关。     

家蝇拟除虫菊酯抗药性的分子生物学监测

目的　建立一种可以早期检测昆虫拟除虫菊酯抗药性的方法 ,以利于抗药性的控制。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)方法 ,用自行设计的特异引物 ,对昆虫的钠离子通道基因进行扩增。结果　共检测敏感家蝇和溴氰菊酯抗性家蝇各 2 0只 ,在所有抗性家蝇的钠离子通道基因中均扩增出特定大小基因片段 ( 183bp) ,表明基因发生了抗性突变。而在所有敏感家蝇的钠通道基因中均未扩增出该基因片段 ,表明未发生基因突变。结论　PCR能够在短时间内完成对昆虫拟除虫菊酯抗性的检测 ,为早期监测昆虫对拟除虫菊酯的抗药性提供了快速可行的方法。     

淡色库蚊CYP6F1基因的克隆及表达差异的鉴定

目的克隆淡色库蚊细胞色素P450（CYP6F1）基因并进行表达差异的鉴定。方法采用RT-PCR技术和RACE策略，从淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系Ⅳ龄幼虫中克隆细胞色素P450基因（CYP6F1），用相应的软件进行生物信息学分析，并用实时定量PCR和RT-PCR技术分析敏感、抗性品系蚊的CYP6F1表达水平及对蚊各期CYP6F1进行表达鉴定。结果成功克隆出CYP6F1基因，基因全长1639bp，开放阅读框为1527bp，编码508个氨基酸（GenBank登录号：AY662654）。序列分析显示该基因与已克隆的日本致倦库蚊细胞色素P450基因（CYP6F1）有99％的同源性，并具有所有的细胞色素P450基因的保守性特征，一个膜锚定信号、两个还原酶结合位点、一个的典型的血红素蛋白结合位点和ETLR基序等。实时定量PCR和半定量RT—PCR结果表明，CYP6F1在淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系中表达水平高于敏感品系，且．CYP6F1基因在淡色库蚊各个发育阶段有不同的表达。结论CYP6F1基因可能与杀虫剂抗药性相关，并且在各个发育阶段有不同的表达。     

高分辨率熔解曲线分析检测家蝇cyp6d1基因突变

目的 探讨家蝇溴氰菊酯抗性机制.方法 使用高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析与半分析定量PCR相结合的方法,分析家蝇抗性基因cyp6d1突变和扩增情况.通过对扩增的PCR产物进行测序来验证HRM准确性.结果 与敏感品系相比,抗性品系cyp6d1基因的mRNA表达量显著增加(P=0.0002),抗性品系cyp6d1基因的mRNA表达量是敏感品系的50.7倍;使用HRM对cyp6d1进行突变分析,将其分为3种基因型,分别为A型(Tm=85.5℃)、B型(Tm=87.3℃)和C型(Tm=88.5℃);经测序,该HRM分析结果分别与3类基因序列型相对应.A型基因型为纯合的1087G、1101T和1155A(对应GenBank序列号U22367.1);C型基因型为纯合的1087A、1101G和1155G;B型基因型为A型和C型的杂合型.生物信息学分析表明,该突变为无意义突变.结论杭州市家蝇抗性品系cyp6d1基因mRNA表达量显著增加,可能是家蝇抗性增加的原因之一.     

高效氯氰菊酯抗性家蝇过氧化物酶性质变化研究

目的研究家蝇抗药性产生机制,为选择快速准确的监测技术和科学用药提供理论依据。方法通过对实验室培育的抗高效氯氰菊酯品系、抗性衰减品系及敏感品系家蝇的谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-PX）的活性及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,观察过氧化物酶对家蝇抗性产生的作用。结果抗性家蝇GSH-PX的活性明显增高,抗性品系家蝇相对活性达到165.89%,抗性衰减品系活性降低到70.13%。3个家蝇品系的电泳图谱中6组条带有较明显的差别。结论抗高效氯氰菊酯家蝇的过氧化物酶性质发生改变,对家蝇的抗药性产生可能起比较重要的作用。     

