LncRNA在缺氧诱导的胃癌细胞中表达谱的变化

目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)在常氧条件下的胃癌细胞及缺氧诱导的胃癌细胞中表达谱的变化。方法:利用lncRNA芯片技术检测常氧条件下的胃癌细胞,缺氧诱导的胃癌细胞中lncRNA表达谱的变异,经对原始数据进行预处理达到均一化后,筛选出差异表达lncRNA,进行分析。结果:与常氧条件下的胃癌细胞相比较,缺氧诱导胃癌细胞中1.5倍以上变化并有显著差异(P<0.05)的lncRNA,确定为差异表达lncRNA。其中在三种胃癌细胞中的变化均在1.5倍以上的共254条,占所有lncRNA的3.6%;大于1.5倍上调的共136条,1.5倍以上降低的共118条;2倍以上上调的共30条;2倍以上降低的共25条;3倍以上升高的共5条;3倍以上降低的共5条。结论:缺氧诱导的胃癌细胞与常氧的胃癌细胞比较,lncRNA表达谱发生显著变化。提示差异性表达的lncRNAs可能参与了缺氧环境下胃癌细胞多种恶性表型的变化。     

特异长链非编码RNA在鼻咽癌中的表达及其意义

目的 分析长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）在鼻咽癌与慢性鼻咽炎组织中表达水平的变化,寻找可能与鼻咽癌发生发展相关的特异lncRNA。方法 采用lncRNA芯片技术分析lncRNA和mRNA在鼻咽癌与慢性鼻咽炎组织的表达谱,筛选差异表达的lncRNA和mRNA,进一步研究使用了聚类分析、GO分析、pathway分析等生物信息学技术。结果 差异表达的lncRNA（2倍以上变化且P＜0.05）共856条,其中上调的共 425条,下调的共431条;差异表达的mRNA共767条,其中上调的共426条,下调的共341条。利用聚类分析方法将差异表达的lncRNA分成3类：增强子型lncRNA、HOX 基因簇、基因间lncRNA。GO分析将mRNA分成3类：生物学过程类、细胞组分类、分子功能类。Pathway分析显示mRNA共参与28条信号通路,其中参与细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路的上调差异表达的mRNA的富集度最高。结论 与慢性鼻咽炎相比,lncRNA在鼻咽癌组织的表达水平明显改变,提示差异表达的lncRNA可能与鼻咽癌的发生发展有关。     

肺癌淋巴结转移相关基因差异表达分析

目的:应用人类14K cDNA基因表达谱芯片筛选肺癌淋巴结转移相关基因,探讨肺癌淋巴结转移发生过程中相关基因群的表达及初步功能.方法:分别抽取肺癌组织和淋巴结转移组织的总RNA,采用逆转录方法,制成cDNA链,并以2种荧光Cy5和Cy3标记做探针,与含有14 784条人类14K cDNA基因表达谱芯片进行杂交.以Agilent荧光扫描仪扫描芯片上2种荧光信号,进行计算机处理和分析,筛选出肺癌淋巴结转移组织中差异表达基因,并用RT-PCR实验对部分差异表达基因进行验证.结果:在14 784条基因中,肺癌组织和淋巴结转移组织间存在差异表达的基因共40条,有21条基因出现显著表达上调,19条基因出现显著表达下调.经RT-PCR验证,差异表达趋势与基因芯片技术检测的结果一致.结论:肺癌淋巴结转移发生过程中有多基因的参与,肺癌组织与淋巴结转移组织共同差异表达的40条基因可能与淋巴结转移的发生、发展有关.     

肺癌侧群细胞microRNA表达谱检测及初步分析

背景与目的 目前研究认为侧群细胞(side population cell,SP cell)富集了肿瘤干细胞,是肿瘤生长和发展的根源;并且SP细胞对放化疗高度耐受,成为肿瘤复发转移的重要因素.为此,我们探讨了肺癌SP细胞与非SP细胞(non-SP)miRNA分子表达谱差异,旨在为进一步研究miRNA在肺癌干细胞中的作用机制打下基础.方法 利用Hoechst 33342染料法,通过流式细胞仪紫外激光分选功能分选出A549细胞中的SP细胞和non-SP细胞,分别采用Trizol一步法提取两者的总RNA,利用miRNA芯片检测系统进行miRNA表达谱差异分析.结果 肺癌SP细胞和non-SP细胞miRNA表达谱存在明显差异.与non-SP细胞相比,在SP细胞中上调2倍以上的miRNA有9条,下调2倍以上的miRNA有25条.结论 差异表达的miRNA能参与肺癌干细胞的发生发展过程,为进一步揭示肺癌干细胞发生的分子机制提供了依据.     

