生地黄汤对卵巢早衰大鼠骨代谢的干预作用

目的研究生地黄汤对卵巢早衰大鼠骨代谢的影响。方法 48只成年雌性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、阳性对照组、生地黄汤高、中、低剂量治疗组。除空白组外,其余各组每日灌胃雷公藤多甙片75 mg/kg,连续造模14 d。从第15 d起,模型组灌胃生理盐水2 mL/kg;阳性对照组灌胃补佳乐1 mg/kg;高、中、低剂量治疗组灌胃生地黄汤(12、6、3 g/kg),每日1次,连续给药21天。放射免疫法测定血清中雌激素(E2)、孕酮(P)的含量;比色法检测血清中钙、磷的含量;ELISA法检测血清中碱性磷酸酶(ALP)、骨碱性磷酸酶(BALP)、1,25二羟基维生素D_3(1,25(OH)_2D_3)含量。结果与模型组比较,生地黄汤高、中剂量治疗组血清中E2、P水平升高(P0.05);生地黄汤高剂量组血清钙、磷的含量高于模型组(P0.05);生地黄汤各剂量组血清ALP、BALP含量均较模型组降低(P0.05),1,25(OH)2D3含量高于模型组(P0.01)。结论生地黄汤可以通过类雌激素样作用升高血清雌二醇水平,改善早衰卵巢功能,同时增强成骨细胞活性,使骨形成大于骨吸收,调节骨代谢平衡,改善卵巢功能减退引起骨质疏松。     

刺老苞根皮对糖皮质激素诱导的大鼠骨质疏松症的干预影响

目的本研究拟在验证刺老苞根皮提取物对糖皮质激素诱发的大鼠骨质疏松症的干预作用。方法 90只SD大鼠(雌雄各半)随机分成6组,即(雌/雄)对照组、(雌/雄)模型组、(雌/雄)治疗组(刺老苞根皮提取物组),每组15只。其中模型组与治疗组采用连续注射地塞米松磷酸钠(DXM)造成继发性骨质疏松,而后直接灌胃刺老苞根皮提取物(20 mg/kg),观察其治疗作用。8周后,检测脂代谢指标[血清胆固醇(TC)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)含量]、骨代谢指标[骨钙素(BGP)、1,25-(OH_2D_3)、骨矿物含量、骨密度值、骨力学参数]、激素指标[甲状旁腺(PTH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)、生长激素(GH)、黄体生长素(LH)、卵泡生成素(FSH)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)含量]以及卵巢、子宫湿重的变化情况。结果与对照组相比,模型组雌性大鼠脂代谢指标[血清高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)]、骨代谢指标[骨钙素(BGP)、1,25-(OH_2D_3)、骨矿物含量、骨密度值、骨力学参数]、激素指标[雌二醇(E2)、生长激素(GH)、黄体生长素(LH)、卵泡生成素(FSH)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)含量]以及卵巢、子宫湿重均有所下降(P0.01);雄性大鼠脂代谢指标[血清高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)]、骨代谢指标[骨钙素(BGP)、1,25-(OH_2D_3)、骨矿物含量、骨密度值、骨力学参数]、激素指标[睾酮(T)]均也有所下降(P0.01),而雌/雄脂代谢指标[胆固醇(TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)]及雄性大鼠激素指标[甲状旁腺(PTH)]则有所升高(P0.01)。与模型组相比,治疗组雌性大鼠脂代谢指标[血清高密度脂蛋白-胆固醇(HDLC)]、骨代谢指标[骨钙素(BGP)、1,25-(OH_2D_3)、骨矿物含量、骨密度值、骨力学参数]、激素指标[雌二醇(E2)、生长激素(GH)、黄体生长素(LH)、卵泡生成素(FSH)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)含量]以及卵巢、子宫湿重均有所升高(P0.05);雄性大鼠脂代谢指标[血清高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)]、骨代谢指标[骨钙素(BGP)、1,25-(OH_2D_3)、骨矿物含量、骨密度值、骨力学参数]、激素指标[睾酮(T)]均也有所升高(P0.05),而雌/雄脂代谢指标[胆固醇(TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDLC)]和雄性大鼠激素指标[甲状旁腺(PTH)]则有所下降(P0.05)。结论刺老苞根皮提取物可以有效治疗糖皮质激素诱发的继发性骨质疏松症。     

