LncRNA ZFAS1靶向微小RNA?150?5p对胃癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA ZNFX1反义RNA 1(ZFAS1)靶向调控微小RNA-150-5p(miR-150-5p)表达及对胃癌细胞侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测正常胃黏膜上皮细胞GES-1及不同胃癌细胞(SGC-7901、HGC-27、MGC-803和BGC-823)的ZFAS1水平。脂质体法向BGC-823细胞转染针对ZFAS1的小干扰RNA片段si-ZFAS1(干扰组)或无关序列si-NC(NC组)并设未转染的细胞为对照组。QPCR、MTT法、Transwell小室实验和划痕实验测定BGC-823细胞的ZFAS1水平、增殖、侵袭和迁移能力的变化,QPCR和Western blotting检测Bcl-2和基质金属蛋白酶(MMP)-9的水平;双荧光素酶报告基因实验验证ZFAS1对miR-150-5p的靶向调控作用。结果胃癌细胞的ZFAS1水平均高于GES-1细胞(P<0.05),后续干扰实验选取ZFAS1水平最高的BGC-823细胞。干扰组的ZFAS1水平为0.269±0.074,低于对照组的1.171±0.263和NC组的1.088±0.142(P<0.05)。与NC组和对照组相比,干扰组BGC-823细胞的增殖活力下降(P<0.05);干扰组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为(51.509±5.348)%和(145.662±12.328)个,低于NC组的(82.317±7.459)%和(341.342±21.814)个及对照组的(80.770±6.163)%和(339.234±17.255)个(P<0.05);干扰组的Bcl-2和MMP-9水平均低于其余两组(P<0.05)。对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。miR-150-5p模拟物能够抑制含有其结合位点的ZFAS1野生型质粒的荧光素酶活性(P<0.05),不影响ZFAS1突变型质粒的荧光素酶活性(P>0.05)。结论ZFAS1在胃癌细胞中高表达,下调其水平可抑制BGC-823细胞的增殖和迁移侵袭能力并发挥类似癌基因的作用,可能与靶向调控miR-150-5p有关,在胃癌靶向治疗中有一定应用前景。     

微小RNA?148a靶向调控S1PR1及对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-148a(miR-148a)靶向调控鞘氨醇-1-磷酸受体1(S1PR1)及对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测32例上皮性卵巢癌组织和25例正常卵巢组织及卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢上皮癌细胞(A2780、SKOV3、OVCAR3和HO-8910)的miR-148a水平,Kaplan-Meier plotter在线生存分析miR-148a水平与485例卵巢癌预后的关系;采用脂质体向SKOV3细胞进行转染,根据转染物分为过表达组(转染miR-148a模拟物)、阴性对照(NC)组(转染无关序列)和对照组(未转染),采用QPCR检测miR-148a、S1PR1及凋亡相关因子Bcl-2、Bax和caspase-3的水平,荧光素酶报告基因系统验证两者的靶向关系,活细胞计数(CCK)-8法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术和caspase-3比色分析法检测增殖活力、凋亡率和caspase-3活性。结果QPCR结果显示与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织的miR-148a水平降低(P<0.05);卵巢癌细胞的miR-148a水平均低于IOSE80细胞(P<0.05),尤其是SKOV3细胞的最低。Kaplan-Meier Plotter在线分析显示337例高水平者的中位总生存期为49.43个月,优于148例低水平者的38.53个月(P<0.05)。与对照组和NC组相比,过表达组的miR-148a水平升高,而S1PR1水平降低(P<0.05);S1PR1野生型质粒和miR-148a模拟物共转染细胞的荧光素酶活性较其他共转染组合降低(P<0.05)。与对照组和NC组相比,过表达组的增殖活力和Bcl-2水平降低,而凋亡率和caspase-3活性以及Bax和caspase-3水平均升高(P<0.05)。结论miR-148a在卵巢癌组织和细胞中表达下调且发挥抑癌作用,可能通过靶向S1PR1来抑制SKOV3细胞的增殖并诱导凋亡,在卵巢癌防治中有一定应用前景。     

