LINC01140 通过 miR-452-5p/Wnt/β -catenin 轴调控食管鳞状细胞癌 Eca109细胞的增殖与侵袭

目的：探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC01140在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组 织及细胞中的表达及其对Eca109细胞增殖与侵袭的影响及其分子机制。方法：选取2012年3月至2015年5月河北医科大学第 四医院收治的 133 例 ESCC 患者的临床资料和 GEPIA 数据库中收集的 182 例 ESCC 组织及 286 例食管正常黏膜组织的 LINC01140表达数据,以及 ESCC 细胞系 Kyse150、Eca109 和 TE13。用 qPCR 法检测癌组织和细胞中LINC01140的表达水平, 分析其表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。分别将pcDNA3.1-LINC01140、阴性对照（pcDNA3.1-NC）或 miR-452-5p mimic及阴性对照（miR-NC）转染到Eca109细胞,MTS、Transwell实验分别检测细胞的增殖与侵袭能力。用双荧光报告基因实验 及 TOP/FOP 报告基因系统检测 LINC01140 与 miR-452-5p 的靶向结合作用及 LINC01140 对 Wnt/β-catenin 通路活化水平的影 响。结果：LINC01140在ESCC组织和细胞中表达均显著下调（均P<0.01）,LINC01140 低表达与 ESCC 患者年龄、淋巴结 转移、TNM分期及OS密切相关（均P<0.05）。LINC01140过表达明显抑制 Eca109 细胞的增殖及侵袭能力（均P<0.01）。机制 研究表明,LINC01140可能通过竞争结合miR-452-5p影响Wnt/β-catenin信号通路的活化水平继而调控Eca109细胞的恶性生物学 行为。结论：LINC01140通过靶向miR-452-5p/Wnt/β-catenin轴促进ESCC细胞的增殖与侵袭能力,其有望成为ESCC患者靶向 治疗的潜在靶点及预后评估的标志物。     

miR-627-3p在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其对癌细胞恶性生物学 行为的影响

目的：探讨 miR-627-3p 在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组织中的表达及其对 ESCC细胞生物学行为的影响。方法：收集2015年1月至2015年10月河北医科大学第四医院胸外科手术切除的ESCC组织86例及对应的癌旁组织标本20例。通过qPCR法检测miR-627-3p在86例ESCC组织及癌旁组织中的表达,分析其表达与ESCC患者临床病理学指标及预后的关系;利用Kaplan-Meier Plotter在线数据库进一步分析数据库中hsa-miR-627的表达与ESCC患者预后的关系;通过qPCR法检测miR-627-3p在4株ESCC细胞系中的表达,选取表达水平最低的食管癌细胞转染miR-627-3p mimic,选取表达水平最高的ESCC细胞转染miR-627-3p inhibitor,采用CCK-8法检测细胞的增殖,采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;采用 KEGG分析探讨 miR-627-3p可能介导的信号转导通路,并采用 qPCR法验证 miR-627-3p对信号通路中关键基因表达的影响。结果：miR-627-3p在 ESCC组织中的表达明显低于在癌旁组织中的表达,miR-627-3p的表达与 ESCC患者淋巴结转移和临床分期相关（均 P<0.05）;miR-627-3p高表达的 ESCC 患者的 5年生存率明显高于 miR-627-3p低表达的食管癌患者（P<0.05）。ESCC细胞系 KYSE170中 miR-627-3p表达最低,KYSE30中 miR-627-3p表达最高;在 KYSE170细胞中转染 miR-627-3p mimic后,细胞的增殖能力无明显变化（P>0.05）,但细胞的迁移（P<0.05）和侵袭能力（P<0.05）显著降低;在 KYSE30 细胞中转染 miR-627-3p inhibitor 后,细胞的增殖能力无明显变化（P>0.05）,但细胞的迁移（P<0.05）和侵袭能力（P<0.05）显著增高。KEGG 分析结果显示,miR-627-3p介导了多条与肿瘤相关的信号转导通路。结论：miR-627-3p在ESCC组织中的表达明显低于在癌旁组织中的表达,其低表达与ESCC患者的不良预后相关,miR-627-3p抑制ESCC细胞的迁移和侵袭,可能是通过干扰多条与肿瘤相关的信号通路发挥生物学功能。     

