NO-Aspirin抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长以及对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响

目的：探讨NO-ASA（一氧化氮阿斯匹林）对MCF-7人乳腺癌细胞生长的影响及其机制。方法：建立稳定传代的MCF-7细胞系。MTT法测定NO-ASA对MCF-7人乳腺癌细胞的增殖抑制作用。应用Westernblot法检测对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响。结果：NO-ASA能强烈抑制细胞生长和β-catenin/TCF转录活性;NO-ASA降低了Wnt/β-catenin下游区靶基因细胞周期蛋白D1（cyclinD1）和细胞总β-catenin的表达水平。结论：NO-ASA通过减少β-catenin表达及抑制β-catenin/TCF依赖转录活性,强烈抑制MCF-7人乳腺癌细胞增殖,导致其靶基因—细胞周期蛋白D1表达降低。这为乳腺癌的预防和治疗提供了针对性的合理的方法。     

氧化苦参碱对人乳腺癌 MCF -7 细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的：了解中药苦参的有效成分氧化苦参碱对人乳腺癌细胞系MCF-7肿瘤细胞的增殖及其相关的调控机制的干预作用.方法：以乳腺癌细胞株（MCF-7）为研究对象,利用MTT法检测氧化苦参碱的体外杀伤活性;RT-PCR法、Western blot法、流式细胞技术、细胞免疫荧光计数检测基因、蛋白表达水平,对其相关调控基因的表达水平进行检测.结果：氧化苦参碱对体外培养的MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用;可以诱导乳腺癌 MCF-7细胞凋亡,而且这种生长抑制及促进凋亡的作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号转导通路的活性来实现.结论：氧化苦参碱可以通过抑制Wnt/β-catenin信号转导通路的活性来抑制人乳腺癌MCF-7细胞系的增殖,促进其凋亡.     

槲皮素抗肿瘤作用与Wnt/β-catenin信号转导关系的研究

目的:探讨槲皮素对人结肠癌细胞SW480增殖的影响及对细胞Wnt/β-catenin信号转导的调控作用。方法:以不同浓度的槲皮素处理SW480细胞,采用MTT比色法分析槲皮素对细胞增殖的抑制作用,利用报告基因方法研究槲皮素对Wnt/β-catenin信号转导的影响,用RT-PCR及蛋白质印迹法观察槲皮素对Wnt/β-catenin信号转导通路的下游关键因子Cyclin D1和Survivin转录水平和蛋白表达水平的影响。结果:(40～160)×10-6mol/L的槲皮素可明显抑制SW480细胞的增殖,P<0.01,抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性;(10～160)×10-6mol/L的槲皮素可明显抑制SW480细胞TCF-4报告基因TOPflash活性,P<0.05,抑制作用呈剂量依赖性。槲皮素可显著下调β-catenin/TCF下游靶基因CyclinD1和Survivin的mRNA表达和蛋白表达水平,呈剂量依赖性。结论:槲皮素可抑制人结肠癌细胞SW480的增殖,其抗肿瘤机制可能与其抑制Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

尼日菌素对前列腺癌DU145细胞Wnt/β-catenin信号传导的影响

目的 研究尼日菌素对前列腺癌DU145细胞的作用及其对Wnt/β-catenin信号传导的影响。方法 体外使用5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的尼日菌素处理前列腺癌DU145细胞,同时以DMSO处理作为对照组。用细胞增殖-毒性检测试剂盒（CCK-8）检测尼日菌素对DU145细胞增殖活力的影响。以Transwell迁移侵袭实验检测药物对细胞的迁移侵袭能力的影响。用Western免疫印迹技术、免疫荧光及TOP/FOP-flash荧光报告试验检测尼日菌素对DU145细胞中β-catenin蛋白的表达及其下游靶基因c-myc及cyclin D1的表达以及对TCF/LEF转录因子活性的影响。结果 尼日菌素对前列腺癌DU145细胞有明显的细胞毒性作用,可以抑制其侵袭和转移;尼日菌素可以降低DU145细胞中β-catenin蛋白的表达,从而阻断Wnt信号的传导,抑制下游转录因子的活性、降低靶基因的表达水平。结论 尼日菌素可显著抑制前列腺癌细胞的侵袭与转移,可能与其抑制Wnt/β-catenin信号传导相关。     

