缺氧诱导因子-1α对体外模拟CO2气腹下人胃癌细胞凋亡的影响

目的 通过体外模拟CO2气腹环境,构建沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的RNAi表达载体,探讨HIF-1α对CO2气腹环境下人胃癌细胞MKN-45凋亡的影响及机制.方法 利用密闭培养箱模拟CO2气腹,气腹机维持培养箱内压力分别为0、5、10、15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),采用RT-PCR方法和Western blot方法观察沉默HIF-1α前后MKN-45细胞HIF-1α mRNA和蛋白表达变化.免疫组化技术观察沉默HIF-1α前后细胞bcl-2/bax表达变化.Annexin V-FITC/PI舣标染色、流式细胞仪检测沉默HIF-1α前后细胞凋亡比例变化.结果 沉默HIF-1α前15 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA和蛋白表达(1.48±0.22和1.34±0.09)以及10 nnn Hg组细胞蛋门表达(1.25±0.10)均显著高于对照组(0.55±0.17和0.83±0.04)(P＜0.05).0、5、10 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA和0、5 mm Hg蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).沉默HIF-1α前15 mm Hg组细胞bcl-2/bax比值(0.78±0.05)较对照组(1.43±0.15)明显降低(P＜0.05),细胞凋亡比例(11.70±0.12)较对照组(0.22±0.07)显著增加(P＜0.01).而在沉默HIF-1α后15 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA表达(0.52±0.11)和蛋白表达(0.92±0.02)、bcl-2/bax比值(1.57±0.04)、细胞凋亡比例(0.45±0.11)与对照组比较均无显著差异(P＞0.05).结论 在CO2气腹环境压力为0、5、10 mmHg CO2时MKN-45细胞凋亡比例与对照组比较无显著差异,压力为15 mm Hg时CO2气腹可促进胃癌细胞凋亡,HIF-1α可能为促进细胞凋亡的重要因子.     

CO2气腹对胃癌细胞周期及细胞周期蛋白的影响

目的 通过检测不同压力CO2气腹环境下胃癌细胞周期及其相关蛋白表达的变化,探讨CO2气腹对胃癌细胞生长增殖的影响.方法 将胃癌MKN-45细胞置于0、10、12和15 mm Hg CO2气腹环境下培养4 h,然后用流式细胞法检测胃癌细胞周期的变化,再用Western blot方法检测细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4、Rb和pRb的表达,最后用免疫沉淀法检测细胞Cyclin D1/CDK4结合力.结果 0、10、12 mm Hg CO2气腹组胃癌细胞增殖指数与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),15 mm Hg CO2气腹组胃癌细胞增殖指数(27.4%4±3.7%)与对照组(36.4%±3.3%)比较显著下降(P<0.05).0、10、12 mm Hg CO2气腹组CDK4、Cyclin D1、pRb蛋白表达以及Cyclin D1和CDK4的结合能力与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),15 mm Hg CO2气腹组CDK4、Cyclin D1、pRb蛋白表达以及Cyclin D1和CDK4的结合能力(0.71%±0.12%、0.93%±0.21%、0.54%±0.11%、0.18%±0.02%)与对照组(1.05%±0.16%、1.40%±0.24%、0.75%±0.14%、0.31%±0.02%)比较显著下降(P<0.05).0、10、12、15 mm Hg CO2气腹组Rb蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 临床常用压力的CO2气腹对胃癌细胞周期无显著影响,15 mm Hg CO2气腹抑制细胞增殖,其原因可能与Cyclin D1和CDK4的表达下调有关.     

