肺腺癌浸润CD8+T细胞表达CD39的机制

目的：探讨肿瘤浸润CD8⁺T细胞表达CD39的可能机制。方法：通过TCGA数据库的肺腺癌(LUAD)组织及正常肺组织转录组数据分析CD39在LUAD组织和正常肺组织中的表达差异及其对患者预后的影响,分析CD39表达与T细胞浸润、激活的关系。用小鼠LUAD Lewis细胞建立小鼠皮下移植瘤模型,FCM检测淋巴结、脾脏以及移植瘤组织中CD8⁺CD39⁺T细胞。收集Lewis细胞培养上清液作为条件培养基(CCM),免疫磁珠法(MACS)分选CD8⁺T细胞、CD11b⁺细胞;在培养基中分别加入CCM、IL-6和采取非接触或接触培养方式进行培养,探索CD8⁺T细胞表达CD39的可能机制。结果：CD39在LUAD组织中呈低表达(P<0.01),其表达水平与LUAD患者OS、T细胞浸润和激活水平均呈正相关(P<0.05或P<0.001)。FCM检测结果显示,在移植瘤组织中CD8+CD39⁺T细胞的比例明显高于淋巴结及脾脏(P<...     

碳离子（12C6+）抑制JAK2/STAT3通路促进肺癌中CD8+ T细胞浸润的研究

目的 探索碳离子（¹²C⁶⁺）照射后JAK2/STAT3通路的改变及下游蛋白FOXP3调控的肺癌中CD8⁺T细胞的浸润差异。方法 基于C57BL/6小鼠Lewis荷瘤模型的RNA测序分析,筛选出碳离子照射后肺癌中显著改变的JAK2/STAT3通路及相关的差异表达基因及蛋白如FOXP3。利用R软件“GSVA”中ssGSEA免疫浸润算法,探索FOXP3与肺癌免疫微环境中主要免疫细胞浸润的相关性并基于碳离子联合STAT3抑制途径（氯硝柳胺）对肺癌中CD8⁺T细胞浸润进行分析。结果 碳离子照射后,肺癌中JAK2/STAT3通路被抑制,相关基因和蛋白表达下调。基于ssGSEA算法的免疫评分显示,FOXP3表达与肺癌免疫微环境中CD8⁺T细胞浸润呈显著负相关。通过碳离子照射联合STAT3抑制剂氯硝柳胺,进一步明确了靶向JAK2/STAT3通路对于增加肺癌中CD8⁺T细胞浸润的协同作用。结论 碳离子（¹²C⁶⁺）可以通过靶向JAK2/STAT3通路与免疫治疗发挥协同增效的作用。     

基于生物信息学方法探讨Her-2基因表达对胃癌免疫细胞浸润的影响

目的 探讨人类表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2,Her-2）对胃癌组织中免疫细胞浸润的影响及可能的机制。方法 从癌症基因组图谱（the Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库下载胃癌转录测序数据及临床资料。采用CIBERSORT反卷积算法获得胃癌微环境中浸润的免疫细胞占比,分析其与Her-2表达的关系,筛选Her-2基因潜在的调控浸润免疫细胞的类型。采用基因集变异分析（gene set variation analysis,GSVA）评估与胃癌组织Her-2表达相关的信号通路集合,利用GEO（gene expression omnibus）收录的胃癌转录组数据验证Her-2基因表达与胃癌免疫细胞浸润程度的关系。结果 CIBERSORT分析TCGA数据库胃癌样本发现CD8⁺T细胞、静息状态记忆性CD4⁺T细胞、M0型巨噬细胞及肥大细胞在Her-2高表达及低表达组中的浸润程度差异有统计学意义（P=0.029,0.049,0.027,0.008）。GEO数据库与TCGA数据库分析结果均显示,Her-2基因高表达与CD8⁺ T细胞、静息状态记忆性CD4⁺T细胞、M0型巨噬细胞及肥大细胞的发育、诱导分化、迁移调控有关（P<0.05）,并影响胃癌组织中部分免疫细胞的浸润能力和程度。结论 在胃癌中Her-2基因高表达可能对部分免疫细胞形成和功能发挥具有抑制作用。     