过表达miR-145-5p 通过下调IGF1R抑制食管鳞状细胞TE-10 细胞的恶性生物学行为

目的：探究miR-145-5p 对食管鳞状细胞癌TE-10 细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）等恶性生物学行为的分子机制。方法：qPCR法检测miR-145-5p 在食管鳞状细胞癌细胞和正常食管上皮细胞中的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-145-5p 与胰岛素样生长因子1 受体（insulin-like growth factor 1 receptor，IGF1R）的靶向调控关系，Western blotting 检测IGF1R蛋白和EMT相关蛋白的表达，CCK-8 法和Transwell 检测miR-145-5p/IGF1R分子轴对TE-10 细胞增殖、侵袭、迁移的影响。结果：miR-145-5p 在3 株食管鳞状细胞癌细胞中低表达且在TE-10 细胞中表达最低（P<0.01 或P<0.05）。过表达miR-145-5p 可显著抑制TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT进程（P<0.01 或P<0.05）。双荧光素酶报告基因证实miR-145-5p 靶向下调IGF1R表达（P<0.01）。回复实验进一步证实，与单独过表达IGF1R相比，同时过表达miR-145-5p 和IGF1R能显著缓解IGF1R 对TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT 进程的促进作用（P<0.01 或P<0.05）。结论：过表达miR-145-5p 通过靶向下调IGF1R进而抑制了食管鳞状细胞癌TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT进程。     

MiR-124对食管癌细胞增殖和侵袭的作用及机制研究

摘 要：［目的］检测miR-124及其靶基因CREB1在食管癌组织中的表达情况，探讨miR-124/CREB1在人食管鳞癌细胞KYSE-150体外增殖和侵袭中的作用及机制。［方法］ 通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测32例食管鳞状细胞癌(ESCC)组织及周围正常组织的miR-124和CREB1表达。Targetscan分析miR-124与CREB1的结合位点，荧光素酶基因报告实验验证miR-124 与CREB1是否结合；过表达或抑制miR-124后，采用Western blot检测KYSE-150细胞中CREB1的表达；在KYSE-150细胞中转染miR-124 mimic为miR-124 mimic或转染miR-124抑制剂为anti-mi-R124，转染后24h、48h、72h收集细胞计数，检测细胞增殖情况；转染24h后通过体外侵袭实验检测过表达或抑制miR-124对KYSE-150细胞侵袭的影响。在KYSE-150细胞中转染CREB1 siRNA后24h、48h、72h收集细胞计数，检测细胞增殖情况；转染CREB1 siRNA 24h后检测KYSE-150细胞侵袭能力的变化；在KYSE-150细胞中共同转染anti-miR-124和siCREB1，检测细胞增殖和侵袭能力变化情况。［结果］ MiR-124在食管癌组织表达降低(P<0.001)，而CREB1在食管癌组织中表达升高(P<0.001)；CREB1是miR-124下游分子，过表达miR-124抑制KYSE-150细胞中CREB1的表达(P=0.016)，抑制miR-124促进KYSE-150细胞中CREB1的表达(P<0.001)。在食管癌细胞中，过表达miR-124抑制KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05)，抑制miR-124促进KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05)；敲低CREB1抑制KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05)。敲低CREB1可抑制anti-miR-124对KYSE-150细胞增殖和侵袭的促进作用(P均<0.05)。［结论］过表达miR-124通过靶向CREB1抑制食管癌细胞的增殖和侵袭。     

miR-377-5p 通过下调HIF-1α 及其相关VEGF 信号通路抑制肝细胞癌HepG2 细胞的增殖和侵袭

目的：探讨miR-377-5p 与缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1，HIF-1α）的靶向关系以及通过控血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）信号通路对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）细胞增殖、侵袭和EMT的调控作用。方法：qPCR检测35 例人HCC组织及癌旁组织标本中miR-377-5p 的表达水平。将HepG2 细胞分为对照组、mimic NC组、miR-377-5p mimic 组，qPCR 检测转染效率；EdU染色、Transwell 和Western blotting（WB）检测miR-377-5p 过表达对HepG2 细胞增殖、侵袭及其增殖相关蛋白Ki-67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）及上皮间质转化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）标志蛋白E-cadherin、N-cadherin 表达的影响；qPCR、WB检测miR-377-5p 过表达对HepG2 细胞中，缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）表达的影响。荧光素酶报告基因实验验证miR-377-5p 与HIF-1α 基因的靶向关系。结果：HCC 组织中miR-377-5p 表达水平较癌旁组织降低（P<0.01）。与对照组相比，miR-377-5p mimic 组HepG2细胞中miR-377-5p 水平明显升高，细胞的增殖、侵袭能力降低（均P<0.01），EMT、N-cadherin 表达水平降低（均P<0.01）而E-cadherin 表达水平显著升高（P<0.01）；miR-377-5p mimic 组中HIF-1α mRNA 和蛋白表达水平均降低（P<0.01 或P<0.05）。miR-377-5p 靶向抑制HIF-1α 基因表达，并抑制VEGF通路的激活（均P<0.05）。结论：miR-377-5p 通过靶向抑制HIF-1α 基因表达和下调VEGF信号通路从而抑制HepG2 细胞的增殖、侵袭和EMT。     

