以重组人类CD40配体为主的细胞因子体外诱导急性髓系白血病完全缓解患者及健康人外周血单个核细胞来源的树突状细胞形态及表型分析

 【摘要】　目的　以健康人AB血清与以重组人类CD40配体（rhCD40L）为主的细胞因子体外诱导急性髓系白血病完全缓解（AML-CR）患者及健康人外周血的单个核细胞,并分析其形态及表型差异。方法　以健康人AB血清为基础的培养体系中加入GM-CSF、rhIL-4、rhCD40L等细胞因子,诱导单个核细胞分化形成树突状细胞（DC）。瑞特-吉姆萨染色观察形态;流式细胞术鉴定表型;MTT法检测DC对淋巴细胞抗原刺激能力;ELISA法检测DC培养上清IL-12的分泌。结果　培养7 d后的细胞具有典型的MoDC形态,并上调表达MoDC特征性表面分子CD83及共刺激分子CD40、CD80、CD86,AML-CR组与健康人组相比差异无统计学意义（均P＞0.05）,但加rhCD40L组较未加rhCD40L组间差异有统计学意义（均P＜0.05）。培养后的MoDC可较强地刺激同种自体淋巴细胞增殖,AML-CR组与健康人组间刺激淋巴细胞增殖作用的差异无统计学意义（P＞0.05）,但加rhCD40L组较未加rhCD40L组间差异均有统计学意义（均P＜0.05）。培养的MoDC自培养第5天始即有IL-12的分泌,AML-CR组与健康人组相比IL-12分泌水平差异无统计学意义（P＞0.05）,加rhCD40L组与未加rhCD40L组间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　以rhCD40L为主的细胞因子体外可诱导AML-CR患者及健康人外周血DC生成,两者在形态及表型上无明显差异,DC可刺激白血病特异毒性T细胞增殖,尤以由rhCD40L诱导的DC作用明显。     

IFN-α联合GM-CSF诱导胃癌患者外周血单个核细胞分化为树突状细胞

目的： 探索干扰素-α（interferon-α,IFN-α）联合粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF）体外诱导胃癌患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）向树突状细胞（dendritic cell,DC）分化的可能性。 方法： 10 例胃癌患者PBMC分别用GM-CSF 100 ng/ml联合IFN-α 500 IU/ml（命名为IFN-α DC） 或GM-CSF 100 ng/ml联合50 ng/ml IL-4（命名为IL-4 DC）体外培养,然后用CD40L、LPS诱导DC成熟。Giemsa染色法观察IFN-α DC和IL-4 DC的形态,流式细胞术分析IFN-α DC和IL-4 DC表面CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达情况,同种异体混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction,MLR）检测不同的成熟DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。 结果： IFN-α DC和IL-4 DC均呈现典型DC形态。IFN-α DC和IL-4 DC分别在诱导第3天和第5天时,细胞表面CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达达到较高水平,成熟IFN-α DC表面CD83\[（78.25±15.36）% vs （50.14±10.24）%,P<0.05\]和CD86\[（84.84±10.12）% vs （62.93±15.12）%,P<0.05\]的表达均高于成熟IL-4 DC。成熟IFN-α DC刺激异体T淋巴细胞增殖能力强于未成熟IFN-α DC（P<005）。在DC与T细胞数量比为1∶40和1∶20时,成熟IFN-α DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力明显强于成熟IL-4 DC\[（39.43±9.21）% vs （27.34±10.63）%,（60.31±7.86）% vs （48.63±6.25）%;均P<0.05\]。 结论： 相比常用的IL-4联合GM-CSF诱导方法,IFN-α联合GM-CSF可以在更短时间内将胃癌患者PBMC诱导成具有更强刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力的DC细胞,这可能与其表面CD83和CD86表达增高有关。     

