骨肉瘤组织XIAP蛋白表达临床意义的研究

目的:观察骨肉瘤组织中X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达,探讨其与骨肉瘤患者临床特征的关系,研究其临床意的义。方法:应用免疫组织化学方法检测50例骨肉瘤组织及8例瘤旁正常骨组织中XIAP的表达,分析其表达水平与患者临床特征相关性,并对骨肉瘤患者进行生存分期,研究XIAP表达水平与患者预后的相关性。结果:XIAP阳性表达主要定位于细胞质。XIAP在骨肉瘤组织中的阳性表达率为74%,明显高于瘤旁正常骨组织的25%,P=0.012。统计学分析显示,XIAP表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤部位以及肿瘤大小无明显相关性,P>0.05;而与En-neking临床分期有关,Ⅲ期明显高于ⅡB期,P=0.009。生存分析显示,40例ⅡB期患者中高水平表达组中位无病生存时间短于低水平表达组,P=0.023;而所有患者中(40例ⅡB和10例Ⅲ期)高水平表达组中位总生存时间短于低水平表达组,P=0.004。结论:骨肉瘤组织XIAP高水平表达与预后不良相关,它对判断骨肉瘤患者的预后有一定的参考价值。     

朊蛋白PrPc在Enneking III期骨肉瘤中的表达及预后相关性分析

目的：探讨朊蛋白PrPc（cellularprionprotein）在EnnekingIII期骨肉瘤中的表达以及分析其与骨肉瘤转移和患者预后的相关性。方法采用免疫组织化学法（SP法）对初诊已发生肺转移的EnnekingIII期骨肉瘤15例以及相应瘤旁组织中朊蛋白 PrPc 的表达进行检测。同时,检测同期收治的初诊未转移骨肉瘤标本33例作为对照组。比较已有转移的骨肉瘤和未转移骨肉瘤中 PrPc 蛋白的表达水平。对2006年1月至2009年12月收住院的两组骨肉瘤患者的临床资料进行回顾性分析。收集年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小、病理性骨折、生存时间等资料。应用 Kaplan-Meier 法计算患者生存年率,应用 Log-rank 检验进行单因素分析,应用Cox回归模型进行多因素分析,探讨PrPc的表达和不同的临床特征与骨肉瘤患者预后生存率之间的关系。结果 PrPc蛋白在骨肉瘤组织中普遍表达,在瘤旁组织中不表达;EnnekingIII骨肉瘤中PrPc的表达要显著高于Enneking II期对照组（ P＝0.006）。Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验显示PrPc的表达水平与骨肉瘤患者预后相关（ P＝0.010）,Enneking分期与预后相关（ P＝0.025）。多因素分析显示,PrPc表达水平和肿瘤的Enneking分期可以作为骨肉瘤预后的独立影响因素。结论朊蛋白PrPc在已有转移的EnnekingIII骨肉瘤中的表达高于未转移患者。PrPc高表达的骨肉瘤患者预后较差。PrPc的高表达可能与骨肉瘤预后不良有一定相关性。     

骨肉瘤组织CRM1基因表达预后意义的分析

目的:分析CRM1基因在骨肉瘤手术标本中的表达及其预后价值.方法:采用蛋白质印迹法检测57例骨肉瘤手术标本和5例正常软骨组织标本中的CRM1基因表达,并进一步分析其对于骨肉瘤患者的预后价值.结果:CRM1基因在骨肉瘤组织中的表达显著高于在正常组织中的表达;CRM1基因高表达和血清碱性磷酸酶水平升高显著相关(P=0.001),但和血清乳酸脱氢酶水平升高无关(P=0.065).单因素分析表明,CRM1基因高表达和肿瘤大小以及病理学分级之间显著相关(P值分别为0.014和0.003),而和其他临床病理特点无关.Kaplan-Meier生存分析表明,CRM1基因高表达对于骨肉瘤患者的无进展生存期和总生存期差异有统计学意义(P值分别为0.016和0.008).而多因素分析表明,CRM1基因高表达对于骨肉瘤患者是一个独立预后因素(95%CI, 1.27～5.39).结论:CRM1基因高表达与骨肉瘤患者的血清碱性磷酸酶水平升高、肿瘤大小以及病理学分级显著相关;是骨肉瘤的独立预后因素.     