CO2气腹下缺氧诱导因子-1α与血管内皮生长因子在大鼠肝癌中的表达及其意义

目的 观察不同CO2气腹压力条件下,大鼠移植性肝癌中缺氧诱导因子(HIF)-1α与血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化.方法 制作大鼠Walker-256移植性肝癌模型,将48只肝痛模型随机分为4组,给予不同气腹压力0、5、10、15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),恒定一定时间及流量.术后处死全部大鼠,切取肝肿瘤,4%甲醛固定后行苏木素-伊红(HE)染色,免疫组织化学染色检测HIF-1α及VEGF表达.结果 随着CO2气腹压力的增加,HIF-1α、VEGF在肿瘤模型上的表达逐渐增强(P＜0.05),各组肝癌组织中HIF-1α VEGF呈正相关关系(其r分别为0.835、0.714、0.761、0.781).结论 随着CO2气腹压力的增加,HIF-1α与VEGF的表达逐渐增加,且HIF-1α与VEGF呈正相关.CO2气腹促进肿瘤生长和转移可能与HIF-1α VEGF有一定关系.     

不同压强与时程CO2气腹对胃癌细胞黏附侵袭能力的影响

目的 分析不同压强与时程的CO2气腹对胃癌细胞黏附侵袭能力的影响.方法 建立体外CO2气腹模型,选用3种胃癌细胞株MKN-45、SGC-7901和MKN-28,分别暴露在0 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)、9 mm Hg (2 h、4 h)和 15 mm Hg(2 h、4 h)的条件下.RT-PCR法检测胃癌细胞中黏附侵袭分子E-cadherin、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、金属基质蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子-A(VEGF-A) mRNA在上述条件下的表达水平; 流式细胞仪检测胃癌细胞中E-cadherin和ICAM-1蛋白在0 mm Hg和15 mm Hg(4 h)条件下的表达水平.结果 随着CO2时程延长或压强升高,E-cadherin mRNA的表达水平有下降趋势,而ICAM-1、MMP-2和VEGF-A mRNA的表达水平则有上升趋势; 流式细胞仪检测结果显示E-cadherin蛋白的表达水平有下降趋势,而ICAM-1蛋白的表达水平有升高的趋势.但各种条件下黏附侵袭分子的表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 在压强不高于15 mm Hg和时程不超过4 h前提下,不同压强与时程的CO2气腹对胃癌细胞株的黏附侵袭能力无明显影响,并不增加肿瘤的转移几率.     

HIF-1α基因沉默对人肝癌SMMC-7721细胞VEGF和MMP-2基因表达的影响

目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因沉默对人肝癌SMMC-7721细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)基因表达的影响。方法构建HIF-1α基因的RNA干扰(RNAi)表达载体(HIF-1α-shRNA-pGenesil-1)和阴性对照载体(shRNA-HK-pGenesil-1),并将其与质粒结合。将人肝癌SMMC-7721细胞分为沉默组、阴性对照组和空白对照组,分别转染HIF-1α-shRNA-pGenesil-1重组载体、shRNA-HK-pGenesil-1重组载体和空载体pGenesil-1。转染细胞经浓度为500μg/mL的G418溶液筛选后获得带有转染重组载体的细胞克隆,分别于常氧、低氧6 h、低氧12 h及低氧24 h条件下培养,再采用实时定量逆转录聚合链式反应(RT-PCR)检测细胞中HIF-1α mRNA、VEGF mRNA及MMP-2 mRNA的表达。结果常氧条件下,沉默组、阴性对照组和空白对照组细胞中均无HIF-1α mRNA的表达,且3组细胞中VEGF mRNA及MMP-2 mRNA的表达水平比较差异均无统计学意义(P0.05)。低氧培养6、12及24 h时,沉默组细胞中HIF-1α mRNA、VEGF mRNA及MMP-2 mRNA的表达水平均低于同时点空白对照组和阴性对照组(P0.05),但同时点空白对照组和阴性对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。与常氧条件对应组别比较,沉默组、阴性对照组和空白对照组各低氧条件组细胞中HIF-1α mRNA、VEGF mRNA及MMP-2 mRNA的表达水平均较高(P0.05);低氧条件下,3组细胞中HIF-1α mRNA、VEGF mRNA及MMP-2 mRNA的表达水平均呈下降趋势,同组内3个时点间两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论利用RNAi技术有效沉默人肝癌SMMC-7721细胞中HIF-1α基因的表达后,VEGF mRNA和MMP-2 mRNA的表达水平均降低,提示沉默HIF-1α基因可抑制原发性肝癌的浸润和转移。     