CD40L+肺癌细胞抗原负载DC诱导同源肺癌免疫

目的：探讨CD40L+肺癌细胞抗原负载由人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）诱导的DC对同源肺癌的免疫增强作用及其机制。方法：常规方法从正常成人外周血中分离PBMC、诱导分化成DC,以重组载体pDNA3.1-CD40L+转染A549肺癌细胞,制备已转染肺癌细胞抗原对DC进行负载刺激,通过流式细胞术检测DC的CD83、CD86及HLA-DR分子表达,ELISA法检测DC的IL-12分泌水平,再以MTT法检测DC对同源T淋巴细胞增殖状态以及A549肺癌细胞增殖影响,并与空载转染的A549细胞抗原诱导DC的相同功能进行对比。结果：将PBMC成功诱导分化出成熟的DC。重组CD40L诱导组DC的CD83、CD86及HLA-DR分子表达水平明显高于空载组\[(4.78±1.5）% vs （3.38±1.5）%、（9.79±5.27）% vs （5.53±2.17）%和 （11.84±8.31）% vs （537±5.48）%,均P<0.05\];IL-12分泌水平也高于空载组和未转染组（P<0.05)。CD40L+DC可促进T淋巴细胞的增殖(P<0.05),并导致同源T细胞对肺癌A549细胞增殖的抑制作用强于对照组、未转染组和空载组（P<0.05）。结论： CD40L转染肺癌细胞抗原诱导成熟的DC可以增强同源肺癌细胞的特异免疫能力。     

肺癌细胞和蛙皮素抑制树突状细胞的产生和功能

目的：了解肺癌细胞株及蛙皮素对树突状细胞（DC）产生及功能的影响。方法：树突状细胞由健康人外周血单个核细胞CD14^ ，在完全细胞培养液中加入1000U／ml GM-CSF和1000U／ml IL-4,培养7天获得，肺癌细胞株CRL－5815，CRL－5826，Bombesin和Bombesin受体拮抗剂加入培养液中，Annxin V检测DC凋亡；流式细胞仪检测CD40，CD86，CD83，CD80，HLA－DR阳性表达。结果：培养7－10天后的DC前体细胞表达高水平的HLA－DR CD80 CD86 CD83 CD40。肺癌及蛙皮素可导致DC前体细胞凋亡，而蛙皮素受体拮抗剂可部分保护蛙皮素致DC凋亡的作用。加入肺癌细胞株或蛙皮素与DC共培养时明显抑制上述细胞表型的表达和DC刺激同种异体T细胞的增殖能力，当加入蛙皮素受体拮抗剂时，DC细胞表达HLA－DR CD80 CD86 CD83 CD40明显增加，接近DC正常对照组。结论：肺癌细胞株及蛙皮素可导致DC的凋亡，抑制树突状细胞的产生和功能。     

分离型痘苗病毒表达载体的构建及HIV-1 gag p17-24的表达

树突状细胞(dendritic cells,DC)作为抗原提呈细胞,具有独特的活化初始型T细胞的能力.白细胞介素-12(IL-12)可促进NK,T细胞的增殖及杀伤活性,以及初始型T细胞向CD4 Thl细胞的分化.本研究采用GM-CSF TNF-α诱导小鼠骨髓细胞产生的DC,观察了在DC成熟过程中IL-12的产生,以及在DC成熟过程中应用IL-12对DC的表型和功能的影响.采用FLISA法检测了GM-CSF TNF-α诱生的DC产生IL-12的水平,结果显示,第5天时,10~6DC培养上清中IL-12 P40的水平为120pg/ml,IL-12P70为20pg/ml;至第8天时,lL-12P40和IL-12 P70水平均升高,分别为150pg/ml和24pg/ml.在DC培养的第3～7天,加入IL-12(25ng/ml),可观察到DC在混合白细胞反应过程中,刺激T细胞增殖的能力显著增强;检测DC的表型,可观察到应用IL-12后,CD80的表达水平显著提高,而CD40,CD54,CD80,MHC-Ⅱ等表面分子则无明显变化.上述     

IL-27基因转染对树突状细胞表型和功能的影响

目的 探讨转染IL-27基因体外对人外周血单个核细胞来源树突状细胞表型和功能的影响。方法 采集健康成人外周血,密度梯度离心法获得外周血单个核细胞,用GM-CSF、IL-4诱导树突状细胞（Dendritic cell, DC）,第5天后将DC分为3组：IL-27基因转染组、TNF-α组和阴性对照组。倒置显微镜观察DC形态;流式细胞术检测DC表面分子CD1a、CD80、CD83和CD86的表达情况;MTT法检测DC刺激T细胞增殖的能力;ELISA法检测细胞培养上清中IL-12和IFN-γ的含量。结果 转染IL-27基因后外周血单个核细胞来源DC呈现典型的成熟DC形态学特征。IL 27基因转染组DC表面CD1a、CD80、CD83和CD86表达水平较阴性对照组均明显上调（P<0.05）。IL-27基因转染组DC诱导T细胞增殖的能力较对照组DC明显增高（P<0.05）。IL-27基因转染组DC培养上清中IL-12和IFN-γ的含量均明显高于对照组DC（P<0.01）。结论 转染IL-27基因可以上调成熟DC的细胞表型,增强DC的免疫学活性。     