lncRNA MAGI2-AS3在非小细胞肺癌组织中的表达及生物学作用

目的:评价lncRNA MAGI2-AS3 在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）组织中的表达及生物学作用。方法:收集63例非小细胞肺癌患者癌组织及其癌旁组织,检测lncRNA MAGI2-AS3在癌与癌旁组织中的相对表达量并分析其与患者临床特征的关系;在A549细胞中过表达lncRNA MAGI2-AS3,分析其与NSCLC细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力之间的关系。结果:lncRNA MAGI2-AS3 在NSCLC组织中呈现低表达状态,与正常肺组织相比,差异具有统计学意义;lncRNA MAGI2-AS3 在NSCLC组织中低表达,与患者的年龄、病理类型、肿瘤大小、临床分期、吸烟指数有关;lncRNA MAGI2-AS3 能够抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。结论:检测lncRNA MAGI2-AS3 与NSCLC病理类型、临床分期有一定的相关性,可以作为一种潜在的肺癌标志物指导临床诊断。lncRNA MAGI2-AS3 能够抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,有可能成为肺癌治疗的潜在靶点用于临床。     

LncRNA在宫颈癌组织中的表达谱变化及意义

目的 研究宫颈癌组织中lncRNA的表达变化情况,为探讨lncRNA参与宫颈癌发生与发展提供分子依据.方法 取20例宫颈癌患者的宫颈癌组织和20例正常宫颈组织,应用高通量lncRNA芯片技术分别检测两组中ln-cRNA表达谱的变化情况,并应用qRT-PCR技术对结果加以验证.结果 与正常宫颈组织相比,宫颈癌组织中共有30586条lncRNA和13982条mRNA存在差异性表达,通过GO聚类分析表明,上调mRNA和下调mRNA分别参与多种不同的生物过程.通过进一步分析发现变化差异性最明显的10个lncRNA可能通过影响相应的mRNA来发挥其生物学功能.qRT-PCR结果与芯片检测结果一致,提示4个lncRNA(BC008359,RP11-521B24.5,BRE-AS1,和RP11-229P13.15)在宫颈癌组织中发挥重要作用.结论 本实验阐述了宫颈癌组织中lncRNA的变化情况,为探讨lncRNA参与宫颈癌发生与发展以及治疗提供新的分子依据.     

转移性喉鳞状细胞癌组织中长链非编码RNA的筛选及鉴定

目的：应用高通量基因芯片技术进行转移性喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）中差异表达长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）的筛选及鉴定,寻找有价值的LSCC 相关候选基因和分子标志物。方法：4 例LSCC组织标本均来自河北医科大学耳鼻咽喉头颈外科生物样本库,病理证实为淋巴结转移的LSCC组织及癌旁黏膜组织。提取标本组织总RNA后,应用SBC-lncRNA 基因芯片检测差异表达的lncRNA 及mRNA,采用差异倍数以及Student''s t 法对差异表达基因进行筛选,将差异倍数(linear)≤ 0.5 或者≥2.0 和P< 0.05 判断为差异表达基因。选取特定的差异表达lncRNA,应用qRTPCR技术验证芯片结果的可靠性。结果：通过对转移性LSCC组织和癌旁组织的lncRNA表达谱分析显示,转移性LSCC组织与癌旁组织的lncRNA表达谱存在明显差异,差异表达的lncRNA 3 073 个,其中癌组织中表达上调1 967 个、下调1 106 个;差异表达的mRNA 2 809 个,其中癌组织中表达上调1 791 个、下调1 018 个。差异表达的lncRNA主要参与细胞增殖、凋亡及免疫应答等生物学过程,涉及细胞因子及其受体的相互作用、趋化因子信号通路、细胞周期调节、P53 信号通路等。选取其中10 条具有显著差异表达的lncRNA,在25 例LSCC标本组织中进行qRT-PCR验证,发现表达趋势与芯片检测结果一致。结论：转移性LSCC组织及癌旁组织的lncRNA表达谱存在明显差异,深入分析这些差异表达lncRNA的分子作用机制对阐明转移性LSCC的侵袭转移机制有重要的意义,可为LSCC特异性肿瘤标志物的筛选及有效的靶向治疗提供实验依据。     

