鼠疫耶尔森菌caf1基因的克隆表达及其产物免疫学评价

目的 表达具有免疫学活性重组F1抗原(rF1),并以其构建检测鼠疫抗体胶体金试纸条.方法 将去掉信号肽编码序列的caf1基因片段与载体质粒pET32a(+)通过BamHI和Not I双酶切位点进行连接,将重组质粒[caf1-pET32a(+)]转化入BL21(DE3)中进行诱导表达,表达产物经亲和层析纯化,以纯化rF1及天然F1抗原制备双检测鼠疫抗体胶体金标试纸条,并对浙江省528份人血清标本进行检测.结果含caf1-pET32a(+)的BL21(DE3),经诱导产生相对分子质量(M_r)约为35.5×10~3的rF1融合蛋白;rF1融合蛋白检测鼠疫抗体的敏感性等同甚至超越天然F1抗原;在528份人血清标本的检测中,rF1与天然F1的符合率为97.9%(K=0.466),有较好一致性.结论 制备的rF1,具有良好免疫学活性,该rF1可替代天然F1抗原,用于鼠疫免疫学检测.     

间接免疫荧光法检测鼠疫杆菌F1抗体

目的构建鼠疫杆菌F1抗原结构基因Caf1的重组载体pCDNA3.1-hisB-Caf1,在NIH3T3细胞中稳定表达,并用表达F1抗原的细胞株作为诊断抗原,探讨间接免疫荧光法（IFA）检测鼠血清中鼠疫杆菌F1抗体的可行性。方法将caf1基因克隆到质粒pCDNA3.1-hisB的多克隆位点上,构建重组载体pCDNA3.1-hisB-caf1,重组载体经脂质体转染至NIH3T3细胞中,G418筛选获得抗性细胞株,并以此细胞株为诊断抗原,IFA检测鼠血清中的F1抗体。结果经IFA证实,pCDNA3.1-hisB-caf1能在NIH3T3细胞中稳定表达,并能与1例经ELISA检测为F1抗体阳性的鼠血清发生特异性反应。结论NIH3T3细胞稳定表达的F1抗原可作为IFA中的侯选抗原,检测鼠血清中的F1抗体。     

解脲脲支原体的N端保守部分MB优化基因在大肠埃希菌中的高效表达

目的 制备N-端保守部分多条带抗原(MB),克隆并在大肠埃希菌中表达其基因,并鉴定重组MB的抗原性.方法分析14个不同血清型解脲脲支原体(Uu)的基因排列,根据大肠埃希菌偏爱密码子,优化、设计合成DNA序列编码的氨基酸保守序列,合成的基因克隆到表达质粒,重组蛋白诱导和亲和层析纯化.结果 通过对Uu 14个血清型MB抗原氮端的氨基酸序列的分析、比对,根据大肠埃希菌的偏好密码子优化、设计并合成碱基序列,目的基因片段与pET-41a构建重组质粒并转化大肠埃希菌后,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析,得到了分子量约为45 kd的重组蛋白,纯化后的MB抗原蛋白能够较特异地与特异性抗体结合,敏感性为85.7％,特异性为87.8％.结论 Uu N-端保守部分的MB蛋白已成功表达、纯化并被证明具有良好的免疫原性.     

重组鼠疫杆菌荚膜抗原诱生鼠保护性抗体反应

FI抗原是一种糖蛋白,它是耶氏鼠疫杆菌荚膜的主要成份。由于受感染动物对FI抗原可产生较强的体液免疫反应,所以FI血清抗体检测可用于本病的流行病学监测及诊断。另外,又由于FI抗体滴度与机体通过接种疫苗所获得的免疫力成正比,所以FI抗原一直被认为是现行的全细胞鼠疫疫苗中的保护性抗原。这种疫苗由于抗原成份不纯,可引起一些副作用,从而广泛应用受到限制。不久前,美国科学家以PYPR1质粒为载体,用DNA重组技术在大肠杆菌上表达F1基因,得到了分子量与天然F1抗原相同并能与抗鼠疫单克隆抗体发生特异性反应的蛋白。用这种纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,可诱生出足以抵抗鼠疫杆菌攻击的保护性抗体反应。一般来说,大肠杆菌对其表达的蛋白质是不能进行糖基化修饰的,但这里大肠杆菌所表达的F1抗原可能含有糖基。这可能是因为当初克隆的9.4Kb的DNA片段除3F1编码基因外,还包含有编码F1蛋白糖基化酶的基因。和鼠疫杆菌一样,该重组的大肠杆菌在表达F1抗原时也受环境温度的影响;即在37℃时表达良好,27℃时表达较差。F1抗     