淡色库蚊敏感和抗氯氰菊酯品系铁调节蛋白基因表达量的分析

目的利用相对定量分析铁调节蛋白基因在淡色库蚊敏感和抗氯氰菊酯品系体内的表达量。方法设计引物、提取RNA、普通PCR、纯化测序、序列比对、荧光定量PCR,采用F检验和t检验对敏感和抗性品系淡色库蚊体内铁调节蛋白基因表达量进行统计学分析。结果将扩增的淡色库蚊铁调节蛋白基因片段进行序列比对,与致倦库蚊相似性较高。荧光定量PCR数据分析,淡色库蚊敏感品系(IRP_敏)和抗性品系(IRP_抗)铁调节蛋白Ct平均值分别为15.17和18.37,内参基因(β_敏和β_抗)Ct平均值分别为20.49和19.06,t检验显示两样本铁调节蛋白基因表达差异具有统计学意义(t=9.52,P0.001),铁调节蛋白基因在淡色库蚊抗性品系中的表达量降低。结论淡色库蚊铁调节蛋白可能参与了抗性机制。     

河南省部分地区溴氰菊酯抗性中华按蚊代谢酶活性的调查研究

目的 了解河南省部分地区溴氰菊酯抗性中华按蚊的代谢酶活性,探讨中华按蚊对溴氰菊酯的代谢抗性机制.方法 2010年8月在河南省桐柏、淮滨县和永城市采集中华按蚊样本,子1代成蚊用接触筒内成蚊药膜滤纸接触法,按照WHO标准,区分溴氰菊酯抗性与敏感样本,并用微量滴定板法测定抗性样本的非特异性酯酶、谷胱甘肽S转移酶(GST)和P450单加氧酶活性.以实验室敏感品系蚊为对照.结果 淮滨、永城和桐柏三地中华按蚊抗性样本的A、B型非特异性酯酶活性均高于对照组(t=2.41,3.30,10.31,7.67,7.90,11.17,均P＜0.05);永城和淮滨地区中华按蚊抗性样本GST活性高于对照组的敏感品系(t=3.687,2.484,均P＜0.05);淮滨、永城及桐柏三地的中华按蚊抗性样本和敏感品系的P450单加氧酶活性的差异均无统计学意义(t=-1.489,0.397,-0.413,均P＞0.05).结论 永城、淮滨两个地区中华按蚊的溴氰菊酯抗性与酯酶和GST活性增高有关;桐柏地区中华按蚊的溴氰菊酯抗性与酯酶活性增高有关.     

抗氯氰菊酯淡色库蚊P450特异性探针的制备及应用

目的 制备淡色库蚊氯氰菊酯抗性株细胞色素P450特异性DNA探针，并用于抗性品系与敏感品系的检测。方法 简并引物PCR法制备特异性DNA探针，生物素杂交检测氯氰菊酯抗性淡色库蚊。结果 摸索得到合适的区分抗性与敏感品系的探针浓度，在该探针浓度下抗性与敏感品系杂交点的阳性率有差异。结论 该方法为抗拟除虫菊酯类杀虫剂媒介昆虫基因检测的实用性研究及抗性分子生物学机制的研究打下了基础。     

基于白纹伊蚊转录组的溴氰菊酯抗性相关基因分析及验证

目的 通过对白纹伊蚊溴氰菊酯抗性品系(DR)和敏感品系(DS)进行转录组分析,筛选可能与抗性相关的差异表达基因。方法 提取白纹伊蚊实验室敏感品系(DS品系)、溴氰菊酯抗性品系(DR品系)的总RNA进行高通量测序,对差异基因进行COG和KEGG的功能注释与分析,筛选出可能与抗性相关的差异表达基因,并进行实时定量PCR验证。结果 DR品系的LC₅₀为2 087.75μg/L,相较于DS品系,抗性倍数为109.8倍,达到了高度抗性标准。RNA-seq测序后基于FPKM值进行差异性分析结果显示,差异表达的基因共有551个,其中在DR品系中上调表达基因有278个,下调表达基因有273个。COG和KEGG功能富集结果显示,显著性富集的通路和蛋白质功能预测均主要与物质代谢相关。基于此进一步分析了代谢抗性相关基因,且10个目标基因的RNA-seq结果与实时定量PCR结果在DR和DS品系中表达趋势具有一致性。结论 白纹伊蚊可能通过上调表达细胞色素P450基因、谷胱甘肽S转移酶基因、羧酸酯酶、表皮蛋白等基因应对杀虫剂的选择压力。     

三种品系白纹伊蚊转铁蛋白基因表达量的比较分析

目的 进行不同品系白纹伊蚊转铁蛋白基因表达量的分析.方法 据二维电泳获得肽段序列设计引物扩增基因片段,荧光定量PCR检测在白纹伊蚊抗性品系、敏感品系、现场采集品系蚊体内的表达水平差异.结果 成功扩增白纹伊蚊转铁蛋白基因片段,荧光定量PCR表明转铁蛋白基因在抗性品系蚊体内的表达量是敏感品系的10.51倍,现场品系是敏感品...     