AQP1通过Wnt通路促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭

目的:探讨过表达水通道蛋白1（aquaporin 1,AQP1）基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移、侵袭能力的影响,分析其对Wnt通路的调控作用。方法:构建和包装pBabe-puro-AQP1逆转录病毒载体,建立稳定过表达AQP1基因的MCF-7细胞。细胞免疫荧光染色法检测外源性AQP1在MCF-7细胞内的定位,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot检测AQP1 mRNA及蛋白表达变化;采用CCK-8法检测细胞的增殖活性;流式细胞法检测细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞的侵袭能力;基因表达谱芯片、Western blot检测转染后Wnt细胞通路相关基因表达改变。结果:稳定过表达AQP1后MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加,差异有统计学意义（P＜0.001）。基因表达谱芯片结果显示,过表达AQP1后22个差异表达基因富集于Wnt细胞信号通路,mRNAs表达明显增强（P＜0.000 1）,Wnt细胞通路关键基因β-catenin及下游靶基因细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、C-Myc蛋白表达也显著增加。结论:AQP1可能通过激活Wnt信号通路促进MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭。     

miR-613通过下调Wnt/β-catenin信号通路活性抑制前列腺癌细胞的增殖与侵袭

目的:研究miR-613在人前列腺癌组织中的表达情况,探讨miR-613是否通过下调Wnt信号通路活性抑制前列腺癌细胞系细胞的增殖和侵袭能力。方法:收集临床前列腺癌组织及配对癌旁组织20例,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组组织中miR-613的表达情况。进一步在细胞实验中,通过转染miR-613 mimic和miR-NC至离体培养的PC-3、DU-145细胞中,随后,采用MTT法、平板克隆实验检测细胞增殖和Matrigel侵袭实验测定前列腺癌细胞的侵袭情况,采用荧光素酶分析方法评估Wnt信号通路活性变化,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因的转录(包括Cyclin D1和c-Myc),WB法检测细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达量。结果:相比配对癌旁组织,miR-613在前列腺癌组织中的表达降低(P<0.01);在体外细胞实验中,相比于miR-NC组,转染miR-613 mimic后,PC-3、DU-145细胞增殖能力下降(P<0.05),PC-3、DU-145细胞的迁移侵袭能力下降(P<0.01);miR-613的过表达显著降低Wnt信号通路活性、β-catenin蛋白表达及Wnt信号下游靶基因Cyclin D1和c-Myc的转录及蛋白表达。结论:miR-613通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来影响前列腺癌细胞的增殖与侵袭,为前列腺癌的潜在治疗靶点之一。     

HK2通过Wnt/β-catenin信号通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug表达促进宫颈癌细胞增殖和迁移CSCD

目的研究己糖激酶2(HK2)对宫颈癌细胞HeLa增殖和迁移的影响及其作用机制。方法G418压力筛选获取HK2稳定表达的HeLa细胞系;细胞计数法、MTT法、流式细胞仪检测HK2对HeLa细胞增殖、细胞活力及细胞周期的影响;细胞划痕和Transwell小室检测HK2对HeLa细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot和免疫细胞化学检测β-catenin、Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白的表达;TOP/FOP实验检测HK2对Wnt/β-catenin信号转导通路活性的影响;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939观察在HK2过表达HeLa细胞中抑制Wnt/β-catenin信号通路活性后细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果成功构建HK2稳定表达的HeLa细胞系;过表达HK2可以促进HeLa细胞的增殖和细胞活力、促进细胞周期从G_0/G_1期向S期转换、增强细胞迁移和侵袭能力、增强Wnt/β-catenin信号转导通路活性,上调Cyclin D1、MMP7和Slug的表达;XAV-939抑制Wnt/β-catenin信号通路在HK2过表达HeLa细胞中的活性后,可以抑制HK2对细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。结论HK2通过Wnt/β-catenin信号转导通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白表达促进HeLa细胞增殖、迁移和侵袭。     

