骨形成发生蛋白4在阿霉素诱导的U251胞抑制中的表达

目的 观察骨形成发生蛋白4(BMP4)和Smad4在阿霉素诱导U251细胞抑制中的表达变化.方法 应用噻唑蓝(MTT)检测空白组和阿霉素组U251细胞增长活性,应用公式(1-阿霉素组A/空白组A)×100%计算阿霉素组U251细胞增长抑制率.应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测空白组和阿霉素组BMP4和Smad4的表达.结果 阿霉素在24、36、48、60、72 h对细胞抑制率为分别为10%、21%、56%、49%、43%.在24 h抑制率为最高(P<0.05).荧光定量PCR显示阿霉素组与对照组比较,BMP4表达增加了(13.0±0.7)%(P<0.05),Smad4表达增加了(35.0±1.0)%(P<0.05),Western blot显示BMP4和Smad4表达分别增加了23%和38%(P<0.05).结论 阿霉素抑制U251细胞的生长可能通过提高BMP4和Smad4的表达来实现,BMP4可能成为胶质瘤治疗的新靶点.     

多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1与胶质瘤细胞株化疗敏感性之间的关系

目的 探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋向样蛋白1(LRIG1)与胶质瘤细胞化疗敏感性的相关性.方法 替莫唑胺诱导构建多药耐药细胞株U251/TR,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测该细胞株的多药耐药性,逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)法检测LRIG1在U251和U251/TR中的表达变化.转染LRIG1质粒体进入多药耐药细胞株,检测其对化疗药物敏感性变化.结果 成功构建多药耐药细胞株U251/TR,替莫唑胺、阿霉素、环磷酰胺、依托泊苷、硫酸长春新碱对U251的抑制率分别为:(19.30±0.04)％、(39.90±0.13)％、(28.10±0.09)％、(66.20±0.02)％、(26.30±0.11)％,而对U251/TR的抑制率分别为:(3.20±0.03)％、(15.30±0.09)％、(4.10±0.03)％、(45.60±0.10)％、(10.80±0.04)％,两者差异有统计学意义(P＜0.05).其LRIG1的表达明显降低,将LRIG1质粒体转入耐药细胞株后,TMZ、VP16、硫酸长春新碱、环磷酰胺、阿霉素对空白组(耐药细胞株)的抑制率为(2.60±0.02)％、(3.30±0.02)％、(9.50±0.06)％、(2.20±0.05)％、(2.90±0.03)％,而对转染组的抑制率为(19.10±0.34)％、(38.20±0.53)％、(29.10±0.25)％、(15.20±0.55)％、(17.40±0.41)％,耐药性被逆转,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LRIG1与肿瘤的化疗敏感性相关,LRIG1可能与肿瘤的多药耐药有关.     

沙利霉素逆转P-gp介导的肾癌ACHN细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨沙利霉素对肾癌ACHN细胞多药耐药的逆转及其机制.方法 实验分为对照组、阿霉素组、沙利霉素组及阿霉素和沙利霉素联合用药组,药物作用24 h后,CCK-8方法 检测肾癌细胞的生长活性,免疫细胞化学法检测肾癌细胞P-糖蛋白(P-gp)的表达情况.结果 10 μg/ml 阿霉素对肾癌ACHN细胞的生长抑制率仅为4.758%.沙利霉素组对肾癌ACHN细胞生长抑制率呈剂量依赖性,并高于阿霉素组(P<0.05),其中以10 μmol/L组抑制率最高(达17.555%).联合用药组的生长抑制率高于沙利霉素组及阿霉素组(P<0.05),以10 μmol/L 沙利霉素 +10 μg/ml 阿霉素组的抑制率最高(达45.447%).与阿霉素组比较,经沙利霉素处理过的肾癌ACHN细胞中的P-gp蛋白表达下降(P<0.05).结论 沙利霉素增强了肾癌ACHN细胞对阿霉素的敏感性,耐药性逆转的机制之一可能与沙利霉素下调癌细胞中P-gp的表达有关.     