驱动蛋白E g5在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的：检测驱动蛋白Eg5在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达水平,并探讨其与非小细胞肺癌转移的关系。方法：选取63例非小细胞肺癌的手术切除标本和20例正常肺脏组织标本,采用免疫组化检测Eg5的表达,并分析其与非小细胞肺癌临床病理特征和转移之间的关系。结果：E g5在正常肺组织中未见明显表达,在非小细胞肺癌组织中的表达阳性率为68．3％（43／63）,且与非小细胞肺癌的肿瘤直径（χ2＝4．506,P＝0．034）、临床分期（χ2＝8．866,P＝0．012）、淋巴结转移情况（χ2＝19．52,P＜0．001）有关,差异有统计学意义;而与患者性别、年龄、分化程度等指标无明显的相关性（P＞0．05）。结论：Eg5在正常肺组织中未见明显表达,在非小细胞肺癌组织中高表达,E g5的表达与非小细胞肺癌临床分期及转移有关,E g5可预测非小细胞肺癌的淋巴结转移情况,可能作为非小细胞肺癌化学治疗的潜在靶点。     

长链非编码RNA在胶质母细胞瘤中异常表达研究

背景与目的：近来研究表明,长链非编码RNA在胶质瘤的发生与发展中发挥重要作用。本研究旨在通过基因芯片分析lncRNAs在胶质母细胞瘤（GBM）和正常脑组织中的表达概况,比较lncRNA差异表达与组织之间的表达谱差异。方法：应用基因芯片技术检测lncRNAs在GBM和正常脑组织的表达谱差异．并筛选出差异表达lncRNA进行分析。结果：lncRNA芯片的数据：原发性胶质母细胞瘤与正常脑组织中LncRNA表达上调3倍基因2032个,LncRNA表达下调3倍基因2036个（P〈0．01）。其中21个lncRNAs上调30倍以上．7个lncRNAs下调超过30倍（P〈0．01）。结论：利用lncRNA基因芯片较大规模地对胶质瘤中的lncRNAs差异表达进行探讨．对lncRNA在其中的功能及潜在的基因治疗功能具有十分重要的意义：差异表达的lncRNAs包括一些抑癌及促癌lncRNA,其在胶质母细胞瘤的发展中扮演重要的角色．通过它们的目标基因在GBM的复发和恶性进展中发挥作用．     

p-Stat3、VEGF-C和MMP-2在非小细胞肺癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的：检测非小细胞肺癌组织中磷酸化信号转导和转录激活子-3（p-Stat3）、血管内皮生长因子C（VEGF-C）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达情况,探讨p-Stat3与VEGF-C、MMP-2之间,以及这三者与临床病理指标之间的相关性。方法：采用免疫组织化学SP法,检测53例非小细胞肺癌组织和10例正常肺组织中p-Stat3、VEGF-C和MMP-2的表达情况,并对p-Stat3、VEGF-C和MMP-2的表达情况进行相关性分析。结果：在53例非小细胞肺癌病例中,p-Stat3、VEGF-C和MMP-2的阳性表达率分别为45.2%（24/53）、77.3%（41/53）和58.4%（31/53）。其中,p-Stat3的表达在腺癌中最显著,阳性表达率为75%（9/12）,且在低分化肺癌组织中的表达明显高于高分化肺癌组织（P〈0.01）,在有淋巴结转移的肺癌组织中高于无淋巴结转移的肺癌组织（P〈0.05）,而阳性表达率与患者的年龄、性别和肿瘤的大小无明显相关（P〉0.05）。VEGF-C和MMP-2在有淋巴结转移的非小细胞肺癌组织中的阳性表达率高于无淋巴结转移的肺癌组织（P〈0.05）,且VEGF-C、MMP-2的表达与p-Stat3的表达呈正相关（依次为r=0.427和0.345,P均〈0.05）。结论：在非小细胞肺癌组织中,p-Stat3、VEGF-C和MMP-2表达均上调,高表达的p-Stat3与肺癌的发生、发展及淋巴结转移密切相关,其机制可能与VEGF-C和MMP-2有关。     

小细胞肺癌组织中lncRNA MEG3的表达及其与预后关系的研究

目的 探讨长链非编码RNA MEG3（lncRNA MEG3）在小细胞肺癌（SCLC）组织中的表达及其与预后的关系。方法 收集2012年1月至2015年12月间于我院就诊的SCLC组织标本92例,采用实时荧光定量PCR（QPCR）法检测lncRNA MEG3在92例SCLC组织、40例癌旁组织及50例正常肺组织标本中的表达,分析其表达与临床病理特征和预后的关系。结果 与癌旁组织（4.082±0.86）和正常肺组织（4.209±0.82）比较,lncRNA MEG3在92例SCLC组织中的表达（2.071±0.97）明显降低,差异有统计学意义（P＜0.001）。lncRNA MEG3表达与年龄、性别无关,与分期、远处转移及生存状态有关。lncRNA MEG3低表达者（＜2.071）的中位无进展生存期为8个月,较高表达者（≥2.071）的21个月短,差异有统计学意义（P＜0.001）;高表达者的中位总生存期为32个月,较低表达组的21个月长,差异有统计学意义（P＜0.001）。Cox比例风险模型分析显示,lncRNA MEG3表达、远处转移和分期均为影响SCLC总生存期的独立因素。结论 lncRNA MEG3参与调节SCLC的发生、发展,可作为潜在的评估SCLC预后的分子标志物。     

