利用全胚胎和微团培养模型评价硝酸镧的发育毒性

目的： 利用大鼠植入后全胚胎培养模型和微团培养模型评价硝酸镧潜在的胚胎早期和中、晚期发育毒性。方法： 将大鼠胚胎随机分为5组后培养于含不同剂量硝酸镧（0、0.12、0.23、0.46及1 mmol/L）的即刻离心血清中，48 h后测量胚胎卵黄囊直径（YSD）、顶臀长（CRL）和头长（HL），计数体节，并根据Brown's评分法对胚胎进行总形态学评分（TMS）。同时，对BALB/c 3T3细胞进行细胞毒性测试。根据欧洲替代方法验证中心（ECVAM）的预测模型对硝酸镧的胚胎早期发育毒性进行评价。分离大鼠胚胎肢芽细胞，制成单细胞悬液，进行微团培养。分别用0.03、0.06、0.13、0.25、0.5、1、2及3 mmol/L硝酸镧进行染毒，利用中性红活细胞摄取染色法测定50%细胞增殖受抑制时的浓度（IC₅₀）以反映细胞增殖情况，利用阿利新蓝染色法测定50%细胞分化受抑制时的浓度（ID₅₀）以反映细胞分化情况。根据ECVAM预测模型对硝酸镧胚胎中晚期发育毒性进行评价。结果： 硝酸镧对胚胎生长的无可见有害作用水平（NOAEL）为0.12 mmol/L，0.46 mmol/L硝酸镧可明显降低胚胎YSD、CRL和HL（P < 0.05），对胚胎生长有明显的抑制效应。0.46 mmol/L硝酸镧可诱导胚胎产生发育畸形，减少胚胎体节形成数目（P < 0.05）。硝酸镧对肢芽细胞增殖活性的NOAEL为1 mmol/L，对肢芽细胞分化为软骨细胞的NOAEL为0.25 mmol/L，其IC₅₀和ID₅₀分别为1.57 mmol/L（510.25 μg/mL）和0.99 mmol/L（321.75 μg/mL）。结论： 经全胚胎培养预测模型评价硝酸镧为弱胚胎发育毒性化学物；经微团培养模型评价硝酸镧为无胚胎发育毒性化学物。     

利用全胚胎和微团培养模型评价硝酸铈的发育毒性

目的：利用大鼠植入后全胚胎培养模型和微团培养模型模拟胚胎发育早期和中、晚期过程,评价硝酸铈的发育毒性,以期为进一步开展体内实验研究及合理制定人群稀土接触的健康指导值提供科学依据。方法：取孕9.5 d的SD大鼠胚胎,分别在含0.00、0.50、0.75、1.00 mmol/L硝酸铈的大鼠即刻离心血清中37℃旋转培养,48 h后根据Brown's评分法对胚胎的生长发育及形态功能进行评分,结合BALB/c 3T3细胞毒性结果,利用欧洲替代方法验证中心（ECVAM）全胚胎预测模型评价硝酸铈胚胎早期发育毒性。分离孕13 d的SD大鼠胚胎肢芽原代细胞进行微团培养,分别用0.03、0.06、0.13、0.25、0.50、1.00、2.00和3.00 mmol/L硝酸铈进行染毒,培养5 d后利用中性红活细胞摄取染色法测定50%细胞增殖受抑制时的浓度（IC50）,利用阿利新蓝染色法测定50%细胞分化受抑制时的浓度（ID50）,根据ECVAM微团培养预测模型评价硝酸铈胚胎中、晚期发育毒性。结果：全胚胎培养模型中硝酸铈对胚胎生长的无可见有害作用水平（NOAEL）为0.50 mmol/L,0.75 mmol/L以上浓度硝酸铈可显著降低胚胎卵黄囊直径和顶臀长（P < 0.05）,抑制胚胎生长,并可致胚胎体节数目减少（P < 0.05）,胚胎发育畸形。微团培养模型中硝酸铈对肢芽细胞增殖活性的NOAEL为0.25 mmol/L,对肢芽细胞分化为软骨细胞的NOAEL为0.12 mmol/L,其IC₅₀和ID₅₀分别为1.23和0.76 mmol/L。结论：经全胚胎培养预测模型和微团培养模型评价硝酸铈为弱发育毒性化学物。     