雷米芬太尼对小儿心内直视手术心肺转流前血流动力学的影响

目的 观察不同剂量雷米芬太尼对小儿心内直视手术心肺转流(CPB)前血流动力学的影响.方法 75例拟行先天性心脏病矫治患儿随机均分为四个不同剂量的雷米芬太尼组和芬太尼组(F组).麻醉诱导静注芬太尼10μg/kg、雷米芬太尼2μg/kg;麻醉维持于切皮前10 min分别静脉泵注雷米芬太尼0.5μg·kg-1·min-1(R0.5组)、1.0μg·kg-1·min-1(R1.0组)、1.5μg·kg-1·min-1(R1.5组)、2.0μg·kg-1·min-1(R2.0组)和静注芬太尼10μg/kg(F组).记录麻醉前(T0)、插管后2 min(T1)、切皮后2min(T2)、劈胸骨后2 min(HR)的HR、MAP及各组开胸后到CPB前间羟胺的使用例数情况.结果 五组血流动力学在T0～T3时基本稳定.与F组比较,T3时R0.5、R1.0组FIR明显增快(P<0.05),R2.0组MAP降低(P<0.05).开胸后R2.0组间羟胺使用率(60%)明显高于F组(20%)(P<0.05).结论 输注雷米芬太尼0.5～1.5μg·kg-1·min-1能维持心内直视手术CPB前小儿的血流动力学稳定.     

丙泊酚-芬太尼麻醉置入喉罩时芬太尼的合适剂量

目的 探讨丙泊酚-芬太尼麻醉置入喉罩时芬太尼的合适剂量.方法 45例择期小手术患者随机分为F_(0.5)、F_(1.0)及F_(1.5)三组,分别给予芬太尼0.5、1.0、1.5μg/kg.丙泊酚剂量均为2.5mg/kg.记录喉罩插入完成时间、喉罩插入后自主呼吸恢复时间以及喉罩插入条件.监测HR、BP、SpO_2,以及自主呼吸恢复后RR、P_(ET)CO_2.结果 F_(1.0)组和F_(1.5)组喉罩置入条件优于F0.5.组(P<0.05).喉罩置入后自主呼吸恢复时间F_(1.5)组显著长于F_(0.5)组和F_(1.0)组(P<0.05).结论 丙泊酚2.5 mg/kg复合芬太尼1.0,μg/kg静脉诱导可以获得较佳的喉罩置入条件,较好地保留自主呼吸.     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体联合丁酸纳诱导肝癌HepG-2细胞凋亡研究

目的 观察肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)与丁酸纳(NaB)联合应用对肝癌细胞HepG-2的抑制作用.方法 将HepG-2细胞悬液接种于96孔培养板后,分别或联合加入不同浓度的NaB(1.0、2.5、5.0 mmol/L)和TRAIL(10、100、500、1000μg/L),应用噻唑蓝(MTT)比色法检测其对HepG-2细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内DR4和DR5 mRNA的表达水平.结果经不同浓度的TRAIL处理后,HepG-2细胞生长抑制率和凋亡率分别为(4.5±1.3)%和3.2±0.7)%,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).NaB对HepG-2细胞生长有明显抑制作用,且随着NaB浓度从1.0mmol/L升高到5.0mmol/L时,抑制率从(37.6±2.6)%升高到(58.4±3.0)%,各浓度组间差异有统计学意义(P<0.05),NaB浓度为2.5 mmol/L时的凋亡率为(26.7 5.2)%.联合应用NaB和TRAIL能够明显的提高HepG-2细胞的生长抑制率和凋亡率,与同等浓度的NaB或TRAIL单独应用比较,差异有统计学意义(P<0.05).HepG-2细胞经过NaB作用后,其DR5 mRNA的表达水平明显的高于对照组.结论 HepG-2细胞对单独应用TRAIL诱导的凋亡不敏感,NaB可通过上调HepG-2细胞内DR5 mRNA的表达而增强HepG-2对TRAIL的敏感性.     

