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人肝癌多药耐药细胞株survivin蛋白的表达及意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨人肝癌多药耐药细胞株survivin蛋白表达与肝癌细胞多药耐药的关系.方法用阿霉素(DOX)浓度梯度递增导法,建立人肝癌多药耐药细胞株(Bel-7402/DOX).用流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡率,同时用蛋白印迹(Western blot)检测其survivin蛋白表达.结果随着培养液中 DOX 浓度的增加Bel-7402/DOX 的凋亡率逐渐增加,survivin蛋白的表达逐渐增强.结论Survivin蛋白的表达变化可能与人肝癌细胞获得性耐药有关. 相似文献
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目的:研究促红细胞生成素(EPO)对体外培养的间充质干细胞(MSC)衰老的影响。方法:全骨髓细胞贴壁法培养大鼠间充质干细胞(MSC),EPO 1U/mL处理后,RT-PCR检测衰老相关基因OCT4、Nanog、SOX2 mRNA表达,30代后检测β-半乳糖苷酶活性,另设空白对照组。结果:随MSC增殖,对照组β-半乳糖苷酶活性较EPO组明显增高,群体倍增时间较EPO组长,EPO组OCT4、Nanog、SOX2 mRNA表达在一定时间内上调。结论:在长期培养过程中,促红细胞生成素能维持间充质干细胞未分化潜能,延缓衰老。 相似文献
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目的 观察抗血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体bevacizumab(商品名Avastin)对氯化钴(CoCl2)诱导的缺氧Mller细胞水通道蛋白4(AQP4)表达的影响,探讨bevacizumab在治疗视网膜水肿中的作用机制.方法 采用酶消化法培养人视网膜Müller细胞,通过电子显微镜、细胞免疫荧光染色进行Müller细胞的鉴定.采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同浓度的CoCl2和VEGF作用不同时间后Müller细胞AQP4和VEGF mRNA的表达.观察200 μg/ml bevacizumab预处理对CoCl2诱导的缺氧人视网膜Müller细胞AQP4 mRNA表达的影响.结果 细胞免疫荧光染色显示,所培养的细胞95%表达波形蛋白、谷氨酰胺合成酶、α平滑肌肌动蛋白和胶质纤维酸性蛋白;电子显微镜下可见特征性的8~10 nm的微丝.证实培养的细胞为Müller细胞.RT-PCR结果显示,CoCl2上调Mller细胞AQP4和VEGF mRNA表达水平,AQP4和VEGF mRNA表达随CoCl2作用时间延长和CoCl2浓度增加的变化趋势均呈成正相关(r=0.952、0.954,P<0.05).VEGF可上调Müller细胞上AQP4 mRNA的表达(F=12.43,P<0.05).bevacizumab可抑制CoCl2诱导的Müller细胞AQP4 mRNA表达的上调(F=2 370.37,P<0.05).结论 bevacizumab可以下调CoCl2诱导的Müller细胞AQP4的表达.这一效应可能是通过抑制VEGF对AQP4的诱导作用所发挥的,推测这是bevacizumab治疗视网膜水肿的机制之一. 相似文献
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抑制MDR1基因表达shRNA RNAi系统的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
目的构建抑制多药耐药基因(MDR1)表达的短发夹RNA(sh RNA)真核表达载体系统.方法根据MDR1基因已知序列,设计两段21个碱基的MDR1特异性靶序列,合成两对62nt 并含有编码shRNA序列的寡核苷酸,双链退火后,克隆到经过BamH I和Xba I双酶切后线性 PG E-1载体的U6启动子下游,重组构建RNA干扰(RNAi)质粒.结果对重新构建的pshRNA-MDR1载体经P CR扩增后行电泳分析,并对含有插入基因片段行测序分析.结果表明,62个碱基均成功插入到预计位点,并且序列完全一致.结论载体的成功构建为研究其对MDR1 基因表达的抑制作用打下基础,同时使我们发展了在体内合成siRNA的方法. 相似文献
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肿瘤疫苗对小鼠肝癌作用的研究 总被引:3,自引:1,他引:2
目的 :通过动物实验评价肿瘤疫苗对肝癌的防治作用 ,为临床应用提供实验依据。方法 :用小鼠肝癌细胞系MM45T .Li经过化学修饰制成肿瘤疫苗免疫小鼠 ,然后再用该细胞系接种于小鼠腋下。分别观察免疫鼠及未免疫小鼠的肿瘤生长情况 ,进行病理学检查 ;并用3H -TdR释放法检测小鼠脾细胞对MM45T .Li细胞的杀伤能力差异。结果 :①经肿瘤疫苗免疫的小鼠的肿瘤生长速度明显低于未免疫小鼠 ;②病理学检查发现免疫鼠肿瘤组织内大量淋巴细胞浸润 ,未免疫鼠内罕见淋巴细胞浸润 ;③3H -TdR释放实验显示免疫鼠脾细胞对MM45T .Li细胞的杀伤能力明显高于未免疫鼠。结论 :按我们现行方法制备的肿瘤疫苗能激活小鼠抗肝癌的免疫反应 ,抑制肝癌的生长 ,但完全保护作用尚不明确 相似文献
