血管内皮生长因子对关节软骨细胞基质金属蛋白酶-13表达的影响

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)对体外培养的关节软骨细胞基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达的影响.方法 体外培养SD乳鼠关节软骨细胞,分为4组,每组加入不同处理因素进行干预,A组:(对照组)不加任何处理因素;B组:10 μg/L VEGF;C组:10 μg/L白细胞介素(IL)-1β;D组:10 μg/L VEGF+ 10 μg/L IL-1β.采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测MMP-13 mRNA的表达,蛋白免疫印迹法检测MMP-13蛋白的表达.结果 B组(0.88±0.47)、C组(3.69 ±0.45)及D组(3.85 ±0.48)的MMP-13 mRNA表达水平均显著高于A组(0.73±0.56),D组软骨细胞MMP-13的mRNA表达水平明显高于B组(P＜0.01)及C组(P＜0.05).与A组(0.36 ±0.17)比较,B组(0.63±0.21)、C组(0.76±0.24)及D组(0.99±0.26)的MMP-13蛋白表达水平显著升高,D组MMP-13的蛋白表达水平明显高于B组(P＜0.05)及C组(P＜0.05).结论 在骨关节炎的发病过程中VEGF可能通过上调软骨细胞MMP-13的表达发挥重要作用.     

雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及机制.方法 建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型24只,随机分为对照组、RAPA小剂量组(每日1 mg/kg体重)、RAPA大剂量组(每日5 mg/kg体重).用药4周后观察肿瘤体积和重量、肿瘤组织切片行透射电镜检查、荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测肿瘤的血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)mRNA的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定裸鼠血VEGF、MMP-2浓度.结果 与对照组比较,雷帕霉素小剂量组和大剂量组均能抑制肿瘤生长[(0.42±0.17)cm3和(0.38±0.21)cm3比(0.78±0.25)cm3,P＜0.05];VEGF mRNA、MMP-2 mRNA的转录和翻译显著减少(P＜0.01).结论 雷帕霉素可以通过抑制肝癌细胞VEGF和MMP-2的mRNA转录和蛋白表达,抑制肿瘤生长,但不呈剂量依赖性.     

槲皮素对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症因子和基质金属蛋白酶的表达的影响

目的探讨槲皮素对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)炎症因子和基质金属蛋白酶的表达的影响及可能机制。方法选用人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)为研究对象,TNF-α诱导MH7A细胞,用不同浓度的槲皮素干预,RT-PCR法检测对IL-1β、IL-6、IL-8、MMP-1、MMP-3、MMP-13的变化的影响,Western blot法检测对NF-κB的影响。结果槲皮素浓度依赖性地降低TNF-α诱导的MH7A细胞IL-1β、IL-6、IL-8、MMP-1、MMP-3、MMP-13的表达,对TNF-α诱导的MH7A细胞NF-κB的磷酸化有明显的抑制作用。结论槲皮素可有效地减轻类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症因子及基质金属蛋白酶的表达,其机制可能和抑制NF-κB的表达相关,槲皮素是治疗类风湿性关节炎的潜在有效药物。     

雷公藤红素对IL-1β致软骨终板退变的影响

目的通过IL-1β与雷公藤红素体外刺激小鼠椎间盘软骨终板细胞,探讨雷公藤红素能否抑制IL-1β对软骨终板细胞的影响。方法不同浓度的雷公藤红素刺激软骨终板细胞,CCK-8法检测不同时间点其对软骨终板细胞增殖作用的影响;实验共分3组:空白对照组(无血清DMEM培养基),IL-1β诱导组(IL-1β5 ng/mL共同孵育2 h),雷公藤红素干预组(经IL-1β5ng/mL共同孵育2 h后,再以雷公藤红素共同孵育24 h)。分组处理后,ELISA法检测MMP-1、MMP-3的水平,同时荧光定量PCR检测蛋白多糖及II胶原的mRNA表达水平。结果与空白对照组相比,IL-1β刺激软骨终板细胞2 h后,MMP-1、MMP-3表达水平明显增高,雷公藤红素可抑制细胞中IL-1β介导的MMP-1、MMP-3的表达,同时IL-1β明显抑制软骨终板细胞的蛋白多糖及II胶原mRNA的表达,而雷公藤红素可上调IL-1β诱导的蛋白多糖及II胶原mRNA的表达水平。结论雷公藤红素能够抑制IL-1β介导的软骨终板退变进程,上调蛋白多糖及II胶原mRNA的表达水平,可能在防治椎间盘退变性疾病中发挥重要作用。     

