hsa＿circ＿0140180通过调控miR-1287-5p影响食管鳞状细胞癌细胞的迁移及侵袭能力

目的：探讨hsa＿circ＿0140180在食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞中的表达水平及对其细胞恶性生物学行为的影响与分子机制。方法：收集2018年11月至2019年3月间在南充市中心医院胸心外科手术切除的6对ESCC组织和对应癌旁组织并进行全转录组测序,筛选出在ESCC组织中低表达的hsa＿circ＿0140180;建立过表达hsa＿circ＿0140180的TE-1和KYSE30细胞,qPCR法检测hsa＿circ＿0140180在人正常食管上皮细胞、ESCC细胞中的表达,以及过表达hsa＿circ＿0140180后TE-1和KYSE30细胞中miR-1287-5p的表达;CCK-8法和FCM检测过表达hsa＿circ＿0140180对TE-1和KYSE30细胞增殖和周期的影响;划痕实验和Transwell实验检测过表达hsa＿circ＿0140180对TE-1和KYSE30细胞迁移和侵袭能力的影响,双荧光素酶报告实验验证hsa＿circ＿0140180与miR-1287-5p的靶向关系。WB法检测过表达hsa＿circ＿0140180对TE-1和KYSE30细胞中EMT相关蛋白的...     

环状RNA hsa＿circ＿0001922对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在分子机制

目的 探讨环状RNA hsa＿circ＿0001922对前列腺癌细胞PC-3增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在分子机制。方法 qRT-PCR、RNA FISH分别检测hsa＿circ＿0001922在前列腺癌细胞PC-3中的表达水平及定位。靶向抑制hsa＿circ＿0001922后,使用克隆形成、Transwell实验及划痕实验检测PC-3细胞增殖、迁移和侵袭的能力;qRT-PCR、Western blot检测抑制hsa＿circ＿0001922后EMT通路相关分子表达水平。结果 环状RNA hsa＿circ＿0001922在前列腺癌细胞PC-3中表达上升(P<0.01)且存在于细胞质和细胞核中。靶向抑制hsa＿circ＿0001922后,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显减弱(P<0.05),E-cadherin mRNA表达水平上升(P<0.05),而Vimentin mRNA水平下降(P<0.05)。Western blot检测结果与上述一致(均P<0.05)。结论 环状RNA hsa＿circ＿0001922可能通过EMT途径促进PC-3细胞的增殖、迁移及侵...     

血清外泌体hsa＿circ＿0004390预测上皮性卵巢癌铂类耐药及预后的临床研究

目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者血清外泌体hsa＿circ＿0004390与化疗耐药和预后的关系。方法 收集2017年1月至12月启东市人民医院(南通大学附属启东医院)肿瘤一科收治的87例原发性EOC患者癌组织及血清样本，另外招募85例健康女性志愿者，获取对照血清样本。将辅助化疗无效或6个月内疾病发生进展的患者纳入耐药组(n=30),其余患者设为敏感组(n=57)。10例接受根治性手术患者的组织样本进行下一代测序(NGS)以筛选circRNA基因谱。实时荧光定量PCR(qPCR)法验证候选circRNAs基因的表达水平。结果 在NGS鉴定出的circRNA基因中，共285个circRNA在耐药组和敏感组EOC组织中存在表达差异(P<0.05)。验证后发现5例耐药组EOC组织中只有hsa＿circ＿0004390(P=0.004)和hsa＿circ＿0006276(P=0.045)相对表达量高于敏感组，因此选择这两种基因进行分析。qPCR检测结果显示，与对照组比较，EOC组患者血清外泌体hsa＿circ＿0004390[2.57(1.47,2.99)vs. 0.94(0.61,...     