鼠疫耶尔森菌TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测

目的 建立一种快速检测鼠疫耶尔森菌的方法.方法 以编码F1抗原的基因caf1为靶序列,人工合成基因序列,制备重组质粒作为鼠疫耶尔森菌检测的标准样品;用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)技术,针对pMT1质粒上的caf1基因设计引物和TaqMan荧光探针,进行实时FQ-PCR检验,评价该方法的准确性、敏感性及特异性.建立鼠疫耶尔森菌TaqMan探针实时FQ-PCR检测方法.结果 本研究成功构建了质粒pUC57-caf1,引物、探针特异性良好,标准曲线在5.03×102～5.03×107拷贝数之间,具有较好的线性关系,相关系数1.0.实时FQ-PCR检验最低可检测出5.03×102拷贝数的重组质粒,灵敏度比普通PCR高100倍.特异性检测试验可选择性检测出鼠疫耶尔森菌,与其他细菌无交叉反应,结果与普通PCR一致.对同一浓度的重组质粒进行15个平行样品的重复性试验,Ct值标准差为0.28.结论 建立TaqMan探针实时FQ-PCR检测技术,能够快速、准确、特异的检测鼠疫耶尔森菌,为鼠疫监控、诊断提供技术支持.     

浙江省2005年鼠疫病原和血清学检测结果分析

目的了解我省鼠疫历史流行区是否存在动物鼠疫的流行。方法在监测区内捕获活鼠并收集死鼠，活鼠采血用放免、血凝、酶标及胶体金方法检测鼠疫F1抗体；鼠脏器用压印法分离鼠疫菌，用多重引物PCR的方法检测鼠疫的基因片段。结果我省首次用间接血凝试验（微量法）从3份鼠血清中检出鼠疫F1抗体，用多重引物PCR的方法从3头鼠脏器中检出鼠疫菌caf 1基因片段。结论我省的部分鼠疫历史流行区存在动物鼠疫复燃的可能，要加强鼠疫的监控工作。     

鼠疫耶尔森氏菌F1抗原在鼠伤寒沙门氏菌中的表达及其保护力

目的：对鼠疫耶尔森氏菌Ｆ１抗原在鼠伤寒沙门氏菌中的表达及其保护力进行研究。方法：ＰＣＲ、化学转化及电穿孔法。结果：采用ＰＣＲ方法，特异地扩增了鼠疫菌Ｆ１抗原ｃａｆ操纵子的５Ｋｂ基因片段。将ＰＣＲ产物与质粒载体连接后，经化学方法转化大肠杆菌ＬＥ３９２，获得ｃａｆ基因克隆子，所得克隆子能较好地表达Ｆ１抗原基因。应用电穿孔法将克隆子的重组质粒转入发鼠伤寒沙门氏菌Ｇ３０内获得转化子，其Ｆ１抗原表达水平与大     

GPC-3蛋白N端可溶性片段多克隆抗体的制备及鉴定

目的:通过原核表达并纯化GPC3-N端蛋白及根据分析GPC3-N端蛋白可能的抗原表位合成多肽,免疫家兔获得抗-GPC3多克隆抗体,为深入研究GPC3基因的功能及其临床应用奠定基础。方法:将GPC3-N端基因片段亚克隆至pQE30原核表达载体,表达带有6-His的GPC3的融合蛋白质,纯化蛋白后免疫家兔;同时应用Goldkey软件预测分析GPC3蛋白N端可能的抗原表位,根据分析结果合成多肽命名为lw1,免疫家兔,获得抗-GPC3多克隆抗体,并鉴定其特性。结果:成功表达出GPC3-N端蛋白,用纯化后的蛋白及合成的肽免疫家兔,获得特异性兔抗多克隆抗体,通过间接ELISA,Western blot和免疫荧光技术证实该多抗能识别原核表达的外源性及HepG2细胞内源性GPC3蛋白。结论:通过两种方法获得的蛋白免疫家兔都能获得能特异识别GPC3蛋白的多克隆抗体,将为GPC3基因的功能研究提供研究工具,并为临床原发性肝癌的血清学早期诊断提供新的标记物。     