胆管癌组织的环状RNA circ?ITCH水平及临床意义

目的探讨胆管癌组织的环状RNA circ-ITCH水平及临床意义。方法收集本院2014年1月至2015年12月手术切除的95对胆管癌组织和癌旁组织,采用实时定量PCR(QPCR)检测上述组织的circ-ITCH水平,比较癌组织和癌旁组织的circ-ITCH水平差异,进一步分析circ-ITCH水平与胆管癌临床病理特征和预后的关系。结果胆管癌组织的circ-ITCH水平[中位数(四分位数)]为0.654(0.407~1.219),低于癌旁组织中的2.034(1.079~3.749),差异有统计学意义(P<0.05)。circ-ITCH水平与年龄、性别、吸烟、饮酒、HBV感染、肿瘤位置、分化程度和CEA水平无关(P>0.05),而与ECOG评分、T分期、N分期、TNM分期和CA199水平有关(P<0.05)。circ-ITCH高水平者的中位总生存期为35.0(95%CI:24.6~45.4)个月,长于低水平者的8.0(95%CI:7.3~28.7)个月(P<0.05);多因素分析显示circ-ITCH水平是影响胆管癌预后的独立因素(HR=0.535,95%CI:0.343~0.835,P=0.006)。结论胆管癌组织中circ-ITCH低表达,且与胆管癌患者的ECOG评分和临床分期有关,circ-ITCH低水平者的预后较差,在胆管癌诊断和预后预测上有一定价值。     

microRNA-506 在不同肿瘤中作用的研究进展*

microRNA- 506 是存在于X 染色体上的一种microRNA，通过对靶基因的转录后调控影响细胞增殖、凋亡、衰老、细胞周期、细胞分化、上皮- 间质转化、血管生成、侵袭和转移等多种生命过程。目前发现，microRNA- 506 在多种肿瘤的发生发展过程中发挥重要的作用，细胞学和动物实验也提示microRNA- 506 可以抑制一些肿瘤的发生发展，并促进某些化疗药物的疗效。但是，microRNA- 506 对不同的肿瘤发挥着不同的调节作用。本文对microRNA- 506 在不同肿瘤中的作用及其作用机制进行总结，旨在为特定肿瘤的治疗提供新的靶点。      

基因间长链非编码RNA152靶向微小RNA?103a?3p对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭迁移的影响

目的探讨基因间长链非编码RNA 152(LINC00152)靶向调控微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)表达及对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和侵袭迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞(ANIP-973、NCI-H157、A549和NCI-H1975)的LINC00152水平。选取LINC00152水平最高的细胞分别转染LINC00152特异性小干扰RNA(si-LINC00152组)或无关序列(si-NC组),另设未转染细胞为对照组。QPCR检测LINC00152水平,活细胞计数CCK-8法、Transwell小室和划痕实验测定细胞增殖、侵袭和迁移能力,Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的水平;荧光素酶报告实验验证LINC00152靶向结合miR-103a-3p的能力。结果NSCLC细胞的LINC00152水平均高于BEAS-2B细胞(P<0.05),尤其是NCI-H1975细胞的最高。si-LINC00152组的LINC00152水平为0.352±0.087,低于对照组的1.058±0.219和si-NC组的1.126±0.139(P<0.05)。与si-NC组和对照组相比,si-LINC00152组NCI-H1975细胞转染48、72 h的增殖活力下降(P<0.05);si-LINC00152组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(27.386±2.428)%和(78.840±5.031)个,低于si-NC组的(77.675±4.803)%和(179.208±13.264)个及对照组的(76.371±5.385)%和(174.003±15.678)个(P<0.05);与si-NC组和对照组相比,si-LINC00152组的MMP-2和MMP-9水平均降低,而PTEN水平升高(P<0.05)。对照组和si-NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告分析证实,miR-103a-3p模拟物降低了野生型LINC00152的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型无影响(P>0.05)。结论LINC00152在NSCLC细胞中高表达并发挥促癌作用,与NSCLC的迁移侵袭密切相关,LINC00152与miR-103a-3p间的相互作用在NSCLC靶向治疗中有一定潜能。     

