bFGF单抗联合放疗对小鼠B16移植瘤的协同抑制作用

目的:探讨碱性成纤维细胞因子单克隆抗体(basic fibroblast growth factor monoclonal antibody,bFGF-mAb)联合放疗对小鼠B16移植瘤的抑制效应。方法:制备并提纯小鼠bFGF-mAb,建立荷B16黑素瘤小鼠模型并随机分为对照组、放疗组、bFGF-mAb组及联合治疗组。各组经相应治疗后,测量移植瘤体积;治疗20 d后处死小鼠,取移植瘤称瘤质量,计算抑瘤率。TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡率,免疫组化检测移植瘤组织bFGF、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达率及肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:bFGF-mAb治疗、放疗、联合治疗的抑瘤率分别为30.49%、12.17%和48.76%,联合治疗组的抑瘤率明显高于其他组(P<0.05);与放疗组比较,联合治疗组的放射增敏率为2.37。联合治疗组移植瘤细胞凋亡较放疗组、bFGF-mAb组及对照组明显增多[(58.56±6.47)%vs(17.21±2.86)%,(28.45±5.47)%,(10.62±1.73)%;P<0.05或P<0.01],其bFGF、VEGF表达水平下降,MVD明显减少(P<0.05)。结论:bFGF-mAb联合放疗对B16移植瘤具有协同抑瘤效应,通过降低肿瘤组织bFGF和VEGF表达、抑制血管新生、促进瘤细胞凋亡提高放疗敏感性。     

局部注射超抗原对小鼠膀胱癌抑癌效应的研究

目的 :研究超抗原抗肿瘤机理并评价SEA对T739小鼠膀胱癌的抑癌效应。方法 :采用已建立T739小鼠皮下可移植性膀胱肿瘤模型 ,实验组在移植瘤处局部注射SEA ,对照组应用生理盐水 ,观察治疗后各组的肿瘤重量和存活时间。结果 :SEA组小鼠肿瘤重量 (0 .6 5± 0 .18g)明显低于对照组 (4.2 8± 0 .86 g) ,抑瘤率为 84.7% (P <0 .0 1) ,SEA组小鼠存活期 (2 3.1± 2 .74天 )比对照组 (18.6± 1.5 0天 )延长 (P <0 .0 1) ,存活延长率为 2 4.1%。结论 :超抗原做为一种新的抗肿瘤生物制剂有明显的抑癌效应。     

齐留通对CT-26结肠癌细胞及荷瘤鼠肿瘤生长影响的观察

目的:探讨齐留通对小鼠CT-26结肠癌细胞和荷瘤小鼠肿瘤生长的影响.方法:将100和200 μmol/L的齐留通作用于CT-26细胞后,通过倒置相差显微镜观察齐留通应用后细胞形态变化,用MTT法检测各组细胞的生长抑制率;建立小鼠结肠癌移植瘤模型,随机分为3组,对照组给予100 mg/(kg·d)三蒸水,干预组于移植当天给予齐留通100 mg/(kg·d)灌胃,治疗组于移植第14天给予齐留通100m/(kg·d)灌胃,每组各10只,移植28 d后,检测各组移植瘤生长情况和血清CEA的浓度,HE染色观察各组移植瘤组织的病理改变.结果:MTT结果显示,以时间和剂量浓度依赖方式抑制CT-26细胞增殖,100和200μmol/L的齐留通组在24、48和72 h的抑制率分别为23.44％和37.92％、33.64％和63.74％、50.85％和75.14％.干预组和治疗组的体积抑瘤率分别为(42.3±2.9)％和(20.1±3.9)％,瘤重抑瘤率分别为(39.0±2.5)％和(24.9±0.6)％.病理观察见干预组和治疗组移植瘤组织大片状坏死,其中干预组最为明显.干预组、治疗组和对照组的癌胚抗原(CEA)含量分别为(72.07±19.90)、(94.20±21.71)和(142.30±18.83) ng/mL,P=0.000.CEA含量与移植瘤的体积和质量呈正相关,r值分别为0.794和0.785,P值均为0.000.结论:齐留通可以抑制结肠癌CT-26细胞增殖,并对荷瘤小鼠的肿瘤生长有明显的抑制作用,且在结肠癌的早期应用能达到更好的效果.     

