同种异体软骨细胞移植术后关节软骨蛋白多糖的测定

目的应用Pluronic F-127负载同种异体软骨细胞移植修复兔全厚关节软骨损伤，对于新生的修复组织进行基质蛋白多糖含量测定，以探讨此方法修复全厚关节软骨损伤的可行性。方法取3个月龄新西兰大白兔关节软骨细胞体外培养扩增，与20％Pluronic F-127凝胶混合。选27只健康同种成年大白兔，人为造成双侧膝关节软骨缺损。实验组软骨缺损处植入培养的软骨细胞／Pluronic F-127混合物，对照组缺损处单纯注入Pluronic F-127凝胶和空白对照。然后，对修复组织进行大体观察及蛋白多糖含量测定。结果移植的软骨细胞-载体复合物中的软骨细胞能良好地生长，12周时再生组织与周围正常软骨组织外观相似，界限模糊。实验组与对照组各时期蛋白多糖含量均有非常显著性差异，实验组不同时期的蛋白多糖含量之间均有显著性差异，实验组12周时蛋白多糖含量与正常软骨组织无显著性差异。结论Pluronic F-127负载同种异体软骨细胞移植是治疗关节软骨缺损的有效方法。     

同种异体软骨细胞移植术后关节软骨蛋白多糖的测定

目的 应用Pluronic F-127负载同种异体软骨细胞移植修复兔全厚关节软骨损伤,对于新生的修复组织进行基质蛋白多糖含量测定,以探讨此方法修复全厚关节软骨损伤的可行性.方法 取3个月龄新西兰大白兔关节软骨细胞体外培养扩增,与20%Plurortic F-127凝胶混合.选27只健康同种成年大白兔,人为造成双侧膝关节软骨缺损.实验组软骨缺损处植入培养的软骨细胞/Pluronic F-127混合物,对照组缺损处单纯注入Pluronic F-127凝胶和空白对照.然后,对修复组织进行大体观察及蛋白多糖含量测定.结果 移植的软骨细胞-载体复合物中的软骨细胞能良好地生长,12周时再生组织与周围正常软骨组织外观相似,界限模糊.实验组与对照组各时期蛋白多糖含量均有非常显著性差异,实验组不同时期的蛋白多糖含量之间均有显著性差异,实验组12周时蛋白多糖含量与正常软骨组织无显著性差异.结论 Pluronic F-127负载同种异体软骨细胞移植是治疗关节软骨缺损的有效方法.     

同种异体组织工程化软骨修复关节软骨缺损

目的：探讨应用同种异体组织工程化软骨修复软骨缺损的可行性。方法：取新西兰大白兔双膝关节软骨细胞，经体外培养扩增，与PlruonicF127混合，植入人为造成的异体兔膝关节软骨缺损。结果：空白对照组和材料对照组只见少许纤维组织修复，缺损凹陷。实验组8周后关节软骨缺损区由部分白色透明样软骨组织充填，Masson三色染色见胶原分布较均匀，软骨陷窝多见，未见明显炎症现象，16周后缺损完全修复，缺损表面较光滑，部分颜色呈淡兰色，软骨陷窝清晰，细胞与基质分布均匀，未见炎症和退变现象，结论：同种异体组织工程化软骨可用于修复关节软骨缺损。     

同种异体组织工程化软骨修复关节软骨缺损

目的　探讨应用同种异体组织工程化软骨修复软骨缺损的可行性。方法　取新西兰大白兔双膝关节软骨细胞 ,经体外培养扩增 ,与PlruonicF12 7混合 ,植入人为造成的异体兔膝关节软骨缺损。结果　空白对照组和材料对照组只见少许纤维组织修复 ,缺损凹陷 ;实验组 8周后关节软骨缺损区由部分白色透明样软骨组织充填 ,Masson三色染色见胶原分布较均匀 ,软骨陷窝多见 ,未见明显炎症现象。 16周后缺损完全修复 ,缺损表面较光滑 ,部分颜色呈淡兰色 ,软骨陷窝清晰 ,细胞与基质分布均匀 ,未见炎症和退变现象。结论　同种异体组织工程化软骨可用于修复关节软骨缺损。     

