二甲双胍增强放射对CT26WT细胞及小鼠移植瘤效应机制研究

目的 探讨二甲双胍(Met)联合放射对结肠癌CT26WT细胞及移植瘤的抑制作用及其机制研究。方法 利用CellTiter-Glo化学发光细胞活性试验检测0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L的Met对CT26WT细胞活力影响,克隆形成试验检测对照组、10.0μmol/L的Met、15Gy照射、15Gy+10.0μmol/L的Met组对CT26WT细胞的增殖抑制作用。构建Bablc小鼠皮下移植瘤模型,肿瘤体积>150mm³随机分对照组、单纯15Gy照射、Met组、15Gy+Met组,照射前24h给予小鼠750 mg/kg的Met,定期测量肿瘤体积及小鼠体重绘制肿瘤生长曲线及生存时间曲线。蛋白质印迹法检测上述处理条件下CT26WT细胞及移植瘤组织中P-H2AX、Sting蛋白表达;并利用免疫组化方法检测移植瘤组织中CD8a (+) T细胞的浸润情况。结果 0、0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L的Met的相对细胞存活率分别为100%、87.9%、87.8%、87.3%、76.5%(P<0.05),其中10.0μmol/L较5.0μmol/L抑制作用更强(P<0.001)。克隆形成实验结果显示对照组、Met组、15Gy组、15Gy+Met组细胞克隆形成率分别为34.0%、24.0%、22.3%、14.0%(P<0.001)。与对照组比较,Met组、15Gy组、15Gy+Met组细胞内Sting蛋白表达分别增加2.99、1.37、4.41倍(P<0.001、<0.01、<0.001)。15Gy+Met组P-H2AX蛋白表达较15Gy组增加1.43倍(P<0.001)。移植瘤体积15Gy+Met组较对照组生长缓慢,最终结果为(1007.0±388.5)、(2639.0±242.9) mm³,(P<0.05),15Gy+Met组小鼠总生存期较对照组增加(48d︰32d,P<0.001)。移植瘤组织中P-H2AX、Sting蛋白表达量在15Gy+Met组较对照组分别增加8.8、1.6倍(P均<0.001)。15Gy+Met组CD8a (+) T细胞浸润在较对照组明显增高(P<0.01)。结论 Met与放射联合能协同抑制结肠癌细胞增殖、克隆形成,可能作用机制是通过加重DNA损伤、激活Sting信号通路导致肿瘤组织中CD8a (+) T细胞增加加强对肿瘤细胞的杀伤作用。     

LncRNA ANRIL靶向miR-195对HCT116细胞及裸鼠移植瘤放射增敏实验研究

目的 探究LncRNA ANRIL对结直肠癌HCT116细胞体外体内放射增敏作用及机制。方法 qPCR检测ANRIL表达。将阴性对照siRNA、ANRIL siRNA、miR-NC mimic、miR-195 mimic、miR-NC inhibitor、miR-195 inhibitor转染至HCT116细胞中分别记为阴性对照、沉默ANRIL、过表达miR-NC、过表达miR-195、抑制miR-NC、抑制miR-195组,以不做任何处理的HCT116细胞为空白对照组。克隆形成实验检测放射敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡,StarBase预测ANRIL下游miRNAs,双荧光素酶报告基因实验进一步验证。裸鼠皮下移植瘤实验检测ANRIL对照射后移植瘤生长影响。结果 沉默ANRIL组细胞存活分数较阴性对照组降低(P<0.05),其放射增敏比为1.52。沉默ANRIL+4Gy组细胞凋亡率较阴性对照+4Gy组增加[(27.86±2.78)%︰(12.06±1.46)%,P<0.05]。裸鼠皮下移植瘤实验结果显示在13、16、19、22、25天时阴性对照组肿瘤体积比沉默ANRIL组降低[(234±66)、(273±63)、(296±72)、(321±85)、(403±94) mm³与(357±79)、(485±124)、(617±143)、(764±174)、(985±221) mm³,P<0.05]。miR-195是ANRIL靶基因,抑制miR-195可逆转沉默ANRIL对HCT116细胞放射增敏和凋亡促进作用及移植瘤生长抑制作用。结论 LncRNA ANRIL通过调控miR-195表达来调节HCT116细胞放射敏感性,可能为临床结直肠癌放疗提供一个新的增敏靶点。     