采用微团培养模型探讨染料木黄酮的发育毒性

目的：利用大鼠胚胎肢芽和中脑细胞微团培养模型研究染料木黄酮（genistein,GEN）的发育毒性,并探讨其发育毒性机制。方法：实验分为不同浓度的GEN（0、0.94、1.875、3.75、7.5、15.0μg/ml）染毒组,受试物分别作用于培养大鼠胚胎肢芽细胞和中脑细胞微团,采用中性红摄取法检测GEN对细胞增殖的影响,采用阿利新蓝染色方法检测GEN对肢芽细胞分化的影响,采用图像处理分析方法检测GEN对中脑细胞分化的影响。计算细胞50%增殖抑制浓度（IC50-P）和50%分化抑制浓度（IC50-D）。用不同浓度的雌激素受体拮抗剂ICI182780（0.1,0.5,1μmol/L）分别预处理细胞后再加入GEN（7.5μg/ml）,观察雌激素受体途径在GEN诱导的发育毒性中的作用。结果：GEN对肢芽细胞的IC5-0P和IC5-0D分别为5.4μg/ml和4.9μg/ml,GEN对中脑细胞的IC5-0P为6.2μg/ml,IC5-0D分别为7.1μg/ml（集落分化个数）或5.3μg/ml（集落分化面积）。IC5-0P/IC50-D的比值均接近1。在GEN7.5μg/ml染毒组,用ICI182780预处理细胞,不能改变GEN诱导的发育毒性作用。结论：根据Flint＇s和欧洲替代方法验证中心ECVAM致畸物判别标准,并结合人体实际可能接触水平,认为GEN为强致畸物,并且对人类存在可能的风险。其致畸作用可能主要通过细胞毒性发挥作用,不依赖于雌激素受体途径。     

麻痹性贝类毒素体外生物毒性检测方法的建立

目的：建立麻痹性贝类毒素体外生物毒性检测方法。方法：小鼠神经干细胞（NSC）培养于96孔培养板中,至对数生长期,每孔加入170 μL培养液和10 μL石房蛤毒素（STX）标准品（分别为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 ng）,再加入10 mmol/L的乌本苷10 μL及1 mmol/L的藜芦碱10 μL。同时设置乌本苷及藜芦碱对照孔,以及空白对照孔。CCK-8溶液孵育后用酶标仪测定各孔D（450）值,根据石房蛤毒素标准液含量与D（450）值之间的剂量反应关系,建立标准曲线。结果：培养的正常NSC第1天为单细胞悬液,第2~3天聚集成为小神经球,第4天为大神经球;加入乌本苷及藜芦碱后较多细胞出现肿胀破裂,加入STX后可见肿胀或破裂死亡的细胞,但细胞形态多为正常。并于0.2~1.0 ng范围内建立了麻痹性贝类毒素体外生物毒性检测方法并建立了标准曲线,其回归方程为y=1.252+0.495x（r=0.998 0,P < 0.01）。结论：成功建立了麻痹性贝类毒素体外生物毒性检测方法,该研究为神经性贝类毒素的体外检测相关研究奠定了基础。     