组织工程化软骨修复兔膝关节软骨缺损的实验研究

目的 评估同种异体组织工程软骨修复兔膝关节全层软骨缺损的有效性。方法分离收集成年新西兰大白兔软骨细胞进行体外培养。建立双侧兔膝关节软骨缺损模型，用去端肽胶原（atelocollagen）凝胶与所培养的异体兔关节软骨细胞共同植入兔膝关节软骨缺损处，并设对照组。分别于手术后4周、8周观察大体标本以及组织学修复结果，并进行Wakitan的评分，评估此方法的有效性。结果大体观察结果表明，与对照组相比，实验组缺损处由软骨组织修复而对照组缺损处由纤维样组织填充。组织学观察可以见到实验组关节软骨缺损处有密集的软骨细胞而对照组关节缺损处只有纤维细胞无软骨细胞。结论通过短期观察表明以同种异体软骨细胞-去端肽胶原复合物修复全层软骨缺损的方法是有效可行的，为其进一步临床应用提供了参考。     

抑制同种异体软骨细胞复合支架免疫反应研究进展

损伤或疾病造成的关节软骨缺损在临床上较常见,许多用于修复关节软骨损伤的方法各有优点,但均存在一定缺陷。组织工程学技术为关节软骨缺损的再生与修复提供了新思路,利用体外培养扩增的同种异体软骨细胞复合支架修复软骨缺损已有大量报道。该文就同种异体软骨细胞复合支架修复关节软骨损伤的免疫反应,在软骨细胞免疫原性、免疫反应发生途径、降低免疫反应机制及方法等方面作一综述。     

软骨细胞-胶原海绵复合移植修复软骨缺损的形态学研究

目的：研究软骨细胞-胶原海绵复合移植修复软骨缺损的疗效。方法：软骨细胞取自3日龄异体幼兔，体外培养后接种于胶原海绵支架上，再移植于兔膝关节全层软骨缺损处。在同一大白兔双膝关节内外髁分3组作自身对照研究，股骨内髁作软骨细胞-胶原海绵复合移植组，右膝股骨外髁作单纯胶原海绵移植组，左膝股骨外髁作空白对照组。移植术后第4、8、12、16、20周分批处死，进行大体、组织学和超微结构观察。结果：软骨细胞-胶原海绵复合移植组缺损处为软骨性修复，而单纯胶原海绵移植组和空白对照组为纤维性修复。结论：运用软骨组织工程的原理，以胶原海绵作为支架材料的异体软骨细胞移植可修复兔关节软骨缺损，为治疗关节软骨缺损提供了一种有效的方法。     

新鲜同种异体骨软骨移植修复软骨缺损

目的联合应用新鲜同种异体骨软骨移植,和局部注射碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growthfactor,bFGF),探讨能否促进关节软骨缺损区新生软骨的形成,提高软骨缺损修复的成功率。方法48只青紫兰兔,96个实验关节,随机分为A、B、C、D组。无菌条件下制作骨软骨缺损模型。在A组缺损区单纯植入新鲜的同种异体骨软骨,B组单纯局部注射重组人bFGF,C组局部注射bFGF后同时植入新鲜的同种异体骨软骨,D组用作空白对照。术后第4、8、12周作大体观察、X线摄片、组织学检查及免疫组化检查。结果移植加注射bFGF组促进软骨缺损修复的效果均好于其他组,图像分析仪进行软骨细胞记数有显著差异(P<0.05),有统计学意义。修复软骨型胶原免疫组化染色强阳性。结论采用新鲜的同种异体骨软骨移植及联合应用碱性成纤维细胞生长因子,二者能起交互作用,促进了新生软骨的形成。     