CO_2气腹对胃癌MKN-45细胞黏着斑激酶的影响

目的 研究CO_2气腹对胃癌MKN-45细胞黏着斑激酶(FAK)的影响.方法 体外模拟不同压力CO_2气腹环境,实验组:人胃癌MKN-45细胞置于5、10、15 mm Hg(1mm Hg=0.133 kPa)CO_2气腹环境培养4 h.对照组:常规条件培养人胃癌MKN-45细胞.采用Western blot法检测各组细胞FAK及磷酸化FAK(FAK Tyr397)的表达量,且分别观察15 mm Hg CO_2作用0.5、2、4 h的情况.多组比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD法检验.结果 实验组5、10、15 mm Hg CO_2气腹环境下,FAK表达量分别为2.14±0.17、2.07±0.21、2.52±0.26;FAK Tyr397表达量分别为1.82±0.28、1.93±0.52、3.71±0.37;而对照组FAK表达量为2.43±0.46,FAK Tyr397表达量为1.71±0.23,两组比较差异有统计学意义(F=2.171,26.951,P<0.01).15 mm Hg CO_2作用0.5、2、4 h后,FAK Tyr397表达量分别为3.41±0.44、4.12±0.56、5.24±0.41,三者比较差异有统计学意义(F=116.119,P<0.01).脱离气腹后恢复至处理前水平(0.72±0.16).结论 不同压力CO_2气腹环境处理胃癌MKN-45细胞4 h不增加其FAK表达,但可使其磷酸化而激活,且压力越高,作用时间越长,磷酸化程度越高,但脱离气腹环境后,其活性迅速降至处理前水平.     

RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α对人膀胱尿路上皮癌T24细胞增殖和凋亡的影响

目的 探究RNA干扰靶向沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人膀胱尿路上皮癌(BUC) T24细胞株中的表达对T24细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建4个针对HIF-1α的小干扰RNA(siRNA)表达质粒PGC-siHIF-1α1-4,脂质体法稳定转染T24细胞.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转染细胞HIF-1α rnRNA和基因表达,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖率,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期和凋亡情况.结果 4个HIF-1α mRNA表达质粒均能不同程度的抑制转染细胞的HIF-1α膜mRNA和基因表达.其中以PGC-siHIF-1 α3的作用最大,效果最佳,该组G0/G1期阻滞率(61.8±1.5)％,细胞增殖受抑率41.7％,细胞凋亡率19.3％,与对照组有统计学差异(P＜0.01).结论 HIF-1α siRNA表达质粒可抑制膀胱癌细胞生长并促进其凋亡,有望成为提高膀胱癌分子靶向治疗的新位点.     

不同压力CO2气腹对胃癌细胞裸鼠移植瘤成瘤能力的影响

目的 通过将不同压力CO2气腹环境下培养的胃癌MKN-45细胞接种于裸鼠皮下,观察CO2气腹对胃癌细胞体内生长增殖的影响.方法 将胃癌MKN-45细胞置于0、10、12和15 mm Hg CO2气腹环境下培养4 h,然后取2×106个细胞接种于裸鼠皮下,3周后处死裸鼠,测量肿瘤的体积和重量,再对各组移植瘤行HE染色和Ki-67免疫组化染色.结果 0、10、12 mm Hg CO2气腹组裸鼠移植瘤成瘤时间、肿瘤体积和重量(分别为7.8 d、7.2 d、7.8 d;1.2 cm3、1.3 cm3、1.3 cm3;1.5 g、1.9 g、1.6 g)与对照组(分别为7.3 d、1.2 cm3、1.4 g)比较差异均无统计学意义(P>0.05),15mm Hg CO2气腹组移植瘤成瘤时间(12.5 d)与对照组比较显著延长,肿瘤体积(0.5 cm3)和重量(0.5 g)与对照组比较显著下降(P<0.05).0、10、12 mm Hg CO2气腹组裸鼠移植瘤细胞内Ki-67抗原阳性率(61.2%、60.5%、63.4%)与对照组(59.6%)比较差异均无统计学意义(P>0.05),15 mm Hg CO2气腹组的阳性率(27.5%)与对照组比较显著下降(P<0.01).结论 临床常用压力CO2气腹对胃癌MKN-45细胞体内生长增殖无显著影响.     

