缺氧诱导因子-1α对体外模拟CO2气腹下人胃癌细胞凋亡的影响

目的 通过体外模拟CO2气腹环境,构建沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的RNAi表达载体,探讨HIF-1α对CO2气腹环境下人胃癌细胞MKN-45凋亡的影响及机制.方法 利用密闭培养箱模拟CO2气腹,气腹机维持培养箱内压力分别为0、5、10、15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),采用RT-PCR方法和Western blot方法观察沉默HIF-1α前后MKN-45细胞HIF-1α mRNA和蛋白表达变化.免疫组化技术观察沉默HIF-1α前后细胞bcl-2/bax表达变化.Annexin V-FITC/PI舣标染色、流式细胞仪检测沉默HIF-1α前后细胞凋亡比例变化.结果 沉默HIF-1α前15 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA和蛋白表达(1.48±0.22和1.34±0.09)以及10 nnn Hg组细胞蛋门表达(1.25±0.10)均显著高于对照组(0.55±0.17和0.83±0.04)(P＜0.05).0、5、10 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA和0、5 mm Hg蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).沉默HIF-1α前15 mm Hg组细胞bcl-2/bax比值(0.78±0.05)较对照组(1.43±0.15)明显降低(P＜0.05),细胞凋亡比例(11.70±0.12)较对照组(0.22±0.07)显著增加(P＜0.01).而在沉默HIF-1α后15 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA表达(0.52±0.11)和蛋白表达(0.92±0.02)、bcl-2/bax比值(1.57±0.04)、细胞凋亡比例(0.45±0.11)与对照组比较均无显著差异(P＞0.05).结论 在CO2气腹环境压力为0、5、10 mmHg CO2时MKN-45细胞凋亡比例与对照组比较无显著差异,压力为15 mm Hg时CO2气腹可促进胃癌细胞凋亡,HIF-1α可能为促进细胞凋亡的重要因子.