Trim37过表达通过激活Wnt/β-catenin通路促进乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及EMT

目的:探讨Trim37通过Wnt/β-catenin通路对乳腺癌发展的影响及其作用机制。方法:实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和Western blot检测Trim37在乳腺癌组织、癌旁正常组织、人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)和人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A细胞)中的表达。pcDNA-Trim37或Trim37 siRNA转染MCF-7细胞后,CCK-8法检测过表达及下调Trim37对细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达及下调Trim37对细胞侵袭的影响,细胞划痕愈合实验检测过表达及下调Trim37对细胞迁移的影响,Western blot检测过表达及下调Trim37对细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Snail)及β-catenin、CyclinD1、p-ERK、p-AKT和p-FAK蛋白表达的影响。Wnt/β-catenin通路抑制剂(XAV939)作用MCF-7细胞后,检测MCF-7细胞增殖、...     

Wnt信号通路在姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡中作用机制

目的 探讨Wnt通路在姜黄素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用机制.方法 将MCF-7细胞培养液随机分为5组,分别加入15、30、60、120μmol/L的姜黄素,对照组不加,培养12,24,48 h后采用CCK-8法检测细胞增殖能力.分A、B两组(剂量组、时间组)采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术(FCM)观测细胞凋亡及细胞周期分布;Western Blotting法检测A、B两组的Wnt通路相关蛋白,并进行相应的相关性分析探讨Wnt通路与乳腺癌MCF-7细胞凋亡的关系.结果 CCK-8结果显示,随培养时间延长,姜黄素各浓度组MCF-7细胞增殖抑制率逐渐增高(均P<0.05);在同一时间点,随着姜黄素浓度升高,细胞增殖抑制率逐渐增高(均P<0.05).FCM染色结果显示,随着姜黄素浓度增加、作用时间延长MCF-7细胞凋亡指数逐渐上升(均P<0.05),且G1/S期细胞增加越多(P<0.05).Western Blotting实验结果显示MCF-7细胞中Wnt1、β-catenin的表达下调程度呈现剂量时间依赖性(P<0.05).相关性分析显示细胞抑制率、G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率均与Wnt通路相关蛋白Wnt1、β-catenin的表达呈现较明显的相关性(P<0.05).结论 姜黄素的抗癌活性与抗增殖能力具有明显的剂量时间依赖性,且Wnt通路在姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞抑制、凋亡过程中发挥了重要作用.     

非甾类抗炎药通过β-catenin/TCF4 survivin通路诱导结肠癌细胞凋亡

背景与目的：Wnt信号传导通路异常导致的细胞增殖加快和凋亡抵抗,在结肠癌发生发展中发挥重要作用。本研究探讨Wnt信号传导通路在结肠癌细胞中拮抗凋亡的作用机制。方法：将survivin的启动子区克隆到荧光素酶报告基因表达系统,与pRL-SV40共转染HCT116细胞,利用双荧光检测系统检测启动子区活性;以非甾类抗炎药物indomethacin刺激HCT116细胞,细胞P1染色后,利用流式细胞仪检测细胞的凋亡状态;Western blot检测蛋白表达。结果：Smvivin作为β-catenin的靶基因受到Wnt通路的调节;lndomethacin通过β-catenin／TCF4信号通路在转录水平抑制survivin的表达;Survivin过表达可以部分逆转Indomethacin诱导的HCT116细胞凋亡。结论：β-catenin／TCF4-survivin通路作为拮抗细胞凋亡的重要途径,在结肠癌的治疗方面具有重要的应用前景。     

塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭的影响,阐明TPD7抑制细胞迁移和侵袭可能的作用机制。方法:采用细胞划痕法、Transwell小室侵袭法检测MCF-7和ZR-75-30细胞的迁移和侵袭。采用Western blot法检测MMP9、β-catenin及c-Myc的蛋白表达。RT-PCR法检测β-catenin及c-Myc的mRNA表达。结果:TPD7对MCF-7细胞和ZR-75-30细胞迁移和侵袭均有显著抑制作用,且下调MMP9、β-catenin、c-Myc的蛋白表达和mRNA表达,呈剂量依赖性。结论:TPD7抑制乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭,可能是通过Wnt信号通路抑制上皮-间质转化。     

维生素D调控Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌干细胞活性

目的 探讨维生素D对乳腺癌干细胞活性的影响及其可能的作用机制。方法 采用MTT法检测不同浓度（1 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L）维生素D对乳腺癌SUM159细胞活力的影响,用无血清培养基悬浮培养富集乳腺癌干细胞CSCSUM159,分析维生素D对乳腺癌干细胞活性的影响。Western blot和Real-time qPCR 分别检测乳腺癌干细胞标志物CD133、CD44、Oct-4、Nanog以及Wnt/β-catenin信号通路相关分子p-GSK-3β、β-catenin、c-Myc和cyclin-D1的表达。结果 MTT法检测结果显示,1 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L维生素D均可显著抑制乳腺癌SUM159细胞的活力（P＜0.01）。无血清悬浮培养可有效富集乳腺癌干细胞CSCSUM159。维生素D可使乳腺癌干细胞CSCSUM159的成球数量减少,且细胞成球大小较对照组小。Western blot和Real-time qPCR检测结果显示,维生素D干预后,乳腺癌干细胞CSCSUM159中CD133、CD44和Nanog的蛋白表达下调,Wnt/β-catenin信号通路相关分子p-GSK-3β、β-catenin和c-Myc蛋白表达及β-catenin、c-Myc和cyclin-D1 mRNA表达亦下调（P＜0.05）。结论 维生素D可抑制乳腺癌干细胞活性,可能与其调控Wnt/β-catenin信号通路活性有关。     

姜黄素通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞上皮间质转化

[目的]探讨姜黄素对结肠癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用机制。[方法]通过MTS检测姜黄素对HCT116细胞活性的影响;运用Western-blot、Real-time q PCR检测不同浓度姜黄素对HCT116细胞Wnt相关基因(β-catenin、TCF4)及EMT相关基因(E-cadherin和Vimentin)的表达情况。[结果 ]姜黄素能明显抑制HCT116细胞的增殖活性,在12h、24h和48h的IC50分别是61.98±2.68μmol/L,19.64±1.29μmol/L和17.84±1.25μmol/L。姜黄素能下调HCT116细胞内β-catenin和TCF4的表达水平;同时显著性上调E-cadherin及下调Vimentin表达水平,且呈剂量依赖性。Wnt信号通路活化剂能上调姜黄素处理后细胞内的β-catenin表达和下调E-cadherin表达水平。[结论]姜黄素通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制肿瘤细胞上皮间质转化。     

ERβ1对乳腺癌MCF-7细胞Efp基因表达的抑制作用

目的 了解雌激素受体β1（ERβ1）对雌激素敏感性指状蛋白（Efp）基因的调节作用,为进一步探讨ERβ对Efp基因的调控机制奠定基础.方法 应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MCF-7细胞中,再用Western blot检测转染细胞中Efp蛋白表达的变化.MTT比色试验观察ERβ1真核表达质粒转染后MCF-7细胞增殖活性的变化.结果 外源性ERβ1真核表达质粒组MCF-7细胞较未转染组MCF-7细胞Efp蛋白表达明显减弱.ERβ1基因转染后的MCF-7细胞的增殖活性降低.结论 ERβ1基因的表达可以抑制人乳腺癌MCF-7细胞中Efp基因的表达,并抑制MCF-7细胞的增殖能力,可能在乳腺肿瘤发生、发展机制中具有重要的作用.     