基于生物信息学方法分析LAYN在甲状腺癌中临床预后价值及对免疫细胞浸润的影响

目的 探索LAYN基因在甲状腺癌组织中的表达与临床预后的相关性及对免疫细胞浸润的影响,为进一步研究潜在的分子机制提供基础。方法 在Oncomine和GEPIA数据库中检索甲状腺癌相关的基因,分析LAYN基因在甲状腺癌组织与正常组织之间表达的差异。通过GEPIA数据库分析LAYN基因与甲状腺癌患者临床分期及预后的相关性。结合ImmucellAI及TIMER2.0工具分析LAYN基因与甲状腺癌组织中CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞浸润丰度的关系。联合STRING数据库分析LAYN表达相关的蛋白。通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)进一步验证检测甲状腺癌组织及癌旁组织,甲状腺癌细胞系SW579,TPC-1及甲状腺上皮细胞TEC中LAYN的表达水平。结果 Oncomine、GEPIA和STRING数据库结果表明,与正常甲状腺组织相比,LAYN基因在甲状腺癌组织中低表达(P＜0.05)。LAYN基因与甲状腺癌临床TNM分期相关(P＜0.05),Ⅲ/Ⅳ期患者肿瘤组织中LAYN基因低表达。LAYN基因高表达组患者总生存期(Overall survival,OS)较差,而无疾病生存期(Disease free survival,DFS)较好(P＜0.05)。在甲状腺癌组织中,CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞的浸润丰度较低,且CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞的浸润丰度与LAYN基因的表达水平呈正相关(P＜0.05)。此外,LAYN相互作用的蛋白为PNRC1,MAGEH1,HAPLN1,SMOC1,PRSS12,HMMR,NF2,TLN2,TLN1,TLE2。RT-qPCR验证结果表明,LAYN在甲状腺癌及甲状腺癌细胞系SW579及TPC-1中低表达(P＜0.05)。结论 LAYN基因在甲状腺癌组织中低表达,且与甲状腺癌患者临床TNM分期及预后相关,可作为预后判断的分子标志物。其潜在机制可能通过影响浸润性免疫细胞丰度发挥作用。为研究甲状腺癌致病机制及靶向药物的开发提供理论依据。     

三焦针灸法对中晚期胃腺癌癌因性疲乏的疗效及对免疫功能的影响

目的 观察三焦针灸法治疗中晚期胃腺癌癌因性疲乏的疗效及对免疫功能的影响。方法 收集2019年1月至2020年12月天津中医药大学第一附属医院收治的中晚期胃腺癌癌因性疲乏患者200例。应用随机数字表法将患者分为对照组和治疗组各100例；剔除脱落患者后，对照组85例，治疗组77例。对照组接受常规中西医对症治疗，治疗组在此基础上联合三焦针灸法治疗。观察两组治疗前后的卡氏功能状态(Karnofsky performance status,KPS)评分、Piper量表评分、红细胞计数、血红蛋白浓度以及淋巴细胞亚群(CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、NK细胞和B细胞)百分比和绝对计数的变化。结果 对照组治疗后KPS评分升高且Piper量表中行为维度评分、红细胞计数、血红蛋白浓度和淋巴细胞亚群CD4⁺T细胞绝对计数均下降，差异均具有统计学意义(均P<0.05)。对照组治疗前后Piper量表中情绪维度、感觉维度、认知维度和总分评分以及淋巴细胞亚群百分比、CD3⁺T细胞绝对计...     