铁超载对非酒精性脂肪肝病HepG2细胞模型中Hepcidin和 Fpn-1的影响

目的：探讨铁超载对非酒精性脂肪肝病（NAFLD）HepG2细胞模型中铁代谢指标Hepcidin和Fpn-1的影响。方法：采用四甲基噻唑蓝（MTT）法分别检测浓度均为0.062 5、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mmol/L的油酸（OA）和硫酸亚铁铵[Fe（NH₄）₂·（SO₄）₂·6H₂O,下称Fe]对HepG2细胞活力的影响,确定OA和Fe联合给药浓度。采用0.5 mmol/L OA联合不同浓度（0、0.125、0.25、0.5 mmol/L）的Fe诱导HepG2细胞建立NAFLD 细胞模型,并设阴性对照组（未经药物处理的细胞）和0.5 mmol/L Fe单独处理组为对照,测定细胞内甘油三酯（TG）和铁蛋白（Fn）含量。采用实时荧光定量PCR（qPCR）法和Western blot法测定细胞中铁调素（Hepcidin）、膜铁转运蛋白（Fpn-1） mRNA和蛋白的表达。结果：与阴性对照组相比,0.5 mmol/L的OA,0.125、0.25、0.5 mmol/L的Fe对细胞存活率无明显影响（P > 0.05）。与对照组和0.5 mmol/L OA组相比,0.5 mmol/L OA与各浓度Fe联合作用时,随着铁浓度增大,细胞内的TG和铁蛋白（Fn）含量逐渐增加,差异具有统计学意义（P < 0.05）。与对照组和0.5 mmol/L OA组相比,0.5 mmol/L OA联合不同浓度Fe处理后Hepcidin的mRNA和蛋白表达均明显下降（P < 0.05）;0.5 mmol/L OA联合不同浓度Fe处理后Fpn-1 mRNA的表达均明显上调（P < 0.05）;与对照组相比,0.5 mmol/L Fe组、0.5 mmol/L OA联合0.25、0.5 mmol/L Fe组Fpn-1蛋白水平明显降低（P < 0.05）。结论：0.5 mmol/L OA联合不同浓度Fe处理时可引起细胞发生脂质沉积,使体内正常铁代谢发生紊乱,Hepcidin的mRNA和蛋白表达均明显下降,Fpn-1 mRNA表达上调而蛋白表达下降,进一步加重NAFLD的进展。     

毒死蜱对果蝇生长发育的影响

目的：研究毒死蜱（CPF）对果蝇生长发育的影响。方法：设定0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0和4.0 mg/L共7个CPF浓度梯度对果蝇进行急性染毒,统计每组果蝇96 h死亡数,Probit法计算毒死蜱染毒96 h对果蝇的半数致死浓度（LC₅₀）,依据LC₅₀分别设置含毒死蜱0.04、0.08、0.16、0.32 mg/L的培养基,用其染毒果蝇后,检测雌、雄果蝇体质量变化,各浓度组随染毒时间延长雌雄果蝇体质量日增减量及各染毒时间段随浓度增加雌雄果蝇体质量变化。结果：CPF对雌果蝇的毒性（LC₅₀为0.447 mg/L）大于雄果蝇（LC₅₀为0.858 mg/L）。CPF各浓度在染毒不同时间对雌果蝇的体质量无显著影响（P>0.05）。0.04~0.32 mg/L CPF使雄果蝇体质量平均日减轻0.01 mg/d,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,存在明显时间-效应关系。雄果蝇对低浓度0.04 mg/L（LC₅₀的1/20）CPF极为敏感,体质量显著下降（0.04～0.08 mg）,雄果蝇在0.16 mg/L浓度染毒时体质量增加（0.02 mg）,染毒72或96 h时各浓度组体质量差异有统计学意义（P<0.05）,存在明显剂量-效应关系。结论：CPF使雄性果蝇体质量发生变化,反映CPF可对雄性果蝇生长发育生理生化指标产生相应的影响。     