慢性束缚应激对昆明小鼠脾淋巴细胞免疫功能及小鼠前胃癌移植瘤生长的影响

背景与目的:近年来心理社会因素在肿瘤发生发展中的作用越来越受到关注,但其具体作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨慢性束缚应激对昆明小鼠脾淋巴细胞免疫功能及其小鼠前胃癌(mouse forestomach carcinoma,MFC)移植瘤生长的影响,为研究心理社会因素促进肿瘤发生发展的机制提供一些依据。方法:将60只昆明小鼠按完全随机设计分为正常饲养组、单纯肿瘤组、单纯束缚组及肿瘤加束缚组,每组15只,对单纯束缚组和肿瘤加束缚组小鼠建立慢性束缚应激模型,单纯肿瘤组及肿瘤加束缚组小鼠于实验第4周时建立MFC移植瘤模型,种瘤后10d处死全部小鼠,测量移植瘤体重量,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖及对MFC细胞的生长抑制能力,酶连免疫吸附试验(enzyme-linked immunoabsorbent assay,ELISA)检测脾淋巴细胞产生IL-2的能力。结果:单纯肿瘤组瘤重(1.39±0.39)g,肿瘤加束缚组瘤重(2.10±0.52)g,与单纯肿瘤组相比,肿瘤加束缚组的MFC移植瘤生长较快,肿瘤增长率达51.08%(P<0.01);正常饲养组、单纯肿瘤组、单纯束缚组和肿瘤加束缚组小鼠的脾T淋巴细胞刺激指数分别为1.77±0.22、1.70±0.17、1.69±0.18、1.22±0.15,脾B淋巴细胞刺激指数分别为1.73±0.14、1.65±0.17、1.64±0.21、1.33±0.11,效靶比在5∶1和10∶1时小鼠脾细胞对MFC细胞的生长抑制率分别为(23.01±4.76)%、(19.47±3.70)%、(16.81±3.68)%、(7.14±5.00)%和(33.03±3.91)%、(28.34±4.58)%、(24.94±2.97)%、(13.49±7.94)%,脾细胞培养上清中IL-2含量分别为(260.03±14.96)pg/mL、(239.78±10.93)pg/mL、(238.11±13.50)pg/mL、(186.34±10.42)pg/mL,两因素方差分析显示慢性束缚应激和移植瘤均使小鼠脾淋巴细胞增殖能力、对MFC细胞的生长抑制能力及产生IL-2的能力减弱,并且两者具有交互效应,其中以慢性束缚应激的影响程度较大(P<0.01)。结论:慢性束缚应激可通过削弱小鼠的免疫功能促进MFC移植瘤生长。     

重组耻垢分枝杆菌对小鼠膀胱癌的抑癌效应

背景与目的:BCG膀胱灌注是治疗膀胱肿瘤防止其复发最有效的方法之一,但部分患者疗效差、且有一定副作用。研究新的分枝杆菌菌株将可能进一步降低BCG副作用,提高疗效。本研究探讨重组耻垢分枝杆菌对小鼠膀胱癌的抑癌效应。方法:采用T739可移植性膀胱癌模型,于移植瘤处局部注射重组耻垢分枝杆菌,并用耻垢分枝杆菌、卡介苗(BCG)和磷酸盐缓冲液(PBS)作对照,观察治疗后各组小鼠的肿瘤重量及其存活期。结果:重组耻垢分枝杆菌治疗组小鼠肿瘤瘤重(3.0±1.6)g,显著低于PBS组(6.8±1.3)g(P<0.01),而与BCG组(3.2±1.2)g相比,差异无显著性(P>0.05),抑瘤率为55.95%;重组耻垢分枝杆菌治疗组小鼠存活天数为(30.4±2.5)d,显著长于PBS组(23.2±2.2)d(P<0.05),与BCG组的(29.7±3.2)d相比,差异无显著性(P>0.05),存活延长率为31.23%。同时免疫组化分析表明重组耻垢分枝杆菌能增加肿瘤组织内CD3、CD4、CD8、CD56的表达。结论:重组耻垢分枝杆菌对小鼠膀胱癌具有抑制作用,并能延长膀胱癌荷瘤鼠的生存期。     