丝裂原活化蛋白激酶信号通路在肝细胞生长因子促进人结肠癌细胞增殖移行中的作用

目的 观察丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在肝细胞生长因子(HGF)促进人结肠癌细胞SW620增殖、移行中的作用.方法 在细胞培养液中加入MAPK通路中丝裂原细胞外激酶(MEK1/2)的拮抗剂U0126(终质量浓度分别为0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 μmol/L),之后加入终质量浓度为20 μg/L的HGF.用噻唑蓝(MTT)比色法检测SW620细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,划痕试验检测移行.二甲基亚砜(DMSO)组加终质量浓度为0.1％体积浓度的DMSO,加入同体积的培养液作为对照组.结果 (1) U0126与20 μg/L HGF共同作用SW620细胞48 h后,低浓度(0.5、1.0、2.0 μmol/L)U0126组、DMSO组与对照组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05),当U0126浓度≥4.0μmol/L时能抑制HGF促SW620增殖,但未表现出浓度依赖性.4.0、8.0 μmol/LU0126组增殖抑制率分别为24.6％和28.4％ (P ＜0.05).(2)2.0、4.0、8.0 μmol/L U0126组G1期细胞数增多,而S期细胞数减少,3组的增殖指数(32.32±6.64、23.87±4.88、20.28±5.22)均低于对照组,P＜0.05),且4.0、8.0μmol/L U0126组与2.0 μmol/L组差异有统计学意义(P＜0.05).(3)加入U0126 24 h后,仅8.0μmol/L组SW620细胞移行受到明显抑制,抑制率为60.9％(P＜0.05),DMSO组、4.0mol/L U0126组与对照组移行距离差异无统计学意义(P ＞0.05);48、72 h后,8.0 μmol/L和4.0μmol/L U0126组细胞移行均受到抑制(P＜0.05),48 h抑制率分别为46.5％、61.8％,72 h抑制率分别为44.2％、54.3％,但8.0μmol/L组与4μmol/L组细胞移行距离差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MAPK信号通路参与了HGF促人结肠癌细胞SW620增殖和移行的作用.     

曲古抑菌素A联合单纯疱疹病毒Ⅰ型对U251细胞增殖、凋亡的影响

目的 以体外培养的U251细胞为模型,观察曲古抑菌素A(TSA)联合单纯疱疹病毒Ⅰ型( HSV-1)对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响.方法 以0.5 ×10-3μmol/L TSA和10 MOI HSV-1及0.5 × 101 μmol/L TSA与10 MOIHSV-1组合作用于U251人胶质瘤细胞,72 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况,显微镜下观察各组细胞形态,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况.结果 单一TSA组、单一HSV-1组、TSA与HSV-1联合组U251细胞增殖抑制率分别为(48.0±1.8)％、(18.0±3.1)％、(58.0±5.8)％;凋亡率分别为(47.4±3.5)％、(29.6±3.0)％、(59.6±4.0)％.TSA与HSV-1联合组U251细胞增殖抑制率及凋亡率明显高于单一使用TSA或HSV-1组(P＜0.01).结论 TSA联合HSV-1对体外培养的U251细胞具有协同或叠加杀伤作用.     

抑制survivin 表达对肝癌细胞阿霉素化疗敏感性的影响

目的:探讨survivin基因沉默对人肝癌耐药株阿霉素化疗敏感性的影响.方法:针对人survivin基因设计并合成3条siRNA序列,分别用脂质体法转染人肝癌BEL-7402细胞(3组).以未转染的BEL-7402细胞为对照,分别用RT-PCR法,免疫细胞化学技术及MTT法检测各组细胞survivinmRNA与蛋白的表达,及对阿霉素敏感性.结果:与对照组比较,各转染组细胞survivin mRNA与蛋白的表达均明显降低(均P＜0.05)；对照组细胞对阿霉素的IC50值为(20.60±2.86) μg/mL,各转染组细胞对阿霉素的IC50值分别为(11.53±1.46) μg/mL,(14.13±1.82) μg/mL,(15.53±0.46) μg/mL,与对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论:抑制survivin基因的表达能增加BEL-7402细胞阿霉素化疗敏感性.     