高压氧对精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡及其基因缺氧诱导因子-α、bcl-2及bax表达的影响

目的 观察高压氧(HBO)对精索静脉曲张(VC)SD大鼠生精细胞凋亡的影响,探讨精索静脉曲张导致男性不育的机制.方法 50只青春期雄性SD大鼠,随机抽出10只作为假手术对照组(A).A组只游离左肾静脉不予结扎,其余40只部分结扎左肾静脉建立VC模型,8周后,将建立了VC模型的40只随机分为VC模型组(B)和HBO干预的VC模型组(C),C组用HBO对VC模型进行干预.实验结束后各组大鼠切取双侧睾丸,采用原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠睾丸生精细胞凋亡,免疫组织化学检测低氧诱导因子(HIF)-α、bcl-2及bax的基因表达.结果 B组较A组生精细胞凋亡数明显增多,HIF-α、bax表达增强(P＜0.01),bcl-2表达减弱(P＜0.01),bcl-2/bax比值降低;C组大鼠较B组生精细胞凋亡数减少(P＜0.01),HIF-α表达减弱(P＜0.01)、bcl-2/bax比值上升,而与A组比较差异无统计学意义.结论 VC大鼠生精细胞凋亡率增加,HIF-α表达增强、bcl-2和bax基因表达失调为其凋亡机制之一;高压氧可能通过HIF-α、bcl-2和bax基因调控途径调节生精细胞凋亡,从而改善VC所致的生精功能障碍.     

体外模拟二氧化碳气腹对人胃癌细胞迁移运动的影响

目的探讨通过体外模拟气腹环境，观察不同压力二氧化碳（CO2）和氦气（He）对胃癌细胞MKN-45迁移运动的影响。方法将MKN-45细胞置于充满CO2或He的密闭培养箱中，按模拟气腹种类不同分为对照组、CO2气腹组和He气腹组，模拟气腹压力分别12mm Hg和15mm Hg，作用时间均为4h。于处理后用血气分析仪检测培养液pH值；用Transwell法观察细胞迁移运动变化。结果处理结束后即刻检测，CO2组细胞培养液呈酸性，He组细胞培养液呈碱性。CO2组和He组在12mm Hg压力下MKN-45细胞穿过滤膜的数量较对照组差异无明显统计学（P〉0．05），CO2 15mm Hg组细胞穿过滤膜的数量较对照组明显减少（P〈0．01）；He 15mm Hg组与对照组差异无明显统计学（P〉0．05）。结论在临床常用气腹压力下（12mm Hg）CO2对胃癌细胞迁移运动无明显影响。     