环状RNA circ＿104939在肺腺癌组织中的作用研究

目的:探讨环状RNA circ＿104939在肺腺癌组织中的临床意义。方法:采集10例肺腺癌病人的肿瘤组织和癌旁组织进行环状RNA测序分析，以肿瘤组织表达明显增高的环状RNA circ＿104939作为研究对象。利用qRT-PCR检测30对肺腺癌组织与癌旁组织中circ＿104939的表达量，验证测序结果。用qRT-PCR检测和分析circ＿104939在肺腺癌细胞系(HCC-78、A549、KTA-7以及PC-9)和正常人支气管上皮细胞BEAS-2B中的表达差异。siRNA敲减circ＿104939后，用MTT、平板划痕实验、Transwell实验、流式细胞术检测细胞周期实验分别检测肺腺癌细胞(KTA-7和PC-9)增殖、迁移、侵袭以及细胞周期的变化。利用RNA pulldown和荧光素酶报告实验验证circ＿104939的可能靶标miR-191-5p。siRNA敲减circ＿104939后，将肺腺癌细胞(KTA-7和PC-9)分别皮下注射到裸鼠体内构建荷瘤小鼠模型，检测移植瘤体积以及质量。结果:相比癌旁组织，肺腺癌组织中的circ＿104939表达显著增高(P<0.01);c...     

败酱草水提物通过调控circ＿0000936/miR-665抑制胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨败酱草水提物对胶质瘤细胞生物行为的影响及其可能作用机制。方法:收集2019年2月至2020年1月期间于本院接受手术切除并经病理证实的31例胶质瘤组织,qRT-PCR法检测正常脑组织与胶质瘤组织中circ＿0000936、miR-665的表达量;Pearson法分析胶质瘤组织中circ＿0000936和miR-665表达量的相关性;体外培养人胶质瘤细胞LN229,不同浓度的败酱草(0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL)处理LN229细胞,si-NC、si-circ＿0000936分别转染至LN229细胞,pcDNA-circ＿0000936转染至LN229细胞后加入2.0 mg/mL败酱草处理细胞;CCK-8、平板克隆形成实验、Transwell小室实验与流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭及凋亡能力;双荧光素酶报告基因实验检测circ＿0000936与miR-665的靶向关系;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果:胶质瘤组织中circ＿0000936的表达量高于正常脑组织(P<0.05),而miR-665的表...     

hsa＿circ＿0006404、miR-151-3p在胰腺癌组织中表达及其临床诊断价值

目的 探讨胰腺癌组织中hsa＿circ＿0006404(circFOXO3)、微小RNA(mir)-151-3p表达水平及其与临床病理特征的关系,以及血清circFOXO3、miR-151-3p诊断胰腺癌的效能。方法 以行手术治疗的100例胰腺癌患者为PC组,对照组为90例体检健康者。采用qRT-PCR技术检测癌组织及血清中circFOXO3、miR-151-3p表达变化,并分析与其临床病理特征的关系;比较血清miR-151-3p、circFOXO3诊断胰腺癌的效能。Pearson法分析circFOXO3与miR-151-3p的相关性。结果 癌组织中circFOXO3表达水平(0.72±0.14)显著低于癌旁组织(1.01±0.17),miR-151-3p表达水平(1.89±0.36)显著高于癌旁组织(1.03±0.15)(P<0.05);低分化、Ⅲ期、淋巴结转移的胰腺癌癌组织circFOXO3表达水平低于中高分化、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移者,而miR-151-3p表达水平高于中高分化、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移者(P<0.05)。PC组血清circFOXO3表达水平(0.76±...     

LncRNA PRNCR1靶向miR-653-5p调控鼻咽癌细胞恶性生物学行为

目的探讨前列腺癌非编码RNA 1(prostate cancer non-coding RNA 1,PRNCRl)对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制。方法采用RT-qPCR法检测鼻咽癌细胞系(5-8F、6-10B、C666-1)及鼻咽上皮细胞NP69中PRNCR1和miR-653-5p表达。分别将si-PRNCR1、miR-653-5p mimics或两者共转染至鼻咽癌6-10B细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证PRNCR1和miR-653-5p的靶向关系。结果鼻咽癌细胞系(5-8F、6-10B、C666-1)中PRNCR1的表达水平均高于鼻咽上皮细胞NP69(均P<0.001),而miR-653-5p表达水平均低于NP69细胞(均P<0.001)。敲减PRNCR1或过表达miR-653-5p后,鼻咽癌6-10B细胞的增殖能力、划痕愈合率及侵袭细胞数均降低(均P<0.001),而凋亡率升高(均P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验证实PRNCR1与miR-653-5p存在靶向关系。敲减PRNCR1后,6-10B细胞中miR-653-5p的表达水平升高(P<0.001)。敲减miR-653-5p可逆转敲减PRNCR1对鼻咽癌6-10B细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论PRNCR1在鼻咽癌细胞系中高表达,敲减PRNCR1表达可抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其作用机制可能与靶向负调控miR-653-5p有关。     