HBV-X蛋白对人肝癌细胞株SMMC-7721恶性表型的影响

目的 观察HBV-X蛋白对低侵袭性人肝癌细胞株SMMC-7721恶性表型的影响.方法 pcDNA3.1(-)-X重组质粒转染SMMC-7721细胞,以空质粒转染作对照,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),Western blot检测X蛋白表达水平,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液X蛋白、MMP-2、MMP-9、尿激酶纤溶酶原活化因子(uPA)水平,并用体外功能实验观察转染前后的恶性表型的变化.结果 重组质粒转染SMMC-7721后X蛋白表达明显升高,细胞培养上清液HBV-X蛋白为(13.02±2.12)μg/L,对照组为(4.07±0.37)mg/L;MMP-2重组质粒转染组为(49.04±4.07)μg/L,对照组为(25.15±5.43)μg/L,MMP-9水平分别为(27.82±2.25)μg/L和(7.89±1.27)μg/L;uPA重组质粒转染组水平明显高于空质粒转染组,分别为(10.78±3.23)μg/L和(1.24±0.34)μg/L,t值分别为19.93,6.27;6.83,7.04,P值均<0.01.体外功能实验提示SMMC-7721转染HBV-X重组质粒后细胞黏附、运动和侵袭能力明显增强,细胞黏附率为(85.33±14.78)%,对照组为(57.34±2.52)%,t=2.96,P<0.05.运动试验透膜组胞数分别为(24.3±1.9)个和(12.3±2.5)个,t=4.89,P<0.05.侵袭试验透膜细胞数分别为(18.2±3.2)个和(9.3±2.3)个,t=4.29,P<0.05.而细胞增殖能力也明显增加.结论 HBV-X蛋白可能通过MMP-2、MMP-9、uPA分泌促进SMMC-7721的恶性表型.     

特异性环氧合酶-2抑制剂与不同抗癌药联用对胶质瘤细胞生长的影响

目的 观察特异性环氧合酶-2抑制剂依托昔布和塞来昔布(celebrex)与长春新碱(VCR)、顺铂(DDP)、鬼臼噻吩甙(VM-26)等抗癌药联用对胶质瘤细胞增殖的影响.方法 30 μmol/L依托昔布、100 μmol/L塞来昔布与不同浓度的VCR、DDP、VM-26单用、联用48 h.噻唑蓝(MTT)比色法检测各组抑制率,中效原理和金正均法评价特异性环氧合酶-2抑制剂与各抗癌药联用的效果.结果 30μmol/L依托昔布和100 μmol/L塞来昔布单用对胶质瘤细胞增殖抑制率分别为(40.87±1.88)%和(46.81±2.37)%;不同浓度(1、10、100 mg/L)的VCR、DDP、VM-26单用对胶质瘤细胞增殖均有不同程度的抑制作用;依托昔布和塞来昔布与不同浓度VCR、DDP、VM-26联用组的抑制率均高于各药物单用组,具有协同作用.结论 依托昔布和塞来昔布与抗癌药联用后起协同作用,特异性环氧合酶-2抑制剂可作为抗癌药的化疗增敏剂.     

