树突状细胞融合疫苗对黑色素瘤小鼠的免疫保护作用

目的探讨树突状细胞(DCs)融合疫苗对黑色素瘤小鼠的免疫保护作用。方法取小鼠骨髓细胞,用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)定向诱导分化为骨髓来源的树突状细胞(BMDCs),体外转录血管内皮生长因子受体2(KDR)融合基因的mRNA,将其致敏DCs,按同量不同次免疫小鼠;皮下接种5×105个/只B16细胞建立荷瘤小鼠模型,20 d后未长肿瘤的小鼠再次接种相同剂量的B16细胞,观察小鼠成瘤情况。实验分组:致敏DCs免疫1次组(A组),致敏DCs免疫2次组(B组),致敏DCs免疫3次组(C组),对照组(D组)。结果对照组小鼠一周成瘤率100%,平均存活时间15 d,A组,B组,C组小鼠观察20 d未见肿瘤生长;第二次接种B16细胞后,A组7只中有2只小鼠长出了肿瘤,B组8只中有2只长出了肿瘤,从第一次接种肿瘤细胞开始计算小鼠生存时间,A组平均生存时间50 d;B组平均生存时间72 d;C组未见肿瘤生长。结论树突状细胞KDR融合疫苗对黑色素瘤小鼠具有免疫保护作用。     

肿瘤抗原致敏的树突状细胞抗肿瘤作用的实验研究

目的研究肿瘤细胞裂解物体外致敏的树突状细胞的抗肿瘤效应.方法经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)协同诱导小鼠骨髓树突状细胞(DC)前体为DC反复冻融制备肿瘤细胞可溶性抗原,将肿瘤细胞可溶性抗原与DC共育,获得肿瘤抗原致敏的DC,将其直接作为瘤苗对荷瘤小鼠进行免疫治疗实验.结果从每只小鼠股骨中分离的DC前体细胞经GM-CSF和IL-4协同诱导,可获得(3～5)×106个树突状细胞;用肿瘤细胞可溶性抗原致敏的DC瘤苗治疗的荷瘤小鼠,其脾淋巴细胞转化率明显高于其它实验组及对照组,其瘤体生长减缓,生存时间明显延长.结论肿瘤抗原体外致敏的DC对荷瘤小鼠具有明显的免疫治疗作用,可望成为肿瘤免疫治疗的新途径.     

高迁移率族蛋白B1对人乳头瘤病毒重组腺病毒载体疫苗免疫效果的影响

目的：评价高迁移率族蛋白B1（HMGB1）分子对接种HPV16型重组腺病毒载体疫苗实验小鼠免疫应答和抗肿瘤生物学效应的影响。方法通过TC-1细胞移植诱导建立小鼠肿瘤模型,在接种HPV16型重组腺病毒载体疫苗的同时,给予外源性HMGB1及其特异性拮抗剂HMGB1 A box注射,进行肿瘤抑制试验、肿瘤细胞挑战实验、特异性IFNγ的诱导检测。结果肿瘤抑制试验表明,与单独接种不同剂量疫苗组相比,注射HMGB1后小鼠成瘤率显著提高（2/10 vs 9/10, P<0.05）;而注射了A-box则减低了小鼠成瘤率（7/10 vs 1/10, P<0.05）。TC-1肿瘤细胞挑战试验显示,10只先接种疫苗的小鼠中有8只免受TC-1肿瘤细胞的攻击,而HMGB1仅能保护2只,且小鼠成瘤时间提前,肿瘤更大,同时HMGB1还使疫苗诱导特异性IFNγ的能力显著降低。结论 HMGB1分子可以削弱HPV16型重组腺病毒载体疫苗在小鼠模型上的免疫效果,而其拮抗剂A box蛋白具有一定程度增强作用。     

龙葵浓缩果汁对S180荷瘤小鼠的抑瘤效应

目的通过动物实验研究龙葵浓缩果汁对S180荷瘤小鼠免疫器官的影响及其抑瘤作用.方法采用S180荷瘤细胞种于小鼠右腋皮下,建立小鼠肿瘤模型;采用动物对比实验法将小鼠随机分成5个组:龙葵浓缩果汁:高剂量组(3000 mg/kg体重)、中剂量组(1500mg/kg体重)、低剂量组(750 mg/kg体重);肿瘤对照组和空白对照组.连续灌胃15 d,脱椎处死后观察小鼠体内瘤重、胸腺和脾脏重量.结果①实验组肿瘤明显小于肿瘤对照组(P＜0.05),其肿瘤抑制率达到64.99%,尤以高剂量组效果明显.②各实验组小鼠的脾脏重量明显高于肿瘤对照组(P＜0.05).结论龙葵浓缩果汁具有抑制小鼠肿瘤生长作用.     

