低水平铅暴露损伤小鼠糖耐量及视网膜血管渗透性促进糖尿病视网膜病变发生

目的： 研究低水平铅暴露对于小鼠糖耐量与视网膜血管渗透性的影响，探讨铅对糖尿病视网膜血管病变的作用。方法： 用去离子水分别配制含0（对照组）、10、100、500 mg/L醋酸铅的饮用水，48只母代小鼠摄入含醋酸铅的饮用水染毒。子代小鼠继续按母鼠相同的剂量喂饲含醋酸铅的饮用水染毒，8周龄时每个染毒剂量均分为两组，每组12只，均雌雄各半。8周组在此时收集样品，利用石墨炉火焰原子吸收法检测血铅，小鼠腹腔葡萄糖耐量试验检测糖耐量水平，眼底静脉荧光造影与小动物视网膜眼底成像技术检测眼底血管渗透性，实时荧光定量聚合酶链式反应检测视网膜血管紧密连接相关分子转录水平改变；20周组继续用醋酸铅饮用水喂养至20周龄检测上述指标。结果： 子代小鼠血铅浓度随着醋酸铅浓度的增加而升高（r_8周组=0.887，r_20周组=0.972，P均 < 0.05）。在100 mg/L剂量以下，染毒8周组小鼠的血铅浓度高于染毒20周组（P < 0.05）；在500 mg/L剂量下，染毒8周组小鼠的血铅浓度低于染毒20周组（P < 0.01）。与对照组小鼠相比，各浓度醋酸铅染毒后的子代小鼠腹腔注射葡萄糖后2 h内血糖高于对照组小鼠，血糖随时间变化的曲线下面积积分高于对照组小鼠（P < 0.05或P < 0.01）。在染毒8周组，小鼠血糖及AUC在10 mg/L醋酸铅染毒时与对照组差异最明显，而在染毒20周组小鼠在100 mg/L醋酸铅染毒时与对照组差异最明显。在染毒8周组，小鼠未出现血管渗漏表现；与对照组小鼠相比，醋酸铅染毒小鼠在分子水平出现紧密连接相关分子ZO-1，Occludin，Claudin-1、3、5等的mRNA转录水平先升高后抑制表现（P < 0.05或P < 0.01）；在染毒20周组，100和500 mg/L醋酸铅暴露条件下，小鼠视网膜血管出现渗漏；与对照组小鼠相比，醋酸铅染毒小鼠在分子水平出现紧密连接相关分子ZO-1，Occludin，Claudin-1、3、5等的mRNA转录受到抑制（P < 0.01）。结论： 铅暴露可以导致小鼠糖耐量试验中血糖升高，早期敏感剂量更低；持续性的铅暴露直接导致了视网膜血管渗漏，铅暴露可能是糖尿病视网膜血管病变等疾病的潜在危险因子。     