苍术素通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL 信号通路诱导非小细胞肺癌A549细胞程序性坏死并抑制裸鼠移植瘤生长

目的：探讨苍术素（ATR）通过调节受体相互作用蛋白激酶（RIPK）1/RIPK3/混合谱系激酶结构域样（MLKL）信号通路对非小细胞肺癌（NSCLC）A549 细胞程序性死亡及裸鼠移植瘤生长的影响。方法：使用0~160 μmol/L 的ATR 处理A549 细胞, MTT 法检测细胞存活率以确定后续实验给药浓度。使用ATR 和/或RIPK1 抑制剂Nec-1（necrostatin-1）、caspase 抑制剂Z-VAD-FMK处理A549 细胞,验证ATR是否诱导A549 细胞发生程序性坏死。将A549 细胞分为对照组、ATR-L 组、ATR-M 组、ATR-H 组（分别用0、10、20、40 μmol/L ATR 处理）、ATR+Nec-1 组（40 μmol/L ATR+50 μmol/L Nec-1 处理）,处理24 h 后,采用PI 单染及Hoechst33342/PI 双染法检测细胞死亡情况、透射电镜观察细胞死亡形态、DCFH-DA 荧光探针法检测细胞内ROS水平、JC-1染色法检测线粒体膜电位、WB法检测细胞中RIPK1/RIPK3/MLKL 信号通路相关蛋白质的表达水平。构建A549 细胞裸鼠移植瘤模型,用10 mg/kg ATR（溶于玉米油中）对裸鼠灌胃给药5 周,观察ATR 对移植瘤生长的影响,WB 法检测移植瘤组织中RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路相关蛋白质的表达水平。结果：10~160 μmol/L的ATR可显著抑制A549细胞增殖,选择10、20、40 μmol/L的ATR进行后续实验。ATR组A549 细胞存活率显著低于对照组（P<0.01）和ATR+Nec-1组（P<0.01）,而ATR+z-VAD组细胞存活率显著低于z-VAD组（P<0.01）,说明ATR可诱导A549 细胞发生程序性坏死而非凋亡。与对照组比较,ATR处理组A549 细胞发生肿胀,线粒体内脊消失呈空泡化,细胞内容物向外泄漏,细胞核聚集,表现为坏死特征,ATR-L 组、ATR-M组、ATR-H 组A549 细胞死亡率、ROS水平及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL表达水平均显著升高,线粒体膜电位显著降低（均P<0.01）,且呈药物浓度依赖性;与ATR-H 组比较,ATR+Nec-1 组细胞死亡率、ROS 及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL 表达水平降低,线粒体膜电位显著升高（均P<0.01）。裸鼠移植瘤实验结果显示,与对照组比较,ATR 组裸鼠移植瘤体积、移植瘤质量均降低（P<0.05,或P<0.01）,而与瘤组织中p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL 蛋白表达水平均显著升高（均P<0.01）。结论：ATR可能通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路诱导A549细胞发生程序性坏死,抑制A549细胞及其裸鼠移植瘤的生长。     