LRIG3基因过表达对神经胶质瘤细胞株U251与U87增殖及增殖细胞核抗原和Ki-67表达的影响

目的 探讨过表达LRIG3基因对神经胶质瘤细胞株U251与U87增殖及增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki-67表达的影响及其机制。方法 用携带LRIG3过表达特异性序列和只含空白载体的质粒用慢病毒法感染胶质瘤细胞株U251与U87,筛选稳定株,分别分成实验组和对照组,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测各组细胞LRIG3表达的变化,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测病毒感染后对胶质瘤细胞株U251与U87增殖的影响,用免疫组织化学链霉亲和素生物素复合物(SABC)法分别检测各组细胞中PCNA和Ki-67的表达差异。结果 LRIG3过表达组细胞中LRIG3 mRNA水平与对照组比较分别升高67.6％( U251)和79.9％ (U87),LRIG3蛋白表达水平分别升高62.3％(U87)和91.0％( U251)。MTT法结果显示两实验组细胞增殖率均低于相应对照组。U251细胞对照组PCNA阳性率为(47.81 ±4.67)％,实验组为(27.49±3.17)％,U87细胞对照组PCNA阳性率为(55.50±4.01)％,实验组为(33.60±4.82)％,差异均有统计学意义(P＜0.05)。U251细胞对照组中Ki-67的阳性率为(48.50±6.11)％,实验组为(24.30±3.76)％,U87细胞对照组Ki-67阳性率为(55.20±4.19)％,实验组为(23.50±4.60)％,差异均有统计学意义(P＜0.0l)。结论 LRIG3基因过表达可减少胶质瘤细胞的增殖。     

AG1478对U87细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的 观察表皮生长因子受体抑制剂Tyrphostin AG1478对人脑胶质瘤U87细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度Tyrphostin AG1478作用于体外培养的人脑胶质瘤U87细胞24 h后的细胞生存率,流式细胞仪检测不同浓度Tyrphostin AG1478作用于体外培养的人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞周期分布和细胞凋亡.结果 5、10、15、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞生存率分别为(7 8.93±11.95)%、(46.42±4.12)%、(42.13±7.54)%和(37.48±4.69)%;0、10、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞凋亡率分别为(10.19±3.15)%、(32.02±1.60)%和(54.35±2.80)%;0、10、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞主要分布在G0～G1期,分别为(51.20±1.21)%、(78.61±1.57)%和(82.73±0.77)%,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Tyrphostin AG1478抑制体外人脑胶质瘤细胞增殖,阻滞细胞周期在G0～G1期,诱导细胞凋亡,均呈浓度依赖性.

Abstract：

Objective To investigate the effects of Tyrphostin AG1478 on glioma U87 cells proliferation, cells cycle and apoptosis. Methods U87 cells were cultured for 24 h in the medium which contained AG1478 with different concentrations (0, 5, 10, 15, 20 μmol/L). The methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) assay was used to detect the survival rate, and the cells cycle and apoptosis of the cells were examined by using flow cytometry. Results The cells proliferation was obviously inhibited by AG1478 in a dose-dependent manner. The survival rate of the cells in 5, 10, 15, 20 μmol/L AG1478 groups was (78.93 ±11.95)%, (46.42 ±4. 12)%, (42. 13 ±7.54)% and (37.48 ±4.69)% respectively, which was all significantly higher than that in 0 μ mol/L AG1478 group (P ＜0. 05 ). The apoptotic rate in 10, 25μmol/L AG1478 groups was (32.02 ± 1.60)% and (54. 35 ± 2. 80)% respectively, significantly higher than that in 0 μmol/L AG1478 group ( P ＜ 0. 05 ). The cells cycle was obviously inhibited by AG1478 in a dose-dependent manner. The percentage of cells treated with 10 and 20 μmol/L AG1478 in Go-G1 phase was ( 78. 61 ± 1.57 ) % and ( 82. 73 ± 0. 77 ) % respectively, significantly higher than that in 0 μmol/L AG1478 group (P ＜ 0. 05 ). Conclusion The growth inhibition of glioma U87 cells caused by AG1478 may be associated with apoptotsis induction and the G0-G1 arrest. AG1478 was expected to become a new anti-tumor drug in human glioma.     

