高脂饮食对结肠癌肝脏转移的影响及作用机制

目的 探讨高脂饮食对结肠癌肝脏转移的影响及其作用机制。方法 30只NSI第三代免疫缺陷裸鼠脾脏种植结肠癌细胞DLD1构建移植瘤裸鼠模型，分别喂养普通饲料（对照组）、高脂饲料（高脂饮食组）和高脂饲料并腹腔注射CXCR4拮抗剂AMD3100（高脂饮食+AMD3100组），每组10只。12周后颈椎脱臼处死，称量各组裸鼠体重、肝脏重量，统计肝脏中肿瘤转移灶数目，并采用Western blot和RT-qPCR检测肿瘤组织中SDF-1、CXCR4的蛋白和mRNA表达水平。结果 12周后，高脂饮食组裸鼠体重、脂肪重量、肝脏重量及血清瘦素浓度高于对照组和高脂饮食+AMD3100组（P<0.05）。对照组、高脂饮食组和高脂饮食+AMD3100组裸鼠发生肝脏转移的比例分别为30.0%、80.0%和40.0%。高脂饮食组裸鼠的肿瘤体积及肝脏转移灶数量均明显高于对照组［（3.83±0.42） mm³  vs （1.00±0.15） mm³，P<0.001；（4.33±0.58） 个 vs （1.33±0.58） 个，P=0.002］和高脂饮食+AMD3100组 ［（3.83±0.42） mm³  vs （1.96±0.15） mm³，P<0.001；（4.33±0.58） 个 vs （2.33±0.58） 个，P=0.002］。Western blot和RT-qPCR检测结果显示，高脂饮食组结肠癌组织中的SDF-1、CXCR4的蛋白和mRNA表达水平均较对照组和高脂饮食+AMD3100组明显上调（均P<0.05）。结论 高脂饮食可通过促进结肠癌癌组织中SDF-1和CXCR4的表达水平而增强结肠癌的肝脏定向转移。     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米对食管鳞状细胞癌生长的影响

目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对食管鳞状细胞癌生长的影响。方法 基于全基因组测序数据,利用药物靶标数据库DGIdb筛选食管鳞状细胞癌相关药物靶基因,采用DAVID软件进行KEGG信号通路富集分析。采用MTT法检测硼替佐米对KYSE30、KYSE180、KYSE150、TE1、KYSE510等5株食管鳞状细胞癌细胞生长的影响,以DMSO作用为相应对照组。裸鼠体外成瘤后分别腹腔注射生理盐水（对照组）及硼替佐米（硼替佐米组）,观察硼替佐米对裸鼠移植瘤体积及重量的影响;免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤细胞Ki-67蛋白的表达。结果 469例食管鳞状细胞癌的基因组学测序数据在DGIdb数据库中共鉴定出307个药物靶基因,突变频率>2.5%的显著突变药物靶基因包括PIK3CA、NOTCH1、CDKN2A、ERBB4等;药物靶基因富集的信号通路有RTK-RAS、PI3K/AKT/mTOR、NOTCH、ERBB信号通路、细胞周期和蛋白酶体途径等。MTT实验结果显示,硼替佐米处理后,5株食管鳞状细胞癌细胞的增殖能力均较对照组降低（P<0.05）;与对照组相比,硼替佐米组裸鼠移植瘤体积减小［（1 909.18±533.40） mm³ vs （1 065.83±283.94） mm³,P＝0.007］,移植瘤重量降低［（1.60±0.36） g vs （0.98±0.30） g,P＝0.009］。免疫组织化学法检测结果显示,与对照组比较,硼替佐米组裸鼠移植瘤组织中Ki-67表达降低（86.32±4.51 vs 43.83±3.22,P＝0.001）。结论 蛋白酶体抑制剂硼替佐米在体外和体内均可抑制食管鳞状细胞癌细胞生长。     