沉默RNF2基因对ECA109细胞裸鼠移植瘤体内放射增敏效应的影响

目的 探讨沉默食管癌ECA109细胞RNF2基因对裸鼠移植瘤放射敏感性的影响。方法 将36只BALB/c/nu裸鼠随机分为对照组、对照+照射组、空载组、空载+照射组、沉默RNF2组、沉默RNF2+照射组,于裸鼠皮下接种ECA109细胞构建裸鼠移植瘤模型,给予X线照射3Gy5次。自接种后第14天开始每2~3d测量1次瘤最大径(a)和最短径(b),记录成瘤时间并按公式计算瘤体积(ab²/2),绘制生长曲线。自首次照射24h后每组处死3只,qRT-PCR和免疫组织化学法分别检测各组瘤组织中RNF2 mRNA和蛋白表达;观察各组剩余瘤照射后生长情况和体积变化。采用TUNEL法检测各组瘤组织细胞凋亡情况,分别采用qRT-PCR和免疫组织化学法检测各组瘤组织中Bcl-2、Bax mRNA和蛋白表达情况。结果 对照组与空载组瘤生长速度最快,沉默RNF2后生长速度减慢,沉默RNF2+照射组瘤生长速度最慢(P<0.05)。照射后各组凋亡水平均明显高于照射前(P<0.05),照射前、照射后RNF2沉默组凋亡水平均高于对照组、空载组(P<0.05)。照射前RNF2沉默组细胞中RNF2 mRNA和蛋白表达水平均低于对照组、空载组(P<0.05),照射后这种趋势更明显。与对照组、空载组相比,照射前、照射后RNF2沉默组Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平均下降(P<0.05);Bax mRNA和蛋白的表达水平均上调(P<0.05)。结论 体内研究显示沉默RNF2基因有效增加了食管癌ECA109细胞裸鼠移植瘤组织放射敏感性,这与诱导细胞凋亡密切相关。     

阿司匹林对HER-2阳性乳腺癌细胞SKBR3侵袭和迁移能力的影响

目的探讨阿司匹林对乳腺癌细胞SKBR3侵袭和迁移能力的影响。 方法先采用MTT法检测不同浓度(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mmol/L)阿司匹林及DMSO(对照组)对SKBR3细胞生长抑制的影响。然后,将乳腺癌细胞SKBR3分为3组,即2.5 mmol/L阿司匹林组、10.0 mmol/L阿司匹林组和对照组(DMSO处理),采用Transwell实验、划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力,实验重复3次。Transwell实验和划痕实验结果数据比较,采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD法。 结果MTT结果显示,随着阿司匹林浓度的增大,SKBR3细胞生长抑制明显增加,其半数抑制浓度(IC₅₀)为7.91 mmol/L。Transwell实验显示,对照组侵袭细胞染色570 nm吸光度值为2.232±0.054,2.5 mmol/L组为1.648±0.069,10.0 mmol/L组为0.372±0.019,3组间相比,细胞侵袭能力的差异有统计学意义(F＝338.1, P<0.001);并且,与对照组相比,2.5 mmol/L和10.0 mmol/L阿司匹林组细胞侵袭能力明显受到抑制(P均<0.001)。划痕实验显示,24 h后对照组细胞迁移愈合率为(69.78±2.87)%,2.5 mmol/L阿司匹林组为(50.16±3.10)%,10.0 mmol/L阿司匹林组为(16.08±2.10)%,3组间相比,细胞迁移能力的差异也有统计学意义(F＝100.8, P<0.001);并且,与对照组相比,2.5 mmol/L和10.0 mmol/L阿司匹林组细胞迁移能力均明显受到抑制(P均<0.050)。 结论阿司匹林能够抑制乳腺癌细胞SKBR3的侵袭和迁移能力。     