circ_XPO1在骨肉瘤组织和外周血中的表达及临床意义

目的:检测 circ_XPO1在骨肉瘤患者组织和外周血中的表达水平，探讨其临床意义。方法:qRT-PCR检测39例骨肉瘤患者肿瘤组织、瘤旁组织及外周血中circ_XPO1的表达水平和24例健康志愿者外周血中circ_XPO1的表达水平，绘制ROC曲线分析circ_XPO1对骨肉瘤的诊断价值，多因素回归分析研究 circ_XPO1与肿瘤病理指标的相关性，通过生存曲线分析和COX回归分析研究 circ_XPO1对骨肉瘤患者预后的影响。结果:骨肉瘤患者外周血中circ_XPO1的表达水平比健康志愿者显著升高，而骨肉瘤患者的肿瘤组织和外周血中circ_XPO1的表达量均比瘤旁组织显著升高。绘制ROC曲线，骨肉瘤患者外周血中circ_XPO1表达水平的AUC为0.857 9。根据外周血的circ_XPO1表达水平将39例骨肉瘤患者分为circ_XPO1高表达组和circ_XPO1低表达组，多因素回归分析显示外周血circ_XPO1的高表达与组织学Price分级和肺部转移呈正相关；绘制生存曲线分析，外周血circ_XPO1高表达组的5年总生存率显著降低，COX回归分析结果提示外周血circ_XPO1高表达是影响骨肉瘤患者生存率的独立危险因素。结论:骨肉瘤患者的外周血和肿瘤组织中circ_XPO1的表达上调，外周血中circ_XPO1的高表达对骨肉瘤有较高的诊断价值，并且circ_XPO1上调越明显，提示临床病情越严重，预后越差。     

LRH1在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的:研究骨肉瘤组织中肝受体类似物（liver receptor homolog 1,LRH1）的表达情况及其与患者临床病理因素及预后的关系。方法:应用Real-Time qRT-PCR 及Western-Blot方法检测10对新鲜骨肉瘤组织及癌旁正常组织中LHR1的表达;应用免疫组织化学法检测85 例石蜡包埋骨肉瘤组织标本中 LRH1 的表达,并与临床病理学指标和术后生存期进行比较分析。应用 SPSS 19.0 软件统计分析,检验标准为P＜0.05 具有统计学意义。结果:骨肉瘤组织中LRH1的表达量显著高于癌旁组织,差异有统计学意义;LRH1的高表达与手术分期和肺转移相关;LRH1蛋白高表达骨肉瘤患者总生存时间和无疾病进展生存期较短;多因素分析结果表明LRH1是骨肉瘤患者生存独立预后因素之一。结论:LRH1作为新型分子预测指标在骨肉瘤发生、发展过程中可能起重要作用。     

H19在骨肉瘤中的表达及其与预后的关系

目的：本实验旨在研究骨肉瘤组织中 H19基因的特异性表达模式,探讨其在骨肉瘤发生发展、浸润转移中的作用及其与预后的关系。方法收集并筛选出2009年至2010年就诊的骨肉瘤患者手术切除标本30例,采集临床指标包括患者性别、年龄、发病部位、大小、Enneking分期、组织病理学分型、有无肺转移及术后随访患者生存情况。应用PCR、RT-PCR及限制性内切酶（ AluI ）酶切等方法,检测30例骨肉瘤组织中H19基因的印迹状态,分析H19基因印迹丢失及其与骨肉瘤各临床病理因素参数之间的关系。结果（1） H19基因印迹丢失率在骨肉瘤组织中为41.67%,瘤近旁组织中为16.67%,瘤远旁组织中为8.33%。Kappa相关分析结果表明,上述不同组织中 H19基因印迹丢失的发生频率间存在显著相关性（ P＜0.05）。（2）单因素方差分析结果表明,H19基因的印迹丢失与骨肉瘤患者 Ennecking 分期、肺转移灶的存在与否有关（ P＜0.05）,而与患者的性别、年龄、部位、大小和病理分型无关（ P＞0.05）。（3） Log-rank单因素生存分析表明, H19基因印迹丢失、肿瘤分期、病理学分类及转移灶的存在与否和骨肉瘤患者预后相关（ P＜0.05）,而性别、年龄、发病部位与患者预后无关（ P＞0.05）。H19基因印迹丢失骨肉瘤患者的生存率明显降低,其差异具有统计学意义（ P＜0.05）。结论骨肉瘤组织中H19基因印迹状态的改变,对骨肉瘤的发生发展、浸润转移起重要作用并与患者的不良预后相关,可能成为预测患者预后情况的新靶点。     