表达人乳头瘤病毒16型E6E7重组腺病毒疫苗对小鼠的免疫和抗肿瘤效应

目的 评价HPV16 E6E7的复制缺陷型重组5型腺病毒(PK-HPV-ad5)治疗性疫苗对实验小鼠免疫应答和抗肿瘤的生物学效应.方法 使用基因重组技术构建PK-HPV-ad5疫苗,并通过小鼠免疫试验,检测小鼠总抗体和特异性IFNγ,同时将造模小鼠分成疫苗组和对照组,分别对其进行抑瘤试验、TC-1肿瘤细胞挑战试验和肿瘤切除后防复发试验.结果 HPV16 E6E7诱导的总抗体第12天的水平相对较高(1:400～1:600);3批次疫苗特异性IFNγ在第14天与对照组比较分别升高8.6、5.9和8.9倍,差异有统计学意义(t=15.721、6.967和14.342,P均＜0.01).抑瘤试验表明疫苗剂量为107IU/只时小鼠肿瘤生长率为0,与对照组比较差异有统计学意义(确切概率法,P＜0.01),3批次疫苗验证有效剂量为107IU/只时肿瘤抑制率可达80％(8/10)以上.TC-1肿瘤细胞挑战试验结果显示:小鼠先接种疫苗能引起特异性的免疫应答,并能保护90％(9/10)的小鼠免受TC-1肿瘤细胞的攻击;肿瘤切除后防止复发试验提示在注射相同剂量疫苗时,对104个/只和105个/只肿瘤细胞造模小鼠,第0、5天免疫组肿瘤复发数少于第5,8天免疫组(1/10,4/10 vs 8/10,7/10).结论 PK-HPV-ad5疫苗能诱导小鼠产生特异性的免疫应答,对抗肿瘤复发有治疗潜力.     

全氟辛烷磺酸对4T1荷瘤小鼠免疫状态的影响

目的研究全氟辛烷磺酸(perfluorooctanesulfonate,PFOS)染毒对接种4T1乳腺癌细胞小鼠免疫状态的影响。方法将36只健康清洁级BALB/c雌性小鼠按体重随机分为3组,分别为对照(Tween-80)组及0.1、0.45 g/L PFOS染毒组,每组12只。采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒56 d。染毒结束后,于小鼠右侧背部皮下注射2×10~5个4T1细胞,制作小鼠乳腺癌细胞荷瘤模型。通过real-time PCR方法检测小鼠Th1/Th2细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA表达水平;采用流式细胞术检测脾细胞中调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)和髓样抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)的细胞分数。HE染色观察PFOS染毒对肿瘤组织的影响。结果与对照组相比,各浓度PFOS染毒组接种4T1乳腺癌细胞后小鼠脾细胞IFN-γmRNA表达水平升高,0.45 g/L染毒组小鼠脾细胞IL-4 mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与0.45 g/L PFOS染毒组相比,对照组和0.1 g/L PFOS染毒组小鼠接种4T1肿瘤细胞后脾细胞中MDSC的细胞分数均下降,差异均有统计学意义(P0.05)。各组小鼠脾Treg细胞数量间比较,差异无统计学意义(P0.05)。对照组和0.1、0.45 g/L PFOS染毒组荷瘤小鼠瘤块大小分别为(697.33±183.06)、(861.5±38.35)、(946.67±135.03)mm~3,各组间差异均无统计学意义(P0.05);且肿瘤包块的大小随着PFOS染毒浓度的升高而呈增大趋势。0.45 g/L PFOS染毒组荷瘤小鼠肿瘤组织可见肿瘤细胞密集,核分裂较多,肿瘤血管更加丰富,与对照组比较,恶性程度更高。结论 PFOS染毒小鼠免疫状态向Th2型倾斜,接种4T1细胞后脾中MDSC的数量增多,肿瘤细胞恶性程度增加。     

黄精对环磷酰胺增效减毒作用研究

目的：研究黄精对环磷酰胺的增效减毒作用。方法：将肉瘤$180细胞复苏,用生理盐水稀释后接种于小鼠腹腔内行细胞传代培养。7天后于无菌条件下抽取腹水,调配成浓度为1．75×10^7个瘤细胞／mL的细胞悬液,对40只小鼠进行肿瘤接种造模,每鼠接种0．2mL于右腋窝下。接种24h后称重,编号,随机将40只小鼠分为4纽,分别为荷瘤组、CTX组、CTX＋中剂量黄精组、CTX＋高剂量黄精组。造模次日开始给药,共11天,停药次日处死,观察各组小鼠的一般状况,计算抑瘤率,睥、肾、胸腺指数。结果：黄精联合使用CTX对S180荷瘤小鼠的抑瘤率明显高于单独使用,黄精可减轻CTX对荷瘤小鼠免疫器官的毒性作用,保护荷瘤小鼠脾脏和胸腺并促其生长。结论：黄精与环磷酰胺联合用药具有增效减毒作用。     

