血红素氧合酶-1减轻大鼠移植肝缺血再灌注损伤的作用及机制

目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)减轻大鼠移植肝缺血再灌注损伤的作用及其机制.方法 选择近交系雄性SD大鼠作为肝移植的供、受者;采用单纯随机方法将48只SD大鼠随机分为对照组、抑制组和诱导组(每组供、受者各8只).对照组:供肝不用任何药物处理;抑制组:在获取供肝前24 h,经供者腹腔注射HO-1抑制剂锌原卟啉20 mg/kg进行预处理;诱导组:在获取供肝前24 h,经供者腹腔注射HO-1诱导剂钴原卟啉5 mg/kg进行预处理.获取供肝后,在4℃UW液中冷保存24 h.肝移植前检测供肝HO-1的表达水平;肝移植后6 h采血并获取移植肝标本,分离培养枯否细胞;检测受者的肝功能;检测枯否细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量;观察移植肝组织病理学表现以及枯否细胞CD14 mRNA的表达水平和蛋白含量测定.结果 移植前诱导组供肝HO-1的表达水平明显增高.移植后诱导组血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)含量明显降低;移植肝组织病理学损伤减轻;枯否细胞培养上清中TNF-α和IL-6含量减少;而且枯否细胞上的CD14 mRNA表达水平和蛋白含量也明显低于抑制组.结论 诱导供肝HO-1表达上调可能抑制了枯否细胞的激活,从而减轻大鼠移植肝缺血再灌注损伤.     

诱导血红素氧合酶-1对脂肪供肝缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨诱导血红素氧合酶-1(HO-1)是否可减轻大鼠脂肪变性供肝移植后缺血再灌注损伤及其机制.方法 sD大鼠敢予高脂饲料喂养4周后彤成轻度脂肪变性供肝;随机分为3组,A组(n=25)供肝切取前24 h腹腔注射血晶素125 mg/kg;B组(n=25)供肝切取前24 h腹腔注射血晶素125 mg/kg,移植肝血流开放时静脉注射Znpp 1.5 mg/kg,C组(n=25)供肝切取前腹腔注射生理盐水;受体肝移植后3、6、12、24、48 h分别取移植肝组织检测HO-1活性,放射免疫法检测血清中肿瘤坏死因子中(TNF)-α水平,苏木素-伊红(HE)染色病理学检查缺血再灌注损伤程度.结果 术后各时段HO-1活性A组均显著强于B组及C组(P<0.05),而B组和C组比较差异无统计学意义(P>0.05);术后各时段肿瘤坏死因子-α水平A组均显著低于B组及C组(P<0.05),而B组和C组比较差异无统计学意义(P>0.05);各组移植肝缺血再灌注损伤以术后12 h最为明显,A组表现为轻度,而B组及C组表现为中度缺血再灌注损伤.结论 诱导HO-1可通过抑制TNF-α的表达而减轻脂肪供肝移植术后缺血再灌注损伤.     

携带IL-13基因肝干细胞对冷缺血大鼠移植肝脏保护作用的研究

目的以基因工程干细胞治疗的方式来改善缺血-再灌注状况,使移植肝脏更好地耐受缺血-再灌注,以减少移植术后的并发症,延长移植器官存活期。方法利用已建立的Wistar大鼠冷缺血原位肝移植(OLT)模型,术中经受体大鼠门静脉输入IL-13基因修饰的或未修饰的肝卵圆细胞(HOC)即转染组和未转染组,分别于术后1、3、7及14d检测受体大鼠肝脏功能变化、组织学变化、胆管上皮细胞(BEC)的增殖情况、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达、肝组织中HO-1 mRNA的表达,并观察移植大鼠术后的存活情况。结果转入IL-13基因的HOC对冷保存损伤的肝脏有一定的保护作用;术后7d,肝移植组和未转染组的α-SMA表达较转染组明显(P0.05);术后3d,未转染组和转染组的BEC增殖指数明显低于肝移植组(P0.05)。转染组术后各时相点的HO-1 mRNA表达水平均明显高于相应时相点的其他各组的水平(P0.05);移植术中经门静脉输入HOC对缺血性胆管损伤所诱导的BEC增殖有一定的抑制作用,对BEC具有一定的保护作用;肝移植组生存率明显低于假手术组和转染组(P0.05)。结论IL-13的持续表达能促进术后移植肝内HO-1 mRNA的表达,这有利于对供肝的保护,有利于受体大鼠术后肝功能的恢复。促进HO-1 mRNA的表达是IL-13对BEC的具有保护作用的机理之一。     