3种植物在水培方式下对锶的富集和迁移实验研究

目的：研究绿萝、吊兰和吊竹梅对锶的富集和迁移情况,以及锶处理对植物吸收其他6种主要营养元素的影响。方法：采用水培扦插方式培养3种植物,每种植物设置1个对照组和3个水培液锶（浓度分别为1、2和3 mmol/L）处理组,每组培养绿萝和吊竹梅各4株,吊兰3株,整个实验在光照培养箱中进行,各组实验条件保持一致,实验周期为28 d。采用电感耦合等离子体发射光谱仪检测植物根、茎、叶组织中钙、铁、钾、镁、磷、硫和锶元素的含量。结果：在3 mmol/L锶处理下,3种植物根、茎、叶组织中的锶含量与对照相比显著升高（P < 0.05）。从植物各组织中的锶质量分数来看,w_{锶,吊竹梅叶} > w_{锶,绿萝叶} > w_{锶,吊兰叶},w_{锶,吊竹梅茎} > w_{锶,绿萝茎},w_{锶,吊竹梅根} > w_{锶,吊兰根}。随水培液中锶浓度的增加,植物组织中钙和铁含量呈显著降低趋势（P < 0.05）。吊竹梅叶、茎和吊兰叶的迁移系数（TF）在0.36~2.54之间,在1 mmol/L锶处理下吊竹梅叶和茎的TF最高,分别达到2.54和2.33,随水培液中锶浓度的增加,其TF呈下降趋势。结论：对比3种实验植物,吊竹梅可作为锶污染水体修复的备选植物。水体中锶含量的增加可降低植物根系对钙和铁的吸收和富集。     

硫化钠对大鼠经口给药的毒性和致畸性检测

目的： 研究硫化钠对大鼠经口给药的急性毒性、长期毒性和致畸性,为其进一步的毒理学研究及应用提供参考。方法： 选用SPF级SD大鼠,雌雄各半,采用霍恩法设置215、464、1 000、2 150 mg/kg剂量系列经口给药检测大鼠急性毒性;常规重复给药毒性试验剂量分别为30、60、120 mg/kg,另外设蒸馏水对照组,检测亚慢性毒性;在妊娠中期采用剂量分别为30、60和120 mg/kg连续给药10 d的传统致畸试验检测其致畸毒性。结果： 硫化钠对大鼠急性经口LD₅₀为雌性794（584~1 080） mg/kg,雄性926（636~1 350） mg/kg;大鼠重复给药毒性试验未出现中毒症状及死亡,120 mg/kg高剂量组大鼠的消化道出现病理学改变。与对照组比较,致畸试验120 mg/kg剂量组发现死胎百分率（1.75%）和外观畸形窝发生率（5.88%）均显著增加（P<0.05）。结论： 在本试验条件下,硫化钠经口给药急性毒性LD₅₀分别为雌性794 mg/kg、雄性926 mg/kg;重复给药毒性试验中（≤60 mg/kg时）未观察到有害作用,致畸试验出现可疑阳性。     

DEHP对3β-羟类固醇脱氢酶表达水平的影响

目的：研究邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯（DEHP）对MCF-7细胞中3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）表达的影响。方法：采用不同浓度（0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 mmol/L） DEHP对体外培养的MCF-7细胞分别染毒12、24和48 h,或同一浓度（0.8 mmol/L）染毒不同时间（3、6、12、24、48 h）后,荧光定量PCR检测各组MCF-7细胞3β-HSD mRNA表达水平,Western blot检测3β-HSD蛋白表达水平。结果：DEHP 0.1~0.8 mmol/L分别染毒细胞12~48 h,3β-HSD mRNA表达水平均较对照组升高,差异有统计学意义（P < 0.01）;DEHP 0.05 mmol/L染毒细胞48 h,3β-HSD mRNA表达水平比对照组升高,差异有统计学意义（P < 0.05）。DEHP 0.8 mmol/L染毒细胞6~48 h,3β-HSD mRNA表达水平均较对照组升高,差异有统计学意义（P < 0.01）。DEHP 0.2~0.8 mmol/L染毒细胞24 h,3β-HSD蛋白表达水平较对照组升高,差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。结论：DEHP可引起3β-HSD mRNA和蛋白表达水平升高,推测DEHP可能通过影响类固醇激素合成过程中3β-HSD表达水平的变化,从而产生生殖毒性作用。     