β-Catenin、β-Trcp 及CRD-BP与结直肠癌

Wnt/β-catenin通路在结直肠癌的发生发展过程中起重要作用,其致癌的关键是β-catenin蛋白降解障碍使其在胞内积聚及核易位,并激活下游肿瘤相关性靶基因的转录,不稳定编码区结合蛋白(CRD-BP)是其靶基因之一.在正常细胞中β-catenin降解依赖于β-转导重复相容蛋白(β-Trcp),而在异常细胞中CRD-BP的表达可调控β-Trcp的稳定性.Wnt/β-catenin通路的激活、β-catenin及CRD-BP的高表达、CRD-BP上调β-Trcp与结直肠癌发生、发展及侵袭转移密切相关.     

香加皮杠柳苷通过抑制Wnt／β-catenin信号通路诱导结肠癌细胞SW480凋亡

背景与目的：Wnt／β-catenin信号通路在人类肿瘤尤其在大肠癌的发生发展中起着重要作用。本研究分析了香加皮杠柳苷（periplocin extracted fromcortex periplocae,CPP）对人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用,及对Wnt／β-catenin信号通路的调控作用。方法：MTT法检测CPP对SW480细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期的变化和凋亡。Western blot法检测CPP处理组与对照组细胞总蛋白、细胞浆蛋白及细胞核蛋白中β-catenin表达变化,电泳迁移率改变法分析CPP作用后SW480细胞核TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力变化。半定量RT—PCR法检测CPP作用后细胞中β-catenin、survivin、c—myc和cyclin D1mRNA的表达。结果：CPP明显抑制SW480细胞增殖（P〈0．01）,并呈时间和浓度依赖性;0．5μg／mLCPP可将SW480细胞阻滞于G0／G1期,并诱导细胞凋亡（P〈0．05）。CPP作用后SW480细胞总蛋白、胞浆蛋白及细胞核蛋白中的B—catenin表达均明显降低（P〈0．01）,细胞核中TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力受到抑制,其下游靶基因mRNA表达水平下降（P〈0．01）,而β-cateninmRNA表达未见明显改变。结论：CPP可明显抑制SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与抑制细胞Wnt／β-catenin信号转导通路有关。     

NDRG2通过抑制β-catenin表达和入核调控乳腺癌细胞增殖

背景与目的：乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤之一,肿瘤细胞的恶性增殖是造成患者死亡的重要原因。本研究利用具有相同遗传背景但不同增殖能力的乳腺癌细胞模型,研究N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)调控乳腺癌细胞增殖的作用及分子机制。方法：通过蛋白[质]印迹法(Western blot)检测MCF-7/LM-MCF-7细胞中NDRG2蛋白表达水平;构建NDRG2真核表达载体及siRNA干扰片段,通过转染上调或沉默NDRG2表达,流式细胞实验检测细胞增殖能力,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)表达,免疫荧光染色检测β-catenin细胞定位;共转染MCF-7细胞NDRG2 siRNA和pCMV-Tcfδ,流式细胞实验检测细胞增殖能力。结果：NDRG2的蛋白表达水平同乳腺癌细胞增殖能力负相关;在增殖的LM-MCF-7细胞中上调NDRG2表达,细胞增殖指数(proliferation index,PI)由47.18%下降至31.78%(P<0.001);在低增殖的MCF-7细胞中沉默NDRG2表达,PI由32.00%上升至52.59%(P<0.001);Western blot及免疫荧光结果显示,NDRG2可抑制β-catenin表达,并抑制其聚集入核;流式细胞检测结果显示,共转染siRNA和pCMV-Tcfδ的MCF-7细胞增殖能力未增强,进一步说明NDRG2是通过抑制β-catenin的转录调节作用抑制肿瘤细胞增殖。结论：在乳腺癌细胞中,NDRG2的表达水平下调,导致β-catenin聚集入核,并激活下游靶基因,促进乳腺癌细胞增殖。此分子机制对阐明乳腺癌细胞增殖调控机制具有重要意义。     