miRNA-26b-3p通过靶向STAT3调控食管鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移

目的：观察miR-26b-3p在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中的表达水平及其对ESCC细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子调控机制。方法: 选取河北医科大学第四医院2018年4月1日至2018年12月25日手术切除的ESCC组织及相应癌旁组织各60例,利用qPCR法检测ESCC组织、癌旁组织和ESCC细胞中miR-26b-3p的表达。选取miR-26b-3p表达水平较低的ESCC细胞TE1和KYSE150,转染miR-26b-3p mimic,并设立阴性对照。利用细胞增殖实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测过表达miR-26b-3p对TE1和KYSE150细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。荧光素酶报告基因实验检测miR-26b-3p与STAT3的 3''UTR 靶点部位的结合情况。随后同时转染 miR-26b-3p mimic 和 pcDNA3.0-STAT3,利用细胞增殖实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测STAT3是否可逆转过表达miR-26b-3p对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。qPCR 和 WB法检测甲基化酶抑制剂5-Aza-DC对ESCC细胞甲基化的影响和miR-26b-3p与STAT3表达的影响。结果: miR-26b-3p在ESCC组织中的表达低于癌旁组织（P<0.01）,其在 ESCC 细胞TE1、KYSE150和LYSE170中表达水平显著低于人正常食管上皮细胞HEEC（均P<0.01）。与miR-26b-3p NC组相比,miR-26b-3p mimic转染可明显上调TE1和KYSE150细胞中miR-26b-3p的表达（均P<0.01）,但可明显抑制两种细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。荧光素酶报告基因实验结果表明,在TE1和KYSE150细胞中,miR-26b-3p明显抑制了野生型STAT3载体的荧光素酶活性（P<0.05或P<0.01）,而突变型的荧光素酶活性不受影响。同时转染miR-26b-3pmimic和pcDNA3.0-STAT3可部分逆转miR-26b-3p mimic对TE1 和 KYSE150 细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用（P<0.05或P<0.01）。5-Aza-DC 处理后 ,TE1 和 KYSE150 细胞中 miR-26b-3p 表达上调（均 P<0.01）、STAT3 mRNA 和蛋白水平降低（P<0.05）,miR-26b-3p呈现去甲基化状态。结论: miR-26b-3p的启动子高甲基化导致其在ESCC组织和细胞中的表达下调,其作为抑癌因子可通过靶向STAT3而抑制ESCC细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

过表达miR-129-5p通过靶向MAPK1抑制宫颈癌HeLa细胞恶性生物行为

[摘要] 目的：探讨miR-129-5p 对宫颈癌HeLa细胞侵袭、迁移和EMT的作用及其机制。方法：选取宫颈癌HeLa细胞,利用生物信息学预测软件筛选miR-129-5p 的靶基因,双荧光素酶报告基因验证miR-129-5p 和MAPK1 的靶向关系。将miR-129-5p mimic、miR-129-5p inhibitor 和pcDNA-MAPK1 单独或联合转染到HeLa细胞,用qPCR检测HeLa细胞中miR-129-5p 和MAPK1 的表达水平,用Transwell、划痕愈合实验分别检测HeLa 细胞的侵袭、迁移能力,WB检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、MAPK1、STAT3 和Bcl-xL的表达。构建裸鼠HeLa细胞皮下移植瘤模型,观察miR-129-5p 过表达对移植瘤生长的影响,WB检测移植瘤组织中EMT及MAPK1 通路相关蛋白的表达。结果：miR-129-5p 与MAPK1 在3’UTR区存在结合位点,过表达miR-129-5p 靶向抑制MAPK1（P<0.01）。与对照组相比,miR-129-5p mimic 组侵袭细胞数目减少（P<0.01）,划痕愈合率降低（均P<0.01）;细胞中Ecadherin表达上调而N-cadherin、MAPK1、STAT3 和Bcl-xL 表达下调（均P<0.01）;共转染MAPK1 可逆转上述现象。成功建立裸鼠HeLa 细胞移植瘤模型,与对照组相比,miR-128-3p mimic 组肿瘤质量减轻（P<0.01）;瘤组织中E-cadherin 表达水平上调而N-cadherin、MAPK1、STAT3 和Bcl-xL 的表达下调（均P<0.01）。结论：过表达miR-129-5p 通过靶向MAPK1 抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭、迁移和EMT。     