低水平铅暴露损伤小鼠糖耐量及视网膜血管渗透性促进糖尿病视网膜病变发生

目的： 研究低水平铅暴露对于小鼠糖耐量与视网膜血管渗透性的影响，探讨铅对糖尿病视网膜血管病变的作用。方法： 用去离子水分别配制含0（对照组）、10、100、500 mg/L醋酸铅的饮用水，48只母代小鼠摄入含醋酸铅的饮用水染毒。子代小鼠继续按母鼠相同的剂量喂饲含醋酸铅的饮用水染毒，8周龄时每个染毒剂量均分为两组，每组12只，均雌雄各半。8周组在此时收集样品，利用石墨炉火焰原子吸收法检测血铅，小鼠腹腔葡萄糖耐量试验检测糖耐量水平，眼底静脉荧光造影与小动物视网膜眼底成像技术检测眼底血管渗透性，实时荧光定量聚合酶链式反应检测视网膜血管紧密连接相关分子转录水平改变；20周组继续用醋酸铅饮用水喂养至20周龄检测上述指标。结果： 子代小鼠血铅浓度随着醋酸铅浓度的增加而升高（r_8周组=0.887，r_20周组=0.972，P均 < 0.05）。在100 mg/L剂量以下，染毒8周组小鼠的血铅浓度高于染毒20周组（P < 0.05）；在500 mg/L剂量下，染毒8周组小鼠的血铅浓度低于染毒20周组（P < 0.01）。与对照组小鼠相比，各浓度醋酸铅染毒后的子代小鼠腹腔注射葡萄糖后2 h内血糖高于对照组小鼠，血糖随时间变化的曲线下面积积分高于对照组小鼠（P < 0.05或P < 0.01）。在染毒8周组，小鼠血糖及AUC在10 mg/L醋酸铅染毒时与对照组差异最明显，而在染毒20周组小鼠在100 mg/L醋酸铅染毒时与对照组差异最明显。在染毒8周组，小鼠未出现血管渗漏表现；与对照组小鼠相比，醋酸铅染毒小鼠在分子水平出现紧密连接相关分子ZO-1，Occludin，Claudin-1、3、5等的mRNA转录水平先升高后抑制表现（P < 0.05或P < 0.01）；在染毒20周组，100和500 mg/L醋酸铅暴露条件下，小鼠视网膜血管出现渗漏；与对照组小鼠相比，醋酸铅染毒小鼠在分子水平出现紧密连接相关分子ZO-1，Occludin，Claudin-1、3、5等的mRNA转录受到抑制（P < 0.01）。结论： 铅暴露可以导致小鼠糖耐量试验中血糖升高，早期敏感剂量更低；持续性的铅暴露直接导致了视网膜血管渗漏，铅暴露可能是糖尿病视网膜血管病变等疾病的潜在危险因子。     

PM2.5中不同组分对人脐静脉内皮细胞的联合毒性作用研究

目的：探讨PM_2.5中各种组分单独以及联合暴露对于人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的毒性作用,并探讨不同组分之间是否存在交互作用。方法：以永生化的HUVECs细胞为研究对象,分别给予0、5、10、20、40、80、160 μg/mL纳米炭黑颗粒（下称炭黑）,0、2.5、5、10、20、40、80、160 μg/mL尘土颗粒（下称尘土）,0、6.25、12.5、25、50、100、200、400 μmol/L醋酸铅,0、5、10、20、40、80、160 μmol/L亚砷酸钠和氯化镉,染毒24 h,采用CCK-8法测定不同受试物对细胞存活率的影响,并计算不同受试物对HUVECs细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）。然后进行联合染毒实验,选用细胞存活率为80%时的剂量,炭黑（或尘土）分别与铅、砷、镉对HUVECs进行联合染毒24 h,用CCK-8测定细胞存活率;另外根据PM_2.5中各组分实际占比,按m_铅：m_{炭黑/尘土}=1：50,m_砷：m_{炭黑/尘土}=1：100,m_镉：m_{炭黑/尘土}=1：500的比例进行两两联合染毒,以及按m_铅：m_砷：m_镉：m_{炭黑/尘土}=10：5：1：500的比例进行四者联合染毒。染毒24 h后,用CCK-8法测定细胞存活率。结果：HUVEC细胞存活率随着炭黑、尘土、醋酸铅、亚砷酸钠、氯化镉染毒浓度的增加而下降（P<0.05）,以上各受试物对HUVECs细胞的IC₅₀分别为16 μg/mL、110 μg/mL、184 μmol/L、15 μmol/L、14 μmol/L。炭黑与醋酸铅、亚砷酸钠、氯化镉联合染毒时,细胞存活率比炭黑单独染毒时分别下降了17.8%、43.8%、41.2%;尘土与醋酸铅、亚砷酸钠、氯化镉联合染毒时,细胞存活率比尘土单独染毒时分别下降了11.6%、27.8%、28.3%。联合染毒时细胞存活率比单独染毒时明显下降（P<0.05）。炭黑与亚砷酸钠、炭黑与氯化镉之间存在交互作用（均为P<0.05）。结论：PM_2.5中不同组分均可以对血管内皮细胞产生毒性作用,单独暴露时炭黑的细胞毒性作用比尘土大;但与3种金属联合暴露时,尘土比炭黑的联合暴露细胞毒性更大。铅、砷、镉对细胞的毒性作用大小排序为氯化镉>亚砷酸钠>醋酸铅,且炭黑颗粒与亚砷酸钠、炭黑颗粒与氯化镉之间存在交互作用,表现为协同作用。     