PP1蛋白在转移及非转移性恶性黑色素瘤中的表达

目的：研究蛋白磷酸酶-1（PP1）对恶性黑色素瘤转移的作用。方法：采用Western blot检测PP1蛋白在非转移性恶性黑色素瘤细胞系-HMCB及转移性恶性黑色素瘤细胞系WM266-4中的表达。用免疫组化的方法检测32例未转移恶性黑色素瘤及20例转移性恶性黑色素瘤标本中PP1的表达。结果：本研究证明非转移性恶性黑色素瘤细胞及组织中PP1蛋白表达明显高于在转移性恶性黑色素瘤细胞及组织中的表达,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：PP1在转移及未转移恶性黑色素瘤细胞及组织中的差异表达为恶性黑色素瘤转移机制方面的研究开辟新的方向。     

Livin在小细胞肺癌组织中的表达

目的：探讨凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein,IAP）家族中的新成员Livin在小细胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）组织中的表达及其与临床病理的关系。方法：采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测SCLC组织中LivinαmRNA和LivinβmRNA的表达,并用western blot分析Livin蛋白的表达。结果：30例SCLC组织中有19例Livin表达,阳性率为63.33%,其表达与患者年龄、性别、肿瘤的TNM分期、淋巴结转移和肿瘤大小均无关（P〉0.05）。而16例癌旁正常肺组织中Livin低表达,阳性率为12.5%（P〈0.01）。结论：Livin在SCLC组织中异常表达,有望成为小细胞肺癌诊断和基因治疗的新靶点。     

肿瘤抑制因子TIMP2在肺癌组织中的表达及其临床意义

[目的]探讨肿瘤抑制因子TIMP2在肺癌组织中的表达及其与各临床指标关系。[方法]采用免疫组织化学染色方法检测94例肺癌患者肿瘤组织和相应的正常肺组织中TIMP2蛋白的表达水平。[结果]TIMP2蛋白的免疫组化染色显示主要为细胞浆着色。TIMP2肺泡阳性表达率为64．20％,支气管阳性表达率63．51％,肿瘤组织阳性表达率为30．85％。经统计学分析结果显示TIMP2蛋白肿瘤组织内表达水平与周围正常肺泡和支气管表达有明显差异（P〈0．001）。[结论]肺癌组织中TIMP2蛋白水平显著降低,提示其在肺癌的发生过程中蛋白表达受到显著抑制。     

小细胞肺癌中MTA1蛋白的表达及其与化疗敏感性和预后的关系

目的 检测转移相关基因1（MTA1）蛋白在小细胞肺癌（SCLC）组织中的表达情况,探讨其在SCLC转移、预后和化疗敏感性预测中的作用。方法 采用免疫组织化学法检测52例无远处转移SCLC组织标本中MTA1的表达,根据免疫组化结果分为两类：低表达（≤6分）和高表达（＞6分）;分析MTA1表达水平与临床病理特征、EP方案（足叶乙甙100mg/m2静滴,d1～d5;顺铂60mg／m2静滴,d1,3周为1周期,共4～6个周期）化疗疗效及预后的关系。结果 52例SCLC组织中MTA1高表达率为71.2％（37／52）,18例癌旁组织均为低表达（100.0％）;MTA1表达在不同肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移与否和有无脉管侵犯之间的差异有统计学意义（P＜0.05）,而在性别、年龄、VALG分期及肿瘤部位之间的差异无统计学意义（P＞0.05）;MTA1高表达组的EP方案化疗敏感率低于MTA1低表达组（54.1％ vs. 80.0％,P=0.020）;MTA1低表达组的中位无进展生存期和总生存期均优于MTA1高表达组（20个月vs.8个月,33个月vs.18个月）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 MTA1在SCLC组织中高表达,且与肿瘤转移、耐药及预后密切相关。     