小分子RNA干扰沉默缺氧诱导因子1α加重缺氧状态肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死

目的 探讨沉默缺氧诱导因子1α （HIF-1α）对缺氧状态肾小管上皮细胞增殖、凋亡和坏死的影响。 方法 利用氯化钴模拟缺氧状态,并应用小分子RNA干扰（siRNA）技术沉默HIF-1α基因表达。将细胞分成5组,分别是正常培养组、缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组。用MTT试验检测细胞的生长抑制率;用TUNEL法、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（aspase）-3蛋白定量法检测细胞的凋亡率;检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活力来测定细胞的坏死情况;用实时定量PCR法和Western印迹法检测细胞HIF-1α、HIF-2α、葡萄糖转运蛋白1（Glut-1）、血管内皮生长因子（VEGF） mRNA和蛋白表达水平。 结果 （1）siRNA的细胞转染效率为95%～100%。在常氧条件下,终浓度100 nmol/L 的HIF-1α siRNA沉默HIF-1α基因的效率为70%;在缺氧条件下,HIF-1α siRNA沉默HIF-1α基因的效率达到97%。（2）HIF-1α siRNA组细胞的生长抑制率显著高于其它组（P < 0.05）;细胞凋亡率在缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组4组间的差异无统计学意义（P > 0.05）;HIF-1α siRNA组细胞培养液中LDH水平显著高于缺氧培养组、转染试剂组和阴性对照组（P < 0.05）。（3）HIF-1α siRNA组细胞的HIF-1α、Glut-1、VEGF mRNA和蛋白表达量显著低于缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组（P < 0.05）;而HIF-2α mRNA和蛋白表达在缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组4组间的差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 siRNA沉默HIF-1α能显著抑制缺氧状态下肾小管上皮细胞Glut-1和VEGF表达,加重缺氧状态下肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死。     

氧化苦参碱对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制

目的 观察氧化苦参碱(OXY)对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法 噻唑蓝(MTT)法测定OXY对A549人肺癌细胞活力的作用.流式细胞术测定A549细胞凋亡率.荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Westem blot方法测定OXY对A549细胞B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax) mRNA和蛋白表达的影响.Western blot方法测定OXY对A549细胞的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、p38丝裂原活化激酶(p38MAPK)、磷酸化ERK(p-ERK)、p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达的影响.结果 OXY可抑制A549细胞增殖.与对照组[(5.63±0.76)％]比较,OXY组细胞凋亡率[(13.26±2.15)％]上升(P＜0.01);与对照组(1.02±0.27、0.23±0.04)比较,OXY组bax mRNA(1.61±0.19)和蛋白(0.71±0.10)表达上升(P＜0.05,P＜0.01);与对照组比较(0.94 ±0.14、0.64±0.09),OXY组bcl-2mRNA(0.42±0.05)和蛋白(0.21±0.04)表达下降(P＜0.01).与对照组(0.29±0.03)比较,OXY组p-JNK表达水平(0.66 ±0.06)明显升高(P＜0.01),其他蛋白表达均无明显变化.与OXY组(0.66±0.07、0.28±0.03、0.65±0.08)比较,同时给予OXY和p-JNK抑制剂SP600125组bax蛋白表达(0.39±0.05)下降,bcl-2表达(0.50±0.08)上升,p-JNK蛋白(0.26 ±0.04)表达下降(P＜0.01).结论 OXY碱可诱导A549细胞凋亡,可能与升高p-JNK水平有关.     

bcl-2/bax mRNA在三氧化二砷体外诱导人胆管癌细胞株凋亡中的表达

目的 观察bcl-2、bax mRNA在三氧化二砷(As2O3)诱导人类胆管癌株QBC939、RBE细胞凋亡中的表达.方法 Rhodamine123染色检测线粒体膜通透性变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2、bax mRNA的表达.结果 As2O3干预,实验组Rhodamine123荧光染色强度较对照组明显减弱;凝胶成像检测bcl-2/β-actin mRNA A比值,QBC939、RBE细胞对照组分别为0.41±0.03、0.84±0.03;24 h实验组为0.01±0.01、0.43±0.02.bax/GAPDHmRNAA比值QBC939、RBE细胞对照组分别为0.21±0.01、0.42±0.04;24 h实验组为1.44±0.16、1.15±0.21,对照组与实验组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 As2O3可能增加胆管癌细胞株线粒体膜的通透性,下调bcl-2mRNA表达,上调bax mRNA的表达,可能启动了线粒体凋亡信号传导途径.     