Ezrin pAkt在肺癌组织中的表达及相关性研究*

目的:探讨肺癌组织中Ezrin 与pAkt 表达的临床病理学意义及二者相关关系。方法:采用免疫组化二步法检测75例肺癌及16例正常肺组织中Ezrin与pAkt 的表达,并分析两种蛋白表达与临床病理特征的关系以及二者的相关性。结果:1）Ezrin蛋白在肺癌组织中阳性表达率（77.3%）低于正常肺组织（100%）,二者比较差异具有统计学意义（χ2=4.460,P=0.036）;Ezrin蛋白表达水平与肺癌患者年龄、性别、吸烟史、原发肿瘤大小,病理类型、分化程度等均无关,与有无区域淋巴结转移及远处转移有关。2）pAkt 蛋白在正常肺组织中全部阴性表达,而在肺癌组织中阳性表达率为68.0% ,二者比较差异具有统计学意义（χ2=6.954,P=0.005）。 pAkt 蛋白表达水平与肺癌患者年龄、性别、吸烟史、原发肿瘤大小、病理类型、有无区域淋巴结转移及远处转移等无关与分化程度及肺癌分期有关。3）使用Spearman 相关分析显示Ezrin与pAkt 的表达无显著相关（r=-0.137,P=0.236）。 结论:Ezrin在肿瘤肺癌组织表达下调,在肺癌的侵袭转移过程中可能发挥重要作用,有可能成为肿瘤治疗的良好靶点。pAkt 在肺癌组织表达上调,可能在肺癌晚期发挥更强的作用。Ezrin低表达的肿瘤,Ezrin可能通过pAkt 以外路径参与肿瘤的进展,也可能在pAkt 上游或间接通过pAkt 路径发挥作用。      

Endoglin基因沉默对卵巢癌微血管内皮细胞干扰效应的研究*

目的:构建Endoglin 基因siRNA的表达载体,转染至原代培养的卵巢癌微血管内皮细胞（ovarian carcinoma-derived microvascular endothelial cells,ODMECs）,并观察其对ODMECs 的干扰效应,为探讨使用siRNA 抗卵巢癌血管生成的可行性提供实验基础。方法:根据siRNA 表达载体的设计原则,设计并合成两个靶基因序列,寡核苷酸退火后插入到pGenesil-1 载体中,并对重组质粒进行测序鉴定,证实Endoglin 真核表达载体构建成功,插入片段测序结果与合成的寡核苷酸序列一致。将重组真核表达质粒pGenesil-ENG 1、pGenesil-ENG 2 采用脂质体法转染原代ODMECs 细胞,应用半定量RT-PCR 观察转染后48h 重组质粒对Endoglin mRNA 表达的影响;MTT 法检测转染后ODMECs 细胞增殖的变化;并且通过光镜观察转染pGenesil-ENG 1 后,对ODMECs 体外二维管腔样结构形成的影响。结果:将构建成功的Endoglin 基因siRNA 表达载体pGenesil-ENG 1 和pGenesil-ENG 2 转染至OD?MECs细胞,48h 后同阴性质粒pGenesil-H 和未转染组相比,二者均可引起靶基因表达水平的显著性下降。转染了pGenesil-ENG质粒的ODMECs ,其生长较未转染组和阴性质粒pGenesil-H 明显受到抑制（P<0.01）;此外,转染了pGenesil-ENG 1 质粒的ODMECs体外二维血管腔样结构的形成较对照组亦有明显减少（P<0.01）。 结论:成功构建了Endoglin 基因siRNA 表达载体,转染至ODMECs 后可下调Endoglin 在靶细胞中的表达,并且前者能够抑制ODMECs 的增殖和体外二维管腔样结构的形成。为进一步研究采用RAN干扰技术进行卵巢癌血管生成的治疗奠定了基础,同时也为抗卵巢癌血管生成的治疗摸索了有效的基因靶点。      