CD4+/CD8+ T淋巴细胞在肝细胞癌组织中的浸润及与预后的相关性研究

目的 检测CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中的浸润程度,并分析其与预后的相关性。方法 收集行肝切除术的HCC患者215例,采用免疫组化技术检测CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞在HCC癌组织中的浸润程度,根据浸润情况比较患者肝切除术后无瘤生存率和总生存率。结果 CD4⁺ T淋巴细胞高浸润和低浸润比例分别为60.9%和39.1%。CD4⁺ T淋巴细胞高浸润组患者总生存率和无瘤生存率均显著高于低浸润组（P=0.015,P=0.038）。CD8⁺ T淋巴细胞高浸润和低浸润比例分别为34.9%和65.1%。CD8⁺ T淋巴细胞高浸润组患者的总生存率和无瘤生存率亦显著高于低浸润组患者（P=0.033,P=0.047）。结论 CD4⁺或CD8⁺ T淋巴细胞低浸润可能与HCC患者术后不良预后相关。     

CRISPR/Cas9敲除内源TCR增强TCR-T细胞对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的杀伤

目的：基于CRISPR/Cas9基因编辑技术制备无内源TCR的TCR-T细胞并鉴定其在体外杀伤HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的功能。方法：培养健康志愿者外周血CD8⁺T细胞和Jurkat细胞，CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除CD8⁺T、Jurkat细胞的TCR基因，制备过表达转基因TCR的重组慢病毒，在敲除内源性TCR的CD8⁺T和Jurkat细胞中用慢病毒过表达转基因TCR制备TCR-T细胞，多色FCM检测TCR-T细胞中TCR和CD3的表达水平，荧光素酶活性实验检测TCR-T细胞对HPV16阳性SiHa细胞的杀伤效率。结果：CRIPSR/Cas9基因编辑技术高效地敲除了外周血CD8⁺T细胞和Jurkat细胞中的TRAC和TRBC基因，敲除效率分别为(81.4±4.5)%(、98.5±0.07)%，制备的无内源TCR的TCR-T细胞高效表达转基因TCR，在外周血CD8⁺T和Jurkat细胞中表达率为(66.0±17.8)%、(97.3±2.6)%，敲除内源TRAC和T...     

肿瘤组织T细胞亚群对结直肠癌患者术后疾病进展风险的预测价值

目的 探讨肿瘤组织T细胞亚群对结直肠癌患者术后疾病进展风险的预测价值。方法 选取2018年12月至2020年6月我院收治的102例结直肠癌手术患者为研究对象，患者术后接受辅助治疗6个月，收集患者入院时的临床资料，采用免疫组织化学方法检测患者术后CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺和Foxp3⁺Tregs表达状况。对患者辅助化疗后随访观察1年，根据是否出现疾病进展分为进展组和非进展组，通过多因素Logistic回归分析探讨结直肠癌患者术后疾病进展风险的影响因素。结果 截止2022年1月1日，99例获得随访，其中41例(41.41%)疾病进展归为进展组，58例(58.59%)未发生疾病进展归为非进展组。两组CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺及Foxp3⁺Tregs细胞水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归...     

整合多数据库分析NFKBIA在SKCM预后和免疫浸润中的价值

目的：探讨核因子κB抑制因子a(NFKBIA)表达与皮肤黑色素瘤(SKCM)患者预后及其与肿瘤微环境免疫浸润的相关性。方法：利用GEPIA2数据库分析正常皮肤和SKCM组织中NFKBIA的表达差异,GEPIA2和Ualcan数据库分析NFKBIA与SKCM预后关系,TIMER和TISIDB数据库分析NFKBIA与SKCM中TIL和免疫调节基因的关系。选用TISCH和CancerSEA数据库从单细胞水平分析NFKBIA与SKCM细胞亚群及其相关的功能状态关联性。选取湖北省荆门市第二人民医院保存的14例SKCM患者的石蜡组织标本,通过免疫组织化学染色法验证SKCM组织和癌旁组织中NFKBIA蛋白的表达水平。结果：NFKBIA在SKCM组织中呈低表达,并且低表达的SKCM患者预后差(P<0.05)。NFKBIA表达与B细胞、CD8⁺T细胞、CD4⁺T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和DC浸润水平呈正相关关系(均P<0.01)。NFKBIA表达与SKCM中TIL丰度和免疫调节基因呈正相关关系(均P<0.01)。NFKBIA在SKCM单细胞...     