基于circRNA芯片数据的肺癌生物信息学分析

目的：环状RNA（circRNA）在肿瘤的发展过程中起着重要作用，但具体作用机制并不明确。本文旨在寻找肺癌与癌旁正常组织的差异表达circRNA并预测与其结合的MicroRNA（miRNA）的靶基因。方法：从基因表达数据库（Gene Expression Omnibus，GEO）下载circRNA表达谱数据，芯片GSE101684与GSE112214共包含7例肺癌患者样本与７例肺癌患者癌旁正常样本。首先，利用R软件筛选出样本中差异表达的circRNA；接着，在癌症特异性数据库（Cancer-Specific circRNADatabase，CSCD）中找到与差异表达显著的circRNA结合的miRNA；然后，利用Perl编程预测miRNA的靶基因；最后，利用生物学信息手段对靶基因进行基因本体论（Gene Ontology，GO）生物学功能富集分析与京都基因与基因组大百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）信号通路富集分析。结果：共筛选出350个差异表达的circRNA，上调的circRNA有169个，下调的circRNA有181个，其中hsa_circ_0039908上调最明显。与hsa_circ_0039908结合的miRNA共有35个，对这些miRNA进行靶基因预测。GO富集分析结果显示与hsa＿circ＿0039908结合的miRNA靶基因主要参与肌肉组织发育、对类固醇激素的反应与细胞酰胺代谢过程的负调控等生物学过程。KEGG富集分析结果显示与hsa_circ_0039908结合的miRNA靶基因主要富集的信号通路有调节干细胞多能性的信号通路、FoxO信号通路与AMPK信号通路等。结论：hsa_circ_0039908在肺癌组织中显著上调，可能通过与其结合的miRNA间接调控靶基因SOCS7、BTG2与RLF等在肺癌中的作用。     

CLU基因干扰质粒的构建及其对鼻咽癌细胞生物学功能的影响

目的 构建CLU基因干扰重组质粒及建立CLU基因干扰转染鼻咽癌细胞及动物模型,检测CLU对鼻咽癌细胞生物学功能的影响。方法 首先以real-time PCR和Western blot法验证CLU在鼻咽癌细胞系5-8F,6-10B中的表达,以高表达CLU的5-8F细胞作为干扰转染的目标细胞;设计及构建shRNA表达载体pSR-GFP/Neo-CLU-shRNA,将其转染至5-8F鼻咽癌细胞系中,通过Transwell小室迁移及侵袭实验来检测对其迁移和侵袭功能的影响。结果 与6-10B细胞比较,CLU基因在5-8F中的表达显著上调（P<0.05）;干扰鼻咽癌细胞5-8F中的CLU可使细胞迁移和侵袭功能明显减弱（P<0.05）,使其体外成瘤能力显著降低（P<0.05）。结论 CLU基因在鼻咽癌细胞系5-8F中明显高表达;pSR-GFP/Neo-CLUshRNA 可成功干扰5-8F中CLU的表达;CLU可抑制5-8F细胞的迁移、侵袭及体内成瘤能力。     