血红素氧化酶-1在大鼠肝移植中保护作用的研究

目的 探讨改变血红素氧化酶-1(HO-1)的活性对大鼠同种异体原位肝移植的影响.方法 用二袖套法建立大鼠同种异体原位肝移植模型,实验分为4组:实验对照组(n=44):供体鼠术前24 h腹腔注射生理盐水5 ml/kg;氯化血红素组(n=44):供体鼠术前24 h腹腔注射氯化血红素100 mg/kg,在供肝4℃生理盐水保存期间,经门静脉注入氯化血红素100 mg/kg;锌原卟啉组(n=44):供体鼠术前24 h腹腔注射锌原卟啉5 mg/kg,在供肝4℃生理盐水保存期间,经门静脉注入锌原卟啉5 mg/kg;正常大鼠作为正常对照组(n=5).分别应用RT-PCR及免疫组化技术检测移植肝脏中HO-1 mRNA及蛋白表达,并用流式细胞仪分析移植肝脏肝细胞的凋亡率.结果 肝移植术后供体肝HO-1表达增强.肝移植术后氯化血红素组HO-I mRNA表达水平高于实验对照组,血清ALT和AST水平低于实验对照组(P<0.05);锌原卟啉组术后肝组织HO-1 mRNA表达水平低于实验对照组(P<0.05),血清ALT和AST水平高于实验对照组(P<0.05).肝移植术后48 h肝细胞凋亡率锌原卟啉组最高,氯化血红素组最低,实验对照组介于二者之间,组间差异有统计学意义(P<0.05).术后7 d实验对照组、氯化血红素组及锌原卟啉组3组的生存大鼠分别为7/12、9/12和4/12,组间差异均有统计学意义(P<0.05).结论 肝移植手术过程可促进大鼠肝脏H()-1表达增强;术前采用药物诱导HO-1可降低移植术后肝细胞凋亡率,减轻肝脏损伤程度,提高术后生存率.     

血红素氧合酶-1基因转染对移植小肠的保护作用

目的 观察重组腺相关病毒血红素氧合酶-1( HO-1)基因转染对移植小肠的保护作用。方法 建立大鼠同种异位小肠移植模型,实验分为2组:实验组(n=34):供体术前腹腔注射载有HO-1基因的腺相关病毒1.0×1012个/ml,对照组(n=34):供体术前腹腔注射腺相关病毒1.0×1012个/ml,在实验组和对照组中检测小肠移植术后小肠组织中HO-1的活性、HO-1 mRNA含量及细胞凋亡,免疫组织化学检测HO-1蛋白的表达,观察小肠组织病理学变化和受体生存时间。结果 实验组平均生存时间为(6.80±1.56)d,对照组平均生存时间为(5.80±1.28)d,两者之间差异无统计学意义(P＞0.05),小肠移植术后24、48 h和5d移植小肠实验组HO-1活性分别为2.11±0.04、1.90±0.04和1.56±0.05,均强于对照组(1.71±0.07、1.56±0.06和1.38±0.08,P＜0.05);各组移植肠缺血再灌注损伤程度以术后24h最重,实验组缺血再灌注损伤程度轻于对照组;术后24h和48 h实验组HO-1 mRNA表达水平分别为1.12±0.08和0.76 ±0.10,均高于对照组(0.69±0.05和0.38±0.08,P＜0.05),术后5 d HO-1 mRNA表达水平两组比较差异无统计学意义(P＞0.05);术后各时段移植小肠细胞凋亡数实验组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),生存时间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 HO-1基因转染可降低移植小肠缺血再灌注损伤程度。     