白藜芦醇对人结肠细胞NCM460和SW620增殖及基因组不稳定性的影响

目的：探讨白藜芦醇（RSV）对人结肠上皮细胞株NCM460及结肠癌细胞株SW620增殖和基因组不稳定性（GIN）的影响。方法：选用NCM460和SW620细胞为研究材料,以台盼兰拒染法检测不同浓度RSV（3.125、6.25、12.5、25、50、100 μmol/L）对细胞增殖的影响;以CBMN-Cyt和集落形成实验分别检测不同浓度RSV（25、100 μmol/L）对GIN和细胞集落形成能力的影响。结果：与对照组相比,6.25~100 μmol/L的RSV对SW620细胞的增殖具有明显的抑制作用（P < 0.05）,100 μmol/L的RSV处理后细胞凋亡率增加、GIN上升、细胞集落形成能力降低（P < 0.05或0.01）;同时,相同浓度的RSV可以降低NCM460细胞的GIN,促进细胞分裂并增强细胞集落形成能力（P均 < 0.05）。结论：RSV可维护正常细胞结肠上皮细胞NCM460的基因组稳定性,同时显著提高结肠癌细胞SW620的GIN发生率,可能是其在结肠癌治疗中表现出较好的抗癌效应及正常细胞保护作用的分子基础。     

大豆异黄酮对阿特拉津损伤SH-SY5Y细胞的保护作用及其机制

目的：比较大豆异黄酮、槲皮素、茶多酚、姜黄素和白藜芦醇5种植物化合物对阿特拉津（ATR）损伤神经元的保护作用及分子机制。方法：体外培养SH-SY5Y细胞,分别加入浓度为5、10、20、50、100 μmol/L的5种植物化合物,24 h后,加入250 μmol/L ATR,继续培养24 h后,CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FTTC/PI双染检测细胞凋亡情况,DCFH-DA探针检测活性氧（ROS）水平,Western blot检测酪氨酸氢化酶（TH）蛋白表达量,并用SPSSS 20.0进行统计学分析。结果：5种植物化合物在低剂量范围内抗ATR损伤效果显著,剂量分别为大豆异黄酮5 μmol/L、白藜芦醇5 μmol/L、槲皮素50 μmol/L、姜黄素5 μmol/L、茶多酚20 μmol/L,与其他4种植物化合物相比,大豆异黄酮抗ATR损伤SH-SY5Y细胞效果显著,尤其在5 μmol/L,可显著降低ROS水平,增加TH蛋白的表达（P < 0.05）。结论：大豆异黄酮可能通过降低SH-SY5Y细胞内ROS水平,增加TH蛋白的表达,增加细胞活力,抑制细胞凋亡。     

HIF-1α高表达对苯代谢物诱导K562细胞毒性的影响

目的：研究缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）高表达对苯代谢物1,4-苯醌、氢醌、苯酚诱导K562细胞毒性的影响。方法：用不同浓度的1,4-苯醌（0、10、20、40、80 μmol/L）、氢醌（0、10、20、40、80 μmol/L）、苯酚（0、1、1.5、2、2.5、5 mmol/L）分别染毒对照组K562细胞及高表达HIF-1α的K562细胞24 h,MTT法检测细胞增殖情况,PI/FITC Annxein V双染结合流式细胞术检测细胞凋亡率,碘化丙啶结合流式细胞术检测细胞周期。结果：MTT实验结果显示,1,4-苯醌染毒后,两株细胞均出现增殖率下降且呈剂量效应关系,1,4-苯醌浓度为80 μmol/L时,高表达HIF-1α的K562细胞增殖率高于对照组K562细胞（P < 0.05）。氢醌和苯酚在较高浓度染毒后,对照组K562细胞亦出现增殖抑制,而高表达HIF-1α的K562细胞增殖无明显抑制。流式细胞术结果显示,1,4-苯醌染毒后,两株细胞的细胞凋亡率增加且呈剂量效应关系。20 μmol/L浓度1,4-苯醌染毒时,高表达HIF-1α的K562细胞较对照组K562细胞凋亡减弱（P < 0.05）。氢醌和苯酚染毒后,两株细胞的凋亡率与未染毒组比较,差异均无统计学意义（P均 > 0.05）,高表达HIF-1α的K562细胞的凋亡率较对照组K562细胞亦无显著差异。细胞周期检测结果显示,3种苯代谢物均可引起K562细胞周期阻滞在G0/G1期或S期。结论：3种苯的代谢物中,1,4-苯醌对K562细胞的毒性大于氢醌和苯酚,HIF-1α高表达可降低苯代谢物引起的细胞毒性,其作用的发挥可能是通过调节细胞增殖及凋亡而实现。     