基质金属蛋白酶9及TGF-β1 mRNA和蛋白在骨关节炎中的表达

目的 TGF-β1对骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨起保护作用,探讨OA中基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、TGF-β1 mRNA和蛋白表达的相关性,为临床治疗OA寻找有效的干预靶点提供理论依据。方法取自愿捐赠的关节软骨及滑膜标本,其中OA患者60例(实验组),外伤截肢、交叉韧带断裂、盘状软骨损伤与半月板损伤患者20例(正常对照组)。行HE染色观察关节软骨与滑膜的病理组织学改变,免疫组织化学染色观测MMP-9及TGF-β1蛋白表达,原位杂交技术检测MMP-9及TGF-β1 mRNA表达;并进行相关性分析。结果 HE染色显示实验组关节软骨细胞固缩、坏死、排列紊乱,细胞外基质断裂,关节滑膜细胞肥大增生、淋巴细胞和单核细胞浸润,多数小血管增生;正常对照组软骨细胞排列整齐、基质染色均匀,滑膜组织无慢性炎症表现、无明显增生。两组均可见MMP-9、TGF-β1 mRNA和蛋白阳性表达,阳性细胞包括软骨细胞、滑膜衬里层细胞及滑膜下层的血管内皮细胞、成纤维细胞、炎性浸润细胞等。实验组MMP-9及TGF-β1 mRNA和蛋白表达均高于正常对照组(P<0.01)。实验组MMP-9 mRNA与蛋白表达成正相关(r=0.924,P=0.000),TGF-β1 mRNA及蛋白表达亦成正相关(r=0.941,P=0.000);实验组MMP-9及TGF-β1蛋白表达成负相关(r=—0.762,P=0.000),MMP-9 mRNA及TGF-β1 mRNA表达成负相关(r=?0.681,P=0.000)。结论 OA中TGF-β1的高表达下调了关节软骨与滑膜中MMP-9的表达,对OA关节软骨起保护作用,从而延缓OA进展。     

去甲斑蝥素抑制基质金属蛋白酶-9蛋白表达对前列腺癌PC-3细胞迁移及侵袭力的影响

目的:研究去甲斑蝥素抑制基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达对前列腺癌PC-3细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:将去甲斑蝥素作用于前列腺癌PC-3细胞后,Western-blot和实时荧光定量PCR检测MMP-9表达水平的变化,划痕实验和侵袭实验检测PC-3细胞侵袭力的变化,透射电镜观察PC-3细胞的伪足形态变化。结果:去甲斑蝥素干预组PC-3细胞中MMP-9的mRNA表达量显著低于空白对照组(P<0.05),同时,去甲斑蝥素干预组PC-3细胞中MMP-9的蛋白表达量显著低于空白对照组(P<0.05);迁移与侵袭实验结果显示,去甲斑蝥素干预组PC-3细胞划痕愈合程度较空白对照组显著降低(P<0.05);去甲斑蝥素干预组PC-3细胞侵袭能力显著低于空白对照组(P<0.05),透射电镜观察发现去甲斑蝥素干预组PC-3细胞的伪足较空白对照组明显减少。结论:去甲斑蝥素作用于前列腺癌PC-3细胞后,PC-3细胞的侵袭能力下降,可能与MMP-9蛋白表达水平下降使PC-3细胞的侵袭伪足减少有关。     

淀粉样肽前体蛋白17肽对紫外线照射后皮肤成纤维细胞内活性氧簇和基质金属蛋白酶-1 mRNA表达的作用

目的 通过建立体外培养人皮肤成纤维细胞的紫外线损伤模型,探讨淀粉样肽前体蛋白319～335肽段(APP17肽)对紫外线(ultraviolet, UV)照射后人皮肤成纤维细胞的保护作用及其可能的机制.方法 从健康青年男性的包皮组织原代培养成纤维细胞.UV照射培养的成纤维细胞,并给予不同浓度的APP17肽保护.MTT法检测细胞活性,激光共聚焦显微镜检测活性氧(ROS)的水平,实时定量RT-PCR方法检测基质金属蛋白酶-1(MMP-1)mRNA的表达.结果 成功培养原代人皮肤成纤维细胞.并建立体外UV损伤模型.UV照射后细胞活性下降(P<0.05),细胞内ROS产生增多(P<0.05),MMP-1 mRNA表达增加1.78倍(P<0.01).APP17肽可增加UV照射后细胞活性(P<0.05),降低细胞内ROS水平(P<0.05).抑制MMP-1 mRNA表达(P<0.05).结论 APP17肽对成纤维细胞的UV损伤有保护作用,APP17肽的光保护作用可能与其抑制ROS产生有关.     

MMP-3、MMP-13在骨性关节炎患者滑膜中的表达及意义

目的探讨MMP-3、MMP-13在骨性关节炎患者滑膜中的表达及相关性。方法应用免疫组化和Western blotting法检测MMP-3、MMP-13蛋白在30例骨性关节炎(OA,实验组)与30例非OA(对照组)患者滑膜组织中的表达情况。结果免疫组化结果表明MMP-3、MMP-13蛋白在实验组与对照组患者滑膜中的表达有显著性差异(P0.01),且阳性表达多定位于滑膜细胞的胞浆;Western blotting分析结果显示MMP-3、MMP-13蛋白在实验组患者滑膜中表达明显高于对照组患者,且二者在OA组中表达呈正相关性。结论 MMP-3、MMP-13蛋白与骨性关节炎发生发展密切相关,可能作为诊断及判断骨性关节炎的一项重要指标。     