神经元特异性烯醇化酶对小细胞肺癌诊断的临床价值

目的：探讨血清NSE对小细胞肺癌的诊断,分期及预后的临床价值,以及同时探讨标本溶血程度对NSE浓度的影响。方法：采用ELISA法,检测83例SCLC患者,63例肺良性疾病,62例正常对照及35例溶血标本的NSE水平。结果：SCLC组血清NSE水平（37．64±36．95）μg／L显著高于肺良性疾病组（11．94±4．19）μg／L和正常对照组（8．92±3．95）μg／L（P〈0．01）;SCLCⅢ,Ⅳ期患者血清NSE水平（53．58±40．87）明显高于Ⅰ,Ⅱ期（14．66±6．48）（P〈0．01）。SCLC治疗前NSE水平显著高于治疗后（P〈0．05）。以NSE水平为指标诊断SCLC的敏感性、特异性、准确性,分别为67．3％、83．1％和85．4％。标本溶血对NSE测定影响很大,并且随着溶血程度的增加NSE结果显著升高。结论：NSE可作为较好的小细胞肺癌肿瘤标志物,对SCLC诊断,尤其对临床分期及预后有重要参考价值。血清NSE值随溶血程度呈递增趋势,因此,应严格避免溶血,以减少假阳性的发生。     

LncRNA-AK058003在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用

目的:探讨lncRNA-AK058003在缺氧诱导胃癌侵袭和转移中的作用。方法:SGC7901、MKN45、MKN28三个胃癌细胞系,分别经常氧/缺氧孵育24h后,Trizol法提取3例配对的胃癌细胞总RNA,利用高通量lncRNA芯片比较它们之间的表达谱差异。通过差异倍数、邻近编码基因信息分析、长度特征分析等策略初步筛选与缺氧诱导胃癌侵袭转移相关的关键分子。RT-PCR法检测lncRNA-AK058003在缺氧诱导的胃癌细胞中相对于常氧条件下的表达水平,进一步检测其在20例胃癌临床标本中相对于癌旁组织的表达水平。构建小干扰RNA慢病毒,稳定下调AK058003在SGC7901及MKN45中的表达。Transwell、划痕实验、裸鼠尾静脉注入不同胃癌细胞等体外和体内实验检测抑制AK058003后对常氧和缺氧条件下胃癌侵袭转移的影响。结果:高通量lncRNA 芯片比较发现:缺氧诱导的胃癌细胞SGC7901、MKN45和MKN28与常氧条件下的细胞相比,有84个分子的表达在缺氧诱导的胃癌细胞中显著上调(P<0.05),其中差异倍数在3倍以上的共有5个。多重筛选策略提示AK058003可能是缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子之一。RT-PCR结果显示: AK058003在缺氧诱导的胃癌细胞中显著上调,其分别在SGC7901缺氧16h,MKN45缺氧24h,MKN28缺氧48h时达到峰值。进一步RT-PCR结果发现,AK058003在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织。缺氧条件下的Transwell实验结果显示缺氧能够显著增加SGC7901和MKN45的侵袭转移力,而抑制AK058003的表达后,胃癌细胞侵袭转移力明显下降。结论:通过高通量 lncRNA芯片比较,首次发现了一系列胃癌细胞中缺氧相关的lncRNAs 分子。通过临床标本验证以及功能缺失试验证实lnc-AK058003是系列分子中影响缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNAs分子之一。     

大肠肿瘤中Ezrin的表达及意义

目的：检测大肠癌及大肠腺瘤中Ezrin蛋白的表达,了解与大肠癌临床病理的相关因素。方法：采用SP免疫组化法,检测Ezrin蛋白在各组织中的表达及意义。结果：Ezrin在大肠癌、大肠腺瘤中的阳性表达率分别为69.4%（43/62）和40.0%（4/10）,癌旁组织阳性表达率为32.6%（15/46）,正常大肠组织阳性表达率为6.7%（1/15）。Ezrin的表达在正常大肠组织和大肠癌之间、大肠腺瘤和大肠癌之间以及癌旁组织和大肠癌之间均有显著性差异（P〈0.05）,而癌旁组织和大肠腺瘤之间Ezrin表达差异无显著性（P〉0.05）;Ezrin在大肠癌转移组及未转移组中的阳性表达率分别为89.7%（26/29）和51.5%（17/33）;转移组阳性表达率高于未转移组（P〈0.05）;大肠癌组织中Ezrin的表达与患者年龄、性别、肿瘤发生部位、分化程度均无关（P〉0.05）。结论：Ezrin的表达增高与大肠癌转移密切相关,可作为临床判断大肠癌转移及预后等生物学行为的重要参考指标。