在体阻断软骨下营养对关节软骨影响的实验研究

背景：关节软骨无血管分布,其营养来自关节液和软骨下骨,哪条营养通路对关节软骨更为重要是学者们争论的焦点。目的：研究软骨下营养对关节软骨的影响,并探讨软骨下营养与骨关节炎的关系。方法：45只5个月龄雄性新西兰大白兔,建立股骨滑车骨软骨缺损的动物模型,并随机分为3组：自体骨软骨块移植组（Control组,n=15）;假手术组（Sham组,n=15）,用环钻在股骨滑车钻取骨软骨块,将其置入管状PVC内,原位回植;阻断软骨下营养组（DNBM组,n=15）,取出骨软骨后,将其置入帽状PVC内,原位回植。术后4周、8周、12周,每组5只（10膝）,取出膝关节进行大体评分、组织学评分、软骨厚度测量、凋亡染色（TUNEL染色）。结果：与Control组相比,大体评分结果提示,DNBM组软骨无明显退变;组织学评分结果提示,术后12周时DNBM组软骨明显退变（P〈0.005）;软骨厚度测量结果提示,术后8周、12周时DNBM组软骨厚度明显变小（P=0.00）;TUNEL染色结果提示,术后8周、12周时DNBM组关节软骨细胞凋亡明显增加（P〈0.01）。结论：软骨下营养是软骨的重要营养来源,失去软骨下营养,软骨会逐渐发生退变。     

微骨折技术保护实验大鼠骨关节炎关节软骨的组织学研究

目的探讨微骨折技术对实验大鼠骨关节炎关节软骨的影响。方法以清洁级健康雌性SD大鼠为动物模型,分为Sham组、模型组和微骨折组。通过切除双侧卵巢并切断右侧膝交叉韧带建立大鼠骨关节炎模型,术后第4周开始用微骨折针刺软骨下骨区造成微骨折,模型组、Sham组以微骨折针刺入关节腔,分别于术后8和12周取材作光学显微镜、透射电子显微镜观察,采用OARSI法评价关节软骨病理改变。结果术后8和12周,模型组较Sham组OARSI评分差异有统计学意义(P0.01),微骨折组较模型组OARSI评分差异有统计学意义(P0.01)。结论软骨下骨微骨折技术能延缓实验大鼠骨关节炎关节软骨退变,对关节软骨具有一定保护作用。     

兔膝骨关节炎进程中软骨下骨血管生成的实验研究

目的 探讨兔膝骨关节炎发展进程中软骨下骨血管生成的时间依从性的变化,研究软骨下骨血管新生在OA发病机制中的作用.方法 30只新西兰大白兔随机分为前交叉韧带切除组（ACLT组）、对照组,每组15只.ACLT组右膝前交叉韧带切除造模,对照组不作任何处理.分别于术后4周、8周、12周取材.取兔膝关节标本进行大体观察,切片行组织学番红O染色及OARSI病理评分,评价软骨退变.行免疫组化VEGF染色,观察软骨下骨中血管生成情况,同时用Image Pro Plus 6.0图像分析软件进行骨软骨交界血管数量密度的计数检测.结果 ACLT组术后4周即可见软骨退变,8周和12周时退变进一步加重,番红O染色基质丢失、软骨变薄及裂隙生成、软骨下骨裸露.对照组无明显软骨退变,不同组关节软骨OARSI评分有统计学差异（F=440.828,P〈0.01）.切片免疫组化血管内皮生长因子（VEGF）染色示ACLT组阳性表达,ACLT组的血管入侵软骨数目明显高于对照组,且OA各时间点之间有统计学差异（F=72.733,P〈0.01）.结论软骨下骨的血管生成是OA的早期病变,OA中骨-软骨复合单元的血管增生与软骨退变相关.血管侵入软骨的数量密度与OA发展呈时间依从性增加变化.     