骨髓基质干细胞复合Ⅰ型胶原修复兔膝关节软骨缺损的研究

目的 探讨骨髓基质干细胞复合Ⅰ型胶原海绵对兔膝关节浅层大面积软骨缺损的修复作用;观察3H-TdR对骨髓基质干细胞的示踪作用.方法 骨髓基质干细胞复合组织工程支架Ⅰ型胶原海绵,植入修复兔膝关节大面积浅层软骨缺损模型,分别于术后4、12、24周取材,观察修复效果;运用3H-TdR标记骨髓基质干细胞,同法植入软骨缺损区,分别于术后4、12、16及24周取材,液体闪烁计数定量分析、乳胶封片、4周后显影定性分析.结果 实验组术后4周缺损表面未见明显的新生软骨形成;12周,缺损表面有少量的新生软骨形成;24周,缺损表面的新生软骨较4、12周的新生软骨明显,仍存在部分缺损尚未修复.对照组则均未见明显的修复.修复组织的细胞核内均有放射活性,与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),提示修复组织的细胞来源为体外移植的细胞,而非自体细胞,至术后24周,植入的细胞仍然存活.结论 该方法对兔膝关节软骨缺损具有修复作用,但不能完全修复;所修复组织的细胞来源为植入的骨髓基质干细胞;3H-TdR标记对骨髓基质干细胞具有较好的长期示踪作用.     

纳米左旋聚乳酸/聚己内酯复合骨髓基质源性软骨细胞修复犬膝关节软骨缺损

目的探讨纳米左旋聚乳酸/聚己内酯(纳米PLLA-b-PCL)复合骨髓基质源性软骨细胞修复犬膝关节软骨缺损的可行性。方法将纳米PLLA-b-PCL支架/骨髓基质源性软骨细胞复合物植入犬膝关节软骨缺损,其为实验组;另一组膝关节造成缺损后旷置,作为空白对照。术后12周,24周取材,行大体及组织学观察,组织学评分。结果术后12周、24周大体形态学和组织学观察均表明实验组得到较好修复,而对照组缺损未修复。结论骨髓基质细胞源性软骨细胞是修复关节软骨缺损较理想的种子细胞;纳米PLLA-b-PCL在新生软骨形成的同时,逐渐降解吸收,是组织工程修复关节软骨缺损的适宜支架材料,其具有良好的应用前景。     

骨髓基质细胞与几丁质复合移植修复关节软骨缺损的实验研究

目的 :探讨骨髓基质细胞 (MSCs)与几丁质复合移植对关节软骨缺损的修复效果。方法 :分离兔骨髓基质细胞并体外培养增殖后 ,与几丁质无纺网复合培养 ;制作兔膝关节软骨全层缺损模型 ,分别用MSCs 几丁质复合物移植、单纯几丁质移植及空白对照组 ,术后第 4、 8、 12、 16周处死动物 ,大体观察并做组织形态学观察。结果 :几丁质 MSCs组术后 16周关节软骨缺损其修复组织表面与正常软骨完全相同 ,软骨及软骨下骨修复 ;单纯几丁质移植组为透明软骨修复 ,表面不平整 ,细胞排列不规则 ,软骨下骨基本修复 ;空白对照组术后各期均为纤维组织修复。结论 :MSCs与几丁质复合移植对关节软骨缺损有较好的修复效果     

组织工程软骨修复兔关节软骨缺损的初步研究

目的 探讨运用组织工程软骨植入修复兔胫骨平台外侧髁全关节软骨浅层缺损的可行性。方法 取2周龄乳兔软骨细胞体外培养传代至第3代后，与人胎盘I型胶原蛋白海绵复合后植入成年兔的胫骨体平台外侧髁浅层完全软骨缺损区，并设立空白对照组，分别于术后4、12和24周取材，观察修复效果。结果 实验组术后4周缺损表面未见明显的新生软骨形成；12周，缺损表面有少量的新生软骨形成，组织学切片上可见软骨细胞呈边缘不规则的，小蜂窝状结构，软骨细胞周围有软骨陷窝形成；24周，缺损表面的新生软骨较4、12周的新生软骨明显，表面光滑，且与周围组织结合紧密，但仍存在部分缺损尚未修复。组织学切片上可见软骨陷窝形成，并分泌甲苯胺蓝异染的软骨基质。面对照组则均未见明显的修复。结论 制成的组织工程软骨对兔胫骨平台软骨浅层完全缺损有修复作用，但不能完全修复缺损。     

