低频电刺激对脊髓损伤后膀胱过度活动抑制的仿真研究

目的 探讨低频脉冲（0～10Hz）刺激时,不同刺激波形对脊髓损伤后逼尿肌反射亢进诱发的膀胱过度活动症的结果,以寻求抑制膀胱过度活动的最优刺激波形.方法 首先根据McNeal的神经纤维电缆模型,基于Frankenhaeuser-Huxley （FH） 方程建立有髓神经纤维的膜外点电极刺激的仿真系统,评价低频电刺激中的四种波形,即正向脉冲、负向脉冲、双向对称脉冲、双向不对称脉冲的效果.通过电刺激脊髓损伤犬的阴部神经实验,验证仿真条件下最优刺激波形的临床效果.结果 仿真实验表明双向不对称脉冲的抑制效果最佳;动物实验表明以3V、0.1ms的正向脉冲为起始脉冲,结合1V、0.3ms的负向脉冲的双向不对称波形的抑制效果为最优.结论 低频脉冲刺激脊髓损伤犬阴部神经时,正向脉冲在前的双向不对称脉冲的刺激波形仿真效果最佳,并适用于临床实验,能够有效抑制膀胱过度活动,保护神经避免电化学损伤.     

不同电极电刺激对有髓神经传导阻断影响的仿真研究

目的 比较双电极双向脉冲刺激和单电极双向脉冲刺激在神经纤维传导阻断中的阻断阈值以及对神经纤维的损伤,并通过该研究为电刺激促进脊髓损伤后下尿路功能重建的动物实验选择最优的刺激模式.方法 以有限长单根有髓神经为研究对象,以两栖动物的有髓神经纤维FrankenhaeuserHuxley（F-H）模型为仿真研究基础.结果 比较了单、双电极在双向对称方波以及双向间歇方波作用下的阻断阈值以及单双电极在同样的刺激条件下（包括刺激波形、频率以及电流强度）产生的离子电流强度大小.结论 双电极的阻断阈值大于单电极的阻断阈值.在相同的刺激条件下,双电极双向脉冲刺激对神经的损伤程度小于单电极双向脉冲刺激.     

原发性女性膀胱颈硬化症45例分析

对我院原发性女性膀胱颈硬化症45例分析如下。 1临床资料 1.1一般资料 本组年龄35-80岁，平均57．5岁，病程6～15a。临床表现为经久不愈的尿频、尿急、尿痛10例，尿线变细无力排尿不尽感、排尿踌躇、排尿等待等进行性排尿困难28例，后期出现剩余尿、急性尿潴留、充盈性尿失禁5例，晚期导致膀胱输尿管返流、肾积水肾功能不全2例。     

Slug通过下调CDH3/β-catenin/C-myc表达抑制宫颈癌细胞增殖

目的 探讨Slug通过下调CDH3/β-catenin/C-myc表达抑制宫颈癌细胞增殖的作用机制。方法 G418压力筛选获取Slug稳定表达的SiHa细胞系;行转录组测序分析,Real-time PCR、Western blot和细胞免疫化学检测CDH3在Slug过表达SiHa细胞中的表达;Western blot和细胞免疫化学检测CDH3在SiHa和HeLa细胞中的表达;在瞬转CDH3表达载体的HeLa细胞和挽救CDH3表达的SiHa-Slug细胞中通过Western blot检测β-catenin和C-myc蛋白的表达;细胞计数和CCK-8检测CDH3对HeLa和SiHa-Slug细胞增殖的影响;双荧光素酶报告系统和染色质免疫共沉淀实验检测Slug对CDH3启动子区的调节作用。结果 成功构建Slug稳定表达的SiHa细胞系;过表达Slug可以下调CDH3在SiHa细胞中的表达;在HeLa和SiHa-Slug细胞中分别上调和挽救CDH3表达可以上调β-catenin和C-myc蛋白的表达并促进细胞增殖;Slug可以识别并结合CDH3启动子区的E-box,从而抑制CDH3在SiHa细胞中的转录。结论 Slug通过抑制CDH3在SiHa细胞中的转录,可下调β-catenin和C-myc蛋白的表达,抑制SiHa细胞增殖。     

HK2通过Wnt/β-catenin信号通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug表达促进宫颈癌细胞增殖和迁移CSCD