沉默circ9119调控miR-126抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和自噬

目的:探讨环状RNA-9119（circular-RNA-9119,circ9119）在肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的作用及其作用机制。方法:qRT-PCR检测收集的组织样本和购买的细胞系中circ9119、miR-126的表达,并对细胞进行筛选。借助荧光原位杂交（FISH）实验、RNA结合蛋白免疫共沉淀（RIP）实验与双荧光素酶报告实验对circ9119和miR-126的关系进行明确。凋亡相关因子和自噬标记物借助qRT-PCR、Western blot测定。CCK8、Transwell、流式细胞术分别测定HCC细胞的增殖、侵袭和凋亡。裸鼠成瘤实验观测肿瘤生长状况。结果:HCC组织和细胞中,circ9119的表达上调、miR-126的表达下调（均P＜0.05）。circ9119能够作为miR-126的ceRNA对其进行调控。沉默circ9119有利于抑制HCC细胞的增殖、侵袭和自噬,促进细胞的凋亡,且能够抑制小鼠体内肿瘤的生长（均P＜0.05）。而过表达circ9119则变化与之相反。上调miR-126的表达与沉默circ9119中细胞变化趋势一致。上调miR-126的作用能够被过表达circ9119所逆转。结论:circ9119作为促癌因子负调控miR-126在HCC中发挥作用。     

环状RNA hsa_circ_0050900在乳腺癌中的表达及其对细胞生物学行为影响的机制研究

背景与目的：环状RNA（circular RNA，circRNA）作为特殊的非编码RNA，一般在体内低表达，且不易被RNA酶降解，结构与表达稳定。随着测序技术的进步，目前发现多种肿瘤的发生、发展与circRNA有关。但未见乳腺癌的发生、发展与hsa_circ_0050900的异常表达相关的报道。探究乳腺癌组织中hsa_circ_0050900的表达以及其影响乳腺癌细胞生物学行为的机制。方法：选取在重庆医科大学附属第一医院经手术切除的4例女性乳腺癌组织及对应的癌旁组织，采用RNA测序（RNA sequencing，RNA-seq）进行测序分析，并运用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）验证乳腺癌中hsa_circ_0050900的表达，其中包括30例乳腺癌组织及其癌旁组织（在重庆医科大学附属第一医院经手术切除），正常人乳腺上皮细胞系即对照组细胞MCF-10A以及两种乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3。通过RTFQ-PCR验证乳腺癌细胞中hsa_circ_0050900被敲低后的表达水平；分别运用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）实验和EdU实验、细胞划痕实验、transwell实验验证细胞的增殖、迁移功能；细胞凋亡的检测采用TUNEL一步法；Hoechst 33342实验通过对细胞核染色确定细胞的状态以检测细胞凋亡；细胞周期蛋白D2（cyclin D2，CCND2）和周期蛋白依赖性激酶4（cyclin-dependent kinase 4，CDK4）的表达采用蛋白质印迹法（Western blot）检测。结果：根据测序结果，挑选出在乳腺癌和细胞中明显高表达的circRNA hsa_circ_0050900；构建的si-circ质粒可显著降低hsa_circ_0050900在乳腺癌细胞中的表达，转染si-circ的细胞增殖能力降低，并促进细胞凋亡，且降低细胞周期相关蛋白CCND2、CDK4的表达。结论：circRNA hsa_circ_0050900在乳腺癌组织中的表达显著高于癌旁组织，敲低hsa_circ_0050900对细胞增殖、迁移能力、细胞凋亡及细胞周期有调控作用。     

沉默circRNA hsa_circ_0103809表达抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭

目的:通过研究环状RNA(circRNA) hsa_circ_0103809对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响,来明确 hsa_circ_0103809在胶质瘤进展中所起到的作用。方法:采用qRT-PCR检测hsa_circ_0103809在胶质瘤细胞系U251和正常脑胶质细胞系HEB中表达水平的差异。U251细胞经小干涉RNA（siRNA）介导下调hsa_circ_0103809的表达水平后,采用qRT-PCR检测沉默效率。将U251细胞分为两组,即siRNA-circ沉默实验组和siRNA-NC阴性对照组,实验组转染hsa_circ_0103809的siRNA,对照组转染siRNA对照序列,后续分别使用CCK-8实验、EdU实验和Transwell实验检测hsa_circ_0103809的表达下调对U251细胞增殖和侵袭的影响。结果:hsa_circ_0103809在胶质瘤U251细胞中的表达水平明显高于正常脑胶质HEB细胞（P＜0.01）。在U251细胞中转染siRNA-hsa_circ_0103809后其表达水平明显降低（P＜0.01）。CCK-8实验结果显示,沉默hsa_circ_0103809的表达后,U251细胞在24 h和48 h的光密度（OD）值和对照组无明显差异,但实验组在72 h的OD值明显低于对照组（P＜0.01）。EdU实验结果显示,沉默hsa_circ_0103809的表达后,U251细胞的增殖能力较对照组明显降低（P＜0.01）。Transwell实验结果显示,沉默hsa_circ_0103809的表达后,U251细胞的侵袭能力较对照组明显降低（P＜0.001）。结论:hsa_circ_0103809在胶质瘤U251细胞中高表达,沉默hsa_circ_0103809表达可显著抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭。     