鲍氏不动杆菌多药耐药与Ⅰ类整合子相关性的研究

目的 探讨鲍氏不动杆菌的多药耐药与I类整合子的相关性.方法 收集39株医院感染多药耐药鲍氏不动杆菌株及41株非多药耐药鲍氏不动杆菌株,以纸片扩散法敏感试验(K-B法)检测其耐药表型,以聚合酶链反应(PCR)方法检测Ⅰ类整合子的分布情况,分析Ⅰ类整合子与细菌耐药表型的相关性.结果 鲍氏不动杆菌对多种抗菌药物的耐药率均较高,除对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦敏感率较高外,对其他抗菌药物的耐药率均>40.0%;多药耐药鲍氏不动杆菌中Ⅰ类整合子阳性率为82.1%,非多药耐药菌株阳性率为26.8%,多药耐药菌与非多药耐药菌株Ⅰ类整合子阳性率差异有统计学意义(X~2=24.6,P<0.01);比较研究Ⅰ类整合子阳性菌株耐药表型与Ⅰ类整合子阴性菌株耐药表型发现,除了对亚胺培南敏感率均较高,对氨曲南均耐药,两者耐药率之间差异无统计学意义外,对其他抗菌药物耐药率差异均有统计学意义(P<0.05).结论 Ⅰ类整合子的表达与鲍氏不动杆菌多药耐药密切相关.     

白色念珠菌CDR基因表达与氟康唑体外药敏试验的关系研究

目的调查白色念珠菌临床株对氟康唑的耐药情况,研究白色念珠菌临床耐药基因的表达与氟康唑耐药之间的关系。方法采用M27-A2微量肉汤稀释法,对某院微生物实验室2010年分离保存的221株来自就诊患者的痰、中断尿、粪便和咽拭子的白色念珠菌进行氟康唑MIC值测定。以白色念珠菌18S RNA为内参照,采用RT-PCR技术观察比较耐药株和敏感株组在不同氟康唑浓度下CDR1和CDR2基因的转录水平。结果 221株白色念珠菌中,有57.47%（127株）对氟康唑敏感,10.86%（24株）剂量依赖敏感,31.67%（70株）耐药。不同药物浓度作用下,耐药株组CDR1和CDR2的表达量相对要高于敏感株组（P〈0.05）。结论白色念珠球菌对氟康唑耐药率较高,耐药株组CDR1和CDR2表达量高于敏感株组。     

福建省鼠伤寒沙门菌噬菌体型及耐药性检测

据１９７５年以来临测，福建省鼠伤寒沙门菌占沙门菌总数的２９．４３％，其噬菌体型常见有７种，但以７７７４型为王体，占４６．６％。对抗生素耐药性方面，９０年代初期较８０年代前期有极显著增加，氨基甙类丁胺卡那霉素外，耐药菌株增至５７．０％－７２．０％；老一代青霉素类与四环素类．硝基呋喃类增至７０．０％左右；对新一代广谱青霉素亦已迅速出现高比例的耐药菌株；对第一代与第二代头孢菌素类均已出现耐药菌株，仅对第三代敏感；对喹诺酮类部分品种已出现２０．０％的耐药菌株，但对氟呱酸、氟嗪酸、环丙氟哌酸仍全敏。８０年代初期多耐菌株主要集中在２或３耐占９７．０％，无６耐以上菌株；至９０年代前期２或３耐菌株降至２０．０％以内，而１０耐以上菌株则猛升至６６．０％，占主导地位。鼠伤寒菌耐药率的增加，耐药谱的加宽，多耐菌株的广泛出现已成为防治工作上亟待解决的问题。     

Comparison of Resistant and Susceptible Strains of Trichomons vaginalis to Metronidazole Using PCR Method

Background

Metronidazole is drug of choice recommended by WHO for treatment of trichomoniasis, however, some reports claims drug resistance in Trichomonas vaginalis isolates recently. The objective of this study was to determine the minimum lethal concentration (MLC) of metronidazole in resistant and sensitive strains, as well as genetic patterns of these stains by PCR method.