PARP抑制剂对Lewis肺癌细胞及移植瘤放疗增敏作用及其机制

背景与目的 受电离辐射的肿瘤细胞DNA损伤主要为单链断裂(single strand break,SSB)与双链断裂(double strand break,DSB),其中SSBs发生的频率数十倍于DSBs,而SSBs多能通过聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[Poly(ADP-Ribose) polymerase,PARP]等因子进行修复.相关新药Olaparib(PARP 1/PARP2/PARP3抑制剂)靶向作用于细胞SSBs损伤修复,其联合化疗的临床研究取得令人鼓舞结果.本实验旨在研究Olaparib对Lewis肺癌细胞及移植瘤放疗增敏作用,初步探讨其可能机制.方法 采用MTT法检测Olaparib对Lewis细胞10％抑制浓度(10％ inhibitoryconcentration,IC10)值,克隆形成实验验证Olaparib联合放疗的体外增敏作用;成瘤小鼠分为空白对照、Olaparib、放疗(radiotherapy,RT,2 Gy×5 d)、Olaparib+RT组,动态测量各组移植瘤体积变化;流式细胞术比较各组细胞体外凋亡率,TUNEL法比较移植瘤细胞凋亡;Western blot检测各组DNA损伤相关蛋白γH2AX,凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2、Caspase-3表达.结果 Olaparib对Lewis细胞IC10值为4.4 μrnol/L,克隆形成实验测得Olaparib放疗增敏比为1.211;移植瘤初体积(处理前)增长4倍所需天数,Olaparib+RT组显著高于单纯RT组(P＜0.001);流式及TUNEL法检测Lewis细胞体内外凋亡率均Olaparib+RT组高于RT组(P＜0.05);Olaparib+RT组细胞及移植瘤中γH2AX、Bax、Caspase-3显著高于RT组,Bcl-2显著低于RT组(均P＜0.05).结论 Olaparib对Lewis肺癌细胞及移植瘤起到显著放疗增敏作用,其机制可能与增加受照肿瘤细胞DNA双链断裂形成,上调Bax/Bcl-2促凋亡体系蛋白有关.     

肺鳞癌引流区域淋巴结细胞对自体肿瘤凋亡相关蛋白表达水平的影响

目的:研究肺癌引流淋巴结(tum or draining lymph nodes,TDLN)细胞对自体肿瘤的凋亡相关蛋白表达水平的影响。方法:手术时取肺癌患者肿瘤引流淋巴结2~4枚,制备细胞悬液,分别用IL-2(I-TDLN)、IL-2+GM-CSF+IL-4(G-TDLN)刺激后,对建立人肺癌细胞移植瘤模型的裸鼠进行免疫干预,检测不同组裸鼠移植瘤细胞的凋亡率和Bcl-2、Bax、survivin、Fas、FasL蛋白的表达。结果:对照组荷瘤裸鼠癌组织的凋亡率为(6.07±3.31)%,IL-2处理组的凋亡率为(12.11±1.19)%;LAK细胞组的凋亡率为(21.42±1.82)%,I-TDLN细胞组的凋亡率为(24.60±0.96)%,G-TDLN细胞组的凋亡率为(32.76±4.46)%。方差分析显示各组间肿瘤组织的凋亡差异显著(P<0.001)。Fas及FasL蛋白在空白对照组及IL-2、LAK、I-TDLN、G-TDLN干预组移植瘤细胞表达的FI值均无统计学差异(P=0.246,P=0.528)。然而经LAK、I-TDLN、G-TDLN干预后,移植瘤细胞Bax蛋白的表达FI值明显高于空白对照组及IL-2作用组(P<0.001);而Bcl-2蛋白在IL-2、LAK、I-TDLN和G-TDLN干预组小鼠移植瘤细胞中的表达FI值明显低于空白对照组(P<0.001);同样survivin蛋白在LAK、I-TDLN和G-TDLN干预组移植瘤细胞中的表达FI值明显低于空白对照组及IL-2作用组(P<0.001)。结论:肺癌引流淋巴结细胞对自体肿瘤的杀伤可能与凋亡蛋白有关。     