Camk2b低表达对1,4-苯醌致K562细胞线粒体毒性的影响

目的：探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶2β（Camk2b）低表达对1,4-苯醌（1,4-BQ）致K562细胞线粒体毒性的影响,初步揭示Camk2b对于细胞抗氧化损伤的作用和意义。方法：检测在1,4-BQ染毒后K562细胞Camk2b mRNA的表达,选择Camk2b抑制剂KN93的适宜浓度,通过荧光定量PCR法和Western blot法验证Camk2b mRNA和蛋白表达,构建Camk2b低表达K562细胞。在0、10、20 μmol/L 1,4-BQ染毒后,通过细胞增殖实验、活性氧实验、ATP生成量实验、线粒体膜电位实验、钙离子检测实验及细胞凋亡实验,检测Camk2b低表达K562细胞和对照细胞的增殖、活性氧、ATP、线粒体膜电位、凋亡率的改变。结果：1,4-BQ染毒后K562细胞Camk2b mRNA的表达下降。与对照细胞相比,Camk2b低表达细胞ATP生成量降低,线粒体膜电位降低,钙离子浓度升高,凋亡率上升（P均 < 0.01）。1,4-BQ染毒后,与相同浓度1,4-BQ染毒对照细胞相比,Camk2b低表达细胞ROS水平升高,ATP生成量降低,线粒体膜电位降低,钙离子浓度升高,凋亡率上升（P均 < 0.05或0.01）。结论：1,4-BQ染毒后,K562细胞Camk2b mRNA的表达降低。与对照细胞相比,Camk2b低表达细胞在1,4-BQ染毒后出现更明显的线粒体损伤,Camk2b对于细胞的抗氧化损伤具有重要意义。     

G6PD缺陷对 1,4-苯醌致K562细胞DNA甲基化的影响及其机制

目的：研究G6PD缺陷对1,4-苯醌（1,4-BQ）致K562细胞DNA甲基化的影响及其机制。方法：分别采用10和20 μmol/L的1,4-BQ溶液对G6PD缺陷K562细胞和正常表达细胞进行染毒,以未染毒组为对照,各组均设置12、24、48 h共3个染毒时间,另在20 μmol/L 1,4-BQ染毒组细胞中加入1.5 mmol/L谷胱甘肽（GSH）进行干预。采用比色法检测全基因组DNA甲基化相对水平,qPCR法检测甲基转移酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA表达水平,Western blot法检测DNMT1、DNMT3a蛋白表达水平。结果：10和20 μmol/L 1,4-BQ染毒后的K562细胞全基因组DNA甲基化水平升高（P<0.05）,除20 μmol/L 1,4-BQ染毒48 h组外,其他各染毒组的G6PD缺陷K562细胞全基因组DNA甲基化水平均高于正常细胞（P<0.05）。在1,4-BQ染毒后,G6PD缺陷细胞的DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA水平以及DNMT1、DNMT3a蛋白表达水平均高于正常细胞（P<0.05）。加入GSH后,G6PD缺陷细胞和正常细胞的全基因组DNA甲基化相对水平、DNMTs mRNA及蛋白表达水平的差异的无统计学意义（P均>0.05）。结论：G6PD缺陷可能以抑制K562细胞GSH合成的方式增加氧化应激水平,最终导致细胞DNMTs生成的增多以及全基因组DNA甲基化程度的升高。     