来那度胺增强细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤效应的研究

 【摘要】　目的 　探讨来那度胺调节细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞对淋巴瘤细胞的杀伤效应。方法　取健康志愿者外周血单个核细胞,经过干扰素-γ（INF-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、抗CD3单抗诱导CIK细胞增殖,并对培养不同时间CIK细胞用不同浓度来那度胺进行处理。流式细胞术检测CD＋3CD＋56细胞比例;酶联免疫吸附（ELISA）法检测粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、INF-γ及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的分泌水平;用Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒检测来那度胺作用后的CIK细胞及未处理的CIK细胞对3种淋巴瘤细胞株的体外杀伤效应。 结果　CIK细胞在多种细胞因子诱导下,CD＋3CD＋56细胞比例明显增加,0.2～5.0 μmol／L的来那度胺对其扩增分化没有影响（P＞0.05）。来那度胺作用下CIK细胞分泌GM-CSF、INF-γ、TNF-α水平有显著提高（P＜0.05）。在1.0 μmol／L来那度胺作用下CIK细胞对淋巴瘤细胞的杀伤效力明显高于未经来那度胺处理的CIK细胞[（42.53±2.19）%比（15.5±3.82）%;（44.78±4.86）% 比（29.94±6.33）%;（54.71±5.31）%比( 37.43±9.75）%]。结论　在来那度胺作用下,CIK细胞分泌功能和对3种淋巴瘤细胞的杀伤效应均有显著增强。     

弥漫大B细胞淋巴瘤患者外周血T细胞亚群、可溶性白细胞介素2受体、血管内皮生长因子及乳酸脱氢酶检测的临床意义

 目的　探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者外周血T细胞亚群及血清中可溶性白细胞介素2受体（sIL-2R）、血管内皮生长因子（VEGF）、乳酸脱氢酶（LDH）水平的改变及其与细胞免疫功能、临床分期及疾病进展的关系。方法　运用流式细胞术检测35例患者及20名健康人外周血T细胞亚群,ELISA法测定外周血清中sIL-2R及VEGF的水平,速率法测定血清中LDH的含量。结果　DLBCL患者血清CD+4、NK细胞数及CD+4／CD+8 比值均低于健康对照[（68.62±12.82）%比（73.00±6.12）%,（14.28±7.93）%比（39.49±12.01）%,（1.03±0.84）比（1.45±0.28）,均P＜0.05]。DLBCL患者血清sIL-2R明显高于健康对照[（501.50±157.70）μg／L比（128.30±82.40）μg／L,P＜0.001],DLBCL Ⅲ～Ⅳ期患者血清sIL-2R水平高于Ⅰ～Ⅱ期[（618.38±192.22）μg／L比（432.45±75.48）μg／L,P＜0.05],DLBCL有B症状患者血清sIL-2R水平高于有A症状患者[（616.50±183.03）μg／L比（441.52±103.48）μg／L,P＜0.01]。DLBCL患者血清VEGF、LDH水平均高于健康对照[（304.03±163.05）pg／ml比（156.25±47.83）pg／ml,（300.74±300.91）U／L比（177.00±32.14）U／L,均P＜0.05]。血清sIL-2R的高表达与CD+4／CD+8 比值低相关（r＝0.4635,P＜0.05）,与血清高表达VEGF、LDH有相关性（r分别为0.447、0.448,均P＜0.05）。结论　DLBCL高表达sIL-2R与细胞免疫功能低下、体内肿瘤负荷、疾病进展及侵袭过程密切相关。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因修饰的树突状细胞疫苗增强体外抗肿瘤免疫效应