阿帕替尼对胃癌HGC-27细胞放射敏感性的影响及其作用机制

目的 探讨阿帕替尼对胃癌HGC-27细胞放射敏感性的影响及可能的作用机制。方法 以不同浓度阿帕替尼（5 μmol/L、10 μmol/L、15 μmol/L、20 μmol/L）以及不同照射剂量（2 Gy、4 Gy、6 Gy、10 Gy、20 Gy）分别处理HGC-27细胞,再选取2 Gy和6 Gy单独照射或联合10 μmol/L阿帕替尼处理HGC-27细胞;采用ELISA法检测细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达情况,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,免疫荧光染色技术检测γ-H2AX的表达情况。结果 阿帕替尼呈浓度及时间依赖性抑制胃癌HGC-27细胞增殖（均P<0.05）;不同剂量照射可促进细胞VEGF表达释放,且呈时间及剂量依赖性（均P<0.01）。10 μmol/L阿帕替尼分别联合2 Gy和6 Gy照射后,HGC-27细胞增殖抑制作用、细胞凋亡率及G2/M期的细胞比例均较单照组升高（均P<0.01）,且6 Gy联合组的作用强度大于2 Gy联合组（均P<0.01）。6 Gy联合组细胞核内γ-H2AX焦点淬灭较6 Gy单照组延迟。结论 阿帕替尼通过抑制细胞增殖,促进细胞凋亡并诱导细胞周期再分布增强胃癌HGC-27细胞放射敏感性,其作用机制可能与延迟γ-H2AX表达而干扰DNA双链断裂修复有关。     

梓醇调节cGAS-STING信号通路对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:探讨梓醇(Catalpol)通过调节GMP-AMP合酶/干扰素基因刺激物(cGAS-STING)信号通路对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:培养肺癌细胞A-427,使用1μmol/L～20μmol/L的梓醇处理细胞,选择最佳药物浓度。将细胞分为对照组(Control组)、梓醇低浓度组(Catalpol-L组,5μmol/L Catalpol)、梓醇中浓度组(Catalpol-M组,10μmol/L Catalpol)、梓醇高浓度组(Catalpol-H组,15μmol/L Catalpol)、梓醇高浓度+cGAS通路抑制剂RU.521组(Catalpol-H+RU.521组,15μmol/L Catalpol+1μmol/L RU.521)。MTT法检测细胞存活率;Edu法检测细胞增殖;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期;蛋白免疫印迹检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3、cGAS和STING蛋白表达;将CD8⁺T细胞与各组处理的细胞共培养,台盼蓝染色检测CD8⁺T细胞存活率;...     

二甲双胍对直肠癌细胞放疗敏感性的影响

目的 探讨二甲双胍（DMBG）对直肠癌细胞放疗敏感性的影响及其可能的作用机制。方法 体外培养直肠癌SW1463细胞，设对照组、DMBG组、照射组及DMBG+照射组，同时建立裸鼠移植瘤模型。MTT实验检测不同浓度（5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L、80 mmol/L）DMBG作用SW1463细胞的细胞活力，克隆集落形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期，免疫印迹法检测DNA损伤蛋白γ-H2AX及DNA损伤修复蛋白DNA-PK的表达，同时观察各组裸鼠移植瘤重量及体积变化，计算抑瘤率，绘制肿瘤生长曲线。 结果 不同浓度（5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L、80 mmol/L）DMBG作用可抑制SW1463 细胞活力（F=43.283，P=0.021）。DMBG+照射组在不同照射剂量（2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy）照射下的细胞存活率均低于DMBG组及照射组（P<0.05），细胞凋亡率明显高于DMBG组及照射组［（63.32±6.15）% vs （16.19±4.38）%，P<0.05；（63.32±6.15）% vs （17.24±5.17）%，P<0.05 ］；DMBG+照射组G2 /M期细胞比例增加到（61.50±5.25）%，G0 /G1期细胞比例减少为（17.36±3.17）%，上调了γ-H2AX蛋白表达，并下调了DNA-PK蛋白表达，与DMBG组及照射组比较差异有统计学意义（P<0.05）；裸鼠移植瘤体积和重量明显变小，抑瘤率亦明显高于DMBG胍组和照射组［（68.51±2.58）% vs （20.74±2.61）%，P<0.05；（68.51±2.58）% vs （31.52±3.43）%，P<0.05］。结论 二甲双胍对直肠癌SW1463细胞及其裸鼠移植瘤具有放疗增敏作用，可能与DMBG联合放疗后改变肿瘤细胞周期分布，抑制肿瘤细胞对DNA损伤的自我修复能力有关。     