干细胞样CD8+T细胞在抗肿瘤免疫治疗中的地位与演进效应

以抗细胞程序性死亡-1/细胞程序性死亡-配体1(programmed cell death-1/programmed cell death-ligand 1,PD-1/PD-L1)为代表的免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICIs)治疗显现了CD8⁺T细胞在治疗和可能治愈恶性肿瘤方面的潜力。但仅约20%的患者对ICIs治疗获益,因此阐明CD8⁺T细胞在免疫微环境中的有效抗肿瘤功能,及其分子和空间的决定因素尤为重要。具有自我更新、增殖分化和杀伤肿瘤细胞能力的干细胞样CD8⁺T细胞亚群,在介导抗肿瘤免疫效应方面扮演极为重要的角色。本文就干细胞样CD8⁺T细胞在抗肿瘤免疫循环中的地位与演进效应进行综述。     

CDCA5在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及其与预后相关性的生物信息学分析

目的:探讨CDCA5在皮肤恶性黑色素瘤（cutaneous malignant melanoma,CMM）中的表达、相关信号通路及其与患者预后之间的关系。方法:应用Oncomine和GEPIA数据库研究CDCA5基因在不同肿瘤组织中的表达情况以及与患者预后关系。此外，还收集了我院41例黑色素瘤患者及41例正常皮肤病例进行免疫组化分析。cBioPortal数据库用于研究CDCA5基因突变情况。应用STRING数据库构建CDCA5相关蛋白-蛋白相互作用网络，并进行功能富集和通路分析。应用TISIDB数据库探究CDCA5与免疫浸润的关系。结果:CDCA5基因在大多数肿瘤组织包括CMM中的表达水平上调，高表达与患者的预后不良有关。免疫组化结果显示，CDCA5在CMM中表达也是明显高于正常皮肤组织。TCGA数据库中有8%的CDCA5基因在CMM组织中发生了突变。CDCA5相关蛋白-蛋白相互作用网络中，相互作用蛋白网络富集明显（P＜1.0E-16）。CDCA5编码蛋白的分子功能主要为蛋白质结合、染色体结合、ATP结合以及蛋白激酶活性等。而生物学过程主要集中于姐妹染色单体凝聚力、有丝分裂核分裂、细胞分裂等。KEGG信号通路主要为细胞周期、卵母细胞减数分裂和孕激素介导的卵母细胞成熟。GSEA结果显示CDCA5相关显著变化的通路主要为炎症反应、TNFα-NF-κB通路、干扰素alpha通路、干扰素gamma通路、IL2-STAT5通路、IL6-JAK-STAT3通路、p53通路以及KRAS通路。此外，CDCA5基因与活化CD4+T细胞成正相关,与不成熟B细胞、肥大细胞、1型辅助T细胞以及效应记忆CD8+T细胞成负相关。结论:CDCA5在CMM患者肿瘤组织中表达较高，高表达与患者的预后不良有关。     

趋化因子CXCL5调控NF-κB与Wnt/β-catenin信号通路抑制肿瘤免疫促进胃癌的机制研究CSCD

目的探讨CXC趋化因子配体-5(CXCL5)促进胃癌的作用及其潜在分子机制。方法纳入胃癌患者83例,另选取健康者40例作为对照。比较两者的血清CXCL5水平;比较癌组织及癌旁正常组织中CXCL5与CXCR2的表达。检测CXCL5对胃癌细胞ERK/MAPK、PI3K/AKT、NF-κB及Wnt/β-catenin信号通路的影响。用对照与过表达CXCL5的MFC细胞建立胃癌移植瘤模型,记录肿瘤生长和小鼠生存曲线;检测各组小鼠移植瘤中CXCL5、p-NF-κB与p-β-catenin的表达及CD4^+T、CD8^+T与CD56^+CD16^+NK细胞数量。结果胃癌患者的血清CXCL5水平较健康者显著升高(P<0.05)。癌组织中CXCL5与CXCR2的表达较癌旁正常组织显著升高(P<0.05)。CXCL5能显著增加SNU216与MFC细胞p-NF-κB与p-β-catenin的表达(均P<0.05)。与对照组小鼠相比,过表达CXCL5组小鼠的肿瘤体积显著增高(P<0.05),生存期显著降低(P<0.05),癌组织中CXCL5、p-NF-κB与p-β-catenin的表达显著升高(P<0.05),癌组织中CD4^+T、CD8^+T与CD56^+CD16^+NK细胞数量均显著降低(均P<0.05)。结论 CXCL5可能通过调控NF-κB与Wnt/β-catenin信号通路抑制肿瘤免疫从而发挥促进胃癌的作用。     