中华眼镜蛇毒C组分诱导U251细胞凋亡及bcl-2/bax相关基因表达的研究

目的以人神经胶质瘤细胞系U251为实验对象，研究中华眼镜蛇毒C组分诱导细胞凋亡的的机制。方法将中华眼镜蛇毒C组分分为1．5mg／L（A组），3．0mg／L（B组），4．5mg／L（C组），15．0mg／L（D组）和30．0mg／L（E组）5个浓度组，以顺铂（DDP）40．0mg／L为阳性对照组，另设一阴性对照组。采用DNA凝胶电泳检测法，观察FC诱导细胞凋亡的情况；采用免疫组织化学法（SP）和逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）法检查bcl-2／bax基因的表达。结果中华眼镜蛇毒C组分对U251细胞具有诱导凋亡的作用，FC诱导U251细胞凋亡率与药物浓度密切相关（P〈0．01），使用FC前后，bcl-2／bax表达无显著变化。结论FC有诱导U251细胞凋亡的作用，但其诱导凋亡不依赖于bcl-2／bax基因的改变。     

Enhancement of C2-ceramide antitumor activity by small interfering RNA on X chromosome-linked inhibitor of apoptosis protein in resistant human glioma cells

OBJECT: Many human glioma cells are resistant to ceramide. In this study the authors investigated the mechanisms of that resistance and considered ways to overcome it. METHODS: The authors first administered C2-ceramide (N-acetylsphingosine) to human glioma cells from rare cell lines susceptible to C2-ceramide (SKMG1 and U87MG) and other cell lines resistant to it (U251SP, T98G, SKAO2, and U251MG). Following this, the authors analyzed the statuses of transduction signals such as cell viability, morphological changes, caspases, mitochondrial membrane potential, apoptosis-inducing factor, oligonucleosomal DNA fragmentation, and the inhibitor of apoptosis protein (IAP) family. CONCLUSIONS: Ceramide resistance was found to arise from the inhibition of caspase-7 induced by IAPs, especially X chromosome-linked IAP (XIAP). Small interfering RNA (siRNA) on XIAP quenched that resistance in ceramide-resistant human glioma cells (U251SP, T98G, SKAO2, U251MG), indicating that a siRNA for XIAP may be a useful tool for overcoming the resistance to ceramide in human glioma cells.     

陷阱受体3反义寡核苷酸对胶质瘤U251细胞凋亡的影响

目的 观察陷阱受体3(DcR3)反义核苷酸(ASODN)在胶质瘤细胞凋亡中的作用.方法 构建并挑选DcR3反义核苷酸,转染U251细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法 观察DcR3 mRNA和蛋白有无降低,流式细胞仪观察细胞凋亡的变化.结果 经1.2 μmol/L AS20DN处理的U251细胞可有效地降低DcR3 mRNA和蛋白表达,DcR3/β-actin比值分别为(12.4±3.1)%和(13.5±4.2)%,错义链组、脂质体组、对照组mRNA和蛋白分别为(68.8±4.5)%、(74.5±5.0)%、(71.3±6.4)%和(78.2±6.8)%、(79.8±4.5)%、(76.4±5.6)%,差异有统计学意义(P＜0.05),同时,传染DcR3反义核苷酸的U251细胞凋亡率为(42.9±13.1)%,明显高于错义链组(15.8±4.8)%、脂质体组(15.7±3.7)%和对照组(14.6±4.0)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DcR3反义核苷酸可使U251细胞凋亡增多.     