胃癌根治术前患者C 反应蛋白⁃白蛋白比对早期 复发的预测价值

目的探讨胃癌根治术前患者C反应蛋白‑白蛋白比例（CAR）对早期复发的预测价值。方法回顾分析2016年5月 至2018年5月在海南省肿瘤医院接受胃癌根治术的Ⅱ~Ⅲ期患者共160例。根据随访2年内是否复发,分为复发组（n=26）和无 复发组（n=134）。比较复发组患者和无复发组患者的病历资料和相关血液学指标;系统性免疫炎症指标（systemic immune-inflammatory index,SII）、中性粒细胞-淋巴细胞比（neutrophil-lymphocyte ratio,NLR）、血小板-淋巴结细胞比（platelet-lymphocyte ratio,PLR）及C反应蛋白-白蛋白比（C-reactive protein-albumin ratio,CAR）对预测早期复发的效能。结果两组患者病例资料 比较,复发组的肿瘤大小（t =-2.326,P =0.021）、淋巴脉管侵袭率（χ2=6.674,P =0.010）及淋巴结转移（χ2=6.17.617,P <0.001）显著 高于无复发组。但两组患者的年龄、体质指数（BMI）、性别、手术方式、消化道重建方式和病理类型等差异无统计学意义（P > 0.05）。两组患者术前血液学指标比较,复发组系统性免疫炎症指标SII（t =-2.951,P =0.004）、NLR（t =-2.245,P =0.026）、PLR（t= -2.885,P =0.004）和CAR（t =-3.960,P <0.001）均显著高于无复发组。CAR预测术后早期复发的AUC为0.719（95%CI: 0.620~ 0.817）,当CAR临界值设为0.142时,特异度为0.690,灵敏度0.962。结论胃癌患者术前CAR能够有效地预测胃癌根治术后 早期复发的风险。     

介于弥漫大B 细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤之间的未分类淋巴瘤

目的:分析介于弥漫大B 细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤之间的未分类的B 细胞淋巴瘤（B-cell lymphoma ,unclassifiable,with features intermediate between DLBCL and Burkitt lymphoma,DLBCL/BL）的临床特点、治疗与预后,增加对该病的认识。方法:收集郑州大学第一附属医院2013年1 月至2014年12月收治的13例DLBCL/BL患者临床病理资料,采用Kaplan-Meier 法进行生存分析,采用Logrank 检验对临床分期、年龄、LDH 水平、IPI 评分、初治化疗方案等进行单因素分析。结果:13例患者中12例存在结外侵犯,13例患者的中位OS为10个月,中位PFS 为6 个月。单因素分析显示IPI 评分、LDH 水平与预后有统计学相关性,行CHOP、CHOP 样与高强度化疗方案患者之间生存差异具有统计学意义（P = 0.054）。 结论:DLBCL/BL恶性程度高,生存期短,结外侵犯多见,对CHOP 及CHOP 样方案治疗反应差,高强度化疗可能改善预后,IPI 评分≥ 3 分及 LDH 升高是其不良预后因素。      

Twist 和Snail 在滑膜肉瘤中的表达*

目的:检测上皮- 间充质转换的转录因子Twist和Snail在滑膜肉瘤组织中的表达,分析二者之间关系及其对滑膜肉瘤远处转移的影响,并探讨其预后意义。方法:通过组织病理学观察和免疫组织化学染色,检测133 例滑膜肉瘤组织标本中Twist和Snail的表达情况,应用统计学软件SPSS13.0 分析二者的不同表达与各临床病理参数特点的关系,并作Kaplan Meier生存分析。结果:Twist和Snail在滑膜肉瘤组织中表达部位为细胞质和/或细胞核,133 例组织标本中Twist高表达者55例（55/133）且与组织学分型、临床分期以及融合基因类型有关（P<0.05）;Snail高表达者82例（82/133）,与组织学分型有关（P<0.05）。 二者的表达与不同性别、年龄、肿瘤大小、部位、组织学分级等无关（P>0.05）。 Twist和Snail在滑膜肉瘤组织中的表达存在正相关（r s=0.191,P=0.027）,Log-Rank test 显示Twist高表达组,患者总生存期和无转移生存期明显低于低表达组,差异有统计学意义（χ2=8.620,P=0.03和χ2=11.462,P=0.001）;Snail高表达组,患者无转移生存期明显低于其弱表达者,差异有统计学意义（χ2=4.575,P=0.032）,但两组的总生存期差异无统计学意义（χ2=0.602,P=0.438）;且二者联合表达组患者总生存期和无转移生存期明显低于其弱表达组,差异有统计学意义（χ2=13.619,P=0.003 和χ2=15.548,P=0.001）。 结论:滑膜肉瘤组织中存在EMT 的主要转录因子Twist和Snail的高表达,二者可独立诱导EMT ,且二者的联合表达更加促进肿瘤转移的发生,提示患者预后不良。