新型多金属氧酸盐药物{BiW8O30}对肝癌SK-HEP-1细胞的抑制作用

目的： 研究新型多金属氧酸盐药物{BiW₈O₃₀}对体外培养的肝癌细胞的作用及其机制。方法： 体外培养人肝癌细胞SK-HEP-1,实验组分别给予50、100、200、400 μmol/L的{BiW₈O₃₀}药液,对照组给予正常培养液,培养24和48 h后检测相应指标。采用细胞增殖实验检测细胞存活率并计算{BiW₈O₃₀}对SK-HEP-1细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）;细胞集落形成实验检测集落形成数;划痕实验检测划痕愈合率;Transwell实验检测侵袭细胞数变化;荧光染色分析药物对细胞凋亡的影响。结果： 与对照组比较,50、100、200、400 μmol/L的{BiW₈O₃₀}处理24 h后,SK-HEP-1细胞存活率分别降低了29.98%、51.29%、65.81%、83.59%（P<0.01）,48 h后分别降低了31.57%、66.23%、81.88%、83.97%（P<0.01）;IC₅₀分别为24 h时（102.07±1.38）μmol/L,48 h时（74.68±0.91）μmol/L;50、100、200 μmol/L的{BiW₈O₃₀}处理2周后,SK-HEP-1细胞的集落形成数分别降低了28.57%、63.27%、90.82%（P<0.01）;50、100、200 μmol/L的{BiW₈O₃₀}处理24 h后,SK-HEP-1细胞的划痕愈合率分别降低了8.47%、70.59%、80.83%（P<0.01）,48 h后分别降低了19.56%、65.98%、75.49%（P<0.01）;SK-HEP-1的侵袭细胞数在24 h后分别降低了27.74%、45.51%、68.77%（P<0.01）,48 h后分别降低了47.03%、72.20%、84.07%（P<0.01）。荧光染色后观察发现{BiW₈O₃₀}处理后的肝癌细胞皱缩,细胞核固缩、碎裂,出现凋亡小体。结论： 新型多金属氧酸盐药物{BiW₈O₃₀}通过抑制肝癌SK-HEP-1细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力以及诱导细胞凋亡发挥体外抗肿瘤作用。     

细颗粒物对斑马鱼胚胎发育的影响

目的：探讨细颗粒物对斑马鱼胚胎发育的影响。方法：采集深圳市某小学楼顶雾霾天气的大气细颗粒物样本,将斑马鱼胚胎暴露于不同浓度的细颗粒物（0、5、20、80、320、800 μg/mL）混悬溶液中,在不同时间（0、2、4、6、8、16、24、48、72、96 h）于体式显微镜下观察斑马鱼胚胎的孵化与存活情况。结果：与对照组相比,细颗粒物暴露48 h后,各剂量组均有胚胎死亡发生,并且在80、320、800 μg/mL剂量组胚胎死亡率明显升高（死亡率均为100%）,而胚胎孵化率则呈现随着剂量升高而降低的趋势,其中80 μg/mL剂量组有较多胚胎出现不出膜现象,800 μg/mL剂量组的胚胎在染毒48 h后全部死亡。经统计分析,细颗粒物对斑马鱼胚胎的半数致死量为（56.6±2.8）μg/mL。结论：细颗粒物可能影响斑马鱼胚胎发育,导致孵化失败和死亡。     