放射联合常山酮增强肺癌疗效及机制动物实验研究

目的 探讨放射联合常山酮对增强Lewis肺癌小鼠移植瘤疗效及对肿瘤侵袭转移的影响,并探索可能的分子机制。方法 将Lewis肺癌移植瘤小鼠随机分为空白对照组、常山酮组、放射组及联合组(9只/组),处理结束后第3天,每组随机处死4只小鼠行免疫组化及ELISA检查,剩余小鼠继续观察存活时间及肝、肺转移情况。组间差异采用方差分析。结果 处理第9天,对照组、常山酮组、放射组及联合组小鼠平均肿瘤体积分别为175.2、118.5、106.6、85.6 mm³(P=0.000)。4个组中位存活时间分别为39、61.5、78.5、84.5 d (P=0.002)。联合组肝肺转移数目显著最少。免疫组化及ELISA结果显示TGF-β₁水平放射组较对照组升高,联合组较对照组低;肿瘤平均血管密度计数联合组明显少于放射组。对照组及放射组胶原蛋白表达较高,常山酮组及联合组胶原蛋白表达较低。结论 放射联合常山酮可能会增强肿瘤治疗疗效,其潜在的机制需要进一步研究。     

放疗联合周剂量重组人血管内皮抑素对A549肺腺癌裸鼠移植瘤生长抑制作用的研究

目的:研究放疗联合周剂量重组人血管内皮抑素(recombinant human endostatin, rh-Endostatin)对肺腺癌A549裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法: 40 只裸鼠A549细胞移植瘤模型随机分成4组:空白对照组、rh-Endostatin治疗组、放射治疗组和放疗联合rh-Endostatin治疗组,观察并绘制肿瘤生长曲线图,计算肿瘤体积抑制率;肿瘤组织行常规HE病理学检查,免疫组织化学法检测肿瘤组织中微血管内皮CD31的表达及肿瘤微血管密度(microvessel density, MVD)的变化;采用免疫组织化学及Western印迹法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表达;TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡. 结果:治疗第8天起,放疗联合rh-Endostatin治疗组的肿瘤体积与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).15 d后,rh-Endostatin治疗组、放射治疗组和放疗联合rh-Endostatin治疗组小鼠的肿瘤体积的抑制率依次为68.35%、90.78%和106.56%; rh-Endostatin治疗组小鼠的MVD较放射治疗组下降明显(P＜0.05);但rh-Endostatin治疗组与对照组、放疗联合rh-Endostati治疗组及放射治疗组相比,VEGF的改变差异均无统计学意义;放疗联合rh-Endostatin治疗组细胞凋亡明显.结论:放疗联合周剂量rh-Endostatin能抑制肿瘤的生长,较早诱导肿瘤退缩,可能与减少放射治疗后肿瘤血管再生及增加肿瘤细胞和内皮细胞的凋亡相关;各治疗组小鼠均未出现急性不良反应,因此该方法具有短疗程的优势,可用于临床推广.     

异种血管内皮生长因子受体重组蛋白疫苗与顺铂联合给药对小鼠LL/2肿瘤的抑制作用

背景与目的:生物鄄化学治疗是生物治疗与化疗相结合的一种恶性肿瘤综合治疗的新动向之一。抗肿瘤血管形成已成为肿瘤生物治疗的一种策略。本实验观察以重组鹌鹑血管内皮生长因子受体2(quailvascularendothelialgrowthfactorreceptor鄄2,qVEGFR)作为肿瘤疫苗,联合化疗药物顺铂抑制小鼠LL/2肿瘤生长的作用。方法:在C57BL/6小鼠建立LL/2肺癌模型,接种瘤细胞7天后将小鼠随机分成qVEGFR联合顺铂组(简称联合给药组)、qVEGFR组、顺铂组、生理盐水对照组4组。实验中观察肿瘤的生长情况以及小鼠的存活情况和不良反应,并检测小鼠抗自身VEGFR鄄2抗体产生情况、肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)、肿瘤细胞凋亡情况等。结果:联合给药组肿瘤明显小于生理盐水对照组,其中有3只小鼠肿瘤完全消退;在接种肿瘤细胞后第70天,联合给药组小鼠存活率为90%,明显高于qVEGFR组(60%)、顺铂组(0%)以及生理盐水对照组(0%)。显微镜下计数结果显示,联合给药组与qVEGFR组所产生的分泌抗qVEGFR抗体的B细胞数量分别为(156.8±19.3)/106个脾细胞和(143.6±18.6)/106个脾细胞。联合给药组肿瘤MVD为11.4±1.3,qVEGFR组为16.4±1.6,顺铂组为33.5±4.5,生理盐水对照组为45.5±4.5,联合给药组MVD明显低于生理盐水对照组。原位末端标记技术     