Methods

From February 2006 to March 2007, in a cross sectional study, clinical and wet mount examination of vaginal smear along with culture were performed on 683 women attending to public and private outpatient clinics in Hamadan. Trichomoniasis marked based on major clinical symptoms. Diagnosis confirmed using wet mount microscopically and culture in Diamond medium. A serial concentration of metronidazole was provided and all isolated Trichomonas strains (resistant and sensitive) tested by standard method. Finally, all sensitive and resistant strains examined by PCR technique.

Results

Only 15/683, (2.2%) of patients clinically diagnosed trichomonal vaginitis were positive for T. vaginalis by wet smear and culture. The minimum lethal concentration (MLC) for clinically sensitive isolates was 25 µg/ml; however, this concentration for resistant isolates was 200 µg/ml after 24 h and 100 µg/ml after 50 h. The results of PCR examination of DNA from sensitive and resistant isolates had same pattern. The lanes appeared by two primers were 98 bp and 261 bp for both clinically sensitive and resistant strains.

Conclusion

Resistance to metronidazole in T. vaginalis has not relation to genetic variations and might be related to some physiologic pathways of organism.     

Susceptibility of gram-negative bacterial isolates to six beta-lactam and two aminoglycoside antibiotics at our university hospital

Susceptibilities of Gram-negative bacterial strains isolated at the University Hospital in 1987 to six beta-Lactam antibiotics (azthreonam cefmetazole, ceftizoxime, latamoxef, aminobenzyl-penicillin and piperacillin) and two aminoglycoside antibiotics (gentamicin and amikacin) were examined by agar dilution and the agar diffusion method. Results obtained from both methods correlated well in most of the strains. Most of the strains belonging to Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumoniae and Proteus mirabilis were sensitive to the beta-lactam antibiotics except aminobenzyl-penicillin and piperacillin. They were also sensitive to aminoglycoside antibiotics. Most strains of Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae and Serratia marcescens were sensitive to azthreonam, latamoxef and aminoglycosides, but were less sensitive to other beta-lactams. Acinetobacter calcoaceticus was generally resistant to beta-lactams except ceftizoxime, but was sensitive to aminoglycosides. More than half of the strains of Pseudomonas aeruginosa were sensitive to azthreonam, piperacillin and aminoglycoside antibiotics and only latamoxef was active in Pseudomonas maltophilia.     

葡萄球菌药性及质粒图谱的对比分析

目的 调查葡萄球菌在医院不同科室之间的感染情况。方法 对烧伤科及胸外科分离的67株葡萄球菌进行初步分类及抗生素敏感性测定,并观察质粒图谱的差异。结果 烧伤科菌株主要由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）组成。仅对去甲万古霉素、利福平保持高度敏感,多数菌株含有2条分子量不同的质粒带;胸外科菌株主要由表皮葡萄球菌（CNS）组成,对抗生素均保持较高的敏感性,质粒图谱未发现相同的图形。结论 尽管烧伤科与胸外科都存在葡萄球菌感染,但其实质有显著不同。     

葡萄球菌耐药性及质粒图谱的对比分析

目的调查葡萄球菌在医院不同科室之间的感染情况。方法对烧伤科及胸外科分离的67株葡萄球菌进行初步分类及抗生素敏感性测定，并观察质粒图谱的差异。结果烧伤科菌株主要由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)组成。仅对去甲万古霉素、利福平保持高度敏感，多数菌株含有2条分子量不同的质粒带；胸外科菌株主要由表皮葡萄球菌(CNS)组成，对抗生素均保持较高的敏感性，质粒图谱未发现相同的图形。结论尽管烧伤科与胸外科都存在葡萄球菌感染，但其实质有显著不同。     