巨噬细胞移动抑制因子在骨肉瘤中的表达及其与预后的关系

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）在骨肉瘤中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法 应用免疫组化法检测61例骨肉瘤组织及15例癌旁组织（距肿瘤组织边缘＞5.0cm）中MIF表达,分析MIF表达与骨肉瘤临床病理特征之间的关系。采用Kaplan-Meier法计算生存情况,Cox多因素回归进行生存分析。结果 骨肉瘤组织中MIF阳性表达率为62.3％,癌旁组织为33.3％,差异有统计学意义（P=0.043）。MIF表达与骨肉瘤患者的性别、年龄、临床分期、组织分型无关,与肺转移相关（P=0.006）。MIF阳性表达组患者的3年生存率为70.3%,显著低于阴性表达组的95.8%（P=0.019）。Cox多因素回归分析显示,Enneking分期是影响患者预后的独立因素,而MIF表达非独立预后因素。结论 MIF表达与骨肉瘤转移密切相关,有助于评价骨肉瘤患者的预后。     

骨桥蛋白在人骨肉瘤中的表达及其临床意义

 目的 研究骨肉瘤中骨桥蛋白（OPN）mRNA的表达及其与临床病理特征之间的关系，阐明骨桥蛋白在骨肉瘤侵袭转移中的作用。方法 应用半定量RT-PCR方法。检测OPN mRNA在58例骨肉瘤组织和25例瘤旁相对正常组织中的相对表达量，分析OPN mRNA的相对表达量与骨肉瘤临床病理特征的关系。结果 58例骨肉瘤组织标本中，OPN mRNA高表达率为81．0％（47／58），而25例瘤旁相对正常组织标本中OPN mRNA高表达率仅16．0％（4／25）。OPN mRNA的表达与骨肉瘤的分化程度、侵袭范围、年龄以及GTM分期密切相关，而与患者性别、肿瘤部位、肿瘤直径无关。58例患者随访12～24个月，平均18个月。术后复发23例，死亡8例。其中OPN mRNA高表达组47例中复发20例，死亡7例；而低表达组11例中复发3例，死亡1例。结论 骨肉瘤中骨桥蛋白mRNA的表达明显增高。OPN mRNA的高表达反映了骨肉瘤病情的进展，并且与患者的预后有关，提示OPN可能是骨肉瘤的一种重要负性预后因子。骨桥蛋白在骨肉瘤远处转移过程中的作用有待进一步研究。     

miR-19a和miR-19b在骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的：探讨miR-19a和miR-19b在骨肉瘤组织及配对瘤旁组织中的表达及其与临床病理特征的相关性。方法：收集32对骨肉瘤和配对的瘤旁组织,运用实时荧光定量PCR（qPCR）检测骨肉瘤组织及其瘤旁组织中miR-19a和miR-19b的表达,分析其与骨肉瘤临床病理特征的相关性及其临床意义。结果：qPCR结果显示骨肉瘤组织中miR-19a和miR-19b的平均表达量较瘤旁组织中均明显上调（P均 < 0.05）。二者的表达水平呈正相关（r=0.685,P=0.000）。miR-19a和miR-19b的表达与骨肉瘤病理分级之间存在正相关（r=0.478,P=0.027）;miR-19a的表达与临床分期呈正相关（r=0.365,P=0.031）且与预后相关。Cox回归多因素分析发现miR-19a可作为骨肉瘤患者预后的影响因子（P=0.037）。结论：miR-19a和miR-19b在骨肉瘤中表达上调,在骨肉瘤的发生发展中可能发挥重要的作用,其中miR-19a可能作为骨肉瘤独立的预后标志物。     