胆固醇代谢调控CD8+T细胞抗肿瘤作用的研究进展

CD8+T细胞又名细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL）,具有直接杀死病原体感染细胞和癌细胞的作用。然而,CD8+T细胞常常丧失其效应功能,继而限制肿瘤微环境中的抗肿瘤免疫,因此,如何重新激活CD8+T细胞的抗肿瘤效力是目前需要解决的问题。最近研究发现,胆固醇代谢在肿瘤中发挥重要作用,胆固醇有助于T细胞受体的积聚和免疫突触的形成,T细胞的效应功能也会被其代谢所影响,肿瘤细胞可利用胆固醇代谢诱导T细胞耗竭和逃避T细胞免疫监视。目前针对胆固醇代谢与CD8+T细胞免疫效应新分子和新策略的筛选已成为肿瘤研究领域的热点,本文综合关于胆固醇与CD8+T细胞方面的重要研究,阐述胆固醇代谢及在CD8+T细胞抗肿瘤活性中的作用机制,为后续研究提供参考。     

基于质谱流式细胞技术揭示TP53突变型乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌的免疫微环境特征

目的 探讨TP53突变型乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）相关性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的肿瘤免疫微环境特征。方法 收集2018—2019年广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科手术切除的38例HCC患者活体组织标本及其配对癌旁组织标本，提取组织DNA，并进行基因突变分析。采用质谱流式细胞术（CyTOF）比较TP53突变组和TP53未突变组中癌组织与癌旁组织以及两组癌组织之间的免疫微环境特点。结果 采用CyTOF鉴定TP53突变组和TP53未突变组所有免疫细胞，结果鉴定为22个细胞亚群，包括CD4⁺T细胞亚群、CD8⁺T细胞亚群、B细胞亚群、树突细胞亚群、自然杀伤（natural killer cell，NK）细胞亚群、NKT细胞亚群、粒细胞亚群和2个未知细胞亚群。其中，TP53突变组癌组织中CD8⁺T细胞和CD4⁺T细胞的表达比例均较未突变组癌组织高（2.26% vs 0.47%，P=0.028；7.53% vs 3.55%，P=0.046）。结论 TP53突变型HBV相关性HCC的肿瘤免疫微环境具有免疫异质性。     

PD-1在肝细胞癌肿瘤浸润淋巴细胞中的表达及与预后的相关性

背景与目的：程序性死亡［蛋白］-1（programmed death-1,PD-1）在调节外周免疫耐受中发挥重要作用,PD-1在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）肿瘤浸润淋巴细胞中的表达状态与效应细胞CD8 ⁺ T淋巴细胞的关系尚不清楚,探讨HCC肿瘤浸润淋巴细胞中PD-1的表达及预后意义。方法：收集2008年1月—2016年12月在南通市第三人民医院接受手术的344例HCC患者的病理样本,制备组织芯片;采用免疫组织化学法检测HCC组织中PD-1、程序性死亡［蛋白］配体-1（programmed death ligand-1,PD-L1）的表达,分析PD-1在肿瘤浸润淋巴细胞中的表达与HCC临床病理学参数、PD-L1的表达、CD8 ⁺ T淋巴细胞之间的相关性及与患者预后的关系;采用免疫组织化学双标记法检测CD8 ⁺ PD-1 ⁺ 双阳性T淋巴细胞密度对HCC患者预后的影响。结果：PD-1阳性信号定位于HCC肿瘤浸润淋巴细胞的细胞膜或细胞质中。PD-1的高表达率为43.9%,其高表达与肿瘤组织学分级（P=0.009）、肿瘤细胞中PD-L1的表达（P<0.001）、肿瘤浸润淋巴细胞中PD-L1的表达（P<0.001）及肿瘤浸润CD8 ⁺ T淋巴细胞密度（P=0.003）有关,并且PD-1高表达是评估总生存（overall survival,OS）率、无病生存（disease-free survival,DFS）率的独立危险因子（OS：HR=1.654,P=0.010;DFS：HR=2.518,P<0.001）。另外,高密度肿瘤浸润CD8 ⁺ PD-1 ⁺ 双阳性T淋巴细胞组较低密度组OS和DFS更差（P均<0.001）。结论：PD-1在HCC肿瘤浸润淋巴细胞中表达可能是潜在的预后因子。     