儿童下呼吸道感染病原菌分布及耐药性

目的了解某儿童医院住院患儿下呼吸道感染的常见病原菌及其耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法采用法国生物梅里埃VITEK2compact鉴定及药敏仪,对2010年2-9月住院的下呼吸道感染患儿痰培养所分离的菌株进行鉴定,并对主要菌种做药敏试验。结果11 785份痰标本共分离病原菌4 094株(34.74％),其中革兰阴性(G-)杆菌2 826株(69.03％),主要为肺炎克雷伯菌（1 012株）、大肠埃希菌（574株）、鲍曼不动杆菌（438株）、阴沟肠杆菌（221株）等;革兰阳性(G+)球菌1 167株(28.50％),主要为金黄色葡萄球菌（402株） 、肺炎链球菌（296株） 、表皮葡萄球菌（193株）等;真菌101株(2.47％)。肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌中产超广谱β 内酰胺酶株检出率分别为23.91％和22.13％;G-杆菌对亚胺培南高度敏感,耐药率为0.00%~2.97%。金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林株占12.19％,表皮葡萄球菌中耐甲氧西林株占35.75%,溶血葡萄球菌中耐甲氧西林株占47.87%,上述细菌对万古霉素均高度敏感,耐药率为0.00%。检出耐万古霉素肺炎链球菌8株（2.70%）,但其对利奈唑胺敏感,耐药率为0.00%。结论该儿童医院下呼吸道感染患儿存在多重耐药菌感染。临床应与微生物室密切配合,及时掌握细菌的耐药机制与变迁,根据药敏结果正确、合理使用抗菌药物,尽量减少新的耐药菌产生。     

Furazolidone resistance in Salmonella gallinarum: the relationship between in vitro and in vivo determinations of resistance.

Of 22 strains of Salmonella gallinarum isolated from recent outbreaks of infection in poultry in Greece (15). Amman (3), Kenya (2), Lebanon (1) and Yemen (1), 20 were more resistant to furazolidone in vitro than 6 strains that had been isolated in the U.K. in the 1950s; the minimum inhibitory concentration of furazolidone was approximately 0.3 microgram/ml for the sensitive strains and 1.3 or 2.5 microgram/ml for the more resistant strains. Furazolidone given continuously in the food did not control experimental infections in chickens caused by most of the strains that had been classed as more resistant by the in vitro tests. Chloramphenicol, trimethoprim and sulphadiazine or mixtures of the latter two were the best antibiotics for treating these infections, but they were less satisfactory than furazolidone for treating infections caused by the furazolidone-sensitive strains. As a group, the furazolidone-resistant strains and furazolidone-resistant mutants of one of the sensitive strains were less virulent for chickens than the sensitive strains.     

攀枝花市中心医院铜绿假单胞菌的耐药性及耐药基因检测

目的 分析攀枝花市中心医院多重耐药铜绿假单胞菌（MDR-PA）的耐药性及其相关的耐药基因。 方法 回顾性分析2017年1月至2019年12月医院临床检出的非重复铜绿假单胞菌（PA）995株,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,PCR法检测35株MDR-PA的耐药基因oprD2、oprM、mexR、mexC、VIM、IMP、DHA并测序。采用WHONET 5.6软件统计分析耐药数据,Fisher精确检验分析亚胺培南耐药株与敏感株基因差异。 结果 检出MDR-PA 114株,占比11.46%,科室来源主要为神经科和ICU病房,标本主要来自痰和分泌物,对氨基糖苷类抗生素耐药率最低,介于2.63%～6.14%;对左旋氧氟沙星、环丙沙星、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、亚胺培南的耐药率依次为7.02%、10.53%、25.44%、35.96%、44.74%;对哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南、头孢他啶的耐药率较高,分别为53.51%、60.53%、100.00%。oprM、mexR、mexC、oprD2基因检出率分别为14.29％、91.43％、97.14％、100.00％,余未检出。随机抽取35株MDR-PA中有13株是亚胺培南耐药株,22株为亚胺培南敏感株,比较亚胺培南耐药株和敏感株,oprM（ P =0.426）、mexR（ P =0.541）、mexC（ P =0.371）基因检测差异无统计学意义。 结论 攀枝花市中心医院MDR-PA耐药率较高,耐药基因以mexC、mexR为主,但MDR-PA对亚胺培南的耐药与此两种基因无明显关系,耐药性的产生与oprD2基因缺失关系不大。