Ezrin蛋白表达及其与骨肉瘤肺转移、生存期关系的研究

目的：探讨ERM（ezrin／radixin／moesin）家族成员之一的Ezrin蛋白在骨肉瘤组织中的表达及其与骨肉瘤肺转移、总生存期的关系。方法：通过免疫组织化学方法检测含有56例骨肉瘤组织、10例瘤旁正常组织和10例软骨肉瘤组织的组织芯片中Ezrin蛋白的表达，并结合临床资料进行肺转移关系分析以及总生存期分析。结果：骨肉瘤组织中Ezrin蛋白的表达明显高于软骨肉瘤及瘤旁正常组织，差异具有统计学意义（P=0．023、0．001）；与EnnekingGTM临床分级关系密Ⅱb期和Ⅲ期患者的表达情况差异具有统计学意义（P=0．046）；但与患者的性别、年龄、部位、病理类型以及初治时肺转移情况均无明显相关性。Ezrin蛋白表达阳性组无肺转移时间以及总生存期均短于表达阴性组（P=0．0026、0．0191），差异有统计学意义。结论：Ezrin蛋白与骨肉瘤患者肺转移关系密切。有可能作为判断预后和生存的指标。     

沉默调节蛋白4在胃癌组织中的表达及其预后价值

目的 探讨沉默调节蛋白4 （sirtuin 4,SIRT4） 在人胃癌组织中的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法 回顾性分析2013年10月—2014年10月于武汉市中心医院接受手术治疗的117例胃癌患者的临床资料。采用免疫组化法检测胃癌组织及其相应癌旁组织中SIRT4蛋白的表达,并分析SIRT4表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。结果 SIRT4蛋白在胃癌组织中的表达水平低于癌旁组织［（2.138±1.306） 分 vs （9.582±3.243） 分,t=19.078,P<0.001］,且SIRT4蛋白表达水平与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、淋巴脉管浸润、神经侵犯及TNM分期有关（均P<0.05）。SIRT4低表达组总生存率低于SIRT4高表达组（P=0.001）,多因素Cox回归分析显示SIRT4蛋白低表达是影响胃癌患者总生存期的独立危险因素（HR=2.241,95%CI：1.252~4.165,P=0.021）。结论 SIRT4在胃癌组织中低表达且与患者预后不良有关,可能是胃癌患者潜在的预后评估标志物。     

siRNA抑制骨肉瘤U2OS细胞系中SIRT6的表达及其生物学作用研究

背景与目的：sirtuin6(SIRT6)蛋白是对人体细胞生长、代谢调控及应激反应等具有重要作用的一种核蛋白,常在细胞核中发挥多种调控作用。但该蛋白在骨肉瘤中的作用还不清楚,本研究通过下调人骨肉瘤U2OS细胞系中SIRT6的表达,观察其对U2OS细胞的作用。方法：设计合成SIRT6的siRNA序列,通过Lipofectamine^TM2000转染U2OS细胞系,通过蛋白质印迹法（Western blot）检测SIRT6蛋白的表达情况,利用流式细胞术检测细胞凋亡,细胞计数试剂盒（cellcounting kit-8,CCK-8）法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,CCK-8法分析对紫杉醇的敏感性。结果：成功构建SIRT6 siRNA序列,Western blot检测转染后24、48和72 h的蛋白水平,实验组较对照组明显降低。流式细胞术检测细胞凋亡也显示实验组凋亡增加（P＜0.05）。Transwell法检测结果显示,实验组侵袭与迁移能力较对照组下降（P＜0.05）。CCK-8法检测细胞生长情况,可见经紫杉醇处理后实验组生长较对照组下降明显,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：下调骨肉瘤U2OS细胞中SIRT6的表达可以抑制骨肉瘤细胞侵袭,促进凋亡,并增强骨肉瘤细胞对紫杉醇的化疗敏感性。     