转化生长因子-β1对人软骨细胞基质金属蛋白酶-1mRNA及其阻滞剂mRNA表达的影响

目的观察转化生长因子-β1(TGF-β1)对人透明软骨细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其阻滞剂T(IMP-1)mRNA表达的作用及相关意义,更好地理解骨关节炎软骨损伤的相关机制。方法TGF-β1作用于传代培养的人软骨细胞12h,浓度分别为1ng/mL、10ngm/L、100ng/mL;上述不同浓度TGF-β1与白介素-1β(IL-1β)10ng/mL组成联合作用组,继续培养12h。应用逆转录PCRR(TP-CR)方法及实时荧光定量方法(FQP-CR),检测TGF-β1及其与IL-1β联合作用于传代培养的人透明软骨细胞MMP-1、TIMP-1mRNA表达的含量。结果正常对照组透明软骨细胞可见MMP-1、TIMP-1mRNA扩增产物,而实验组TGF-β11ng/mL、10ng/mL、100ngm/L作用于透明软骨细胞12h后,MMP-1mRNA表达逐渐降低,TIMP-1mRNA表达逐渐增高;TGF-β1与IL-1β联合作用后,随着TGF-β1浓度的升高,MMP-1mRNA表达逐渐降低,TIMP-1mRNA表达逐渐增高,各组之间差异有显著性意义(P<0.05)。提示TGF-β1与MMP-1、TIMP-1mRNA表达之间存在剂量依赖关系。结论不同浓度TGF-β1按照剂量依赖方式抑制人软骨细胞MMP-1mRNA基因的表达,刺激人软骨细胞TIMP-1mRNA基因表达;TGF-β1具有对抗IL-1β对人软骨细胞MMP-1、TIMP-1mRNA表达的作用,也呈现剂量依赖关系。研究结果对揭示骨关节炎的发病机理,指导其治疗具有积极意义。     

MMP-2、TIMP-2、VEGF和bFGF在血管瘤增生及消退过程中的变化

目的 探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及其抑制剂（TIMP-2）、血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在血管瘤增生、消退过程中的变化。方法 采用免疫组织化学链霉亲和素-过氧化酶（SP）法，检测增生期血管瘤32例、消退期血管瘤10例、血管畸形17例及小儿正常皮肤10例标本中MMP-2、TIMP-2、VEGF及bFGF的表达。结果 MMP-2、VEGF及bFGF在增生期血管瘤中的表达明显高于消退期血管瘤、血管畸形和正常皮肤，其差异有统计学意义；TIMP-2在消退期血管瘤中的表达明显高于增生期血管瘤、血管畸形和正常皮肤，其差异有统计学意义。结论 MMP-2、VEGF及bFGF可能促进血管瘤血管生成，从而促进血管瘤增生，而TIMP-2可能促进血管瘤消退。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。     

深圳市某两所小学流行性腮腺炎突发疫情的流行病学分析

目的：通过对深圳市某两所小学发生的流行性腮腺炎突发疫情的流行病学特点及差异性进行分析,为制定科学、高效的防控策略提供科学依据。方法2013年5～7月深圳市大鹏新区某两所小学爆发流行性腮腺炎,以学校为整体研究对象,分别标记为学校A（24个班,学生1210例）和学校B（27个班,学生1274例）,对比两所小学的疫情流行病学差异性。结果分析发现,学校A流行性腮腺炎发病率为4.30%,发病班级所占比54.17%,均较学校B1.73%和29.63%高,对比差异有统计学意义（P＜0.05）;分析显示学校A学生出现疫病平均年龄为（11.2±1.1）岁,较学校B（9.34±1.0）岁,对比差异明显（P＜0.05）;且两组疫病患儿在接种疫苗率对比上差异无统计学意义（P＞0.05）;但疫情发生时,学校B疫苗紧急接种率明显高于学校A,对比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论小学作为流行性腮腺炎爆发的主要场所之一,疫病爆发高峰季节前,针对易感染人群给予相应的疫苗接种等预防控制措施,同时加强流行性腮腺炎的监测,对于降低感染人群数量,减轻、遏制疫情有着积极的意义,值得相关防控部门重视。     

主动脉窦瘤破裂外科治疗的临床研究

目的　探讨主动脉窦瘤破裂局部病理改变及其合并主动脉瓣关闭不全的手术方法。方法　 3 6例主动脉窦瘤破裂 (RASV)合并主动脉瓣关闭不全 (AI) 15例、室间隔缺损 (VSD) 2 6例。补片修补 3 5例 ,其中合并VSD的均以一片法修补 ,合并AI的主动脉瓣置换 (AVR) 6例 ,主动脉瓣成形 4例。手术取材作病理检查 5例。结果　本组 3 6例中手术死亡 2例 ( 5 .6% )。存活的 3 4例病人均经门诊复查或通信随访 0 .3～ 18年 ,其中 2例死亡。病理检查见RASV合并VSD的瘤壁为纤维素样坏死或玻璃样变性。结论　主动脉窦壁纤维素样或玻璃样变性可能是其形成的病理基础。合并主动脉瓣关闭不全时应探查其病变程度 ,酌情一期矫正 ,瓣膜损伤明显时宜行主动脉瓣置换 ,对主动脉瓣环细小的病例 ,可借修补VSD和RASV的补片扩大主动脉瓣环。