苯并(a)芘染毒致人支气管上皮细胞的周期改变及BPDE-DNA加合物形成

目的:通过观察苯并(a)芘(BaP)染毒致人支气管上皮细胞16HBE细胞周期改变及BPDE-DNA加合物形成的情况,探讨DNA损伤与细胞周期阻滞之间的关系。方法:用不同浓度BaP(0、1、2、4、8、16、32 μmol/L)染毒16HBE细胞24 h,用16 μmol/L BaP染毒16HBE细胞不同时间(0、1、2、4、8、12、24 h)以检测BaP染毒16HBE细胞的剂量和时间效应。再根据上述结果选择16 μmol/L BaP染毒16HBE细胞4 h后,恢复不同时间(0、1、2、4、8、12、24 h),处理结束后采用流式细胞术检测细胞周期分布情况,酶联免疫法和荧光免疫组化法检测BPDE-DNA加合物表达。结果:与正常对照组相比,随着BaP染毒浓度和染毒时间的增加,S期细胞所占比例均增加(P<0.05或P<0.01)。16 μmol/L BaP染毒16HBE细胞4 h后,恢复早期(4~12 h)S期细胞所占比例与恢复0 h相比明显增加(P<0.05),恢复24 h时S期细胞所占比例(24.52%)与恢复0 h相比明显降低(P<0.01),而与正常对照组(26.41%)相比差异无统计学意义(P>0.05)。随着染毒浓度增加和染毒时间延长,16HBE细胞内BPDE-DNA加合物含量逐渐增加,与正常对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01),染毒后恢复1 h时BPDE-DNA加合物含量与恢复0 h组相比显著增加(P<0.01),而后随恢复时间延长逐渐下降。回归分析显示BaP染毒后细胞S期所占比例与BPDE-DNA加合物含量符合Cubic方程(R²=0.386,P=0.01)。结论:BaP染毒所致BPDE-DNA加合物的形成与S期阻滞密切相关。     

纳米镍对大鼠睾丸生精-支持共培养细胞的凋亡作用及机制研究

目的：研究纳米镍对大鼠睾丸生精-支持共培养细胞的作用及其相关机制。方法：以体外共培养的大鼠睾丸生精-支持共培养细胞为实验对象,分别加入不同浓度的纳米镍（0、25、50、100、200、400和800 μg/mL）染毒24 h后,采用MTT法检测细胞存活率,Hoechst33258染色法检测细胞凋亡形态及Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;lncRNA基因芯片检测细胞凋亡相关lncRNA的差异表达。结果：与对照组相比,不同浓度纳米镍染毒后,细胞存活率均降低（P < 0.01）,并呈剂量效应关系（P < 0.01）。Hoechst33258染色结果显示,与对照组比较,纳米镍染毒组细胞核或细胞质内显示出浓染致密的颗粒块状荧光及明显核形态变化。Annexin V/PI双染法流式检测结果显示,染毒浓度为25、50、100、200、400 μg/mL时,细胞凋亡率分别为8.80%±0.50%、11.00%±0.70%、12.53%±0.71%、15.95%±0.54%和17.80%±0.76%,各浓度组细胞凋亡率与对照组比较均明显增加（P < 0.01）,且呈浓度效应关系（P < 0.01）。LncRNA基因芯片检测结果显示,与凋亡相关的lncRNA共169个,其中,100 μg/mL纳米镍染毒组与对照组比较,上调的有117个,下调的有52个。结论：纳米镍能引起大鼠睾丸生精-支持共培养细胞凋亡,lncRNA可能在其中起重要作用。     

氯喹通过激活P38MAPK通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的：研究氯喹对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并初步研究其可能的机制。方法：体外培养HepG2细胞,采用MTT法检测不同浓度（0、10、20和40 μmol/L）氯喹作用不同时间（24、48和72 h）后对细胞增殖的影响;用DAPI染色观察氯喹处理细胞24 h后细胞核的变化;流式细胞术检测氯喹对HepG2细胞凋亡的影响;Western blot技术检测氯喹对HepG2细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax、P-P53、P38MAPK和P-P38MAPK蛋白表达的影响。结果：与对照组比较,在上述3个时间点10、20、40 μmol/L氯喹（10 μmol/L氯喹作用24 h组除外）对人肝癌HepG2细胞的增殖均有明显抑制作用（P均 < 0.05）;荧光显微镜下发现,10、20、40 μmol/L氯喹处理24 h后均可引起HepG2细胞不同程度的核浓集、固缩等典型凋亡形态变化;流式细胞术结果提示10、20、40 μmol/L氯喹能诱导HepG2细胞凋亡（P均 < 0.05）;Western blot结果显示20和40 μmol/L氯喹作用HepG2细胞后,P-P53、P-P38MAPK、剪切后活化型Caspase-3和Bax蛋白表达量增加（P均 < 0.05）,Bcl-2表达下降,Caspase-3和P38MAPK表达无明显变化（P > 0.05）。结论：氯喹能够抑制人肝癌HepG2细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与P38MAPK通路有关。     