叉头框蛋白M1在骨肉瘤组织中的表达及其与预后的相关性

目的:探讨骨肉瘤组织中叉头框蛋白M1(forkhead box protein M1，FOXM1)的表达及其与预后的相关性。 方法:采用免疫组化SP法分别检测FOXM1在96例骨肉瘤组织和30例骨软骨瘤组织中的表达；分析FOXM1表达情况与骨肉瘤临床病理特征的关系；采用Log-Rank检验及Cox回归分析FOXM1与骨肉瘤患者预后的相关性，并通过Kaplan-Meier法绘制生存曲线。 结果:骨肉瘤组FOXM1高表达率高于对照组(P<0.05)；骨肉瘤组织中FOXM1高表达与肿瘤临床分期和肺部转移相关(P<0.05)；单因素分析显示，FOXM1蛋白高表达、肺部是否转移、临床分期是影响生存预后的独立因素(P<0.05)；FOXM1蛋白高表达组的5年生存率为65.15%，低于低表达或无表达组的86.67%，差异有统计学意义(P<0.05)；多因素分析显示，FOXM1蛋白高表达、临床分期和肺部转移是影响骨肉瘤患者生存预后的独立危险因素(P<0.05)。 结论:FOXM1蛋白在骨肉瘤组织中高表达，与患者的肺部转移及临床分期等病理特征有关，且高表达与较差预后相关。     

SIRT1基因沉默对DLBCL细胞放射敏感性影响

目的 探究SIRT1基因沉默对DLBCL放射敏感性影响。方法 利用免疫组织化学观察SIRT1在DLBCL组织中的蛋白表达情况,蛋白印迹法检测SIRT1在DLBCL细胞系OCI-Ly3、SU-DHL-2、SU-DHL-4及人正常B细胞永生化细胞系HMy2.CIR中的表达情况。利用Lipofectamine 2000转染试剂盒将si-SIRT1及si-NC转染到SU-DHL-4细胞中并检测转染后SIRT1的表达;MTT法和克隆形成实验检测经放射处理后细胞放射敏感性的变化。成组t检验差异或单因素方差分析。结果 SIRT1在DLBCL组织中的阳性率为72.6%(103/140),明显高于SIRT1在RLH中的阳性率(26.5%,8/25)(P=0.001);SIRT1在DLBCL细胞系中的表达水平显著高于人正常B细胞永生化细胞系HMy2.CIR细胞(P=0.020);SIRT1基因沉默后,SIRT1在SU-DHL-4细胞中的表达量明显降低(P=0.008)。放射处理后,SIRT1基因沉默组的细胞增殖率和克隆形成率显著低于对照组(P=0.030)。结论 SIRT1基因沉默明显提高了DLBCL细胞的放射敏感性,为DLBCL细胞的治疗提供了一个新的靶标。     

骨肉瘤细胞和组织H3K27me3表达与临床病理特征相关性研究

目的 组蛋白H3K27三甲基化(H3K27me3)在肿瘤发生发展过程中起着重要作用,研究发现H3K27me3在肝癌和前列腺癌等恶性肿瘤中的表达和临床病理特征存在相关性,但其在骨肉瘤中的研究相对较少.本研究分析H3K27me3在骨肉瘤细胞和组织中的表达及其与临床病理的关系,并探讨H3K27me3在骨肉瘤发生和发展中的作用和意义.方法 所有切片均来自于河北医科大学第四医院骨科2005-01-01-2011 01-01手术切除的标本.采用蛋白印迹法检测骨肉瘤MG-63、U2-OS、Sa-OS细胞系及hFOB1.19成骨细胞中H3K27me3表达的水平差异;采用免疫组织化学染色方法检测53例骨肉瘤组织及16例骨软骨瘤组织中H3K27me3的表达水平.KaplawMeier分析比较H3K27me3高表达和低表达患者生存率之间的差异.并应用Cox回归模型分析其表达水平对预后影响.结果 hFOB1.19、MG-63、U2-OS和Sa-OS中H3K27me3蛋白表达水平分别为0.37±0.06、0.86±0.06、0.79±0.07和0.83±0.05,与hFOB1.19细胞中H3K27me3表达相比,3组骨肉瘤细胞系中H3K27me3蛋白表达水平均显著升高,P=0.023;与骨软骨瘤组织相比(56.3％),H3K27me3在骨肉瘤组织中高表达(84.9％),二者差异有统计学意义(P＜0.001),并与肿瘤大小、肺转移、Enneking分期和生存率有关,P值分别为0.037、0.020、0.023和0.046.且其表达水平与患者生存期显著相关,P=0.012.结论 H3K27me3在骨肉瘤细胞及骨肉瘤组织中呈高表达,并与肿瘤的临床病理特征相关,可能会是骨肉瘤患者重要的预后因子及治疗靶点.     