目的 研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰树突状细胞(DC)后形态、表型及功能的变化,以及增强DC疫苗对肿瘤细胞的体外杀伤作用.方法 小鼠尾静脉注射趋化因子配体3(CCL3),分选得到B220- CDllc+细胞,经细胞因子培养诱导分化DC.在体外用含GM-CSF基因的重组腺病毒(AdGM-CSF)转染DC,酶联免疫吸附试验(ELJSA)检测转染后GM-CSF的水平.通过细胞形态学观察、表型分析及混合淋巴细胞反应(MLR),检测GM-CSF基因修饰前后DC的变化.反复冻融法制备胃癌可溶性抗原,将其与GM-CSF基因修饰的DC共同培养,制备DC疫苗,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测活化的T淋巴细胞在体外对小鼠前胃癌细胞(MFC)的杀伤作用,ELISA法检测干扰素γ(INF-γ)的分泌情况.结果 CCL3注射后,外周血中B220- CD11c+细胞明显增加,48 h达到高峰[占外周血单个核细胞的(13.88±1.10)%].AdGM-CSF转染后,培养液上清中GM-CSF浓度升高,当感染复数(MOI)为1:100时达到高峰[(130.00±12.61)pg/m1].经GM-CSF.基因修饰的DC在形态上更趋成熟,MHCⅡ类分子、CD80、CD86等细胞表型明显上调,具有更强的刺激T细胞增殖的能力.荷载胃癌抗原的DC激活的T淋巴细胞对MFC细胞具有特异性杀伤作用,并产生高水平的INF-γ[(1245.00±13.75)pg/ml].结论 GM-CSF转染DC后,能大量表达GM-CSF,DC形态及细胞表型更趋成熟,刺激T细胞增殖能力明显增强.GM-CSF基因修饰的DC在体外可诱导出针对靶肿瘤细胞的特异性杀伤作用.     

多发性骨髓瘤患者基质细胞衍生因子-1α、CD44v6表达的研究

 目的　探讨基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）、CD44v6（一种变异的CD44受体）在多发性骨髓瘤（MM）中的表达水平及其与病情进展的关系。方法　用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测24例MM患者[14例初发和复发MM患者（初发和复发MM组）,10例病情稳定MM患者（病情稳定MM组）]和15位健康骨髓移植供者或非肿瘤良性贫血患者（对照组）的骨髓单个核细胞（MNC）和骨髓基质细胞（BMSC）培养上清的SDF-1α、CD44v6水平。结果　初发和复发MM组MNC培养上清的SDF-1α、CD44v6表达水平[（7232.41±2644.97）pg／ml和（34.34±13.20）ng／ml]显著高于病情稳定MM组[（2315.49±748.29）pg／ml和（15.69±5.28）ng／ml]（t＝6.25、t＝7.82;均P＜0.05）和对照组[（1149.52±636.06）pg／ml和（4.85±3.62）ng／ml]（t＝4.60、t＝7.61;均P＜0.05）。病情稳定MM组SDF-1α、CD44v6水平显著高于对照组（t＝2.99、t＝4.87;均P＜0.05）。9例初发和复发MM组的BMSC与人类骨髓瘤细胞系细胞U266加入rhIL-6进行混合培养后,SDF-1α水平[（6180.25±5925.38）pg／ml]显著高于5例对照组BMSC[（1021.13±358.65）pg／ml]和9例初发和复发MM组[（1004.07±727.36）pg／ml]（t＝2.66、t＝2.42;均P＜0.05）。而其他BMSC各组间的SDF-1α水平差异无统计学意义（P＞0.05）。SDF-1α与CD44v6两者表达水平呈正相关（r＝0.51,P＝0.03）。结论　SDF-1α、CD44v6水平升高与MM的病情进展或发病有关,也可能与MM的肿瘤浸润过程有关;而这些体内过程可能需骨髓瘤细胞和BMSC与IL-6、SDF-1α和CD44v6等因素协同完成。     