二甲双胍对直肠癌细胞放疗敏感性的影响

目的 探讨二甲双胍（DMBG）对直肠癌细胞放疗敏感性的影响及其可能的作用机制。方法 体外培养直肠癌SW1463细胞，设对照组、DMBG组、照射组及DMBG+照射组，同时建立裸鼠移植瘤模型。MTT实验检测不同浓度（5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L、80 mmol/L）DMBG作用SW1463细胞的细胞活力，克隆集落形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期，免疫印迹法检测DNA损伤蛋白γ-H2AX及DNA损伤修复蛋白DNA-PK的表达，同时观察各组裸鼠移植瘤重量及体积变化，计算抑瘤率，绘制肿瘤生长曲线。 结果 不同浓度（5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L、80 mmol/L）DMBG作用可抑制SW1463 细胞活力（F=43.283，P=0.021）。DMBG+照射组在不同照射剂量（2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy）照射下的细胞存活率均低于DMBG组及照射组（P<0.05），细胞凋亡率明显高于DMBG组及照射组［（63.32±6.15）% vs （16.19±4.38）%，P<0.05；（63.32±6.15）% vs （17.24±5.17）%，P<0.05 ］；DMBG+照射组G2 /M期细胞比例增加到（61.50±5.25）%，G0 /G1期细胞比例减少为（17.36±3.17）%，上调了γ-H2AX蛋白表达，并下调了DNA-PK蛋白表达，与DMBG组及照射组比较差异有统计学意义（P<0.05）；裸鼠移植瘤体积和重量明显变小，抑瘤率亦明显高于DMBG胍组和照射组［（68.51±2.58）% vs （20.74±2.61）%，P<0.05；（68.51±2.58）% vs （31.52±3.43）%，P<0.05］。结论 二甲双胍对直肠癌SW1463细胞及其裸鼠移植瘤具有放疗增敏作用，可能与DMBG联合放疗后改变肿瘤细胞周期分布，抑制肿瘤细胞对DNA损伤的自我修复能力有关。     

miR-125b-5p对喉鳞状细胞癌细胞能量代谢及增殖的影响

目的  探讨miR-125b-5p对喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）细胞能量代谢和增殖的影响及其可能的作用机制。方法 实验分为miR-125b-5p转染组（miR-125b-5p模拟物转染LSCC）和对照组（空质粒转染LSCC细胞）。采用RT-qPCR 检测miR-125b-5p在正常支气管上皮细胞和LSCC细胞中的表达,CCK-8和流式细胞术检测LSCC细胞增殖、凋亡情况,Western blot检测miR-125b-5p过表达后LSCC中HK2的表达,3H-2DG法和乳酸盐比色测定实验分别检测LSCC细胞葡萄糖消耗和乳酸产生的情况。结果 RT-qPCR实验结果显示,与正常支气管上皮细胞相比,LSCC细胞中miR-125b-5p的表达降低（0.68±0.03 vs 0.22±0.05,t=7.025,P=0.001）。CCK-8实验结果显示,转染72 h和96 h后,miR-125b-5p转染组LSCC细胞的增殖能力均较对照组明显降低（P<0.05）。流式细胞术检测结果显示,miR-125b-5p转染组LSCC细胞凋亡率较对照组升高 ［（37.52±2.34）% vs （12.46±3.52）%,t=7.025,P<0.001）］,但细胞集落形成能力降低（0.29±0.02 vs 1.02±0.03,t=5.689,P=0.005）;荧光素酶报告基因测定实验结果显示,miR-125b-5p转染组的荧光素酶活性低于对照组（0.32±0.03 vs 1.01±0.02,t=7.543,P=0.001）;Western blot法实验结果显示,miR-125b-5p转染组HK2蛋白表达水平较对照组降低（0.12±0.02 vs 0.75±0.03,t=5.875,P=0.023）;miR-125b-5p转染组葡萄糖消耗量［（3.85±0.86） dpm/mg vs （10.52±1.34） dpm/mg,t=6.118,P=0.005］以及乳酸产生量［（4.23±1.36） dpm/mg vs （10.96±2.45） dpm/mg,t=5.907,P=0.002］亦较对照组降低。结论 miR-125b-5p可能通过下调HK2表达降低喉鳞状细胞癌细胞的能量代谢和增殖能力,诱导细胞凋亡。     