创伤后关节软骨中MMP-3的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-3(MMP-3)在创伤后关节软骨退变中的作用。方法手术建立单纯软骨缺损的动物模型,术后4周、8周对软骨退变进行大体评分,用免疫组织化学方法检测MMP-3在关节软骨中的表达。结果术后关节软骨发生退变,MMP-3在关节软骨中的表达与退变有关。结论MMP-3在创伤后软骨退变过程中发挥重要作用。     

仙灵骨葆延缓前交叉韧带切断后大鼠关节软骨退行性变的研究

目的 观察仙灵骨葆(xianlinggubao,XLGB)对前交叉韧带切断术(anterior cruciate ligament transection,ACLT)后骨关节炎大鼠模型膝关节软骨和软骨下骨的影响.方法 24只3月龄雌性SD大鼠按体重随机分为3组(n=8):假手术组(A组)、ACLT组(B组)和XLGB组(C组).B组和C组大鼠行右膝关节ACLT:A组同法打开关节腔暴露ACL后缝合.术后4 d C组开始持续XLGB灌胃250 mg/(kg·d),A、B组给予等剂量生理盐水.术后12周取材行大体观察,关节软骨Matin法评分,MMP-13免疫组织化学染色观察关节软骨的退行性变和软骨基质的降解程度,股骨远端软骨下骨骨密度和胫骨近端骨组织形态计量学分析.结果 术后12周大体观察A组无溃疡,C组较B组溃疡面小;C组关节软骨Mankin评分和MMP-13免疫组织化学染色积分光密度值低于B组,差异有统计学意义(P<0.05).B组股骨内侧髁骨密度低于A组和C组,差异有统计学意义(P<0.05):C组的胫骨近端骨量高于B组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 XLGB 250 mg/(kg·d)灌胃12周可以预防ACLT大鼠关节软骨退行性变,其作用机制可能与下调MMP-13的表达和增加软骨下骨骨量有关.     

褪黑素对骨性关节炎大鼠关节软骨中TGF-β1和IL-1β表达的影响

[目的]探讨褪黑素对骨性关节炎(osteoarthritis,OA)雄性大鼠关节软骨的影响.[方法]雄性SD大鼠40只,通过在大鼠膝关节腔注射4%papain(木瓜蛋白酶)溶液0.2 ml制作骨性关节炎模型和采用持续光照的方法建立大鼠去松果体模型.实验随机分为4组:Ⅰ组:正常对照组(n=10);Ⅱ组:骨性关节炎组(n=10);Ⅲ组:Ⅱ组+持续24 h光照组n=10);Ⅳ组:Ⅲ组+给予褪黑素治疗(n=10).成功建立模型1周后,Ⅳ组左膝关节腔注射浓度为20 mg/ml褪黑素溶液0.2 ml,每周4次,共4周.注射最后1次后,应用ELISA测取大鼠2 Am和2 Pm的血清褪黑素含量,并处死全部老鼠,同时切取股骨髁进行大体观察,之后脱钙制片,行HE染色观察和IL-1β、TGF-β1免疫组化观察(均采用Mankin法进行评分).[结果](1)大体观察:Ⅰ组软骨表面光滑,有弹性且边缘规整;Ⅱ组软骨表面凹凸不平,失去原有的光泽,存在软骨软化现象及软骨下骨外露;Ⅲ组较Ⅱ组严重;Ⅳ组软骨软化现象消失及软骨剥脱,软骨下骨外露减少.(2)组织学观察:Ⅰ组软骨细胞大小一致,排列规整;Ⅱ组软骨细胞排列紊乱,局部可见簇聚现象;Ⅲ组较Ⅱ组严重;Ⅳ组软骨细胞排列较规则,炎性细胞侵润明显较少.(3)免疫组化观察:Ⅳ组关节软骨IL-1β表达显著低于Ⅲ组和Ⅱ组.Ⅳ组关节软骨TGF-β1表达显著高于Ⅲ组和Ⅱ组.同时,4组组织学和免疫组化的Mankin评分比较差异均有统计学意义.[结论]雄性OA模型大鼠在持续光照下可以加快骨性关节炎关节软骨的的退变进程.浓度为20 mg/ml的褪黑素溶液0.2 ml关节腔注射4周后能够抑制骨性关节炎的进一步发展,其可能作用机制与上调软骨生长因子TGF-β1及下调炎性因子IL-1β表达有关.     