化合物UC2288对CNE-2R细胞体外及裸鼠移植瘤放射敏感性影响

目的:探讨化合物UC2288对CNE-2R细胞及裸鼠移植瘤放射敏感性影响。方法:化合物UC2288浓度参照以往实验结果(IC 50＝12.20 μmol/L),克隆形成实验检测UC2288联合2、4、6、8 GyX线照射对CNE-2R细胞放射敏感性影响。CCK8实验检测UC2288联合X线2、4、6、8 G...     

姜黄素联合顺铂对非小细胞肺癌细胞A549放疗增敏作用的初步研究

目的 探讨姜黄素联合顺铂对非小细胞肺癌细胞A549放射增敏的影响。方法 采用MTT法观察不同浓度姜黄素（10、20、50、100、200 μmol/L）和顺铂（1、2、5、10、20 mg/L）作用24、48及72 h后的细胞存活率,根据实验设计分为单纯照射（R）组、姜黄素+照射（C+R）组、顺铂+照射（P+R）组及姜黄素+顺铂+照射（C+P+R）组,采用克隆形成实验检测4组经不同剂量X线（0、2、4、6、8、10 Gy）照射后的存活分数（SF）并通过单击多靶模型拟合细胞存活曲线计算增敏比（SER）,分别采用人工划痕、Transwell试验及Western blotting检测以上4组处理24 h后的细胞迁移、侵袭及表皮生长因子受体（EGFR）的蛋白水平。结果 随姜黄素（10~200 μmol/L范围内）和顺铂（1~20 mg/L范围内）浓度增加,A549细胞的细胞存活率降低,抑制效应呈浓度和时间依赖方式,差异有统计学意义（P<0.05）;C+P+R组在照射剂量为2~10 Gy时的细胞SF均低于其余3组,而C+R组在4~10 Gy,P+R组在2~10 Gy时的细胞SF均低于R组,差异有统计学意义（P<0.05）,C+R组、P+R组及C+P+R组相对于R组的SER依次为1.24、1.31和1.96;C+P+R组的迁移距离、穿膜细胞数量及EGFR蛋白水平均低于其余3组,而C+R组和P+R组的以上指标亦低于R组,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 姜黄素联合顺铂可抑制A549细胞增殖并具有放射增敏作用,同时抑制其迁移和侵袭,可能与EGFR相关信号通路受抑制有关。     

E838联合γ射线对淋巴瘤荷瘤小鼠的协同抑瘤作用

 目的 本研究主要观察E838对小鼠移植性淋巴瘤的体内抑瘤效果及相关的生物学指标，探讨合用137Cs γ射线是否具有抑瘤增效作用。方法 取2～3mm3淋巴瘤瘤块接种于IRM 2小鼠腋部皮下，24h后将荷瘤小鼠随机分为对照组、单放组、E838低、中、高药物组及药物合用照射组、环磷酰胺组。药物组与药物合用照射组对应性腹腔注射相同剂量E838，每日1次，连续7天，环磷酰胺隔日1次×4。合用照射组于给药的第4天进行全身1Gy照射，每日1次，连续5天。观察各组小鼠骨髓有核细胞数和肿瘤抑制率。结果 E838 3个剂量对小鼠移植性淋巴细胞瘤的抑瘤率分别为(44.14±15.96)%、(70.74±11.17)%和(50.00±18.09)%，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)，骨髓有核细胞数与对照组相比则明显提高。E838合用137Csγ射线能提高抑瘤效果，抑瘤率分别为(65.43±2.13)%、(77.13±6.38)%和(67.55±11.17)%，(P<0.001)，对肿瘤的杀伤作用高于单放组和单药治疗组。结论 E838对小鼠肿瘤细胞具有良好的抑制作用，E838合用γ射线具有协同抑瘤作用，在适当剂量范围内可以促进荷瘤小鼠放疗后骨髓损伤修复。     