c-jun基因沉默对放射抗拒鼻咽癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响

目的 探讨c-jun基因沉默对人鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法 用携带shRAN慢病毒载体感染CNE-2R细胞以沉默c-jun基因,构建c-jun-shRNA-CNE-2R细胞组（c-jun-shRNA组）以及阴性对照NC-shRNA-CNE-2R细胞组（NC组）,以CNE-2R细胞为空白对照组,采用Western blot 检测3组细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白的表达水平。构建裸鼠模型,观察3组细胞裸鼠皮下种植瘤生长曲线及体积;采用免疫组化法检测移植瘤组织中VEGF、CD34的表达,并检测组织内微血管密度（microvessel density,MVD）。结果 Western blot 结果显示,c-jun-shRNA组细胞VEGF蛋白表达较NC组及空白对照组明显下调（P<0.05）。裸鼠模型实验中,c-jun-shRNA组移植瘤体积为（720.85±72.10） mm³,质量为（0.42±0.04）g,MVD为11.69±3.30;NC组移植瘤体积为（1 196.81±90.69） mm³,质量为（0.80±0.08）g,MVD为32.56±7.33;空白对照组移植瘤体积为（1 203.76±100.42） mm³,质量为（0.83±0.05）g,MVD为35.45±4.87;c-jun-shRNA组种植瘤体积、质量、MVD较NC组和空白对照组低（P<0.05）。免疫组化检测结果显示,移植瘤组织中VEGF蛋白表达c-jun-shRNA组呈弱阳性,NC组及空白对照组组均呈强阳性。结论 c- jun基因沉默可抑制放射抗拒性鼻咽癌移植瘤生长及血管生成。     

沉默VEGF对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R侵袭迁移的影响

目的 探讨沉默血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R迁移和侵袭能力的影响。方法 制备含VEGF-shRNA的慢病毒载体（VEGF-LV1、VEGF-LV2、VEGF-LV3）和对照shRNA重组慢病毒（VEGF-NC）,并转染人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R,建立稳定沉默VEGF细胞（CNE-LV1、CNE-LV2和CNE-LV3）和阴性对照细胞（CNE-NC）。采用RT-qPCR和Western blot法检测细胞转染效果,划痕实验和Transwell小室实验检测VEGF沉默后细胞的迁移和侵袭能力。结果 成功构建VEGF-shRNA重组慢病毒并建立了稳定沉默VEGF细胞CNE-LV3。划痕实验和Transwell小室迁移实验显示,与空白对照组和CNE-NC组相比,CNE-LV3组细胞迁移率明显降低［（50.17±1.76）% vs （37.97±1.56）%,P＝0.001;（50.63±1.52）% vs （37.97±1.56）%,P＝0.001］,穿膜细胞数亦明显下降［（95.3±3.8） 个 vs （41.3±1.5） 个,P＜0.001;（94.3±4.0） 个 vs （41.3±1.5） 个,P＜0.001］;Transwell小室侵袭实验结果亦显示,CNE-LV3组细胞穿膜细胞数较空白对照组和CNE-NC组明显下降［（46.3±2.1） 个 vs（105.3±1.5） 个,P＜1.001;（46.3±2.1） 个 vs （93.3±2.5） 个,P＜0.001］。结论 沉默VEGF表达可抑制人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R的迁移和侵袭能力。     

多西他赛联合基质金属蛋白酶抑制剂SB-3CT对前列腺癌移植瘤生长的影响

目的 探讨多西他赛联合基质金属蛋白酶抑制剂（SB-3CT）对前列腺癌移植瘤生长的影响及其可能的作用机制。方法 用前列腺癌PC-3细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型，随机分为SB-3CT组（注射SB-3CT溶液25 mg/kg），联合用药组（SB-3CT 25 mg/kg+静脉注射多西他赛溶液 10 mg/kg）和空白对照组（注射等量生理盐水），每组5只。测量肿瘤体积和质量并绘制生长曲线。免疫组化检测移植瘤组织中PDK1和PFKFB4的表达。结果 联合用药组、空白对照组和SB-3CT组平均瘤体质量比较差异有统计学意义（F=29.556，P=0.001），且联合用药组的肿瘤生长速度明显较空白对照组和SB-3CT组慢。免疫组化结果显示，PDK1在联合用药组、空白对照组和SB-3CT组的染色评分分别为（2.33±0.47） 分、（6.00±0.81） 分和（4.33±0.48） 分，组间比较差异有统计学意义（F=18.200，P=0.003），且联合用药组评分低于SB-3CT组（P=0.017）；PFKFB4在3组的染色评分分别为（5.33±0.49） 分、（11.33±0.47） 分和（9.00±1.41） 分，组间比较差异有统计学意义（F=17.643，P=0.003），且联合用药组评分低于SB-3CT组（P=0.011）。结论 多西他赛联合基质金属蛋白酶抑制剂SB-3CT对前列腺癌移植瘤生长具有抑制作用，糖代谢相关酶PDK1和PFKFB4表达下调可能是潜在的分子机制。     