骨康对去卵巢大鼠骨源性碱性磷酸酶和胰岛素样生长因子的影响

目的:探讨骨康对去卵巢大鼠血清中骨碱性磷酸酶(BALP)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的影响,及其治疗骨质疏松症的作用机制.方法:6月龄雌性SD大鼠68只按简单随机方法分为空白组和手术组,分别为22只和46只.空白组行假手术,手术组行卵巢切除术.术后3个月后从两组随机各选出10只大鼠行骨密度检查,以确定造模成功.在确定造模成功后,将手术组中剩下的36只大鼠再随机分为3组,每组12只,分别为手术模型组、雌激素组、中药组.空白组中剩下的12只大鼠为空白对照组.对各组进行灌胃给药治疗,灌胃给药容积为10ml/kg,空白对照组、手术模型组灌服蒸馏水;中药组灌服相应的药物,雌激素组给予尼尔雌醇灌胃.治疗3个月后采取动物血清进行实验指标检测,测定动物血清中E2、IGF-1、BALP含量.结果:雌激素组、中药组血清E2、BALP水平高于手术模型组,其差异有统计学意义(P<0.05).而雌激素组与中药组血清E2水平相比较差异无统计学意义(P0.05).中药组血清IGF-1水平高于手术模型组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:中药骨康能提高去卵巢大鼠血清中雌二醇、胰岛素样生长因子、骨源性碱性磷酸酶水平,间接促进成骨细胞增殖,抑制破骨细胞骨吸收,促进成骨细胞的骨形成功能.     

护骨胶囊对去卵巢大鼠钙相关激素和性腺激素影响的研究

目的观察护骨胶囊(Hugu capsules,HG)对去卵巢大鼠血清中与钙代谢直接相关的激素和性激素及子宫的影响。方法将60只SD雌性大鼠随机分为假手术组(Sham)、去卵巢组(OVX)、仙灵骨葆胶囊组(Pos)和护骨胶囊低、中、高剂量组(HG-L、HG-M和HG-H)。大鼠卵巢切除后,隔天开始,连续灌胃3个月。处死大鼠,取大鼠子宫与血清,观察HG对子宫重量,血清1,25双羟维生素D3(1,25(OH)2D3)、甲状旁腺激素(PTH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)变化及子宫内膜组织的影响。结果与Sham组比:OVX组的PTH(P0.01)和T(P0.05)升高,E2(P0.01)和P(P0.05)降低;子宫重量显著减少,子宫内膜萎缩。与OVX组比:PTH在HG各个剂量组都降低,在Pos组无变化;E2在HG-L和HG-M组显著增加,在Pos组无变化;P在HG-L组降低,在Pos组显著升高;T在HG-L和HG-H组无变化,HG-M组降低,而Pos组显著升高;HG各个剂量组和Pos组的子宫重量和子宫内膜较OVX组均无明显差异。结论护骨胶囊对OVX大鼠的作用是调节PTH和E2水平,此调节作用与仙灵骨葆胶囊的作用机制不一样。护骨胶囊在补充雌激素的同时对子宫的影响不大,为推广护骨胶囊临床防治绝经后骨质疏松提供了实验依据。     

培本固疏方对去势大鼠骨代谢及骨生物力学的影响

目的观察培本固疏方对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度、骨生物力学及骨代谢指标的影响。方法将42只SD大鼠随机分为假手术组(SHAM)、模型对照组(OVX)、中药低剂量组(D)、中药中剂量组(Z)、中药高剂量组(G)和西药组(X),通过切除大鼠双侧卵巢建立骨质疏松症模型,假手术组仅切除卵巢周围约1 g的脂肪组织。造模4周后进行药物干预,各组持续灌胃8周。计算子宫指数,测定股骨骨密度(bone mineral density,BMD)及股骨生物力学弹性载荷、极限载荷、弹性模量等指标;采用ELISA法测定血清骨代谢指标TRACP5b、sRANKL、OPG及氧化应激指标MDA、AGEs的含量。结果与SHAM组比较,OVX组子宫指数、股骨近端和股骨中段BMD、弹性载荷、弹性模量均明显降低(P0. 05),OVX组血清MDA、AGEs含量明显升高(P0. 01),血清TRACP5b含量明显升高(P0. 01),而OPG、OPG/sRANKL比值下降(P0. 01);与OVX组相比,各治疗组子宫指数、骨强度均有所改善。Z组、G组及X组BMD均明显增高(P0. 05)。Z组、G组及X组TRACP5b含量下降(P0. 05)、OPG含量升高(P0. 05)、RANKL含量降低、OPG/sRANKL比值升高(P0. 05)。Z组、G组血清MDA、AGEs含量降低(P0. 05)。结论培本固疏方可以增加骨强度,通过OPG/RANKL/RANK通路来抑制破骨细胞形成,减缓骨基质吸收,抗氧化应激机制也可能参与其中,具体机制有待探讨。     