降钙素对OA大鼠关节软骨及软骨下骨的保护作用

[目的]研究降钙素(calcitonin,CT)对骨性关节炎(OA)模型大鼠关节软骨和软骨下骨的保护作用.[方法]采用前叉韧带切断(anterior cruciate ligament transection,ACLT)法制备大鼠OA模型,30只12周龄雌性SD大鼠,随机分成3组:假手术组(Sham, n=10)、手术组(ACLT+NS, n=10)和给药组(ACLT+CT, n=10).术后ACLT+CT组皮下注射鲑鱼降钙素10 IU·kg-1·d-1,连续12周;ACLT+NS组则给予等量生理盐水.术后12周处死动物取材,采用Mankin评分系统评分;用双能骨密度仪测量右侧股骨远端1/4骨密度和股骨内外侧髁软骨下骨的骨密度;右侧股骨髁脱钙后切片,行番红"O"染色和MMP-13免疫组化染色;右侧胫骨近端做硬组织切片,测量软骨下松质骨的骨组织形态计量学参数.[结果](1)Sham组和ACLT+CT组关节软骨Mankin评分结果显著低于ACLT+NS组.(2)ACLT+NS组软骨下骨骨密度、骨量(BV/TV,Tb.Th)均显著高于Sham组及ACLT+CT组.(3)ACLT+NS组关节软骨MMP-13表达显著高于Sham组及ACLT+CT.[结论]降钙素10 IU·kg-1·d-1皮下注射12周能够抑制OA大鼠关节软骨的退变,其作用机制可能与下调关节软骨中MMP-13的表达及抑制软骨下骨的增生硬化并改善其微观结构有关.     

阿仑膦酸钠对前交叉韧带切断大鼠关节软骨退变的影响

[目的]观察阿仑膦酸钠(alendronate,ALN)对前交叉韧带切断术(anterior cruciate ligament transaction,ACLT)后骨关节炎模型大鼠膝关节软骨和软骨下骨的影响.[方法]24只3个月龄雌性SD大鼠按体重随机分为假手术组(Sham,n=8)、手术组(ACLT+NS,n=8)及给药组(ACLT+ALN,n=8),术后ALN组给予阿仑膦酸钠20 μg·kg-1·2 d-1皮下注射,连续给药12周;ACLT组则给予等剂量无菌生理盐水.股骨远端软骨下骨骨密度和胫骨近端骨组织形态计量学分析,通过关节软骨Mankin评分和MMP-13免疫组化染色观察关节软骨的退变和软骨基质的降解程度.[结果](1)ACLT+NS组股骨内侧髁骨密度显著低于Sham组和ACLT+ALN组(P＜0.05);(2)ACLT+ALN组的胫骨近端骨量显著高于ACLT+NS组(P＜0.05);(3)ACLT+ALN组的关节软骨Mankin评分和MMP-13免疫组化染色平均积分光密度显著低于ACLT+Ns组(P＜0.05).[结论]阿仑膦酸钠20 μg·kg-1·2 d-1皮下注射12周可以预防ACLT大鼠关节软骨退变,其作用机制可能与下调MMP-13的表达和增加软骨下骨骨量有关.     