积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和自噬的影响

目的  探讨积雪草酸（asiatic acid,AA）对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和自噬的影响。方法 不同浓度AA作用于人肝癌SMMC-7721细胞24 h后,MTT法检测细胞活性并观察自噬抑制剂3-MA对40 μmol/L AA的干预作用;MDC染色检测自噬泡的形成,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62、mTOR、p-mTOR及p53的表达。结果 MTT检测结果显示,不同AA浓度均可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,并呈浓度依赖性（F＝46.790,P＝0.006）,IC₅₀ =37.313 μmol/L。与单独使用40 μmol/L AA相比,自噬抑制剂3-MA可部分逆转40 μmol/L AA对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用［（46.400±9.099）% vs （22.000±3.391）%,P＜0.001］。MDC染色实验表明40 μmol/L AA干预可增加自噬泡形成。Western blot检测发现,与对照组比较,40 μmol/L AA可明显降低LC3-Ⅰ的蛋白表达,而提高LC3-Ⅱ表达（1.744±0.108 vs 1.529±0.065,t=2.928,P=0.043;0.113±0.031 vs 0.380±0.036,t=-9.754,P<0.001）,降低p62蛋白表达（0.522±0.024 vs 0.123±0.019,t=22.565,P<0.001）和p-mTOR蛋白表达（1.252±0.039 vs 0.353±0.028,t=30.775,P<0.001）,但对mTOR和p53的蛋白表达无影响（1.713±0.111 vs 1.556±0.076,t=1.555,P=0.190;0.671±0.040 vs 0.726±0.055,t=-1.555,P=0.210）。结论 AA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,可能与其通过非p53依赖方式负调控mTOR通路诱发自噬有关。     

美蓝染色标记法联合Glisson蒂横断式肝切除与非规则性肝切除治疗肝癌的临床疗效

目的 探讨美蓝染色标记法联合Glisson蒂横断式肝切除与非规则性肝切除治疗肝癌的临床疗效。方法 对美蓝染色标记法联合Glisson蒂横断式肝切除25例（联合组）与非规则性肝切除23例（非规则组）治疗肝癌作前瞻性研究,比较两组患者围手术期情况,包括平均手术时间、术中出血量、术后1 d和4 d AST的水平、肿瘤标本切缘阳性率、并发症发生率、术后1年复发率和1年生存率等,并分析其临床疗效。结果 两组患者均无围手术期死亡病例。联合组平均手术时间较非规则组少［（120.16±15.45） min vs（130.26±8.48） min,t=2.77,P<0.05］;联合组术中出血量较非规则组少［（252.40±81.25） ml vs （493.44±100.96） ml,t=8.42,P<0.05］;联合组术后1 d、4 d AST水平上升幅度较非规则组小［（1 d AST：（143.76±49.48）U/L vs （253.82±77.79） U/L,t=5.90,P<0.05;4 d AST：（79.36±24.51） U/L vs（129.57±45.66） U/L,t=4.80,P<0.05］;肿瘤标本切缘阳性率分别为4.0%和8.7%（P>0.05）;围手术期并发症发生率联合组较非规则组低（12.00% vs 39.13%,P<0.05）;术后1年复发率联合组较非规则组低（20.00% vs 47.83%,P<0.05）;术后1年生存率两组差异无统计学意义（80.00% vs 78.26%,P>0.05）。结论 美蓝染色标记法联合Glisson蒂横断式肝切除较非规则性肝切除治疗肝癌的术中出血量和术后并发症少,患者术后恢复快,复发率低,值得临床推广应用。     