TGF-β1/Smad4信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓微环境的影响及针刺干预机制

目的研究TGF-β1/Smad4信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠的影响,并分析针刺疗法对大鼠骨髓微环境的干预机制。方法选取SPF级雌性Wistar大鼠共60只,按照随机数字法分为空白组(A组)、模型组(B组)、针刺组(C组)和雌二醇组(D组),每组大鼠各15只。除A组外,其他大鼠均以去卵巢法建立骨质疏松症动物模型。造模成功后,C组交替给予电针刺激"肾俞穴""三阴交穴""关元穴"及"足三里穴",每次电针15 min,1次/d。D组按照人鼠等效剂量给予戊酸雌二醇治疗,总计干预治疗12周。对比分析各组大鼠血清中骨代谢相关标志物、股骨远端骨密度水平及骨小梁微结构变化;对比各组大鼠股骨远端骨组织中Runx 2、PPARγ、TGF-β1、Smad 4蛋白和mRNA表达水平。结果造模后,与空白组比较,各组大鼠骨密度均明显降低(P0.05),血清中骨代谢标志物CBF-α1、BALP、PINP、OC、CTX-I含量均明显减少(P0.05);相对骨体积分数(BV/TV)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)、连接密度(Conn.D)、结构模型指数(SMI)明显升高(P0.05);股骨远端骨组织中Runx 2、PPARγ、TGF-β1、Smad 4蛋白和mRNA表达下降(P0.05)。干预12周后,与模型组比较,雌二醇组和针刺组大鼠骨小梁微结构明显改善,骨密度、骨代谢标志物及股骨远端骨组织中Runx 2、PPARγ、TGF-β1、Smad 4蛋白和mRNA表达上升(P0.05),其中针刺组明显优于雌二醇组(P0.01)。结论针刺"肾俞穴""三阴交穴""关元穴"及"足三里穴"能够改善去卵巢大鼠骨髓微环境,改善骨小梁微结构,增加骨量,其机制可能与针刺疗法调控TGF-β1/Smad 4信号通路有关。     

活血消异方改善子宫内膜异位症大鼠卵泡发育的机制探讨

目的 从卵巢颗粒细胞凋亡与自噬相互作用的角度，探讨活血消异方对子宫内膜异位症大鼠卵泡发育的影响及作用机制。方法 将动情周期正常的48只SD大鼠分为空白组、假手术组各10只，剩余的分为供体组(n=5)和受体组(n=23)用于造模，造模成功后的20只大鼠又分为模型组、活血消异方组各10只。活血消异方组予活血消异方汤剂2 ml灌胃，空白组、假手术组、模型组均予蒸馏水2 ml灌胃，各组连续灌胃15 d后，检测大鼠血清活性氧(ROS)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平。取各组大鼠的卵巢组织行HE染色，光镜下观察各级卵泡形态并计数；免疫组化染色定位颗粒细胞，并比较凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达；TUNEL染色观察颗粒细胞凋亡情况并计算凋亡率；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织中凋亡及自噬相关蛋白p-JNK、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Beclin-1、LC3Ⅱ的表达；电镜观察各组大鼠卵巢颗粒细胞自噬体形态，并计算自噬体胞质面积比。结果 (1)与空白组、假手术组比较，模型组血清ROS含量显著升高，T-SOD、CAT水平...     

金匮肾气丸对去势大鼠骨微结构及ALP、OPG、IL-6的影响

目的研究金匮肾气丸防治骨质疏松的机制,探讨"温补肾阳,以生髓壮骨"中医理论在绝经后骨质疏松中的应用。方法采用卵巢切除法复制绝经后骨质疏松大鼠模型,随机分为模型组、金匮肾气丸高、低剂量组、雌二醇组,同时设置假手术组作为对照组,各组分别给予相应的药物灌胃。给药3月后处死取材,计算子宫系数; HE染色观察子宫的病理变化; Micro-CT检测大鼠骨密度及骨微结构的变化;全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中血糖、血脂及钙磷的变化; ELISA检测各组大鼠血清中ALP、IL-6及OPG表达的变化。结果与假手术组相比,模型组大鼠骨密度显著下降(P0.05),骨微结构破坏明显;与模型组相比,金匮肾气丸低剂量组大鼠骨密度得到了有效提高、骨微结构获得改善,血糖、血脂水平降低,血清中钙磷的含量明显提高,血清中ALP、IL-6含量降低,OPG含量升高。结论金匮肾气丸能够提高去卵巢大鼠的骨量,防治绝经后骨质疏松症,其作用机理可能与降低ALP、IL-6,提高OPG含量有关。     