原儿茶酸对人胶质瘤细胞株U251MG增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨原儿茶酸(PCA)对人胶质瘤细胞株U251MG增殖、凋亡的影响及相关分子机制。方法常规培养人胶质瘤细胞株U251MG。应用噻唑蓝(MTT)技术检测0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L浓度PCA干预后各组细胞的活性。流式细胞术(FCM)检测PCA对U251MG细胞周期和凋亡的影响。应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测U251MG在药物干预前后增殖凋亡相关基因和的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白的变化,组间比较采用t检验。结果0μmol/L的PCA干预48 h后细胞活性为0.881±0.079、2.5μmol/L为0.757±0.077、5.0μmol/L为0.600±0.101、10.0μmol/L为0.532±0.056(F=35.131,P<0.01),差异有统计学意义。RT-qPCR和Western blot结果显示,随PCA浓度增加,增殖细胞核抗原(PCNA)的mRNA表达水平为1.172±0.153、0.756±0.059、0.601±0.061、0.390±0.059、0.236±0.036(F=55.618,P<0.01),差异有统计学意义;蛋白的表达水平分别为0.934±0.071、0.781±0.053、0.650±0.045、0.384±0.046、0.174±0.019(F=113.681,P<0.01),差异有统计学意义。FCM结果显示,PCA组U251MG细胞的G0/G1期比例[(71.033±8.570)%]高于对照组[(52.057±6.735)%,t=3.015,P<0.05],差异有统计学意义,G2/M比例[(18.833±7.639)%]低于对照组[(36.910±5.328)%,t=-3.362,P<0.05],差异有统计学意义;Western blot结果显示,增殖相关蛋白Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E表达在PCA组低于对照组(0.405±0.047比1.217±0.101、0.673±0.070比1.166±0.110、0.604±0.085比1.286±0.085,t=-12.625、-6.549、-9.827,P<0.01),而p21、p27表达在PCA组高于对照组(1.206±0.096比0.575±0.046、0.990±0.086比0.481±0.045,t=10.267、9.083,P<0.01)。FCM结果显示,PCA组U251MG细胞凋亡率(29.971±7.572)%高于对照组[(10.264±3.121)%,t=4.168,P<0.05];Western blot结果显示,凋亡相关蛋白bcl-2、pro-Caspase-3、pro-Caspase-9表达在PCA组低于对照组(0.337±0.024比1.198±0.113、0.430±0.044比1.150±0.098、0.486±0.049比1.278±0.107,t=-12.909、-11.609、-11.656,P<0.01),bax、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9表达在PCA组高于对照组(1.312±0.097比0.471±0.051、1.173±0.140比0.460±0.052、1.245±0.089比0.606±0.080,t=13.292、8.269、9.249,P<0.01)。Westernblot结果显示,PCA组U251MG细胞MAPK信号通路中p-ERK表达明显低于对照组(0.591±0.047比0.989±0.084,t=-7.162,P<0.01)。结论PCA能通过调控MAPK信号通路中p-ERK的活性而抑制胶质瘤细胞U251MG的增殖,并促进凋亡。     

黄芩苷对胶质瘤细胞增殖及侵袭的影响及其机制

目的探讨黄芩苷对U-251胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响及可能机制。方法人星形细胞瘤细胞(U-251胶质瘤细胞)购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。采用0、10、20、50、100和200 mg/L等浓度黄芩苷处理U-251胶质瘤细胞筛选出半数抑制浓度(IC50)。将U-251胶质瘤细胞分为对照组(未行任何处理)、黄芩苷组(50 mg/L黄芩苷处理)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组(50 mg/L黄芩苷和10μg/L浓度TNF-α处理),分别采用克隆形成实验和Transwell实验检测细胞增殖和侵袭;酶联免疫吸附法检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、核因子活化B细胞-κ轻链增强子(NF-κB)、磷酸化-NF-κB(p-NF-κB)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和磷酸化-IκBα(p-IκBα)蛋白表达水平,组间两两比较采用SNK-q检验。结果黄芩苷处理U-251胶质瘤细胞48 h的IC50为47.91 mg/L。黄芩苷组U-251胶质瘤细胞克隆形成率、侵袭细胞数、IL-1β和IL-6水平、PCNA、MMP-2、MMP-9、p-NF-κB和p-IκBα蛋白表达水平低于TNF-α组和对照组[克隆形成率分别为(21.04±2.42)%、(49.73±5.04)%和(56.29±5.37)%,侵袭细胞数分别为(40.02±4.16)、(68.18±5.22)和(76.25±6.50)个,IL-1β分别为(19.26±2.04)、(35.18±3.82)和(42.08±4.12)ng/L,IL-6分别为(113.38±10.24)、(204.55±20.16)和(216.07±18.52)ng/L,PCNA分别为(0.28±0.03、0.56±0.05和0.64±0.06),MMP-2分别为(0.09±0.01、0.19±0.02和0.22±0.02),MMP-9分别为(0.14±0.01、0.28±0.02和0.31±0.03),p-NF-κB为(0.17±0.02、0.38±0.04和0.35±0.03),p-IκBα为(0.14±0.01、0.41±0.04和0.37±0.03)],差异均有统计学意义(F=157.904、112.532、103.507、100.032、137.829、139.004、158.786、102.137、77.871,P<0.05)。结论黄芩苷通过抑制NF-κB信号通路调控炎症反应抑制U-251胶质瘤细胞增殖和侵袭。     