食管癌组织中肿瘤浸润性树突状细胞表型改变及功能分析

目的:探讨食管癌患者肿瘤组织中肿瘤浸润性树突状细胞表型改变及功能。方法:收集2017年01月至2018年09月我院收治的食管癌患者92例作为观察组,选择同时期我院收治的92例食管良性肿物患者作为对照组。术中分别取食管癌标本和良性肿物标本。检测相应组织中肿瘤浸润性树突状细胞表达水平及表型,同时检测T细胞亚群表达情况,分析肿瘤浸润性树突状细胞表达情况和食管癌患者临床特征的相关性。结果:与对照组比较,观察组肿瘤浸润性树突状细胞密度、MHC-Ⅱ阳性树突状细胞和CD54阳性树突状细胞百分比均显著降低(P＜0.05);观察组CD4+T细胞增高［(24.81±3.72）% vs （20.77±3.63）%,P=0.000］;CD8+T细胞降低［(20.90±4.12）% vs （23.08±4.42）%,P=0.001］。食管癌组织中肿瘤浸润性树突状细胞密度、MHC-Ⅱ阳性树突状细胞和CD54阳性树突状细胞百分比与肿瘤直径、TNM分期和淋巴结转移有关(P＜0.05)。食管癌组织中肿瘤浸润性树突状细胞密度、MHC-Ⅱ阳性树突状细胞和CD54阳性树突状细胞与CD4+T细胞显著负相关,与CD8+T细胞显著正相关(P＜0.05)。结论:肿瘤浸润性树突状细胞在食管癌组织中低表达,功能低下,与T细胞亚群失衡和预后不良有关。     

结直肠癌及腺瘤患者CD4+、CD8+和CD28+T淋巴细胞的亚群变化及临床意义

背景与目的：结直肠癌（colorectal cancer,CRC）严重影响患者生存。探讨肿瘤微环境（tumor microenvironment,TME）T细胞亚群在CRC和腺瘤中的表达及意义。方法：用免疫组织化学法和流式细胞术对51例健康人（对照组）、46例结直肠腺瘤（腺瘤组）、100例CRC（癌症组）和15例CRC术后（癌术后组）患者进行T细胞亚群检测。结果：① 对照组、腺瘤组及癌症组3组中CD4⁺T细胞的阳性率分别是90.00%、43.75%及32.65%,CD8⁺T淋巴细胞的阳性率分别是30.00%、56.25%及75.51%,CD28⁺T淋巴细胞的阳性率分别是42.86%、30.00%及20.00%。② 对照组、腺瘤组及癌症组3组中CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、CD28⁺、CD8⁺CD28⁺和CD8^－CD28⁺逐渐降低,CD8⁺、CD8⁺CD28^－逐渐增加（P＜0.05）;癌术前术后T细胞亚群差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：① CRC微环境T细胞亚群中CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、CD28⁺、CD8⁺CD28⁺和CD8^－CD28⁺呈递减趋势,CD8⁺、CD8⁺CD28^－呈递增趋势,且在癌前病变腺瘤中已逐步出现上述趋势变化。② CRC患者行肿瘤切除术后,其T细胞亚群有所恢复,故在一定程度上,CRC中T细胞亚群的变化可以早期预测结直肠疾病的发展。