UPLC/Q-TOF MS/MS技术评价防腐剂硼酸和叠氮化钠对尿液代谢物的影响

目的：在基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱（UPLC/Q-TOF MS/MS）的尿液代谢组学研究中,确定硼酸和叠氮化钠两种防腐剂是否适用于尿液样品的处理,并确定其适宜的浓度范围。方法：收集6名健康志愿者的晨尿,等量混匀后分装,根据处理方式不同,分为对照组、叠氮化钠组和硼酸组。对照组样品不添加任何防腐剂,叠氮化钠组在尿液中分别添加终浓度为0.1、1和10 mmol/L的叠氮化钠,硼酸组在尿液中分别添加终浓度为2、20和200 mmol/L的硼酸。应用UPLC/Q-TOF MS/MS技术对样品进行检测,采用主成分分析、偏最小二乘判别分析和正交偏最小二乘判别分析等化学计量学方法进行数据处理,比较不同处理组间的代谢图谱。结果：偏最小二乘判别分析得分图显示,3个浓度的叠氮化钠处理组以及2 mmol/L硼酸处理组与对照组间无明显分离趋势;200 mmol/L硼酸处理组与对照组分离趋势明显,两组尿液代谢物存在差异。结论：0.1~10 mmol/L叠氮化钠和2 mmol/L硼酸适用于基于UPLC/Q-TOF MS/MS技术的尿液代谢组学研究。     

五氧化二砷对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响

The micromass culture was used to determine the effects of vanadium pentoxide(v2O5)on the proliferation and differentiation of limb bud cells of rat．In the in vitro test,the results showed that V2O had obvious inhibiting effects on both proliferation and difierentiation of limb bud cells with a dose-dependent response,its proliferating and differentiating IC50 being 13．64 and 4．77 Vmol／L,respectively． In the in vivo/in vitro test,the results showed that V2O5 had no obvious effect on cell proliferation but had obvious inhibiting effect on cell differentiation．These results indicated that V205 might have a specific inhihifing effec t on the differentiation oflim b bud cells．     

EGCG对顺铂损伤HEK293细胞及杀伤A549细胞的影响

目的: 探讨表儿茶素没食子酸酯(EGCG)对顺铂(DDP)致人胚肾HEK293细胞损伤及对DDP杀伤人肺癌A549细胞的影响。方法: 体外培养HEK293细胞和A549细胞,分为对照组、DDP组和DDP+EGCG组,DDP组和DDP+EGCG组同时建立DDP损伤模型,MTT法检测EGCG和/或DDP对HEK293细胞和A549细胞存活率的影响。结果: EGCG对HEK293细胞的IC₅₀值为61.6 mg/L。当EGCG浓度<40 mg/L时,对DDP诱导的HEK293细胞损伤没有显著性影响,EGCG浓度≥40 mg/L时,可显著性增强DDP对HEK293细胞的损伤作用。EGCG对A549细胞的IC₅₀值为33.6 mg/L。当EGCG浓度≥32 mg/L时,可显著增强DDP对A549细胞的杀伤作用。结论: EGCG对DDP所致HEK293细胞损伤无保护作用,但EGCG对癌细胞毒性作用大于其对正常细胞的毒性,且当EGCG与DDP同时使用时可以加重A549细胞损伤。     

平移计数法在微团培养技术中的应用

背景与目的： 探索一种经济、快速而又准确的计数方法,以应用于微团培养技术中集落的评价。 材料与方法： 采用5 d连续培养妊娠13 d的大鼠胚胎中脑及肢芽细胞后,以倒置显微镜视场直径为间距将微团划分为若干等间距平行区间,沿一定方向移动视场并依次计数各区间内集落数,通过摄像分析和批内重复实验评价方法的准确度及灵敏度。 结果： 各组数据经Grubbs检验法检验均为正常数据,中脑细胞集落数和肢芽细胞集落数的相对误差分别为0.776％、0.213％;批内标准差分别为0.933 9、2.883 9;批内变异系数分别为1.24％、2.05％,均小于WHO提出的OCV(3％)标准。 结论： 平移记数法无需特殊设备,不仅具有较好的准确度和极高的灵敏度,而且适用于即时分析,从而缩短实验周期,可以作为微团培养技术中集落计数的常规方法。