普萘洛尔对小鼠血管瘤细胞体外增殖及凋亡的影响

  目的  通过β受体阻滞剂普萘洛尔作用于小鼠EOMA血管瘤细胞体外增殖及凋亡的实验研究, 初步探讨普萘洛尔治疗血管瘤的机制。  方法  体外培养EOMA细胞, 使用不同浓度普萘洛尔分别作用于EOMA细胞24、36、48 h, 应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率、吖啶橙染色检测细胞凋亡情况, 观察普萘洛尔对EOMA细胞体外增殖和凋亡的影响。  结果  作用24 h后, 随剂量增加, EOMA细胞存活率逐渐下降, 与对照组相比, 至药物浓度为75μmol/L时有显著差异(P < 0.05), 继续增加至800μmol/L时, 细胞存活率接近0, 同时吖啶橙染色示凋亡细胞逐渐增多, 与对照组相比, 至药物浓度75μmol/L时, 细胞凋亡率有显著差异(P < 0.05)。36 h组和48 h组变化趋势与24h组相似。  结论  普萘洛尔在体外可有效抑制小鼠EOMA血管瘤细胞的增殖并促进其凋亡, 这一作用呈现明显的剂量-时间效应依赖性。      

PD98059抑制MAPK/ERK信号通路对胃癌细胞生物学功能的影响

目的：研究MAPK/ERK信号通路中关键信号分子MEK和ERK在胃癌SGC-7901细胞中的表达及PD98059抑制MAPK/ERK通路对胃癌细胞生物学功能的影响。方法：体外培养胃癌细胞株SGC-7901,不同浓度（0、25、50、100、200、300和400 mmol/L）PD98059处理24 h后CCK-8法检测细胞增殖率变化;再用0、25、50和100 μmol/L PD98059处理24 h后采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测MEK和ERK mRNA的表达量;Western blot检测MEK和ERK蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化。同时设正常胃黏膜上皮GES-1细胞为对照。结果：与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比,胃癌SGC-7901细胞中MEK和ERK mRNA的表达升高,差异具有统计学意义（P < 0.05）;p-MEK、p-ERK蛋白的表达亦显著升高,差异具有统计学意义（P < 0.05）。0~200 μmol/L PD98059处理SGC-7901细胞后,细胞增殖率随着抑制剂浓度的升高而降低（P < 0.05）。当PD98059浓度处于200~400 μmol/L时抑制作用逐渐趋于平稳。0~100 μmol/L PD98059作用后MEK、ERK mRNA的表达量低于对照组（P < 0.05）,随着PD98059浓度升高,ERK mRNA表达量逐渐降低（P < 0.05）。Western blot检测结果显示50和100 μmol/L PD98059作用后p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达降低（P < 0.05）。且抑制剂PD98059使胃癌SGC-7901细胞发生G0/G1期阻滞,可诱导细胞凋亡。结论：MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞中激活,PD98059通过抑制MAPK/ERK信号通路的活性可影响胃癌细胞的生物学功能。     

34. Effect and the Possible Mediated Pathway of Cortisol Secretion in Adrenocortical Cells Induced by Lead and Cadmium in Vitro