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目的开发一种快速、准确判断酸碱平衡紊乱类型的软件,以指导临床处理酸碱紊乱.方法参考国内外文献,采用改进后的方法判断酸碱失衡以及代偿预计值计算公式为基础,建立数学模型,用Visual Basic6.0编写全部程序.输入动脉血气及血清电解质检测数据,而不需要其他临床信息,本软件能自动判断酸碱失衡的类型.结果应用本软件对278例次酸碱平衡紊乱进行分析,对132例单纯型、97例二重混合型、49例三重混合型酸碱平衡紊乱使用本软件判断,准确率99.3%;而人工判断准确率为85.6%(P<0.001).结论本软件界面简洁,操作方便,结果准确可靠,分析时间短,在临床有较大的实际应用价值.此判断方法较简便,准确率较高,值得临床推广应用.具有自动分析处理结果、储存查询统计检验的数据、打印结果等多项功能. 相似文献
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载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌耐药细胞MDR1表达的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 :构建含多药耐药基因MDR1的短发夹状RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)表达质粒 ,观察对肝癌耐药细胞Bel 740 2 /R的MDR1mRNA的抑制作用。方法 :利用分子克隆技术 ,将含MDR1的双链DNA ,与经双酶切后的载体PGE 1连接 ,构建pshRNA MDR1重组质粒 ,在脂质体的介导下转染肝癌耐药细胞株Bel 740 2 /R ;RT PCR分析MDR1mRNA的表达 ,MTT法检测细胞对药物的敏感性 ,流式细胞仪检测细胞内罗丹明 12 3 (Rh12 3 )的潴留和P gp的表达。结果 :PCR和DNA测序证实了表达质粒构建成功 ,并能明显地抑制MDR1mRNA的表达 ;对盐酸表柔比星和顺铂的半数抑制浓度IC50明显降低 ,P <0 0 5 ;P gp的表达阳性率降低了 5 7 3 % ;细胞内Rh12 3的浓度显著增高 ,P <0 0 5。结论 :构建的pshRNA MDR1表达质粒能有效地降低肝癌耐药细胞MDR1mRNA和P gp的表达。 相似文献
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MDR1基因稳定表达的人肝癌多药耐药细胞株的建立 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 建立多药耐药基因(MDR1)稳定表达的人肝癌Bel-7402耐药细胞株,为应用RNA干扰技术逆转肿瘤多药耐药基因的表达提供实验模型。方法 应用阿霉素(ADM)长期培养筛选建立Bel-7402耐药细胞株,应用MTT法、流式细胞仪(FCM)及逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)对该细胞株相关特性(耐药范围、致死剂量、p-糖蛋白功能及其表达阳性率、MDR1基因检测)进行比较研究。结果 经MTT法检测,耐药细胞株耐药性明显增高,FCM检查发现从敏感细胞到耐药细胞,其阿霉素潴留功能由77.7%降至25.1%,P-糖蛋白(P—gp)阳性率由1.4%升高至54.0%,RT-PCR检查显示该细胞中MDR1 mRNA呈高表达。结论 成功建立了稳定表达MDR1基因的人肝癌Bel-7402耐药细胞株,该细胞中P—gp呈高表达,稳定性好。 相似文献
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目的:重组构建抑制多药耐药MDR1基因表达的shRNA真核表达载体,研究其对肝癌耐药细胞MDR1基因表达的抑制作用,以及对P-糖蛋白(P-gp)表达和功能的抑制作用.方法:根据MDR1基因序列,设计两段21个碱基的MDR1特异性靶序列作为shRNA目标序列(sh-MDR1-1,sh-MDR1-2),重组构建psh-MDR1表达质粒.采用脂质体介导转染肝癌耐药细胞SMMC-7721/R,用MTT法测定细胞对化疗药物阿霉素(ADM)的敏感性,流式细胞仪检测细胞膜表面P-糖蛋白(P-gp)表达和细胞内Rhdaming123(Rh123)的潴留.结果:PCR和DNA测序证实了psh-MDR1-1和psh-MDR1-2重组质粒的成功构建,均能有效地抑制细胞P-gp表达;转染细胞后均能够一定程度地恢复耐药细胞对化疗药物ADM敏感性,P-gp表达水平明显降低,细胞内的Rh123稳态积累量均明显增高;第1条序列更能有效的抑制MDR1基因表达.结论:体外完成shRNA RNAi载体的构建,能有效地逆转肝癌耐药细胞MDR1基因过度表达,抑制P-gp介导的多药耐药.从DNA载体产生的shRNA在肝癌耐药细胞内能诱导RNAi,能够序列特异性地抑制MDR1基因表达. 相似文献
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目的:观察CD3AK(抗CD3单克隆抗体)的活化及对肿瘤细胞的杀伤活性。方法:以不同的肿瘤细胞为靶细胞,以人外周血淋巴细胞为效应细胞,在体外用不同浓度的抗CD3单克隆抗体和/或IL-2进行激活,用MTT法观察细胞毒杀伤作用。结果:CD3AK的扩增率较LAK高一个数量级,且对不同的肿瘤细胞均有杀伤作用。其18h杀伤均大于4h。结论:由于CD3AK较LAK对IL-2的需要量少,扩增率高,而比LAK更有临床应用发展前景。 相似文献