Hsa-miR-4282对肝癌细胞系SMMC-7721生长的影响

目的  探讨Hsa-miR-4282在肝癌细胞系SMMC-7721中的表达及其对细胞生长的影响。方法 采用实时荧光定量PCR法检测Hsa-miR-4282在人正常肝上皮细胞系HL-7702和人肝癌细胞系MHCC97-H、SMMC-7721，以及 20例肝癌组织及其相应癌旁组织中的表达。采用瞬时转染法将Hsa-miR-4282 mimics（上调组）和Hsa-miR-4282 inhibitor（下调组）分别转染肝癌SMMC-7721细胞，上调组和下调组分别设置相应阴性对照组。转染后采用MTT法检测细胞增殖能力，平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞仪检测细胞凋亡能力。结果 Hsa-miR-4282在肝癌组织、肝癌细胞MHCC97-H及肝癌细胞SMMC-7721中的表达均低于癌旁组织及正常肝细胞HL-7702（P＜0.05）。MTT实验结果显示，Hsa-miR-4282上调后肝癌SMMC-7721细胞的OD值低于其阴性对照组，而下调后OD值高于其阴性对照组 （P＜0.05）。平板克隆形成实验显示，下调组的细胞克隆数高于其阴性对照组［（240±7） 个 vs （191±10） 个，P=0.005）］，而上调组细胞克隆数低于基阴性对照组［（146±10） 个 vs （193±12） 个，P=0.013）］。流式细胞仪检测结果显示，Hsa-miR-4282上调组细胞凋亡率较其阴性对照组升高［（23.89±1.89）% vs（16.6±1.14）%，P=0.009）］，下调组细胞凋亡率较期阴性对照组降低［（14.98±0.46）% vs （17.79±0.73）%，P=0.010］。结论 Hsa-miR-4282上调可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖，促进细胞凋亡，可能与肝癌的发病机制有关。     

术前超声引导下单次腰方肌阻滞对胃癌根治术患者早期康复及T细胞免疫功能的影响

目的 探讨术前超声引导下单次腰方肌阻滞对胃癌根治术患者早期康复及T细胞免疫功能的影响。方法 选取2017年3月至2018年6月于我院行胃癌根治手术的68例患者作为研究对象,采用随机数字表法分为观察组（n=34）和对照组（n=34）,观察组在麻醉诱导后经彩超引导下行双侧腰方肌阻滞（注射盐酸罗哌卡因）,对照组单纯注射生理盐水,比较两组患者术后镇痛指标、视觉模拟评分（visual analogue score,VAS）、血清CD4⁺CD25⁺ T细胞水平及不良反应。结果 观察组的舒芬太尼用量、镇痛泵按压次数和补救性镇痛比例均低于对照组（P＜0.05）,但镇痛满意度评分高于对照组（P＜0.05）;观察组术后2 h、6 h、12 h和24 h静息状态和运动状态的VAS评分均低于对照组（P＜0.05）;观察组手术前后CD4⁺CD25⁺　T细胞含量差值高于对照组（2.0±0.8 vs 1.1±0.6,t=5.248,P<0.001）;观察组麻醉后发生恶心呕吐比例（5.9% vs 26.5%）、眩晕比例（2.9% vs 20.6%）均低于对照组（P＜0.05）。结论 术前超声引导下单次腰方肌阻滞可减少胃癌根治术患者镇痛药物的使用量,提高术中和术后镇痛效果及术后疼痛满意度,且T细胞免疫功能恢复更快,不良反应较少,有利于早期康复。     

PES1对肝细胞癌预后和肝癌BEL-7402细胞生长的影响

目的 探讨pescadillo核糖体生物发生因子1（pescadillo ribosomal biogenesis factor 1，PES1）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）组织中的表达及其对肝癌BEL-7402细胞生长的影响。方法 采用免疫组化法检测HCC癌组织和癌旁正常组织中PES1的表达。肝癌BEL-7402细胞转染PES1小干扰片段后，采用Western blot检测PES1、CDK4、CDC25A蛋白表达，MTS法检测细胞生长情况，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果 95例HCC癌组织中，PES1表达阳性率高于癌旁正常组织（90.5% vs 72.6%，χ²=10.122，P=0.001）；癌组织中PES1染色评分高于癌旁正常组织的［（6.30±3.56） 分 vs （2.10±1.64） 分，t=10.423，P<0.001］。PES1表达与HCC患者的肿瘤大小、门脉癌栓和TNM分期有关（均P<0.05）；PES1高表达患者总生存期较PES1低表达患者短（P<0.05）。转染PES1小干扰RNA组的细胞与对照组相比，细胞生长受抑制（P<0.01），G1期细胞比例增加，S期细胞比例减少（均P<0.01），CDK4、CDC25A蛋白表达下调，但细胞凋亡未见明显变化。结论 HCC组织中PES1表达上调，且与患者预后相关。PES1可通过上调CDK4、CDC25A蛋白表达，加快细胞G1/S期的转换，促进肝癌细胞生长。