内皮祖细胞作为干扰素基因载体的体外抑瘤实验

目的 研究用人骨髓诱导培养内皮祖细胞（EPCs）并以其作为免疫性基因载体治疗肿瘤的可行性。方法 采用梯度离心法从人骨髓中分离单个核细胞,加入人血管内皮生长因子(VEGF165）诱导培养,用流式细胞仪测定细胞表面标志CD133、KDR和CD34的表达情况。以增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）作为报告基因,用流式细胞仪检测携带EGFP基因的腺病毒载体（Ad-EGFP）对EPCs的感染效率。携带人干扰素γ（hγIFN）基因的腺病毒载体（Ad-hγIFN）感染EPCs（EPCs-hγIFN）,ELISA法检测细胞EPCs-hγIFN分泌 hγIFN的情况。将EPCs-hγIFN与肺癌细胞株H460、胃癌细胞株SGC7901、大肠癌细胞株LoVo混合培养,观察EPCs-hγIFN对肿瘤细胞的作用。结果 经过诱导培养2周后,贴壁的单核细胞开始表达CD133、KDR和CD34。Ad-EGFP的感染复数（MOI）为150pfu／EPCs时,感染率达90％以上。EPCs-hγIFN培养上清可以测得浓度稳定且高水平的hγIFN,第1天上清液中的hγIFN浓度为1305.28pg／ml,第14天为1419.10pg／ml。EPCs-hγIFN与H460、SGC7901、LoVo细胞株混合培养4天,肿瘤细胞的生长受到明显的抑制,肿瘤细胞存活率分别为（77.87 ± 6.50）％、（79.36 ± 4.35）％和（69.52 ± 3.78）％, 均显著低于对照组（P＜0.05）。结论携带hγIFN目的基因的腺病毒转染EPCs后基因表达情况良好,体外实验中表现为抑制肿瘤细胞的生长,可作为免疫性基因载体开展进一步的研究。     

不同纵隔淋巴结切除方式对非小细胞肺癌患者围手术期免疫功能的影响

目的 探讨肺癌纵隔淋巴结不同切除方式对非小细胞肺癌患者围手术期免疫功能的影响.方法 连续收集2009年3月至2012年3月接受手术治疗的415例非小细胞肺癌患者临床资料,其中系统性淋巴结清扫术（SLND）组216例,淋巴结采样术（LNS）组199例.检查所有患者术前、术后3d及术后7d外周血淋巴细胞计数（LC）及淋巴细胞中CD4＋T淋巴细胞、CD8＋T淋巴细胞、自然杀伤（NK）细胞比例.对两组患者上述指标进行比较.结果 SLND组术后各时点全血中淋巴细胞、CD8＋T淋巴细胞、NK细胞比例均低于LNS组,差异有统计学意义[术后3d：淋巴细胞（0.95±0.57）×10^9/L比（1.10±0.65）×10^9/L,CD8＋T淋巴细胞（19.53±6.48）％比（20.93±6.70）％,NK细胞（17.36±6.06）％比（18.57 ±5.97）％,均P＜0.05;术后7d：淋巴细胞（0.86±0.53）×10^9/L比（1.00±0.60）×10^9/L,CD8＋T淋巴细胞（17.27±5.64）％比（18.40±5.26）％,NK细胞（13.11 ±4.84）％比（14.20±5.30）％,均P＜ 0.05];术后3d时LND组CD4＋T淋巴细胞低于SLNS组,差异有统计学意义[（29.59±6.53）％比（31.19±6.32）％,P＜0.05],术后7d时两组差异无统计学意义[（36.64±6.65）％比（37.20±6.83）％,P＞0.05].结论 与SLND相比较,LNS可以减轻患者术后免疫功能的抑制.     

围术期肺癌患者 CD4＋／CD8＋T 细胞与TGF -β、IL -4、IL -6的检测及临床意义

目的：研究围术期肺癌患者CD4＋/CD8＋T细胞与TGF-β、IL-4、IL-6的含量变化及临床意义。方法分别采用流式细胞术（Flow cytometry,FCM）及酶联免疫吸附法（ELISA）检测20例肺癌患者手术前后和10例正常对照者CD4＋T、CD8＋T细胞比例及细胞因子TGF-β、IL-4和IL-6的含量。结果20例肺癌患者术前CD4＋T、CD8＋T细胞比例分别为（46．26±4．26）％、（43．15±5．18）％,术后5天分别为（44．30±4．25）％、（39．80±2．53）％;肺癌患者术前血清中TGF-β、IL-4、IL-6的含量分别为（240．51±46．37）pg/mL、（19．85±2．52） pg/mL、（129．28±33．06） pg/mL,术后5天分别为（210．79±36．94） pg/mL、（17．37±2．57） pg/mL、（107．28±27．83） pg/mL。两组之间差异均有统计学意义（ P＜0．05）。结论围术期肺癌患者的免疫状态呈先抑制后恢复,监测围术期CD4＋/CD8＋T细胞与TGF-β、IL-4、IL-6的含量变化对肿瘤患者病情监测及预后判断具有重要意义。     