鼠肝热缺血再灌注后Bsep基因的表达及调控

目的：探讨鼠肝热缺血再灌注后胆汁、血浆中胆盐含量异常改变的分子机制。方法：应用70％的鼠肝热缺血再灌注模型；实验动物分为A（正常）、B（缺血20min）、C（缺血35min）三组；苏木精．伊红染色分析肝组织病理改变，常规生化检测胆汁、血浆中胆酸（BA）的含量；荧光定量PCR、RT-PCR方法分析肝组织胆盐输出泵（Bsep）、类法尼醇X受体（FXR）的表达；ELISA检测肝组织肿瘤坏死因子（TNF-α）的含量。结果：B、C组再灌注后均无肝细胞坏死。B组再灌注后6h-1d时胆汁中BA含量明显降低，而血浆中则明显上升；C组上述改变持续至再灌注后3d。B组再灌注后6h。肝组织BsepmRNA的表达明显下调，C组持续至再灌注后3d，与肝组织中TNF-α含量的改变呈明显负相关。C组再灌注后6h-1d时，FXR mRNA表达上调。结论：鼠肝热缺血再灌注后Bsep表达的减少导致了胆汁、血浆中胆盐含量的异常改变。在再灌注后Bsep表达的调控中炎症介质起了主要作用。     

血红素加氧酶-1诱导对鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)在鼠肝缺血再灌注损伤肝组织中的表达及其作用。方法建立小鼠部分肝脏热缺血再灌注损伤模型,36只清洁级Balb/C小鼠随机分为3组: 假手术组(S组)、缺血/再灌注损伤组(I/R组)、HO-1诱导剂氯化高铁血红素(hemin)预处理组(HM组)。免疫组化半定量分析肝组织HO-1蛋白的表达,检测血清AST和ALT,肝组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,并观察肝组织的病理变化。结果与S组比较,I/R组HO-1蛋白表达显著增强,hemin预处理后,HO-1蛋白表达较I/R组增高(P<0．01)。I/R组AST,ALT活性和MDA的含量显著高于S组,而HM组均显著低于I/R组(P<0．01);I/R组SOD活性下降,而HM组显著高于I/R组(P<0．01)。HM组病理损伤程度明显轻于I/R组。结论 HO-1在鼠肝缺血再灌注损伤肝组织中表达上调,对肝脏具有保护效应。     

诱导HO-1改善氧化应激状态减轻老年供肝缺血-再灌注损伤

目的观察诱导血红素氧合酶-1(HO-1) 生成能否减轻老年供肝移植后缺血-再灌注损伤.方法取老年(16个月龄)SD大鼠5只和成年(3个月龄)大鼠5只,分别测定其肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性及维生素E(Vit E)、维生素C(Vit C)和丙二醛(MDA)含量; 另取老年SD大鼠60只作为供体,随机均分为血晶素(Hemin)组和对照组,分别于取肝前24 h腹腔注射Hemin或生理盐水,然后将其肝脏移植给同种大鼠,同时观察再灌注后肝脏组织学变化和细胞凋亡.结果老年大鼠肝脏组织中SOD活性明显低于成年大鼠,Vit C含量亦少(P＜0.05),而MDA明显增高(P＜0.05).用Hemin预处理的老年SD大鼠供肝在切取前,SOD活性增加,Vit E、Vit C含量增加,MDA含量降低(P＜0.05); 肝移植后血清ALT明显降低,肝组织HO-1活性明显增高,肝脏组织学检查示再灌注后凋亡细胞明显减少(P＜0.05).结论老年SD大鼠肝脏存在氧化应激和脂质过氧化状态,HO-1可通过改善这种状态而减轻其缺血-再灌注损伤.     