扶正抑瘤汤对卵巢癌的抑制作用及其机制的实验研究

目的探讨扶正抑瘤汤对裸鼠卵巢癌移植瘤的抑制作用并探讨及作用机制。方法 40只裸鼠接种人卵巢癌细胞A2780,复制荷瘤模型后,随机分为4组,每组10只:分别为对照组和扶正抑瘤汤大、中、小剂量组;分别给予生理盐水、和不同剂量扶正抑瘤汤(30 g/kg、20 g/kg、10 g/kg)灌胃,连续3W。停药第2天测量各组裸鼠肿瘤体积后,处死裸鼠,剥离肿瘤称重。流式细胞仪检测肿瘤组织的细胞周期、Western Blot法检测肿瘤组织的PCNA和VEGF蛋白表达、ELISA法检测裸鼠外周血IL-2和INF-γ水平。结果与对照组相比,各剂量组裸鼠的肿瘤体积和重量均明显降低(P0.05);随着扶正抑瘤汤剂量的增大,抑制肿瘤生长的作用更明显(P0.01)。随着药物剂量加大,肿瘤组织G1期细胞随之增多,而S期+G2细胞则随之减少(P0.01)。扶正抑瘤汤可明显下调肿瘤组织的PCNA和VEGF蛋白表达、上调外周血IL-2和INF-γ的水平,其作用呈剂量依赖性(P0.01)。结论扶正抑瘤汤能抑制卵巢癌荷瘤鼠瘤组织的生长,作用呈剂量依赖性;作用机制可能与扶正抑瘤汤对瘤组织细胞周期的调控、下调瘤组织PCNA、VEGF表达以及提高免疫功能等途径有关。     

以正交设计研究β胡萝卜素+维生素E对放化疗荷瘤小鼠血液及肿瘤生长的影响

目的探讨β胡萝卜素(β-Carton,β-C)与维生素E(VitaminE,VE)不同配比方案,对荷瘤小鼠放、化疗后血液学及肿瘤生长的影响,确定其减轻放、化疗毒副作用的合理剂量配比水平。方法采用有重复的正交实验设计,用L8(27)正交表研究β-C、VE不同水平的两两配比及放疗、化疗2种治疗方案的不同配比对荷瘤小鼠放、化疗后血液白细胞、血小板及瘤重的影响。24只小鼠随机分为8组,经口给予不同剂量配比的β-C、VE,20天后每只小鼠腋下接种S-180瘤液0.2ml,接种瘤液后第2天对小鼠分别进行化疗、放疗。放疗组为一次性全身γ-射线辐射,剂量为4Gy,化疗组给予环磷酰胺,剂量为180mg/kg·bw,隔日1次,共5次。治疗前一天及治疗后第3天进行白细胞计数及血小板计数,治疗后第10天解剖动物,检测动物的肿瘤重量,计算瘤体比。结果单因素β-C在抑制由于放、化疗引起的白细胞、血小板下降及抑制肿瘤生长方面作用明显(P<0.05);单因素VE可明显抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长(P<0.05);β-C和VE交互作用可抑制荷瘤小鼠由于放、化疗引起血小板下降(P<0.05),并明显抑制荷瘤小鼠肿瘤生长(P<0.05)。结论β-C+VE在抑制荷瘤小鼠由于放、化疗引起血小板下降方面合理的剂量配比为β-C60mg/kg+VE50mg/kg;β-C+VE抑制荷瘤小鼠肿瘤生长的合理剂量配比为β-C30mg/kg+VE50mg/kg(以每公斤体重计)。     

赤芍抑制骨肿瘤作用的研究

目的:研究赤芍对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫器官的影响。方法:应用肉瘤S180荷瘤小鼠作为动物模型,连续灌胃给药14d后脱颈椎处死,解剖,观察赤芍对小鼠S180移植肿瘤的抑制作用及免疫功能的影响,为寻找有效和低毒的抗肿瘤药物提供有价值的实验资料。建立小鼠S180实体瘤模型,分别设赤芍组、空白对照组及黄芪低(5g/kg)、中(10g/kg)、高(20g/kg)剂量组。测实体瘤小鼠瘤重、脾重,计算抑瘤率、脾指数。各组比较并进行统计学分析。结果:与黄芪组比较,赤芍低、中、高剂量组瘤体均缩小(P<0.05-P<0.01);与黄芪组比较,赤芍中、高剂量组脾指数均升高(P<0.05-P<0.01)。结论:赤芍对小鼠S180移植肿瘤具有抑制作用,并可增强荷瘤小鼠的免疫功能。