As2O3联合Aspirin对615小鼠移植性前胃癌淋巴道转移的影响

[目的]观察As2O3和Aspirin联合应用对615小鼠前胃癌侵袭、淋巴管生成及淋巴道转移的影响。[方法]建立小鼠前胃癌淋巴道移植瘤模型,用As2O3、Aspirin单独及联合作用后,测量各组小鼠体重、瘤重,计算肿瘤抑制率并计数瘤组织微淋巴管密度(LMVD)。[结果]与NS组相比,各治疗组615小鼠移植瘤生长均受抑制,Aspirin组抑瘤率为15.4%,As2O3组抑瘤率为43.8%,减半联合组为45.6%,联合组为60.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结内瘤组织转移抑制率As2O3组为22.4%,减半联合组和联合组分别为28.6%和50.0%。联合治疗组与减半联合组、Aspirin组、As2O3组及NS组相比,LMVD计数均显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]As2O3与Aspirin联合应用可抑制小鼠前胃癌移植瘤的生长、侵袭和淋巴道转移。     

沙利度胺联合放射治疗对结肠癌小鼠移植瘤生长及放射敏感性的影响

背景与目的：沙利度胺能有效增强肿瘤对放射的敏感性,但作用机制尚不清楚。本研究探讨沙利度胺对人结肠癌小鼠移植瘤放射敏感性的影响,并探讨其协同抑制效应的机制。方法：建立colon26结肠癌移植瘤模型,将32只小鼠随机分为对照组;单纯沙利度胺组(T组);单纯放疗组(R组);沙利度胺+放疗组(T+R组);从治疗当天开始,隔日测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,治疗结束时测量肿瘤体积,计算抑瘤率,处死小鼠后剥离瘤体,采用免疫组化法测定各组肿瘤组织微血管密度(microvesseldensity,MVD)。结果：治疗第22天,对照组、T组、R组和T+R组移植瘤平均体积分别为(4.97±1.20)cm3、(2.90±0.92)cm3、(2.66±0.88)cm3和(1.89±0.76)cm3;肿瘤生长抑制率分别为41.7%、46.5%和61.9%,T+R组移植肿瘤抑瘤率明显高于其他各组(P＜0.05);与R组比较,T+R组的放射增敏率为2.27;沙利度胺联合放射治疗能显著抑制肿瘤组织MVD生成：T+R组的平均MVD较对照组下降了46.8%,下降程度明显高于T组(40.7%)和R组(37.7%,P＜0.05);且T+R组肿瘤组织中出现较多的坏死,坏死细胞数明显高于对照组(P＜0.05)。结论：沙利度胺可以增强结肠癌小鼠移植瘤的放射敏感性,其机制可能与抑制移植瘤血管的生成有关。     

Changes in T lymphocyte subsets in mice with CT26 colon tumors after treatment with donor lymphocyte infusion

The objective of this study was to detect changes in T lymphocyte subpopulations in mice with CT26 subcutaneous colon cancer after treatment with donor lymphocyte infusion (DLI) and cyclophosphamide (CP) chemotherapy. A colon cancer model was established by subcutaneous injection of CT26 carcinoma cells into BALB/C mice. The mice were randomized into different treatment groups. We recorded survival times, tumor growth inhibition rates, histopathological changes, and T lymphocyte subsets in peripheral blood of the mice. Mice treated with DLI and CP survived 33.5?±?5.02 days, which was significantly longer than the survival time of untreated control mice (16.7?±?2.98 days, P?<?0.01). In addition, the tumor inhibitory rate was higher in mice treated with DLI and CP (89.3 %) than that in mice treated with CP or DLI alone (67.1 and 34.5 %, respectively). There were higher levels of T lymphocytes that were CD3⁺ and CD4⁺ in mice treated with DLI alone or the combination of CP and DLI (P?<?0.05), and the ratio of CD4⁺/CD8⁺ cells was significantly improved in these mice (P?<?0.05). DLI combined with chemotherapy significantly prolonged survival and inhibited tumor growth in mice with CT26 colon cancer. This treatment might also improve immune function in these mice. Donor spleen cells that include high numbers of allogeneic lymphocytes and a few stem cells could induce a graft-versus-tumor effect, leading to elimination of residual cancer cells. This indicates that it is potentially a feasible adoptive cellular immunotherapy strategy for the management of solid tumors.     