鼻咽癌组织中Gli1的表达及其对5-8F细胞增殖和迁移的影响

目的:研究神经胶质瘤相关癌基因1(Gli1)在鼻咽癌组织中的表达及其对鼻咽癌细胞5-8F增殖和迁移的影响。方法:采用荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测40例鼻咽癌组织和12例正常鼻咽组织中Gli1的表达;设计并合成针对Gli1基因的RNAi片段,将其感染5-8F细胞,蛋白质印迹法检测Gli1蛋白表达;MTT实验、平板克隆形成实验、细胞划痕实验和Boyden实验分别研究Gli1基因沉默后对5-8F细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:Gli1在鼻咽癌组织中的表达明显高于正常鼻咽组织,将siRNA-Gli1-01和siRNA-Gli1-02转染入5-8F细胞后,5-8F细胞中Gli1蛋白表达水平明显降低,细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。结论:Gli1基因的表达异常与鼻咽癌的发生发展相关,有望成为鼻咽癌早期诊断和预测预后的生物分子标志物。     

ciRS-7在食管癌组织中的表达及其对食管癌细胞TE1生物学特性的影响

目的：探讨环状RNA（circRNA) ciRS-7 在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组织中的表达及对ESCC细胞株增殖、迁移和侵袭的影响。方法：选取河北医科大学第四医院2016 年5 月至2017 年4 月收治的60 例食管癌患者病理组织标本及配对癌旁组织,通过qRT-PCR 检测ciRS-7 的表达水平。过表达或者敲低ciRS-7 后,采用CCK-8 法检测ESCC细胞株TE1 的增殖情况,同时采用划痕实验和Transwell 实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化。最后通过动物实验在体内进行验证。结果：ciRS-7 在ESCC组织中高表达,且表达水平与病理分级和淋巴结转移有关（均P<0.05）。过表达ciRS-7 后,ESCC细胞株TE1 的增殖、迁移和侵袭能力显著升高（均P<0.05）;沉默ciRS-7 后,TE1 细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低（均P<0.05）。动物实验结果显示,转染ciRS-7 表达质粒组裸鼠的肿瘤体积和质量均明显高于空载体组（均P<0.05）。免疫组化检测结果表明,转染ciRS-7 表达质粒组裸鼠的肿瘤组织中增殖相关抗原(ki67、PCNA)、转移相关抗原(MMP2、MMP9)表达明显高于空载体组（均P<0.05）。结论：ciRS-7 在食管癌组织中表达上调,并且会增强食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,提示ciRS-7 可以作为诊断和治疗食管鳞状细胞癌的潜在作用靶点。     

miR-17-5p 通过下调BRMS1L表达调控鼻咽癌CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡

目的：探讨miR-17-5p 通过调控乳腺癌转移抑制基因1 相似基因（breast cancer metastasis suppressor 1 like,BRMS1-like 或BRMS1L）表达调控鼻咽癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法：收集2014 年1 月至2017 年12 月间平煤神马医疗集团总医院收治的40 例鼻咽癌患者切除的鼻咽癌组织及其相应的癌旁组织标本,以及鼻咽癌细胞系CNE 2、HONE 1、C666-1 和鼻咽部永生化上皮细胞株NP69,采用qPCR 检测miR-17-5p 在癌组织和癌细胞系中的表达水平。通过StarBase 数据库预测BRMS1L 与miR-17-5p 的靶向关系,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。WB检测转染miR-17-5p 模拟物和抑制物对CNE2 细胞中BRMS1L表达的影响;CCK-8、Transwell 和流式细胞术检测miR-17-5p/BRMS1L分子轴对CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结果：miR-17-5p 在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中呈高表达（P<0.05 或P<0.01）,下调miR-17-5p 显著抑制CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移但促进细胞凋亡（P<0.05 或P<0.01）。miR-17-5p 靶向作用于BRMS1L并下调其表达水平。过表达BRMS1L可显著抑制CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移而促进细胞凋亡（均P<0.01）;而同时过表达miR-17-5p 和BRMS1L 可逆转上述作用（均P<0.01）。结论：miR-17-5p通过靶向下调BRMS1L的表达,进而促进CNE2 细胞增殖、侵袭和迁移而抑制细胞凋亡。     

长链非编码RNA ZEB1-AS1促进食管鳞癌侵袭转移

背景与目的：长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链1（Zinc finger E-box binding homeobox 1 antisense 1,ZEB1-AS1）在多种肿瘤中高表达,与肿瘤患者临床病理学特征及预后相关,但其在食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中的作用及其机制尚不清楚。从细胞与分子生物学水平探讨lncRNA ZEB1-AS1在ESCC细胞侵袭转移中的作用。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）方法检测9株ESCC细胞株中lncRNA ZEB1-AS1的表达水平,筛选出一株高表达细胞株。采用小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）转染Eca-109细胞,分成干扰组（siZEB1-AS1）、干扰对照组（siNC）和空白组（Eca-109）。采用RTFQ-PCR方法检测lncRNA ZEB1-AS1的表达水平,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）实验检测细胞增殖能力情况,采用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力情况,采用RTFQ-PCR方法和蛋白质印迹法（Western blot）检测ZEB1的表达水平。结果：9株ESCC细胞株中,Eca-109细胞中lncRNA ZEB1-AS1表达水平最高。siRNA 抑制lncRNA ZEB1-AS1表达,降至对照组的57%。与对照组细胞相比,lncRNA ZEB1-AS1不影响Eca-109细胞增殖,但是能显著促进Eca-109细胞迁移和侵袭。lncRNA ZEB1-AS1上调ZEB1 mRNA和蛋白的表达。结论：lncRNA ZEB1-AS1通过上调ZEB1促进ESCC迁移、侵袭,lncRNA ZEB1-AS1/ZEB1或许可以作为ESCC治疗的潜在靶点。     

Circ-0003910在HER2阳性乳腺癌中的表达、定位、生物学作用及蛋白质组学研究

背景与目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,2020年已成为全球新发病例最多的癌症。人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor 2,HER2）阳性型乳腺癌约占所有乳腺癌病例数的20%,是一种复发转移率高的分子分型。因此,探索HER2阳性型乳腺癌相关生物标志物具有十分重要的意义。本文旨在探讨circ-0003910在HER2阳性型乳腺癌组织和细胞中的表达水平和定位,阐明circ-0003910对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响,探索高表达circ-0003910对乳腺癌细胞蛋白质组学的影响。方法：通过高通量环状RNA（circular RNA,circRNA）芯片筛选在HER2阳性乳腺癌细胞中差异表达的circRNA,选择显著高表达的circRNA作为研究目标;RNA荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）实验检测circ-0003910的亚细胞定位;采用BaseScope实验分析circ-0003910在乳腺癌组织中表达水平及临床诊断意义;通过体外转染克隆质粒和siRNA构建过表达和敲低circ-0003910的乳腺癌细胞;采用transwell迁移和侵袭实验检测circ-0003910对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响;通过TMT定量蛋白质组学技术,初步探索circ-0003910促进乳腺癌细胞迁移和侵袭的分子机制。结果：CircRNA芯片分析显示,在HER2阳性乳腺癌细胞和正常乳腺细胞中共筛选出1 843个差异表达的circRNA（fold change≥2,P<0.05）,其中上调的circRNA有845个,下调有998个。与正常乳腺上皮细胞相比,circ-0003910在HER2阳性乳腺癌细胞中的差异表达倍数为24.39。实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）实验结果显示,circ-0003910在HER2阳性乳腺癌细胞中表达水平高于其他分子分型乳腺癌细胞;BaseScope实验结果表明,circ-0003910分布于HER2阳性乳腺癌细胞的细胞质和细胞核,但主要定位于细胞质中。过表达circ-0003910促进MDA-MB-231乳腺癌细胞的迁移和侵袭;敲低circ-0003910抑制SK-BR-3乳腺癌细胞的迁移和侵袭。蛋白质组学鉴定结果显示,过表达circ-0003910后,共有197个蛋白表达发生改变,其中104个蛋白质上调,93个蛋白质下调。GO和KEGG富集分析提示,差异表达蛋白质参与细胞黏附分子合成和癌症中转录失调等重要生物学进程。结论：Circ-0003910在HER2阳性乳腺癌细胞中表达上调,能够促进乳腺癌细胞迁移和侵袭,可能是HER2阳性乳腺癌新的生物标志物和抗肿瘤转移治疗靶点。     