上调肝脏HO-1抑制肥大细胞脱颗粒减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 探索HO-1对肝脏缺血再灌注损伤中肥大细胞脱颗粒的影响。方法 将20只SD大鼠随机分成4组：假手术组（Sham组）,缺血再灌注损伤组（I/RI组）,HO-1诱导剂钴原卟啉组(CoPP组,术前24h给予CoPP,5 mg/kg)及HO-1抑制剂锌原卟啉组(ZnPP组,术前24h给予ZnPP,20 mg/kg)。建立大鼠缺血再灌注损伤模型,各组于再灌注后2h收集标本。RT-PCR检测肝脏组织HO-1 mRNA表达,Western blot检测肝脏组织HO-1蛋白表达;测定血清中ALT、AST水平;肝脏组织甲苯胺蓝染色检测肥大细胞脱颗粒数量,HE染色评价肝脏组织损伤情况。结果 与Sham组相比,I/RI组、CoPP组、ZnPP组大鼠组织HO-1 RNA和蛋白表达增加,血清ALT、AST水平升高,肥大细胞脱颗粒数量增多,肝脏细胞损伤加重。CoPP组与I/RI组相比,HO-1 mRNA和蛋白表达增加,血清ALT、AST水平减低,肥大细胞脱颗粒数量减少,肝细胞损伤减轻。ZnPP组与I/RI组相比,HO-1 mRNA和蛋白表达减少,血清ALT、AST水平升高,肥大细胞脱颗粒数量增多、肝细胞损伤严重。组间比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论 HO-1过表达能减轻肝脏I/RI,其机制可能与抑制肝脏组织中肥大细胞脱颗粒有关。     

血红素氧合酶-1减轻老龄大鼠供肝缺血再灌注损伤

目的诱导血红素氧合酶-1,提高老龄大鼠供肝的抗氧化能力,观察其能否减轻老龄大鼠供肝缺血再灌注损伤。方法　老龄SD大鼠为供者,成年SD大鼠为受者,随机分为实验组和对照组。实验组:供者供肝切取前24 h腹腔注射血晶素;对照组:供者供肝切取前24 h腹腔注射生理盐水。受者肝移植后3、6、12、24、48 h分别取移植肝组织,检测抗氧化酶、抗氧化剂、凋亡细胞和凋亡因子的表达情况。结果　实验组移植肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和维生素E、维生素C含量较对照组明显增加,丙氨酸转氨酶(ALT)则较对照组明显降低;另外,实验组较对照组凋亡细胞数量减少,BCL-2表达增加,半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)表达降低。结论诱导血红素氧合酶-1可以减轻老龄大鼠供肝缺血再灌注损伤,其机制与抑制细胞凋亡有关。     

Expression of Heme Oxygenase-1 in Human Livers Before Transplantation Correlates with Graft Injury and Function After Transplantation

Upregulation of heme oxygenase-1 (HO-1) has been proposed as an adaptive mechanism protecting against ischemia/reperfusion (I/R) injury. We investigated HO-1 expression in 38 human liver transplants and correlated this with I/R injury and graft function. Before transplantation, median HO-1 mRNA levels were 3.4-fold higher (range: 0.7-9.3) in donors than in normal controls. Based on the median value, livers were divided into two groups: low and high HO-1 expression. These groups had similar donor characteristics, donor serum transaminases, cold ischemia time, HSP-70 expression and the distribution of HO-1 promoter polymorphism. After reperfusion, HO-1 expression increased significantly further in the initial low HO-1 expression group, but not in the high HO-1 group. Postoperatively, serum transaminases were significantly lower and the bile salt secretion was higher in the initial low HO-1 group, compared to the high expression group. Immunofluorescence staining identified Kupffer cells as the main localization of HO-1. In conclusion, human livers with initial low HO-1 expression (<3.4 times controls) are able to induce HO-1 further during reperfusion and are associated with less injury and better function than initial high HO-1 expression (>3.4 times controls). These data suggest that an increase in HO-1 during transplantation is more protective than high HO-1 expression before transplantation.     

Sequence of reperfusion influences ischemia/reperfusion injury and primary graft function following porcine liver transplantation.