吉西他滨对卵巢癌移植瘤小鼠的免疫调节作用

目的:观察吉西他滨(gemcitabine,GEM)对卵巢癌移植瘤小鼠肿瘤免疫微环境的调节作用.方法:C57BL/6小鼠皮下注射卵巢癌ID8细胞构建卵巢癌移植瘤模型,实验组腹腔注射GEM,对照组注射生理盐水,观察肿瘤生长情况.流式细胞术检测小鼠脾脏及肿瘤组织的调节性T细胞(regulatoryT cells,Treg)及髓来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC),实时定量PCR检测小鼠肿瘤组织arginase-1(Arg-D和Foxp3 mRNA的表达,流式细胞仪检测小鼠脾脏CD8+T细胞的比例,ELLSE法检测小鼠血清IFN-γ及IL-2的表达.结果:GEM处理后的移植瘤小鼠肿瘤生长明显受到抑制[(366.8±44.88) vs (499.3±24.14)mm3,P＜0.01].移植瘤小鼠肿瘤组织及脾脏Treg比率明显降低[(12.71±2.31)％ vs (20.36±2.65)％、(10.09±1.69)％ vs (13.79±1.31)％,均P＜0.01].实验组的相关基因mRNA表达较对照组显著降低[Foxp3:(4.30±0.46)vs (6.35±0.58);Arg-1:(16.32±0.38)vs(13.26±0.37);均P＜0.01].实验组血清中的IFN-γ和IL-2含量明显高于对照组[IFN-γ:(71.90±2.28)vs (53.91±3.91) pg/ml;IL-2:(51.46±1.69)vs (40.90±1.50) pg/ml,均P＜0.01].结论:GEM下调卵巢癌移植瘤小鼠免疫抑制活性,并可上调小鼠抗肿瘤免疫原性,该结果可为GEM作为卵巢癌免疫治疗干预措施提供实验依据.     

ADAM17-shRNA转染的骨髓间充质干细胞对裸鼠乳腺癌移植瘤生长的影响

目的:探讨转染解聚素-金属蛋白酶17-shRNA(a disintegrin and metalloprotease 17-shRNA,ADAM 17-shRNA)的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenehymal stem cells,BMMSC)对乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤的抑制效果.方法:全骨髓贴壁法分离并培养3周雄性SD大鼠的BMMSC,利用慢病毒介导的ADAM17-shRNA转染BMMSC.30只裸鼠建立MCF-7乳腺癌移植瘤模型,种植肿瘤细胞14d后建模成功.按照数字表法随机分成对照组(注射等量PBS)、BMMSC组(注射l×106/mlBMMSC)和转染组(注射1×106/ml转染ADAM 17-shRNA的BMMSC),每组10只.在种植细胞第15天开始经尾静脉注射BMMSC进行抑瘤实验(0.1 ml/只,每3d给药1次,共计5次),观察裸小鼠移植瘤的生长情况;抑瘤实验16d后处死裸鼠.利用Real-time PCR法检测移植瘤组织ADAM17 mRNA表达,Westem blotting法检测移植瘤组织ADAM 17蛋白表达.结果:抑瘤实验16d时,对照组、BMMSC组移植瘤体积明显高于转染组[(787.15±25.95)、(767.02±28.98) vs (361.89±19.75)mm3,均P＜0.01];BMMSC组、转染组抑瘤率明显高于对照组(2.57％、53.89％ vs 0.00％,均P＜0.05).对照组、BMMSC组ADAM17 mRNA的表达水平明显高于转染组(1.00±0.01、0.97±0.08 vs 0.30±0.09,均P＜0.05);对照组、BMMSC组ADAM 17蛋白表达水平明显高于转染组(0.70±0.09、0.68±0.02 vs 0.45±0.05,均P＜0.05).结论:ADAM 17-shRNA通过BMMSC介导可将ADAM17靶向归巢至裸鼠乳腺癌移植瘤并发挥抑瘤作用.     