热休克蛋白70-2基因沉默诱导大鼠精原细胞凋亡及其机制

目的 探讨热休克蛋白(HSP)70-2基因沉默对精原细胞的影响及其机制.方法 构建HSP70-2特异的短发夹RNA(shRNA)质粒载体,并转染大鼠精原细胞;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSP70-2 mRNA表达,Western blot检测HSP70-2、Cyclin DI、bcl-2和box蛋白表达,应用流式细胞术分析细胞周期和凋亡.结果 HSP70-2基因沉默组的HSP70-2蛋白表达量为0.93±0.13,明显低于阴性对照组1.31±0.10(P<0.01);流式细胞术检测结果显示,与转染Scrambled的阴性对照组比较,转染pGenesil-1-HSP70-2重组质粒组的PC3细胞在G1期出现明显细胞周期阻滞和细胞凋亡,G1期阻滞细胞比例为(80.09±2.37)%,凋亡率为(7.44±2.41)%,而阴性对照组分别为(61.85±2.31)%和(1.09±0.57)%(P<0.05).与阴性对照组比较,转染后细胞bcl-2、Cyclin D1表达水平显著降低,而bax表达水平升高.结论 HSP70-2基因沉默能诱导精原细胞凋亡,其机制可能是通过Cyclin D1蛋白调节细胞周期并通过上调box蛋白表达促进细胞凋亡.     

金属卟啉化合物的光动力学作用对人膀胱癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的探讨金属卟啉的光动力学作用对人膀胱癌细胞增殖和凋亡基因bcl-2、bax表达的影响及其诱导细胞凋亡的机制。方法合成水溶性锰卟啉化合物后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、膜联蛋白/碘化丙锭流式细胞术、免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测锰卟啉的光动力学作用对人膀胱癌BI U-87细胞的生长活性、凋亡率和bcl-2、bax蛋白及相应mRNA表达水平变化的影响。结果1μmol/L锰卟啉光动力作用BI U-87细胞30min后,MTT法和流式细胞术结果显示细胞生长抑制率和凋亡率分别为(62.39±9.17)%、(19.15±5.49)%,免疫组化和RT-PCR结果表明bax蛋白及相应mRNA表达水平分别为(46.4±5.67)%、(0.63±0.13),均分别明显高于对照组(2.26±0.04)%、(3.95±0.84)%、(32.7±4.52)%、(0.29±0.02)(P<0.05);而bcl-2蛋白及其mRNA表达水平分别为(31.5±2.59)%、(0.44±0.02),均明显低于对照组(54.8±6.21)%、(0.73±0.07)。结论锰卟啉的光动力作用可以通过抑制bcl-2的表达、促进bax的表达来诱导BI U-87细胞发生凋亡。     

热CO2气腹对胃癌细胞杀伤作用的实验研究

目的:体外研究热CO2气腹对人胃癌细胞SGC-7901的杀伤作用,探讨临床上腹腔镜胃癌手术使用热CO2气腹抑制腹膜转移和戳孔种植的可行性。方法:建立体外热CO2气腹实验模型,人胃癌细胞SGC-7901经热CO2气腹(42℃、43℃,1～3 h)处理后,WST-8法检测细胞毒作用,流式细胞术定量分析、Hoechst 33342/PI荧光显微镜观察细胞形态,RT-PCR检测Bax、bcl-2基因mRNA的表达。结果:WST-8法检测显示热CO2气腹能显著抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,43℃作用3 h后,细胞存活率降至(65.83±2.40)%。流式细胞术及细胞形态学结果显示,诱导胃癌细胞凋亡是热CO2气腹作用的主要方式,与温度和作用时间呈正相关。RT-PCR检测结果显示,实验组(43℃,3 h)Bax基因mRNA表达水平显著高于对照组(25℃,3 h)差异有统计学意义(P<0.05);但对bcl-2的表达无明显影响。结论:热CO2气腹通过诱导细胞凋亡对人胃癌细胞有显著的增殖抑制作用,发生机制可能是通过上调Bax的表达促进细胞凋亡。     