应用骨形态发生蛋白(BMP)修复关节软骨缺损的实验研究

目的探讨关节软骨全层缺损应用骨形态发生蛋白修复的效果。方法于2004年5月至2005年12月,30只新西兰种成年兔随机分为A,B,C三组,每只兔子左膝股骨髁间凹做一大小为4mm×5mm×2.5mm的全层关节软骨缺损。A,B组缺损内分别填充骨形态发生蛋白/纤维蛋白胶(BMP/FG)及FG,C组为空白。术后28周对缺损修复情况行大体形态、组织学和电镜观察。结果BMP/FG组,缺损组织以透明软骨修复,接近正常组织,而FG组和空白组则以纤维组织修复为主。结论BMP/FG能较好的完成关节骨软骨全层缺损的修复,并随着时间的延长修复的软骨越接近正常软骨,但修复软骨缺损的组织与邻近正常软骨组织连接性仍不是十分理想。     

组织工程技术修复同种异体兔关节软骨缺损实验研究

目的：探讨关节软骨缺损治疗的新途径。方法：把几丁糖作为软骨细胞培养的支架。将几丁糖与软骨细胞一起体外培养,然后移植修复同种异体兔的膝关节软骨缺损,并对关节软骨的修复过程进行术后16周大体、组织学、电镜观察及修复组织厚度测定。结果：几丁糖无纺网在术后2周开始降解吸收,术后10-12周完全吸收;术后第16周在实验侧关节软骨缺损处可见成熟的透明软骨,软骨缺损得到完全修复。结论：几丁糖泊生物学特性符合组织工程中对细胞培养支架的要求;几个糖负载软骨细胞移植修复同种异体兔膝关节软骨缺损,兔膝关节全层软骨缺损得到成功修复。为临床上关节软骨缺损的治疗提供了可能的途径。     

自体骨膜延迟游离移植修复成年后关节软骨缺损的实验研究

目的：研究年龄对自体骨膜游离移植修复关节软骨缺损的影响,探讨延迟游离移植能否提高成年后骨膜修复软骨能力。方法：选中国白兔,成年兔20只,幼兔10只,分3组。A组：成年兔左膝骨膜直接游离移植组;B组：成年兔右膝骨膜延迟游离移植组;C组：幼兔骨膜直接游离移植组,取骨膜或骨膜新生组织、行光镜、电镜组织学观察比较。结果：移植前B、C组骨膜厚度、细胞计数及细胞活跃程度均优于A组（均为P＜0．01）,移植后12周3组关节软骨缺损获得不同程度修复,C组优于A组（P＜0．01）及B组（P＜0．05）,B组优于A组（P＜0．01）。结论：自体骨膜局部剥离、原位激活,体内培养、延迟游离移植可提高成年骨膜成软骨能力,更好地修复成年后关节软骨缺损。     

自体软骨细胞团块植入修复兔陈旧性关节软骨缺损的实验研究

目的 观察自体软骨细胞团块植入对兔关节软骨缺损的修复作用. 方法 24只成年新西兰大白兔48侧膝关节,随机分为三组(n=16)并制备双膝关节股骨滑车软骨缺损模型.空白对照组无特殊处理,骨膜移植组将骨膜覆盖缺损并缝合于缺损两侧的股骨髁上,实验组将自体软骨细胞团块植入缺损中.术后3、6个月分别取材(n=8),进行大体和组织学观察,修复组织行Wakitani评分并进行比较. 结果实验组共成功取材11个缺损关节,9个为透明软骨修复,2个因植入细胞生长状态差未修复;骨膜移植组修复组织为纤维软骨或纤维组织,修复组织薄,基质异染弱;空白对照组仅有少量纤维组织填充缺损底部.修复组织Wakitani评分:实验组3.82分,骨膜移植组6.71分,空白对照组9.23分,差异有统计学意义(F=5.96,P=0.00). 结论自体软骨细胞团块植入能较好修复关节软骨缺损,修复的质量与植入细胞的质量有关.     