肺癌患者血清bFGF和PIGF检测的临床意义

目的探讨胎盘生长因子（PIGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在肺癌患者血清中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 通过酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测136例肺癌患者和68例正常对照者血清中PIGF、bFGF的表达水平,分析两者表达的相关性及其与临床病理特征的关系。结果 肺癌组患者血清中PIGF和bFGF的表达水平分别为（528.26±27.54）pg／ml和（835.45±7.83）pg／ml,明显高于正常对照者的（482.45±13.23）pg/ml和（192.18±7.65）pg/ml（P＜0.05）。肺癌患者血清PIGF和bFGF的表达水平与年龄、性别、病理分型无明显的相关性（P＞0.05）,而与肿瘤的分化程度、TNM分期、远处转移均相关（P＜0.05）。经Pearson相关性检验,肺癌患者血清中bFGF和PIGF的表达水平呈正相关（r=0517,P＜005）。结论 PIGF和bFGF可能参与肺癌的发生、发展、侵袭和转移过程,能够反映疾病进展的情况。     

液相芯片分析技术检测乳腺浸润性导管癌患者血清中VEGF和MMP-9的临床意义

目的利用液相芯片分析技术检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在乳腺浸润性导管癌(infiltrative ductal carcinoma,IDC)、良性乳腺纤维瘤患者和正常人血清中的表达,探讨其临床诊断价值。方法采用液相芯片分析技术对301例乳腺浸润性导管癌、83例乳腺良性纤维瘤患者及40例正常人血清中VEGF、MMP-9表达水平进行检测,并分析118例IDC患者手术治疗前后VEGF和MMP-9浓度变化。结果血清中VEGF和MMP-9的表达水平:乳腺浸润性导管癌患者分别为(152.76±150.28)pg/ml和(945.09±749.43)ng/ml;乳腺纤维瘤患者为(29.86±16.10)pg/ml和(563.59±183.29)ng/ml;正常人表达量为(52.45±51.39)pg/ml和(267.33±215.60)ng/ml;IDC患者显著高于乳腺纤维瘤患者和正常人(均P<0.05)。乳腺癌患者血清中VEGF、MMP-9表达水平与年龄无关(P>0.05);而与临床分期、原发灶大小及淋巴结转移相关(均P<0.01)。118例IDC患者术后复查血清VEGF、MMP-9表达量分别(135.26±131.20)pg/ml和(680.36±551.77)ng/ml,与术前相比,表达水平明显下降(均P<0.05)。结论利用液相芯片分析技术定量分析血清中VEGF和MMP-9可成为乳腺癌临床诊断和预后评估的有效指标。     

化疗诱发异基因造血干细胞移植后急性T淋巴细胞白血病复发患者移植物抗宿主病及其Th17／Treg细胞动态观察

 【摘要】　目的　探讨化疗诱发异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）髓外复发患者发生移植物抗宿主病（GVHD）的临床特征及Th17／Treg细胞及相关细胞因子的动态变化。方法　以20名健康体检者为健康对照。1例诊断为T-ALL患者在2个疗程化疗后血液学完全缓解时,行同胞供者HLA配型全相合的allo-HSCT。移植后对患者进行随访,同时采用流式细胞术和酶联免疫吸附法（ELISA）检测患者在供者细胞植入状态、疾病复发、GVHD各个时期外周血Th17／Treg细胞及相关因子的动态变化。结果　患者+27天获得完全供者嵌合体（FDC）,+34天造血功能完全恢复,+110天出现慢性GVHD（cGVHD）,+264天在cGVHD状态下髓外复发,Hyper-CVAD方案化疗后,+347天相继出现表现为口腔溃疡的cGVHD及伴有Ⅳ度肠道GVHD的重叠综合征。患者外周血中Th17细胞占CD+4 T细胞比例在发生重叠综合征时（1.70 %）较健康对照组[（0.56±0.35）%]有所增高,Treg细胞占CD+4 T细胞的比例在患者发生cGVHD时（4.66 %）较健康对照组[（0.59±0.33）%]及患者复发时（0.39 %）、造血干细胞植入时（1.15 %）高,发生重叠综合征时升高更加明显（7.83 %）,同时在复发时Th17／Treg比例＞1,而发生GVHD时Th17／Treg比例＜1。血清中白细胞介素-17A 在患者发生cGVHD时（6.11 pg／ml）及化疗后诱导重叠综合征时（6.81 pg／ml）均较健康对照组[（5.19±0.77）pg／ml]有所增高,TGF-β1浓度在患者移植后不同时期均较健康对照[（48.81±4.90）ng／ml]高。结论　化疗可诱发allo-HSCT术后复发的急性白血病患者发生GVHD;Th17／Treg细胞及相关细胞因子的失衡可能与疾病复发、GVHD的发生相关。     