骨肉瘤中RUNX2基因拷贝数扩增及其蛋白过表达的研究

  目的  通过微阵列-比较基因组杂交(aCGH)和免疫组织化学技术(IHC), 检测RUNX2基因在骨肉瘤组织中的拷贝数变化及蛋白表达情况, 探讨RUNX2基因在骨肉瘤的发生、发展和预后中的作用。  方法  应用aCGH检测10例新鲜骨肉瘤组织样本RUNX2的基因拷贝数变化; 同时, 运用免疫组织化学技术检测59例福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)骨肉瘤组织中RUNX2蛋白表达水平。  结果  10例骨肉瘤样本中发现3例(30%)RUNX2基因扩增; RUNX2蛋白在59例骨肉瘤组织中的阳性表达率为50.8%(30/59)。RUNX2蛋白的表达水平与患者的临床病理特征和生存率无相关性, 差异无统计学意义(P > 0.05)。Kaplan-Meire单因素生存分析显示pTNM分期、病理诊断、复发、转移和综合治疗对患者的无病生存率有显著影响, 性别、pTNM分期、新辅助化疗和疾病转移对患者的总生存率有显著影响, 均有统计学意义(P < 0.05), 但Cox模型多因素生存分析显示这些因素均不能作为生存率独立的预测因素。  结论  RUNX2基因扩增、蛋白过表达以及蛋白的表达与骨肉瘤患者的临床特征和预后无相关性提示RUNX2基因扩增及其蛋白的过度表达可能是骨肉瘤发病的早期事件。      

Increased expression of CD24 is associated with tumor progression and prognosis in patients suffering osteosarcoma

Objective

As a small heavily glycosylated mucin-like glycosyl-phosphatidylinositol-anchored cell surface protein, CD24 plays an important role in carcinogenesis of various human malignancies. However, its involvement in osteosarcoma is still unclear. The aim of this study was to investigate the expression pattern and the clinical significance of CD24 in human osteosarcoma.

Methods

CD24 mRNA and protein expression levels were, respectively, detected by RT-PCR and Western blot assays using 30 pairs of osteosarcoma and noncancerous bone tissues. Then, immunohistochemistry was performed to analyze the association of CD24 expression in 166 osteosarcoma tissues with clinicopathological factors or survival of patients.

Results

CD24 expression at mRNA and protein levels were both significantly higher in osteosarcoma tissues than those in corresponding noncancerous bone tissues (both P < 0.001). In addition, CD24 protein was positively expressed in 129 of 166 (77.7 %) osteosarcoma specimens with a cytoplasmic and membraneous staining, and also increased in the osteosarcoma specimens with advanced clinical stage (P = 0.01) and positive distant metastasis (P = 0.005). The univariate and multivariate analyses showed that osteosarcoma patients with high CD24 expression had poorer overall and disease-free survival, and high CD24 expression was an independent prognostic factor for both overall and disease-free survival.

Conclusion

The aforementioned findings offer convincing evidence for the first time that the increased expression of CD24 is correlated with tumor aggressiveness and tumor metastasis of osteosarcoma, and this molecule is an independent prognostic marker for osteosarcoma patients.