目的研究己糖激酶2(HK2)对宫颈癌细胞HeLa增殖和迁移的影响及其作用机制。方法G418压力筛选获取HK2稳定表达的HeLa细胞系;细胞计数法、MTT法、流式细胞仪检测HK2对HeLa细胞增殖、细胞活力及细胞周期的影响;细胞划痕和Transwell小室检测HK2对HeLa细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot和免疫细胞化学检测β-catenin、Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白的表达;TOP/FOP实验检测HK2对Wnt/β-catenin信号转导通路活性的影响;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939观察在HK2过表达HeLa细胞中抑制Wnt/β-catenin信号通路活性后细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果成功构建HK2稳定表达的HeLa细胞系;过表达HK2可以促进HeLa细胞的增殖和细胞活力、促进细胞周期从G_0/G_1期向S期转换、增强细胞迁移和侵袭能力、增强Wnt/β-catenin信号转导通路活性,上调Cyclin D1、MMP7和Slug的表达;XAV-939抑制Wnt/β-catenin信号通路在HK2过表达HeLa细胞中的活性后,可以抑制HK2对细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。结论HK2通过Wnt/β-catenin信号转导通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白表达促进HeLa细胞增殖、迁移和侵袭。     

hBD1稳定表达细胞株的建立及其表达产物对多重耐药菌的活性检测

目的 构建人β防御素1( hBD1)稳定表达细胞株并检测其对多种多重耐药菌的抗菌活性.方法 将重组质粒pCMV-hBD1通过阳离子脂质体转染于非洲绿猴SV40转化的肾细胞(COS-7细胞),经过G418压力筛选后获得单克隆细胞株;提取细胞总RNA,用RT-PCR检测目的基因在转录水平的表达;收集细胞培养上清液,用Western blot检测hBD1基因蛋白的表达;将含有表达产物hBD1的细胞培养上清液分别同各耐药菌液混合,37℃孵育不同时间后涂布于LB平板,以各实验组和对照组的菌落数的比值作为该耐药菌的存活率.结果 经过G418压力筛选所得到的稳定表达细胞株,在转录水平和蛋白水平均检测到目的基因hBD1的表达,在表达产物hBD1的作用下,多重耐药鲍氏不动杆菌、多重耐药大肠埃希菌存活率和多重耐药肺炎克雷伯杆菌的存活率可以分别降至9%、22%和50%,多重耐药嗜麦芽窄食单胞菌的存活率同对照组没有明显差异.结论 成功获得hBD1稳定表达细胞株,目的基因hBD1的表达产物对多种多重耐药菌均具有抗菌活性.     

新型非病毒载体O-CHCS携带HBD2转染L929细胞及表达产物活性检测

目的研究O-胆甾醇基壳聚糖(O-CHCS)作为基因载体进行人β防御素-2(HBD2)基因转染小鼠纤维母细胞L929的可行性及检测目的基因表达产物的生物活性。方法构建重组质粒pCMV-hBD2,通过O-CHCS介导转染于L929细胞,提取转染细胞总RNA,用RT-PCR检测HBD2基因转录水平;收集转染细胞培养上清液,用Westernblotting检测HBD2基因蛋白的表达;用Kirby-Bauer纸片法检测HBD2抗菌活性,同时以Lipofect脂质体转染试剂作为阳性对照。结果经过O-CHCS介导转染的L929细胞,目的基因HBD2在转录水平和蛋白水平均有表达,转染细胞上清液对金黄色葡萄球菌有抑菌圈形成,结果同Lipofect的转染效果基本一致。结论成功构建了真核表达载体pCMV-hBD2,证实了O-CHCS可以作为基因载体用于目的基因HBD2的转染,且目的基因表达产物具有生物活性,为基因工程合成HBD2提供一条经济便捷的途径。     

敲除EZH2抑制人宫颈癌细胞系迁移和侵袭

目的 研究zeste基因同源蛋白2(EZH2)对人宫颈癌细胞系迁移和侵袭的影响,并初步探讨其作用机制.方法 利用CRISPR/Cas9敲除人宫颈癌HeLa和人子宫颈鳞癌SiHa细胞系中EZH2的表达.划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞体外迁移和侵袭;实时荧光定量PCR检测STAT3 mRNA水平;W...     

基于高频交流电刺激的神经传导阻断的动物实验研究

目的：面肌痉挛虽不危及生命，但可以对患者造成心理负担，严重影响患者正常的工作和生活。高频电刺激可以有效阻断运动神经的神经冲动，从而终止相应的神经功能。本研究通过利用动物在体神经进行实验的方法研究高频信号阻断神经传导的效应，为高频电刺激治疗面肌痉挛提供更多的信息。方法：采用Wistar大鼠在体坐骨神经进行实验，对神经施加高频阻断刺激信号，通过记录并观察神经所支配肌肉的肌电信号及其肌肉状态来确定阻断效果．研究高频交流电信号对周围神经传导阻断的作用。结果：当对神经给予高频阻断刺激信号时，神经出现传导阻断的现象，且阻断现象发生于某一频段，完全阻断则只是发生于其中更小的频率范围，而继续增大频率或幅值，则可能会出现部分阻断、强直甚至不阻断现象。结论：本动物实验研究为将来高频电刺激治疗面肌痉挛的临床应用的实现提供更多信息。