四君子汤诱导裸小鼠移植性人胃癌细胞凋亡的初步研究

目的:研究健脾类中药四君子汤在体内诱导移植性人胃癌细胞凋亡的作用。方法:采用人胃癌细胞SGC7901裸小鼠皮下移植瘤模型。实验动物共30只,造模后随机分为3组,每组10只。四君子汤组,予四君子汤煎剂灌胃;5FU组,5FU腹腔注射,共6天;对照组,予生理盐水灌胃,共40天。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)、电镜观察结合流式细胞分析技术,观察四君子汤的抑瘤作用及细胞形态学改变,并计算肿瘤细胞凋亡率。结果:发现四君子汤对裸小鼠移植性人胃癌细胞瘤抑瘤率为34.33%,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数AI为16.24%±3.21%,与对照组的2.63%±1.03%比较明显提高t检验P<0.01;流式细胞分析示四君子汤组凋亡率为11.38%±6.46%,比对照组的7.15%±1.32%提高(t检验P<0.05);电镜下见凋亡细胞染色质浓聚成块,位于核周边,胞浆浓缩。结论:四君子汤有诱导裸小鼠移植性人胃癌细胞凋亡的作用,其对胃癌治疗的价值有必要进一步研究。     

TRAIL-induced cell death cooperates with IFN-gamma activation in the graft-versus-tumor effect against colon tumors

The graft-versus-tumor (GVT) effect that occurs following allogeneic bone marrow transplantation (BMT) and donor lymphocyte infusion (DLI) is currently being subjected to intensive investigation because of clinical evidence for GVT efficacy against leukemia. In this report, we investigate the efficacy and molecular mechanisms of GVT against solid tumors, using a modification of the mouse parent-to-F1 BMT model. Mouse Colon26 cells in which tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) receptor expression was stably knocked down were transplanted to investigate the role of the TRAIL-TRAIL receptor system in the GVT effect. In addition, Fas ligand-(FasL) deficient mice on a C57BL6 (B6) background were used as donors, to determine the significance of the Fas-FasL system for the antitumor effect. The group that received B6 DLI followed by preconditioning with 950 rad irradiation underwent tumor reduction associated with the induction of IFN-gamma, TRAIL and tumor-cell apoptosis. In vitro cultured Colon26 cells were resistant to TRAIL but susceptible to the combination of IFN-gamma and TRAIL in a TRAIL-dose-dependent manner. The infusion of lymphocytes from FasL-defective donors reduced the tumor progression, although efficacy was decreased in the TRAIL receptor knockdown tumors but not in wild-type ones, compared with infusion of B6-derived lymphocytes. The findings indicate that GVT activity against subcutaneous colon tumors is efficiently induced by preconditioning with irradiation and allogeneic DLI, and that TRAIL and IFN-gamma act cooperatively in the antitumor effect.     

A reduction of recipient regulatory T cells by cyclophosphamide contributes to an anti-tumor effect of nonmyeloablative allogeneic stem cell transplantation in mice

We have recently established a unique model system of nonmyeloablative allogeneic stem cell transplantation (SCT) for treatment of murine solid tumors, based on cyclophosphamide‐induced tolerance. An injection of allogeneic donor spleen cells and bone marrow cells (BMC) followed by cyclophosphamide treatment induced a stable mixed chimerism with long lasting tolerance to the allografts. A donor lymphocyte infusion (DLI) in the cyclophosphamide‐induced tolerant mice exerted strong anti‐tumor effects on an MBT‐2 murine bladder tumor, MBT‐2 via their graft versus tumor (GVT) activity. In the present study, we determined whether a cyclophosphamide‐induced reduction of naturally occurring regulatory T cells (Tregs) was associated with the anti‐tumor activity in our nonmyeloablative SCT system. The number of recipient CD4+ CD25+ Foxp3+ Tregs significantly decreased 3 days after an intraperitoneal injection of cyclophosphamide in C3H/HeN mice that had been injected with spleen cells and BMC of donor AKR/J mice, compared with the number of CD4+ CD25+ Foxp3‐ T cells. An adoptive transfer of CD4+ CD25+ T cells from naïve C3H/He x AKR/J F1 mice into recipient mice 1 day after DLI significantly suppressed the expansion and IFN‐γ production of host‐reactive donor CD4+T cells and hampered the MBT‐2 anti‐tumor activity when compared with the transfer of CD4+ CD25‐ T cells. These results indicated that cyclophosphamide‐induced reduction of recipient Tregs is associated with retardation of tumor progression via the expansion of host‐reactive donor T cells and IFN‐γ production after DLI in our nonmyeloablative SCT system.     