术后早期活动对同种异体关节移植后关节软骨保护作用的实验研究

目的采用同种异体关节移植动物模型,于术后采用不同处理方法进行对照实验,探讨同种异体关节移植后早期活动对关节软骨的保护作用。方法选用生长条件相同的6月龄新西兰大耳白兔10只(雌雄不限,体重2.5～3.0 kg)作为供体,取其一侧半膝关节,经深低温冻存处理后移植于取下股骨侧半膝关节的6月龄青紫蓝兔(雌雄不限,体重2.5～3.0 kg)膝关节处,术后分别给予早期活动(术后2周,早期活动组,n=5)或持续石膏固定6周(持续固定组,n=5);并取供体对侧半膝关节设立空白对照组(未经任何处理,n=5)和冻存对照组(经深低温处理2周,n=5)。术后分别行大体、X线片及组织学观测,观察同种异体关节软骨的变化情况。结果大体观察示,早期活动组实验兔关节活动良好;持续固定组实验兔关节活动受限明显。X线片示,术后当天、术后2周同种异体关节供体骨端与受体骨端对合整齐、对位对线良好;术后6周,早期活动组3只实验兔受体和供体骨端略有成角畸形,持续固定组对位及对线仍良好。HE染色示,早期活动组同种异体半膝关节标本软骨细胞数量和形态基本正常,偶见核碎裂及核溶解;持续固定组同种异体半膝关节标本中软骨细胞大量减少,大部分细胞核溶解消失,软骨基质中大量纤维组织增生。细胞存活率检测示,早期活动组细胞存活率(49.66%±2.15%)显著高于持续固定组(20.68%±1.24%),比较差异有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜观察示,早期活动组同种异体半膝关节标本可见软骨细胞细胞核核膜尚完整,染色质凝聚、边集,线粒体及粗面内质网肿胀;持续固定组同种异体半膝关节标本可见软骨细胞细胞膜消失,软骨细胞与周围基质界限不清,核膜破裂,染色质及细胞质内细胞器消失。结论同种异体关节移植术后进行早期功能活动对兔关节软骨有保护作用,但不能完全阻止软骨退变。     

关节腔注射羧甲基壳聚糖预防膝骨关节炎软骨退变

目的观察羧甲基壳聚糖（CMCTS）关节腔注射对骨关节炎（OA）模型关节软骨退变及软骨基质金属蛋白酶（MMP-1，-3）及其组织抑制物（TIMP-1）mRNA表达的影响。方法32只大耳白兔行单膝前交叉韧带切断术，随机分为A～D组，A、B组分别于术后立即关节腔注射高、低分子量2％CMCTS0．3ml，每2周1次；C组术后立即关节腔注射1％透明质酸钠（SH）0．3ml，每周1次；D组术后不注射任何药物。术后6周处死动物，比较各组股骨内髁关节软骨的大体变化，采用逆转录聚合酶链反应（R-PCR）方法检测软骨MMP-1，-3及TIMP-1 mRNA的表达水平。结果大体评分显示不注射组软骨退变明显重于CMCTS和SH注射组MMP-1，-3在CMCTS注射组软骨中的表达明显低于SH注射组和不注射组，不同分子量CMCTS注射组MMP-1，-3的表达没有显著差异，SH注射组软骨中MMP-1，-3的表达与不注射组比较差异无统计学意义（P〉0．05），TIMP-1在各组中的表达没差异有统计学意义（P〉0．05）。结论CMCTS能明显下调软骨MMP-1，-3的mRNA表达．明显减轻软骨退变的程度。软骨具有保护作用。     

骨骺软骨中的管状结构--软骨管

目的软骨管是发育时期骨骺软骨内的管状化疏松间质组织,对于软骨的生长发育有着重要意义。关于其形成、结构及功能等方面,目前尚有分歧,本文就此作一综述。     

Resorption of calcified and decalcified costal cartilage

Summary Cartilage is used in plastic and reconstructive surgery. Ageing of cartilage, followed by calcification, makes cartilage implants susceptible to resorption. However, it has been suggested that decalcified cartilage resists resorption. In the present work resorption of calcified and decalcified cartilage implants in isogenic and allogenic rats was studied in detail. Calcified implants were strongly resorbed and slightly ossified after 3 months. However, decalcified costal cartilage implants were not resorbed and ossified until the third month, i.e. at the end of the observation period, in iso- and allogenic transplants. Furthermore, there was no lymphocytic accumulation observed around decalcified implants as there was around untreated allogenic implants. It is suggested that screening of cartilage implant material for calcium salts with subsequent decalcification when necessary may decrease the number of resorbed and ossified implants. Further, it may protect against immunological response to allograft implantation.     