Objective: To understand the direct effect on the secretion of adreno-cortical cells induced by lead and cadmium and the possible mediated pathway. Methods: The adrenocortical cells of male guinea pigs were dispersed and primarily cultured, then the cells were incubated wich cadmiun chloride and lead acetate in dosage as 0,6.25, 12.5, 25, 50, 100 μmol/L respectively for different periods (30, 60, 120 and 240 minutes). The cortisol levels in culture medium and cellular cAMP concentration were measured with RIA. Results: Under the existence of ACTH, the levels of cortisol secreted from the cultured cells were showed significantly declined in dose-dependent manner when the cells were treated in 6.25-100μmol/L CdCl2 for 30 to 240 minutes. There would be an interaction for cortisol secretion between the dose of CdCl2 and the incubatal period. Nevertheless, it seemed to have no obvious linear relation in the alterations of cortisol secretion after 12.5～100μmol/L PbAc incubated for 30～240 minutes. It appeared to have a tendency of dual-phase response in a manner of inhibiting the cortisol secretion in low dose (lower than 25μmol/L) and stimulating the secretion function in high dose (50 and 100μmol/L). The cAMP level was presented a remarkably decrease after 6.25～100 μmol/L CdCl2 incubated with the cells. It was proved that the cAMP level had does-effect relations with the CdCl2 dose. PbAc appeared not only dual response with the tendency of cAMP inhibition in low dose and activating to raise in high dose but also dose-effect relationship. Conclusion: CdCl2 could directly inhibit the secretion of cortisol. PbAc is also of the toxic effect on the cortisol secretion with the characteristic of dual-response as inhibition in early phase and low dose while induction to raising in high dose. cAMP, as an important second messenger, play a role in synthesis and secretion of adrenocorticoids. The toxic effects on steroids secretion induced by cadmium and lead were possibly mediated by cAMP-PKA pathway.     

脱水淫羊藿素维持人尿源性干细胞干性的作用研究

目的:探究脱水淫羊藿素(DICT)对人尿源性干细胞(hUSCs)干性的影响。方法:常温离心法体外分离培养hUSCs,倒置相差显微镜下进行hUSCs形态学观察;根据MTT实验绘制hUSCs接种后1~7 d的生长曲线;流式细胞术检测hUSCs表面标志物;分别设hUSCs培养基对照组,浓度为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0μmol/L的DICT处理组,利用四甲基噻唑蓝(MTT)实验检测作用1~7 d后各组的细胞活力;采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测2.0μmol/L DICT作用hUSCs 3 d后,对干性基因OCT-4、C-MYC mRNA表达的影响。结果:通过常温离心法成功获得形态良好、生长活性较高的hUSCs,hUSCs表达间充质干细胞表面标志物CD44和CD90,不表达造血干细胞表面标志物CD34和内皮细胞表面标志物CD31。2.0μmol/L DICT作用3~6 d能显著促进hUSCs的增殖,增强其生长活力(P<0.01),上调hUSCs干性基因OCT-4、C-MYC的mRNA表达(P<0.01)。结论:DICT在体外可增强hUSCs的干性。     

CDC42抑制剂CASIN对食管癌细胞活力与迁移能力的抑制作用

目的：研究细胞分裂周期蛋白42（CDC42）特异性抑制剂CASIN对食管癌细胞的活力、迁移能力,以及伪足形成的影响,并初步揭示其诱导细胞凋亡的分子作用机制。方法：根据CDC42蛋白表达情况将细胞分为4组,内源性CDC42高/低表达组和外源性CDC42高/低表达组。首先采用Western blot检测9种食管癌细胞系中内源性CDC42蛋白表达情况,接着选用CDC42内源性高表达和低表达食管癌细胞系各2种,采用细胞活力分析实验和划痕实验检测CDC42抑制剂CASIN对食管癌细胞活力和迁移能力的影响,Western blot检测CASIN对凋亡酶蛋白Caspase-3的表达及其底物蛋白PARP的裂解情况。然后将构建的Flag-CDC42和GFP-CDC42重组表达载体转染到食管癌细胞中,分成外源性CDC42低表达和高表达组,采用细胞活力分析实验和划痕实验检测CASIN对食管癌细胞活力和迁移能力的影响;免疫荧光实验检测CASIN对食管癌细胞伪足形成的影响。结果：与对照组（0 μmol/L的CASIN）比较,在内源性CDC42高/低表达的细胞组中,细胞活力分析和划痕实验发现,15~30 μmol/L的CASIN能明显抑制食管癌细胞的活力和迁移能力（P<0.05）;Western blot结果显示,CASIN能引起Caspase-3表达增加,裂解PARP增多,提示可能诱导了细胞凋亡的发生。与低表达CDC42的食管癌细胞对照组相比,外源性高表达CDC42的食管癌细胞在20 μmol/L CASIN作用时抑制程度显著增强（P<0.05）;免疫荧光实验结果显示CASIN对CDC42促进细胞的伪足形成具有抑制作用。结论：CASIN能使食管癌细胞活力和迁移能力明显下降,抑制细胞伪足形成,同时还可能诱导细胞发生凋亡。因此,CASIN有望被开发为一种新型的抗食管癌分子靶向药物。     