Allograft of cultured chondrocytes into articular cartilage defects in rabbits--experimental study of the repair of articular cartilage injuries

Articular cartilage defects were created by dill holes, 2 mm wide and 3 mm deep, through the articular cartilage into the subchondral bone in the patellar groove of the femur in mature rabbits. The defects received graft of cultured chondrocytes and the matrix obtained from the primary culture of chondrocytes isolated from the articular cartilage or auricular cartilage in immature rabbits. The isolated cells were cultured for 10 to 14 days. For graft, the cultured chondrocytes together with the matrix were detached from the culture chamber using rubber policemen and centrifuged. The repair of the grafted defects or defects without graft (control) was histologically studied 2 to 12 weeks after operation. The defects without the graft were progressively filled with fibrous tissue containing spindle shaped cells, fibers perpendicular to the surface, and matrix showing weak metachromasia with toluidin blue at 8 weeks. The defects received articular cartilage cell graft were occupied by new cartilage tissue consisting colonylike crumps of chondrocytes 2 weeks after operation. The crumps showed strong metachromasia with toluidin blue and strong stainability for safranin-O. By 4-8 weeks, the defects were filled with homogeneous cartilage. At 12 weeks, arrangement of the chondrocytes of the superficial layer of the new cartilage became columnar as seen in the normal articular cartilage. The defects received elastic cartilage cell graft were filled by reformed cartilage with chondrocytes surrounded by elastic fibers 2-12 weeks after operation. The results indicate that allograft of cultured chondrocytes with matrix into the articular cartilage defects accerated the repair process of the defects by formation of the new cartilage derived from the grafted chondrocytes.     

CS/PVA凝胶负载Ad-hTGF-β1转染的BMSCs移植修复兔关节软骨缺损

目的 探讨温敏型CS/PVA凝胶负载Ad-hTGF-β1转染的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植修复兔关节软骨缺损的实验效果.方法 体外分离培养兔BMSCs,在Ad-hTGF-β1转染1周后,用细胞免疫化学方法检测hTGF-β1在细胞内的表达.用24只成年新西兰大白兔制造关节软骨缺损模型,双侧后肢均用于实验,动物模型随机分为4组,各组动物6只.A组:凝胶复合转染BMSCs修复组;B组:凝胶复合未转染BMSCs修复组;C组:凝胶修复组;D组:空白对照组.在术后16周时处死动物取材,通过大体标本和组织学染色观察评价各组修复效果,按照改良Pinoda法评分,对各组修复效果进行统计学分析.结果 免疫组化证实体外培养的BMSCs在Ad-hTGF-β1转染后表达hTGF-β1蛋白,阳性率为85.4%.术后16周取材见凝胶复合转染细胞组关节软骨缺损部位为软骨样组织填充,组织学观察见再生的软骨组织细胞排列及细胞密度与正常软骨相似,Ⅱ型胶原免疫组化阳性,Pineda评分同其它各组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CS/PVA凝胶作为一种温敏型可注射支架材料,其负载hTGF-β1转染的BMSCs移植可用于兔关节软骨缺损修复.

Abstract：

Objective To investigate the experiment effects of rabbit joint articular cartilage defects repaired by thermosensitive CS/PVA composite hydrogel engineered hTGF-β1 transfected bone marrow mesenchymal stem cells. Methods Bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and cultured in vitro. The positive rate of transfection was defected by cell immunohistochemistry methods after Ad-hTGF-β1 transfected for 1 week. Twenty-four adult New Zealand white rabbits with full articular cartilage defects were randomly divided into 4 groups, each group had 6 animals, both hind limbs were used in the experiment. Group A: hydrogel combined with transfected cells; Group B: hydrogel combined with untransfected cells; Group C: hydrogel group; Group D: blank control group. Specimens and histological observation were used to evaluate the repair effect after 16 weeks according to Pineda's score. Results The positive rate of hTGF-β1 expression in BMSCs was about 85.4% after transfection. After 16 weeks the defects of group A were repaired by cartilage-like tissue, the cell arrangement and densities of regenerated cartilage were similar to normal cartilage, type Ⅱ collagen immunohistochemistry were positive. There was a significant difference in Pineda's score compaired with other groups (P ＜ 0.05). Conclusion Rabbit articiular cartilage defects could be repaired by CS/PVA hydrogel engineered hTGF-β1-transfected bone marrow mesenchymal stem cells.