鼠疫耶尔森菌csf1基因的克隆表达及其产物免疫学评价

目的表达具有免疫学活性重组F1抗原(rFl),并以其构建检测鼠疫抗体胶体金试纸条。方法将去掉信号肽编码序列的c口朋基因片段与载体质粒pET32a(+)通过BamHI和Not I双酶切位点进行连接,将重组质粒[csf1-pET32a(+)]转化入BL21(DE3)中进行诱导表达,表达产物经亲和层析纯化,以纯化rFl及天然F1抗原制备双检测鼠疫抗体胶体金标试纸条,并对浙江省528份人血清标本进行检测。结果含csf1-pET32a(+)的BL21(DE3),经诱导产生相对分子质量(M_r)约为35.5X 103的rFl融合蛋白;rFl融合蛋白检测鼠疫抗体的敏感性等同甚至超越天然F1抗原;在528份人血清标本的检测中,rFl与天然F1的符合率为97.9％(K=0.466),有较好一致性。结论制备的rFl,具有良好免疫学活性,该rFl可替代天然F1抗原,用于鼠疫免疫学检测。     

甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白fliC-a基因的克隆、原核表达及鉴定

目的:克隆甲型副伤寒沙门菌1相鞭毛蛋白抗原(H1抗原)fliC-a基因,构建原核表达系统并鉴定重组蛋白的抗原性。方法:PCR方法扩增fliC-a基因,克隆到质粒pET-42a构建原核表达载体pET-fliC-a,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的重组蛋白rfliC-a表达,用SDS-PAGE鉴定rfliC-a,Western blot和双向免疫扩散法鉴定rfliC-a的抗原性和免疫原性。结果:成功表达并纯化获得相对分子量为14.4 kDa的重组蛋白rfliC-a,rfliC-a能与兔抗甲型副伤寒沙门菌全菌血清发生特异性结合,免疫家兔获得高效价抗体。结论:成功构建了fliC-a基因原核表达系统,所表达的rfliC-a具有良好的抗原性。     

对医院护理管理队伍建设的几点思考

文章分析了当前医院护理管理队伍存在的主要问题：知识结构不合理；专业思想不纯正；接受继续教育不足：工作效能低下。提出了建设高素质护理管理人才队伍的思路：严格标准，搞好选才；加强思想教育和引导；加大培养力度；建立科学考评和激励机制；完善人才合理流动措施；合理编制，突出效率。     

Problem of methodology of evaluation of the quality of public health

The basic general methodological assessments of public health quality are considered. An analogy is drawn with quality assessment in industry, approaches to the development of multi-aspect and multi-parameter assessment of public health quality are substantiated. A term of "qualimetry " of public health is suggested.     

医学科技成果信息资源网络开放利用的原则探析

医学科技成果信息资源网络开放利用，为资源的开放共享创造了良好条件，它使医学科技信息得到了高效传播和最大利用。网络开放利用医学科技成果信息资源，利用的主体和核心是其信息内容。信息内容是网络用户从中提取知识和所需资料的主要来源，同时也是信息破坏者发动攻击的主要目标之一，因而，信息内容的安全是信息安全的基本问题，主要包括信息内容的规范性、完整性与真实性、知识产权保护与利用的合理性等。要做好这些工作，应该遵循相应的原则和要求。     

政府公共财政支出分配公平性研究进展

政府公共财政支出是社会再分配的一种形式，其目的是促进社会公平。因此，政府的公共财政支出应该具有较强的目标针对性，应该向社会贫困人群倾斜，使其从中受益。本文通过查阅国内外政府公共财政支出分配公平性的相关文献资料。阐述了相关研究的进展情况，井着重探讨了政府公共财政支出分配公平性的内涵、研究范围、测算方法和研究意义。以及实际研究中存在的问题，最后提出我国政府公共财政支出分配公平性的研究方向和需要进一步完善的地方。