125I粒子联合AZD1152对三阴性乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究¹²⁵I粒子联合Aurora激酶抑制剂AZD1152对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响。方法：试验设对照组(常规培养)、¹²⁵I粒子照射组(照射组)、1 μmol/L AZD1152作用MDA-MB-231细胞48 h组(抑制组)、¹²⁵I粒子照射与1 μmol/L AZD1152联合作用MDA-MB-231细胞48 h组(联合组)。采用免疫荧光检测细胞多核形成;四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术PI单染检测细胞周期;流式细胞术Annexin V/PI双染观察各组细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞中Cyclin B1、组蛋白H3的表达及其磷酸化水平的改变,以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、PARP表达的变化。结果：免疫荧光检测发现1 μmol/L AZD1152作用MDA-MB-231细胞48 h时可见到多核细胞形成;MTT试验结果显示对照组、照射组、抑制组和联合组的细胞增殖抑制率分别为(0.61±0.32)%、(17.62±1.41)%、(29.67±0.41)%、(53.17±1.26)%;CCK-8检测显示细胞存活率分别为(94.88±0.22)%、(59.21±0.14)%、(42.05±0.17)%、(32.12±0.36)%;细胞周期检测发现G2/M期占比分别为(18.99±0.15)%、(38.05±0.23)%、(49.80±0.32)%、(75.52±0.45)%,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。照射组、抑制组和联合组的细胞凋亡率分别为(17.48±0.24)%、(29.23±0.02)%、(63.11±0.27)%,均较对照组(0.31±0.03)%升高(P<0.05)。流式细胞术发现抑制组细胞出现多核及多倍体细胞,易形成非整倍体。Western blot检测结果显示联合组较其他3组,抗凋亡蛋白Bcl-2、组蛋白H3的磷酸化和Cyclin B1蛋白表达减少(P<0.05),而促凋亡蛋白Bax和PARP蛋白剪切明显增加(P<0.05)。结论：¹²⁵I粒子对AZD1152有增敏作用,¹²⁵I联合AZD1152可显著抑制MDA-MB-231细胞组蛋白H3磷酸化及Cyclin B1水平,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO对氮芥诱导BEAS-2B细胞损伤的影响

目的: 探讨线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO对氮芥(HN2)诱导人支气管上皮细胞系BEAS-2B的影响。方法: BEAS-2B细胞分为正常对照组、Mito-TEMPO对照组、HN2染毒组和Mito-TEMPO干预组,其中正常对照组和Mito-TEMPO对照组分别给予含DMSO(体积分数为0.1%)和Mito-TEMPO(100μmol/L)的无血清培养基处理26 h,HN2染毒组给予含DMSO的无血清培养基预处理2 h,然后给予HN2(8μmol/L)染毒24 h,Mito-TEMPO干预组给予Mito-TEMPO(100μmol/L)预处理2 h,然后HN2(8μmol/L)和Mito-TEMPO(100μmol/L)共处理24 h。分别采用CCK-8法检测细胞活性,速率法检测细胞培养基上清乳酸脱氢酶(LDH)活性,倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V/PI探针法流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1探针法检测线粒体膜电位,紫外分光光度法检测细胞匀浆ATP含量,MitoSOX、DCFH-DA、DHE探针法分别检测细胞内线粒体ROS、H2O2及总ROS水平,实时荧光定量PCR检测炎症因子TNF-α、IL-6的mRNA表达水平。结果: 与HN2染毒组相比,Mito-TEMPO干预组细胞活性降低了约42.6%(P<0.05),细胞上清LDH水平显著增加(P<0.05),同时伴有异常形态细胞增多,Mito-TEMPO干预组细胞线粒体ROS水平降低了53.6%(P<0.05),细胞内H2O2水平及总ROS水平分别升高了171%和43.4%(均为P<0.05)。Mito-TEMPO干预对HN2染毒导致的细胞凋亡比例、线粒体膜电位、ATP含量、TNF-α、IL-6的mRNA表达水平等指标改变均无显著影响(P>0.05)。结论: 100μmol/L的Mito-TEMPO干预在HN2染毒BEAS-2B细胞模型中促进了细胞损伤,其机制可能与提高细胞内H₂O₂水平及总ROS水平有关。