血根碱对人肺腺癌细胞迁移、侵袭和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨血根碱对人肺腺癌细胞迁移、侵袭的影响及其初步分子机制。方法 MTT法检测血根碱对肺腺癌细胞活性的影响；利用划痕和Transwell小室实验分析血根碱对细胞迁移、侵袭的影响；RT-qPCR和免疫印迹法检测不同浓度血根碱对Wnt/β-catenin通路相关基因和核心蛋白的影响。结果 与空白对照组比，血根碱（1~10 μmol/L）呈浓度-时间依赖性地抑制人肺腺癌细胞的活力（P<0.05）；低浓度1 μmol/L作用48 h后，A549和H1975细胞的迁移和侵袭能力明显减弱（P<0.01）；血根碱（1、2.5、5 μmol/L）可显著下调Wnt/β-catenin通路中核心分子β-catenin及上游磷酸化GSK3β、DVL2蛋白表达，进而抑制下游靶基因TCF/LEF，CyclinD1的mRNA水平（P<0.05），并呈一定的浓度依赖性。结论 血根碱可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路起到抑制人肺腺癌细胞迁移、侵袭的作用。     

肝癌细胞系中Oct4与Wnt/β-catenin 和TGF-β信号通路的相互影响

 目的 探讨干细胞相关基因Oct4与Wnt/β-catenin 及TGF-β信号通路在肝癌细胞系中的相互作用。方法 应用RT PCR法检测Oct4、Wnt/β-catenin及TGF-β信号通路相关基因β-catenin、Wnt10b、TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4在肝癌组织及细胞系中的表达;使用siRNA 沉默人肝癌HepG2细胞Oct4和TCF3的表达,实时荧光定量RT PCR法检测Wnt10b、β-catenin、 TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4等基因的表达变化。结果 Oct4和β catenin、Wnt10b、TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4在肝癌组织及细胞系中同时表达; siRNA-Oct4 沉默人肝癌HepG2细胞Oct4后,Oct4表达明显下调,β-catenin、Wnt10b随之下调达40%~50%左右,而TCF3表达升高到3倍左右;同时ELF、Smad3和 Smad4均下降到原来的1%以下;而siRNA-TCF3 沉默TCF3后,Oct4的表达也升高2~3倍;ELF升高亦达2~3倍,Smad3和 Smad4也略有升高。结论 Oct4和β-catenin、Wnt10b、TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4在肝癌组织及细胞系中同时表达提示彼此之间有相互作用。RNAi实验证明Oct4对Wnt/β-catenin及TGF-β信号通路的成员有调控作用;Oct4 与TCF3之间的负反馈作用值得深入研究。     

β-catenin对非小细胞肺癌细胞A549顺铂耐药作用及机制的探讨

目的:探讨β-catenin介导的信号通路在人非小细胞肺癌顺铂(DDP)耐受中的作用及可能机制.方法:MTS法检测人非小细胞肺癌A549及其衍生的DDP耐受细胞A549/DDP对DDP的敏感性;蛋白质印迹法检测A549和A549/DDP细胞内β-catenin及其靶基因Survivin和Bcl-2的蛋白表达,并以TCF/LEF报告基因检测β-catenin的活性;实时定量PCR检测Survivin和Bcl-2的转录水平;将β-catenin反义寡核苷酸片段转染入A549/DDP细胞沉默β-catenin的表达,MTS检测干扰前后细胞对DDP的敏感性,实时定量PCR及蛋白质印迹法检测相关基因的表达.结果:A549/DDP对DDP的耐受性是A549细胞的3.14倍,P=0.006 9;A549/DDP细胞中β-catenin蛋白含量上调且其活性上调4.28倍(P=0.003 6),β-catenin的靶基因Survivin及Bcl-2在mRNA及蛋白水平均上调;干扰下调A549/DDP细胞中β-catenin 明显下调了Survivin及Bcl-2的mRNA及蛋白水平,增加了对DDP的敏感性.结论:β-catenin在耐药细胞A549/DDP对DDP的耐受中起着重要作用,是逆转肺癌DDP耐受的可能潜在靶标.