The impact of 3 different reperfusion sequences following orthotopic liver transplantation (OLT) in pigs were evaluated. The reperfusion technique commonly performed is primary portal in order to shorten warm ischemic times (WITs). Experimental and clinical data, usually comparing 2 out of 3 possible reperfusion sequences, provide controversial results. OLT was performed in 24 pigs randomized into 3 groups: primary arterial (A), simultaneous (SIM), and primary portal (P) reperfusion. Hemodynamics were continuously monitored and reperfusion injury and primary graft function were assessed by standard serum parameters, histopathological findings, immunohistochemistry for heme oxygenase 1 (HO-1), and heat shock protein 70 (HSP 70). Aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), lactate dehydrogenase (LDH), and gamma-glutamyl transpeptidase (gammaGT) following reperfusion were significantly increased for group A when compared to groups SIM and P. Hemodynamics showed significant differences after reperfusion compared to physiological data; differences in group comparisons were not significant. The bile production/100 g liver/hr was significantly higher for group SIM (1.15 mL) compared to group P (0.66 mL) and group A (0.62 mL). Histology and immunohistochemistry significantly correlated with functional results and outcome. Histological score was best for group SIM and worst for group A. HSP 70, being visualized mainly in the hepatocytes, showed higher expression for groups SIM and P. Inversely, HO-1, found in perisinusoidal cells, showed highest expression after primary arterial reperfusion. In conclusion, although associated with a 10-minute longer warm ischemic time, simultaneous reperfusion causes the least reperfusion injury with superior primary transplant function. Primary arterial reperfusion showed the worst overall outcome and highest degree of HO-1 expression.     

巨噬细胞炎性蛋白-2在大鼠原位肝移植后的表达

目的：研究趋化因子巨噬细胞炎性蛋白－2（MIP－2）在大鼠同种原位肝移植后的表达。方法：采用大鼠原位肝移植模型，将供肝用乳酸林格氏液保存4h，随机分为两组，即移植后1h组和移植后4h组，同时用假手术组作对照，对肝组织中的MIP－2mRNA的表达，血清MIP－2的表达，肝组织中的中性粒细胞浸润、血清丙氨酸转氨酶（ALT）做了测定。结果移植组MIP－2mRNA的表达和血清蛋白表达较假手术对照组显著升高，4h 组高于1h组（P＜0．01），并且它的mRNA表达和血清蛋白表达与肝中中性粒细胞浸润。血清ALT变化呈正相关。结论MIP－2在大鼠肝移植的缺血／再灌注损伤中起重要的上调作用，成为肝移植植再灌注损伤的重要因素之一。     

丹参对大鼠供肝冷保存缺血再灌注损伤中肝细胞凋亡的影响

目的 探讨丹参对大鼠原位肝移植供肝冷保存缺血再灌注损伤中肝细胞凋亡的影响.方法 将40只SD大鼠分为对照组、实验组及假手术组,建立原位肝移植模型.供肝灌注冷保存以4℃乳酸林格氏液为基液,实验组加丹参注射液(60 ml/L),对照组不加丹参.保存5 h后植入受体.移植后6 h处死大鼠取样,检测血浆中ALT、AST水平;采用TUNEL法检测移植术后肝细胞凋亡情况;流式细胞仪检测凋亡相关基因Bcl-2、FasL蛋白的表达;光镜下观察移植肝脏病理形态学的改变.结果 再灌注后实验组ALT、AST显著低于对照组.与对照组比较,实验组肝细胞凋亡指数明显下降(F=133.802,P<0.05);肝组织中Bcl-2蛋白表达增加(F=91.063,P<0.01);FasL蛋白表达无明显变化(F=1.329,P>0.05);实验组与对照组比较肝组织形态学的再灌注损害程度明显减轻.结论 丹参可通过促进抑制凋亡基因Bcl-2蛋白的表达来抑制冷保存再灌注导致的肝细胞凋亡,对原位肝移植肝脏的缺血再灌注损伤有保护作用.     