长链非编码RNA UCA1 靶向调控miR-185-5p 对非小细胞肺癌A549 细胞的作用及其机制

[摘要] 目的：探究长链非编码RNA（ long non-coding RNA,lncRNA)尿路上皮癌抗原1 ( urothelial carcinoma associated 1,UCA1) 调控非小细胞肺癌(NSCLC) A549 细胞增值、侵袭和迁移的作用及其机制。方法：NSCLC A549 细胞培养及慢病毒转染完成后,RT-PCR检测A549 细胞UCA1 表达水平,荧光素酶实验验证UCA1 和miR-185-5p 的靶向关系,MTT检测A549 细胞活性,Transwell 和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;Western blotting 检测Wnt1/β-catenin 信号通路蛋白的表达。结果：sh-UCA1 能显著抑制UCA1 表达并促进miR-185-5p 表达(均P<0.05),miR-185 inhibitor 可减弱sh-UCA1 对miR-185-5p 表达的促进作用(P<0.05),UCA1 能明显抑制miR-185-5p 表达(P<0.05),miR-185 mimic 可减弱UCA1 对miR-185-5p 表达的抑制作用(P<0.05)。荧光素酶报告实验表明UCA1 序列上有miR-185-5p 的结合位点。sh-UCA1 能显著抑制A549 细胞增殖、侵袭和迁移(均P<0.05),并能降低信号通路蛋白Wnt1、β-catenin 信号和TCF-4 表达水平(均P<0.05);miR-185 inhibitor 能显著减弱sh-UCA1 对A549 细胞的增殖、侵袭、迁移及对Wnt1/β-catenin 通路蛋白表达的抑制作用(P<0.05)。结论：UCA1 可通过靶向miR-185-5p 促进NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,其作用机制与Wnt1/β-catenin信号通路激活有关。     

lncRNA SBF2-AS1 通过调控miR-140-5p/VEGFA 分子轴促进宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化

目的：探讨lncRNA SBF2-AS1 通过调控miR-140-5p/血管内皮生长因子A（VEGFA）分子轴对宫颈癌HeLa 细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法：细胞培养和转染后分为NC、miR-140-5p mimic、miR-140-5p mimic+pcDNA-VEGFA、si-lncRNASBF2-AS1+pcDNA-VEGFA及si-lncRNA SBF2-AS1+miR-140-5p mimic组5 组。采用qPCR检测lncRNA SBF2-AS1 在宫颈癌组织及细胞系中的表达水平,双荧光素酶报告基因验让lncRNA SBF2-AS1、miR-140-5p 与VEGFA的靶向关系,WB检测HeLa细胞中VEGFA及EMT标志物N-cadherin、Vimentin 和E-cadherin 的表达水平,Transwell 实验检测HeLa细胞侵袭和迁移能力。结果：lncRNASBF2-AS1 在宫颈癌组织及细胞系中高表达（P<0.05 或P<0.01）,lncRNA SBF2-AS1 靶向结合miR-140-5p,且VEGFA 是miR-140-5p 的靶基因（P<0.05）。敲降lncRNA SBF2-AS1 抑制HeLa细胞侵袭、迁移及EMT。进一步实验证实,lncRNA SBF2-AS1通过miR-140-5p 上调VEGFA的表达水平,从而促进HeLa 细胞侵袭、迁移及EMT（P<0.05 或P<0.01）。结论：lncRNA SBF2-AS1通过miR-140-5p/VEGFA分子轴促进HeLa细胞EMT。     

miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌发生发展的分子机制

目的：探讨miR-515-5p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法：选取2020年6月至2020年12月在河北医科大学第四医院手术切除的60例食管癌患者的癌组织标本和20例健康成人的食管上皮组织标本,以及食管癌细胞TE1、Eca109、KYSE30和KYSE170,用 qPCR 法检测食管癌组织和细胞中 miR-515-5p 的表达水平。在Eca109细胞中转染miR-515-5p模拟物以及其阴性对照物、在TE1细胞中转染miR-515-5p抑制剂以及其阴性对照物,qPCR法检测转染效率,用CCK-8法、Transwell实验分别检测转染细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法分析预测miR-515-5p的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证组蛋白去乙酰化酶2（histone deacetylase 2,HDAC2）为miR-515-5p的靶基因。应用GEPIA和TCGA数据集分析HDAC2在食管癌组织中的表达及其与患者临床特征的关系。结果：miR-515-5p在食管癌组织及细胞中表达降低（均P<0.01）。过表达miR-515-5p抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）,而敲低miR-515-5p 表达则可增强食管癌 TE1 细胞的增殖、侵袭和迁移能力（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因分析证明,HDAC2是miR-515-5p的靶基因。qPCR和WB实验结果显示,miR-515-5p对HDAC2 mRNA和蛋白表达具有负调控作用。挽救实验证实miR-515-5P通过靶向HDAC2抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。