不同时期胎儿长骨骨骺软骨管形态学研究

目的：研究骨骺软骨管的形态结构。方法：胎儿和新生儿胫骨近端骨骺标本,用组化染色方法及电镜观察。结果：胎儿８周时无软骨管,１４周软骨管数目少,２２周增多,２９周最多,分支复杂,新生儿软骨管数目减少。软骨管除由动脉、静脉和毛细血管,还包含淋巴管。结论：胎儿胫骨近端骨骺软骨中存在淋巴管,淋巴管是办骨管的重要组成成分。     

跖趾关节软骨移植修复掌指关节面缺损

目的　利用自体跖趾关节软骨移植修复掌指关节缺损的软骨面,为掌指关节创伤性关节炎提供简便、可靠的方法。方法　1990 年以来,应用改良处理后的自体跖趾关节面软骨移植修复9 例11 侧掌指关节面,通过内固定、侧副韧带修复并提供适宜的生物力学和营养环境。结果　经6 个月7 年随访,关节活动度平均增加35-1°,供趾骨融合良好,成形术后关节活动度减少甚至强直,但无疼痛,对行走无明显影响。结论　软骨面匹配良好,可靠的内固定、重建韧带、供区薄的软骨面和少的骨量及适宜的生物力学环境是手术成功的关键     

胶原-透明质酸支架的制备及其与软骨细胞复合培养的实验研究

目的制备胶原-透明质酸支架,评价其与兔髁状突软骨细胞的生物相容性,探讨其应用于关节软骨组织工程的可行性。方法冷冻干燥法制备胶原-透明质酸复合多孔海绵支架材料,将其与碳化二亚胺[1-ethyl-3-（3-dimethyl aminopropyl）carbodiimide,EDC]进行化学交联。分别采用体积法和体外酶解实验测定支架材料孔隙率和降解率,扫描电镜观察交联前后支架材料的形态变化。取3周龄新西兰兔髁状突软骨细胞,体外培养5d后,甲苯胺蓝染色,倒置相差显微镜下观察行细胞鉴定。取消化后第2代软骨细胞接种至支架材料复合培养,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。复合培养1、3、5、7和10d后,PBS液清洗3次,置入24孔板并以0.25%胰酶和0.1%EDTA消化细胞,采集细胞进行细胞计数并绘制细胞生长曲线。另取部分样本继续培养5d,行组织学和扫描电镜观察。结果胶原-透明质酸支架材料经化学交联后,具有合适的三维多孔结构,孔隙率为83.7%,孔径100-120μm;交联后抗酶解能力显著增加。髁状突软骨细胞在其表面和内部贴附良好,形成细胞-材料复合体,细胞增殖实验显示,复合培养1d,材料中细胞数为3.7×104/支架,10d后增至8.2×104/支架。电镜观察见细胞周围有基质分泌。结论EDC交联后的胶原-透明质酸支架具有良好空间结构和生物相容性,可作为支架材料用于髁状突软骨组织工程的研究。     