miR-21在恩度联合X线照射心肌纤维母细胞的作用

目的:初步研究恩度联合X线照射对心肌纤维母细胞(CF)影响及miR-21的作用。方法:使用大鼠CF进行实验,设空白对照组、10 Gy X线照射组、恩度组、10 Gy X线+恩度组、10 Gy X线+恩度+NC mimics组(阴性对照组1)、10 Gy X线+恩度+miR-21 mimics组、10 Gy X线+恩度+...     

基于小动物照射研究平台建造C57BL6/J小鼠急性放射性肠炎精准模型研究

目的 基于小动物照射研究平台建造C57BL6/J小鼠放射性肠炎精准模型。方法 将48只雌性小鼠随机均分为空白对照组、6Gy照射组、9Gy照射组及12Gy照射组4组。基于SARRP,照射组小鼠接受全腹单次照射,剂量率为4 Gy/min。观察小鼠一般情况、体重、小肠病理改变。结果 CT扫描后,勾画靶区及正常组织,根据4个预计划靶区剂量分布及脊髓保护,采用等中心水平对穿照射方案。6、9、12Gy组平均照射时间分别为163、252、328s。照射后15天6、9、12Gy组小鼠的生存率分别为100%、100%、50%;照射后第5天6、9、12Gy组小鼠体重较空白对照组明显下降(P=0.035、P=0.002、P<0.001),10天后逐渐上升。随着照射剂量增加,肠黏膜绒毛和腺体损伤逐渐加重。与较空白对照组相比,9、12Gy 组绒毛长度明显缩短(P<0.001);照射组肠壁厚度明显变薄(P<0.001)。结论 SARRP在小鼠放射性肠炎模型建造中能够提供精准的靶区定位、计划的筛选和精确的剂量交付。6~9Gy的单次全腹水平对穿照射能够成功地建造C57BL6/J雌性小鼠的急性放射性肠炎模型。     

阿魏酸对人脐静脉血管内皮细胞辐射损伤的保护作用及其机制

目的：研究阿魏酸对电离辐射所致人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用,及其对辐射敏感蛋白Thbd和γH2AX的影响,探讨阿魏酸的抗辐射作用与机制。方法：以4~16 Gy的⁶⁰Co γ射线照射HUVEC细胞,照后48 h以MTS法检测细胞活力,探索适宜照射剂量。以10 Gy γ射线照射HUVEC细胞,分别于照射后1、3、6、12、24和48 h提取细胞总蛋白,蛋白质印迹法检测蛋白Thbd和γH2AX的表达水平。并于照射前2 h,预防性给予细胞0.001~1 μmol/L的阿魏酸,照后48 h检测细胞活力、Thbd和γH2AX蛋白表达水平的改变。结果：与未照射组（0 Gy）比较,HUVEC受到10 Gy γ射线照射后48 h,细胞活力约降低30%（P < 0.05）。以此剂量照射,照后1 h Thbd约降至正常水平的0.6（P < 0.05）,照射后48 h γH2AX约升高至正常水平的5倍（P < 0.05）。与照射对照组比较,0.1和1 μmol/L 的阿魏酸作用后,受照HUVEC的细胞活力提高（P < 0.05）,Thbd蛋白表达升高（P < 0.05）,γH2AX蛋白表达降低（P < 0.05）。结论：0.1~1 μmol/L的阿魏酸可调节10 Gy γ射线照射后HUVEC的Thbd和γH2AX蛋白的表达水平,从而促进HUVEC增殖,提高其细胞活力,发挥抗辐射作用。