siRNA干扰KLF8表达对鼻咽癌细胞上皮间质转化的作用

目的 探讨下调KLF8的表达对鼻咽癌CNE1-LMP1细胞侵袭能力的影响及其机制。方法 通过脂质体转染法将KLF8 siRNA真核表达质粒稳定转染至鼻咽癌细胞株CNE1-LMP1。Western blot和RT-PCR法检测CNE1-LMP1细胞中KLF8、E-cadherin、N-cadherin蛋白和mRNA表达水平的变化。Transwell侵袭实验观察siRNA后对CNE1-LMP1细胞侵袭能力的影响。结果 KLF8 siRNA转染的CNE1-LMP1细胞株与其阴性对照NC-si组比较KLF8蛋白和mRNA表达水平均下调,证实稳转细胞株建立成功。KLF8 siRNA可上调CNE1-LMP1细胞中E-cadherin的表达,而下调N-cadherin的表达。Transwell侵袭实验显示siRNA干扰CNE1-LMP1细胞侵袭能力下降。结论 KLF8在鼻咽癌CNE1-LMP1细胞中高表达;通过siRNA下调KLF8的表达能干扰上皮间质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin的表达,阻断EMT过程,抑制CNE1-LMP1细胞侵袭转移。     

circ_0072088 通过调控 miR-545-3p/STAT3 轴促进非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为

[ 摘 要 ] 目的：探究环状 RNA(circular RNA, circRNA）0072088 在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞中 的生物学功能及其作用机制。方法：在公共基因芯片数据库 Gene Expression Omnibus（GEO）中下载 GSE101684 数据集,通过 GEO2R 分析得到差异基因。通过 qPCR 检测 NSCLC 细胞 H165、H358、H460、H226 和 A549 细胞中 circ_0072088 的表达水平, 随后采用 CCK-8 法和 Transwell 小室法分别检测 circ_0072088 对 NSCLC 细胞增殖、迁移和侵袭的作用。通过 CircInteractome 和 TargetScan 数据库预测 circ_0072088 与 miR-545-3p、miR-545-3p 与 STAT3 之间的靶向关系,并通过双荧光素酶报告基因实 验和 RNA 结合蛋白免疫沉淀（RNA binding protein immunoprecipitation,RIP）实验验证 circ_0072088、miR-545-3p 与 STAT3 之 间的靶向关系。结果：circ_0072088 在 NSCLC 细胞系中的表达均显著上调（均 P<0.05）。过表达 circ_0072088 促进了 NSCLC 细胞的增殖、侵袭和迁移（均 P<0.05）;敲低 circ_0072088 抑制了 NSCLC 细胞的增殖、侵袭和迁移（均 P<0.05）。miR-545-3p 是 circ_0072088 的下游靶点,可以被 circ_0072088 吸附;STAT3 是 miR-545-3p 的靶基因,可以被 circ_0072088 间接正向调控。 结论：Circ_0072088 通过调节 miR-545-3p /STAT3 轴促进 NSCLC 细胞的增殖和转移。