Stereological study of the developing distal femoral growth plate

The distal femoral growth plate has a uniquely convoluted structure comprised of four mammillate processes. Factors contributing to the development of these processes and overall plate geometry were explored using three-dimensional image analysis of the canine distal femoral epiphysis. The growth plate at birth remains relatively flat until ossification of the epiphysis begins at 1 week of age. Epiphyseal ossification proceeds eccentrically, projecting in the medial-lateral and anterior-posterior directions. Growth plate activity indexed by [3H]thymidine labeling and plate thickness revealed regional differences in cell proliferation. This was measured as a decreased labeling index and thinning of the growth plate in areas capped by the ossifying epiphysis. The eccentric ossification pattern and associated variations in growth plate activity result in definition of an "intraphyseal" groove and medial-lateral oriented sulcus. The groove and sulcus bisect the plate into four quadrants, giving rise to a convoluted structure composed of four areas of plate elevations termed mammillary processes (MP). By 5 weeks, the pattern of ossification results in greater development of the MP in the anterior-medial quadrant and in decreasing order, in the posterior-medial, anterior, and posterior-lateral quadrants. By 10 weeks, a uniform rate of cell proliferation was observed coincident with completion of ossification of the epiphysis. The data suggest that localized variations in growth plate proliferation are associated with ossification of the epiphysis.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

同种异体兔关节软骨细胞移植实验研究

将幼兔关节软骨细胞复层培养后植入同种成年兔关节软骨面人为缺损部，术后１．５个月－６．５个月采用大体、ＨＥ、甲苯胺兰、番红花精０染色及放射性自显影等方法观察软骨细胞修复缺损情况。结果表明移植术后１．５个月，植入软骨细胞在局部生长，与周围原有软骨组织融合，将缺损填平。２．５个月－６．５个月仍保持透明软骨性质，无纤维化、骨化、血管长入，免疫排斥反应等。     

An experimental study of the repair of injured articular cartilage using 3H-thymidine autoradiography

Summary The mechanism of repair of injuries to articular cartilage of the distal femur in young, young adult and adult rats was investigated using ³H-Thymidine autoradiography and microscopic observation. It was found that in young rats the defect was repaired by the reactive proliferation of the cartilage cells, that in the young adult rats the wound was repaired by hyaline cartilage which was differentiated from undifferentiated mesenchymal cells (U.M.C.), and that in the adult rats repair with cartilage did not occur. The superficial part of the defect was filled by connective tissue derived from the U.M.C. while the deeper layers were repaired by tissue resembling bone and also derived from the U.M.C. Repair of the injured articular cartilage thus varied with the degree of maturity of each animal, suggesting that age largely influences the mechanism of response to injury.

---

Résumé Le mécanisme de la réparation du cartilage articulaire après traumatisme a été étudié chez le rat au niveau de l'extrémité distale du fémur. Les expériences ont porté sur des animaux jeunes, adultes jeunes et adultes et ont été contrôlées par autoradiographies à la thymidine tritiée et observations microscopiques. On a trouvé que chez le jeune rat la perte de substance est réparée par prolifération des cellules cartilagineuses, que chez le jeune adulte la réparation est faite de cartilage hyalin qui se différencie à partir des cellules mésenchymateuses et que chez l'adulte il n'y a pas de réparation par du cartilage. La partie superficielle de la perte de substance est comblée de tissu conjonctif dérivé des cellules mésenchymateuses, tandis que sa partie profonde est réparée par du tissu ressemblant à de l'os, également dérivé des cellules du mésenchyme. La réparation du cartilage articulaire varie donc avec le degré de maturité de chaque animal, ce qui permet de penser que l'âge influence notablement le mécanisme de réponse au traumatisme.

     

Otoplasty with Mustarde Suture, Cartilage Rasping, and Scratching

Many techniques have been developed for the treatment of protruding ears. However, the best technique is one that is reproducible, simple, and versatile. Modern otoplasty techniques consist of two main surgical categories, cartilage sparing and cartilage cutting, along with many variations. A retrospective review of 58 patients who underwent otoplasty was conducted. Mustarde suturing and cartilage softening were applied for the treatment of protruding ear. The authors use 4–0 braided white polyesther suture. For four patients, a secondary revision was performed for recurrence. The remaining patients were satisfied with their outcome.