不同压力二氧化碳气腹对胃癌细胞增殖运动的影响

目的 通过体外模拟气腹环境,观察不同压力CO2对胃癌细胞MKN-45增殖、运动的影响.方法 将MKN-45细胞置于充满CO2的密闭培养箱中,按CO2压力不同分为对照组、0、5、10和15mm Hg组(1 mm Hg=0.133 kPa),作用时间均为4 h.用血气分析仪检测培养液pH值;MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪观察细胞周期变化;Transwell法观察细胞迁移运动变化.结果 0、5、10和15 mm Hg组细胞培养液在0 h呈酸性.MTF法检测细胞增殖发现0、5、10 mm Hg组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),15 mm Hg组与对照组比较吸光度(OD)值在1～3 d差异无统计学意义(t=0.625,-0.537,0.137.P＞0.05),在4～7 d差异有统计学意义(t=26.622,13.376,18.839,7.595,P＜0.01).0、5、10mm Hg组细胞增殖指数和细胞穿过滤膜的数量与对照组比较差异无统计学意义(t=1.134,-0.538,-0.829:t=0.330,0.794,0.508,P＞0.05),15 mm Hg组与对照组比较差异有统计学意义(t=11.225,8.775,P＜0.01).结论 在15 mm Hg压力下,CO2对MKN-45细胞增殖、运动起抑制作用.     

人工气腹对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨腹腔镜结直肠癌手术人工气腹的安全性与可行性。方法:(1)实验分组为对照组,对照+用药组,CO2组,CO2+用药组,He组,He+用药组(PD98059);(2)用MTT法测定细胞增殖数;(3)用丫啶橙/溴乙啶(AO/EB)双荧光染色检测细胞凋亡率;(4)软琼脂克隆形成试验测定单个细胞增殖能力;(5)用免疫组化法测定结肠癌细胞中HIF-1α和VEGF的表达。结果:CO2气腹作用后人结肠癌细胞LS-174T增殖能力高于对照组、He组。He组细胞凋亡率高于CO2组和对照组,CO2、He人工气腹作用后结肠癌细胞中HIF-1α和VEGF阳性表达率高于对照组。PD98059药物组细胞生长速度、增殖能力及HIF-1α和VEGF的阳性表达率均低于相应处理组。结论:CO2气腹可促进结肠癌细胞LS-174T生长,He气腹可相对抑制其生长,PD98059可抑制结肠癌细胞的生长。     

不同压力CO_2气腹对人胃癌MKN-45细胞生长的影响

目的研究体外模拟不同压力CO2气腹环境对人胃癌MKN-45细胞生长增殖能力的影响。方法实验组于体外建立模拟CO2气腹环境,全自动气腹机维持气腹压力分别为9、12、15mm Hg,作用时间均为4h,对照组直接放入37℃、5%CO2孵箱中培养。处理后第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3h,用pH计检测细胞培养液pH值变化;第1、2、3、4、5、6、7天,MTT法检测细胞增殖情况。结果15mmHgCO2气腹处理后胃癌细胞增殖较对照组下降显著(P<0.05),但9、12mmHg组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。CO2气腹处理后细胞培养液pH值较对照组下降非常显著(P<0.01),但在恢复正常培养后最长3h即恢复正常。胃癌细胞增殖在第1天与不同压力CO2气腹处理后细胞培养液的即时pH值有显著相关性(P<0.05),而第2、3、4、5、6、7天均无相关性(P>0.05)。结论模拟9、12mmHgCO2气腹对胃癌MKN-45细胞增殖没有显著影响,模拟15mmHgCO气腹对胃癌MKN-45细胞增殖有显著的抑制作用。