人胎盘提取物抑制结肠癌细胞的增殖及迁移

目的:探讨人胎盘提取物(human placenta extracts,HPE)对人结肠癌细胞株Caco-2及SW480增殖和迁移能力的影响.方法:用不同质量浓度HPE处理Caco-2和SW480细胞,CCK-8、Ki-67、CFSE法检测细胞增殖活性的变化,Annexin-V/PI及DAPI细胞核染色检测HPE对细胞周期及凋亡的影响,实时荧光定量PCR法检测HPE对细胞中BAX、CDK2及CyclinA2基因表达的影响,划痕实验检测对细胞迁移能力的影响.建立裸鼠结肠癌移植瘤模型,随机分组分别单独或联合给予HPE和5-氟尿嘧啶(5-Fu),观察裸鼠移植瘤的生长状况.结果:HPE处理组Caco-2及SW480细胞增殖能力低于对照组[(0.82±0.01) vs (0.96±0.02),P＜0.01;(0.90±0.03) vs (0.96±0.02),P＜0.05],细胞凋亡率高于对照组[(20.47±1.32)％ vs(11.01±3.82)％,P＜0.01;(20.70±5.19)％ vs (8.00±2.69)％,P＜0.05];HPE处理组细胞胞质减少、核固缩、BAX基因表达增加[(3.23±1.90)vs(1.00±0.00),(2.25 ±0.55) vs (1.00±0.00),均P＜0.05];细胞停留在细胞DNA复制S期,出现凋亡峰;Caco-2细胞CDK2及CyclinA2基因表达降低(P＜0.05);并且细胞的迁移能力低于对照组[(0.17 ±0.29) vs (1.50±0.50)mm,P＜0.05].HPE处理组裸鼠移植瘤体积小于对照组、生存率高于单用5-Fu组(P＜0.05).结论:HPE在体内外通过干预结肠癌细胞凋亡、阻滞细胞周期、抑制细胞增殖及迁移,可能对抑制肿瘤细胞增殖有一定作用.     

CIK细胞联合贝伐单抗对肝癌HepG2细胞的体内外抗瘤活性

目的:探讨细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞联合贝伐单抗(bevacizuma)对肝癌HepG2细胞的体内外抗肿瘤活性及其作用机制.方法:提取健康供血者外周血的单个核细胞(PBMC),加入多种细胞因子促进CIK细胞成熟,在流式细胞仪上进行CIK细胞的免疫表型分析.CIK细胞与贝伐单抗单独或联合作用于HepG2细胞后,利用CCK-8测定其对HepG2细胞体外增殖活性的影响;利用侵袭小室(Transwell)和划痕实验测定其对HepG2细胞侵袭迁移活性的影响;Western blotting检测HepG2细胞Akt和Erk信号通路相关蛋白磷酸化的变化.建立HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤模型,并随机分为生理盐水组、CIK组、贝伐单抗组及CIK细胞联合贝伐单抗组,给药28 d后处死裸鼠,剥取瘤体,免疫组化法检测瘤组织CD31及Ki67蛋白的表达.结果:提取健康人PBMC诱导14 d后,CIK细胞表型分析显示CD3+ CD56+细胞扩增达(36.33±2.58)％.与单独治疗组比较,联合组对HepG2细胞的抗肿瘤增殖活性显著增强(P ＜0.05);CIK细胞和贝伐单抗两药联合比单独给药组对HepG2细胞的侵袭[(75.6 ±9.53) vs (304.8 ±45.73)、(359.8 ±38.10)个,P＜0.01]和迁移[(29.35±8.14)％vs (55.07±6.27)％、(60.50±9.73)％,P＜0.05]能力的抑制更强;CIK细胞和贝伐单抗两药单独及联合都能抑制Akt和Erk的磷酸化;CIK联合贝伐单抗组可显著抑制移植瘤生长以及移植瘤组织平均血管密度和Ki67表达,与单独治疗及对照组细胞比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:CIK联合贝伐单抗在体内外对HepG2细胞增殖、侵袭、迁移均有抑制作用,且优于单独治疗组.     