MS-275阻断STAT3信号通路诱导U251细胞凋亡

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对脑胶质瘤细胞株U251细胞增殖的影响及促凋亡机制.方法 以不同药物浓度梯度和U251细胞分别共培养24、48、72 h后,应用CCK-8法检测肿瘤细胞增殖,瑞氏-姬姆萨染色法观察细胞形态变化,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI法经流式检测细胞凋亡率,免疫印迹检测STAT3蛋白和PARP蛋白表达.结果 MS-275能显著抑制U251细胞的增殖,药物浓度40 nmol/ml,培养72 h,抑制率为(79.0±1.7)%;经药物作用后,细胞呈现凋亡形态,胞质和胞核浓缩或碎裂;G0/G1期细胞由(66.320±0.456)%降至(38.288±1.242)%(P＜0.01),G2/M期细胞由(19.940±0.580)%升高至(35.650±0.507)%,而后降至(22.343±1.224)%(P＜0.01),亚G0凋亡峰由(0.230±0.035)%增高至(18.393±1.449)%(P＜0.01);总凋亡率由(2.133±0.416)%增高至(29.000±2.307)%(P＜0.01);免疫印迹检测提示磷酸化STAT3表达水平降低,PARP被剪切.结论 MS-275对胶质瘤细胞的增殖抑制作用具有浓度和时间依赖性,它通过阻断STAT3磷酸化,诱导激活Caspase-3凋亡途径.

Abstract：

Objective To investigate the effect of MS-275 on the proliferation of brain glioma cells. Methods U251 cells were respectively cultured for 24, 48, 72 h, with different concentrations of MS-275. CCK-8 assay was used to assess the proliferation of U251 cells. The morphological changes of U251 cells were observed by Wright-Giemsa staining. The cell cycle was analyzed by PI dyeing. The apoptosis rate was assayed by flow cytometry using annexin V-FITC/PI. The protein expression of STAT3 and PARP was detected by Western blotting. Results MS-275 could significantly inhibited proliferation of U251 cells. After treatment with MS-275, apoptosis of U251 cells was seen; The ratio of G0/G1 was decreased from ( 66.320 ± 0.456 ) % to ( 38. 288 ± 1. 242 ) % ( P ＜ 0. 01 ), the percentage of G2/M cells was increased from ( 19. 940 ± 0. 580 ) % to ( 35.650 ± 0. 507 ) %, then decreased to ( 22. 343 ± 1. 224 ) %(P＜0.01), and ratio of sub-G0 was increased from (0.230 ±0.035)% to (18.393 ±1.449)% (P＜0. 01 ); Total apoptosis rate was increased from ( 2. 133 ± 0.416 ) % to ( 29. 000 ± 2. 307 ) % ( P ＜ 0. 01 );The expression level of phosphorylated STAT3 was significantly downregulated, and the cleavage of PARP was detected by Western blotting. Conclusion MS-275 inhibites proliferation of brain glioma cells in a time- and dose-dependent manner, which is achieved by inducing apoptosis.