非小细胞肺癌患者外周血Th17细胞比例和血清IL-17水平的检测及其临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血Th17细胞比例和自细胞介素-17(IL-17)水平的变化及其与患者临床病理的关系.方法 收集60例原发未治疗的NSCLC患者(NSCLC组)和20例健康志愿者(对照组),采用流式细胞术(FCM)检测Th17细胞比例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IL-17水平.结果 NSCLC组Th17细胞占CD+3 T细胞比例高于对照组[(1.23±0.41)％比(1.05±0.28)％,t=1.679,P=0.097],鳞状细胞癌患者外周血Th17细胞比例明显高于腺癌患者[(1.31±0.39)％比(1.09±0.41)％,t=2.093,P=0.041].NSCLC组IL-17水平明显高于健康对照组[(21.11±7.87) pg/ml比(17.64±5.07)pg/ml,t=2.280,P=0.027],鳞状细胞癌患者血清IL-17表达水平明显高于腺癌患者[(23.11±8.73) pg/ml比(18.54±6.38)pg/ml,t=2.203,P=0.032].Th17细胞比例、IL-17的表达水平随临床分期的进展呈下降趋势[F=3.151,P=0.032;F=4.132,P=0.010].结论 NSCLC患者外周血中Th17细胞比例和IL-17的表达与肿瘤病理分型、TNM分期相关,可能在NSCLC的病程中发挥重要作用.     

沙利度胺治疗急性白血病的疗效及对血管调控因子水平的影响

 目的　观察沙利度胺联合化疗治疗急性白血病的临床疗效及其对血浆血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体（VEGFR）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）水平的影响。方法　急性白血病患者36例,随机分为试验组及对照组各18例。每组均予以常规化疗方案标准剂量化疗,试验组同时口服沙利度胺100 mg／d。治疗前及治疗后8周分别采集外周血,双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆VEGF、VEGFR、bFGF含量。以15位健康体检者为健康对照组。结果　试验组与对照组有效率分别为88.9 %（16／18）和77.8 %（14／18）,差异有统计学意义（χ2＝4.103,P＜0.05）。试验组与对照组治疗前血浆VEGF水平分别为（389.78±249.94）和（318.54±125.78 ）pg／ml,高于健康组的（132.91±26.66）pg／ml（t＝3.141、3.024,均P＜0.01）;治疗后分别为（211.74±36.72 ）和（288.02±31.77）pg／ml,高于健康组（t＝2.413、2.324,均P＜0.05）;试验组与对照组治疗前VEGF差异无统计学意义（t＝1.384,P＞0.05）,治疗后差异有统计学意义（t＝2.793,P＜0.05）。试验组与对照组治疗前血浆VEGFR水平分别为（2490.75±1695.9）和（2322.78±1105.87）pg／ml,高于健康组的（1134.98±378.45）pg／ml（t＝2.914、2.783,均P＜0.01）;治疗后分别为（1359.71±390.24 ）和（1753.89±337.04）pg／ml,与健康组相比差异有统计学意义（t＝2.572、2.447,均P＜0.05）;试验组与对照组治疗前VEGFR差异无统计学意义（t＝1.276,P＞0.05）,治疗后差异有统计学意义（t＝2.486,P＜0.05）。试验组与对照组治疗前血浆bFGF水平分别为（2.43±0.27）和（2.41±0.33）ng／ml,高于健康组的（1.83±0.44）ng／ml（t＝4.982、4.171,均P＜0.05）;治疗后分别为（2.09±0.17）和（2.11±0.31）ng／ml,与健康组相比差异有统计学意义（t＝3.011、2.773,均P＜0.05）;试验组与对照组治疗前及治疗后相比差异无统计学意义（t＝0.953、1.282,均P＞0.05）。结论　沙利度胺联合化疗可提高急性白血病患者的缓解率,有可能成为一种通过抗血管新生从而抑制白血病细胞生长及浸润的有效治疗方法。