顺铂不同化疗模式对卵巢癌细胞SKOV3血管生成拟态能力的影响及其机制的探讨

目的 观察接受顺铂低剂量连续化疗（LDM）和最大可耐受剂量化疗（MTD）后卵巢上皮癌SKOV3细胞的血管生成拟态（VM）的形成能力,并探讨其可能机制。方法 建立卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤模型,分别采用顺铂LDM和MTD模式对裸鼠移植瘤进行治疗,以未化疗小鼠作为对照组;化疗结束取移植瘤培养原代细胞。三维细胞培养观察比较LDM组、MTD组和对照组原代细胞形成VM的能力;MTT法和Transwell侵袭实验分别检测SKOV3移植瘤原代细胞的增殖和侵袭能力;Western blotting检测原代细胞中CD133和乙醛脱氢酶（ALDH1）的表达;收集经流式细胞荧光分选技术（FCAS）分选的CD133+ALDH1+和CD133-ALDH1-细胞行三维细胞培养观察并比较两组形成VM的能力。结果 MTD组和LDM组的抑瘤率分别为25.87％和51.52％。MTD组、对照组和LDM组形成VM的平均时间分别为6、9和12 h;48 h后MTD组、对照组和LDM组的VM密度分别为（29.60±9.55）个、（18.70±4.97）个和（11.20±2.60）个,差异有统计学意义（P＜0.05）。从第3天开始MTD组细胞增殖率显著高于对照组和LDM组（P＜0.05）。Transwell侵袭实验结果显示,MTD组细胞穿膜数为156.93±22.77,对照组为112.13±16.59,LDM组为87.33±19.58,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。MTD组CD133、ALDH1蛋白的相对表达量分别为0.402±0.034、0.418±0.020,对照组为0.338±0.046、0.325±0.011,LDM组为0.296±0.042、0.318±0.012,3组间差异有统计学意义（P均＜0.05）。以5×104个／ml接种CD133+ALDH1+细胞6 h左右形成VM,CD133-ALDH1-细胞48 h仍未形成VM;以1×105个／ml接种CD133-ALDH1-细胞24 h可形成少量VM。结论 较MTD模式而言,LDM模式可能通过减少高表达CD133+ALDH1+的细胞以影响肿瘤血供进而减少传统模式化疗后肿瘤的耐药和复发。     

流式细胞术检测结直肠癌根治术前后循环肿瘤细胞和循环肿瘤干细胞及其临床预测价值

目的:探讨流式细胞仪检测结直肠癌根治术前后循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)和循环肿瘤干细胞(circulating tumor stem cell,CTSC)作为患者临床预测指标的可行性和临床价值.方法:人组首诊初治50例结直肠癌患者,手术前后各抽取15 ml外周血.分离单个核细胞后分成两份,一份标记CTC标志物(CD45、EpCAM和CK),另一份标记CTSC标志物(CD45、EpCAM、CD44和CD133),Moflo XDP流式细胞仪对其进行检测,CD45-EpCAM+ CK+细胞确定为CTC;CTSC确定为3群:CD44+CTSC、CD133+ CTSC和CD44+ CD133+ CTSC.结果:结直肠癌根治术前患者CTC和CD44+ CTSC阳性率分别为34％和44％,CD133+ CTSC和CD44+CD133+ CTSC是24％和0;术后患者CTC和CD44+ CTSC阳性率分别为38％和54％,CD133+ CTSC和CD44+ CD133+ CTSC分别为26％和0.根治术前后CTC阳性率都与肿瘤T分期有关联(P＜0.05);术后CTC与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和远处转移有关联(P＜0.05);术前CD44+ CTSC与肿瘤的浸润深度有关联.结论:根治术前后CTC及术前CD44+ CTSC阳性率都具有临床预测指标的可行性和价值,术后CTC阳性率可能是更好的预测指标.