转染血红素氧合酶-1基因减轻大鼠脂肪肝移植后的缺血再灌注损伤

目的 探讨转染血红素氧合酶-1(HO-1)基因对大鼠脂肪肝移植后缺血再灌注损伤的影响.方法 利用分子生物学方法构建携带有HO-1基因的重组腺病毒(Ad5-HO-1),于供肝切取前48 h经阴茎背静脉将Ad5-HO-1注入供者体内,供肝置于4℃HTK液保存2 h,然后移植.对照组接受正常肝移植;轻度对照组接受轻度脂肪肝移植;轻度实验组接受注射Ad5～HO-1的轻度脂肪肝移植;重度对照组接受重度脂肪肝移植;重度实验组接受注射Ad5-HO-1的重度脂肪肝移植.术后观察各组大鼠的存活率及肝功能;观察移植肝组织的病理变化;测定移植肝组织中HO-1的活性以及HO-1、Bcl-2、锌指蛋白A20、凋亡蛋白酶-3(Caspase-3)的表达.结果 与重度对照组相比较,重度实验组的丙氨酸转氨酶水平显著下降(P＜0.05).轻度实验组和重度实验组的HO-1活性分别高于各自的对照组(P＜0.05).重度实验组移植肝组织中HO-1、Bcl-2及锌指蛋白A20的表达水平明显高于重度对照组(P＜0.05),而Caspase-3的表达是降低的(P＜0.05).重度实验组的1、7、21 d存活率分别为66.7%(4/6)、50%(3/6)和50%(3/6),而重度对照组的1、7、21 d存活率分别为33.3%(2/6)、16.7%(1/6)和16.7%(1/6),二者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 转染血HO-1基因可减轻大鼠脂肪肝移植后的缺血再灌注损伤.     

缺血预处理对大鼠移植肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的　探讨缺血预处理 (ischemicpreconditioning ,IP)对大鼠移植肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。 方法　采用SD大鼠原位肝移植动物模型 ,供肝冷保存时间 10 0min ,无肝期 2 5min。 64只SD大鼠随机均分成两组 :对照组 ,获取供肝前仅以肝素生理盐水经门静脉灌注 ;IP组 ,获取供肝前阻断肝门血供 10min ,再灌注 10min ,然后再以肝素生理盐水经门静脉灌注。每组受体的一半 (n =8)用于观察存活率 ,另一半 (n =8)用于移植肝脏再灌注 2h后取血及肝脏检测。结果　IP组的 1w存活率、胆汁分泌量、抗氧化酶活力、血清NO水平均明显高于对照组 (P<0 .0 5 ) ,血清ALT、AST、LDH、TNF及肝组织中的过氧化产物含量均明显低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,组织的病理改变也轻于对照组。结论　IP能够提高血清NO水平 ,降低血清TNF含量 ,对大鼠移植肝脏的缺血再灌注损伤具有保护作用     

他克莫司对移植肝脏再灌注损伤的影响

目的 探讨他克莫司对移植肝脏再灌注损伤的影响.方法 建立大鼠肝移植模型,实验组(40只)和对照组(40只)分别注射他克莫司和生理盐水,检测再灌注24、48和96 h后TNF-α、IL-1、ALT、AST、LDH、内皮素(endothelin,ET)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,观察肝脏超微结构和细胞凋亡情况,RT-PCR法检测Fas、Bcl-2的mRNA水平.依据免疫抑制方案,将112例终末期肝硬化患者分为他克莫司组(63例)和环孢素A组(49例),比较临床肝移植使用环孢素A和他克莫司患者肝酶指标及急性排斥反应的发生.结果 实验组TNF-α、IL-1、ALT、AST、LDH、ET和MDA显著低于对照组(P＜0.05),肝脏超微结构受损和细胞凋亡较轻,Fas mRNA合成减少.患者使用他克莫司后急性排斥反应发生率较环孢素A低(x2=39.0,P＜0.05).结论 他克莫司可通过抑制细胞凋亡来减轻大鼠移植肝脏再灌注损伤,临床使用他克莫司能减少急性排斥反应的发生.