自拟中药方治疗自身免疫性卵巢功能早衰小鼠的实验研究

目的:探讨自拟中药方对自身免疫性卵巢功能早衰的治疗作用.方法:将40只小鼠随机分为:实验组、对照组、模型组和正常组,10只/组.除正常组外均制成自身免疫性卵巢功能早衰模型,造模成功后第7天开始各组分别给予中药、戊酸雌二醇、生理盐水、生理盐水灌胃给药.连续灌胃4周后处死小鼠,取卵巢组织观察形态变化,采用放免法测定小鼠血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)的含量.结果:造模后小鼠卵巢萎缩,卵泡数目减少,颗粒细胞排列紊乱,模型组最严重,其次为实验组和对照组.模型组小鼠血清中FSH和LH的含量显著高于其他各组(P<0.05),E2的含量显著低于其他各组(P<0.05).实验组和对照组小鼠血清中FSH和LH的含量显著高于正常组(P<0.05),实验组小鼠血清中E2的含量显著低于对照组和正常(P<0.05).结论:自拟中药方剂对自身免疫性卵巢早衰小鼠有一定的治疗作用.     

芦丁对去卵巢骨质疏松症大鼠的防治作用

目的探讨芦丁在去卵巢骨质疏松大鼠中发挥的抗骨质疏松作用,找到治疗绝经后骨质疏松症的新思路。方法取40只大鼠,10只行剖腹手术未摘除卵巢为假手术组,30只行去卵巢手术。去卵巢手术大鼠随机分成3组:OVX组(用生理盐水灌胃)、R5低剂量组[喂食芦丁剂量5 mg (kg·d)]、R10高剂量组[喂食芦丁剂量10 mg (kg·d)],每日灌胃一次,观察3个月。观察芦丁干预前后大鼠体重和子宫指数的变化,利用双能X线骨密度仪测定大鼠右侧股骨的骨密度(bone mineral density, BMD)。经HE染色分析左侧胫骨组织形态学。用ELISA方法检测IL-6,IFN-γ、TNF-α的含量,观察芦丁对炎性指标的影响。同时监测干预后的去卵巢大鼠体内E2、1,25(OH)2D3_、OCN水平变化。结果芦丁对去卵巢大鼠体重无显著影响,但干预组子宫指数显著升高,且提高了去卵巢大鼠的BMD,降低了OVX大鼠的炎症因子IL-6、TNF-α、INF-γ水平。芦丁干预后E2和1,25(OH)2D3水平显著升高,并且通过剂量依赖性逆转了大鼠的血清OCN水平,使骨小梁变厚。此外,芦丁显著改善了去卵巢大鼠骨小梁的平均厚度及平均骨体积分数。结论芦丁具有明显抗骨质疏松的活性,是一种理想的治疗骨质疏松症的备选药物。     

毓麟珠通过改善小鼠卵巢微环境防治早发性卵巢功能不全的作用机制研究

目的研究毓麟珠通过改善卵巢微环境防治早发性卵巢功能不全(POI)的作用机制。方法选取BALB/c雌性小鼠随机分为空白组、模型对照组、中药组和阳性药组,每组10只。除空白组外其余三组均皮下注射小鼠透明带3(ZP3)多肽建立免疫性POI模型,模型建立后分别给予生理盐水、戊酸雌二醇、毓麟珠溶液灌胃,每天一次,连续6周。高频超声系统动态监测卵巢面积、卵泡数、卵巢血流;取血检测血清激素水平。用BCA试剂盒检测卵巢组织超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的水平。结果(1)模型对照组小鼠卵巢面积、卵泡数显著低于空白组(P<0.05);与模型对照组比较,阳性药组、中药组卵巢面积均显著增加(P<0.05),中药组卵泡数显著增加(P<0.05),且显著高于阳性药物组(P<0.05)。(2)模型对照组小鼠较空白组小鼠卵巢动脉脉压差增大,搏动指数、阻力指数增高(P<0.05);与模型对照组比较,阳性药组、中药组脉压差、搏动指数、阻力指数均显著降低(P<0.05)。(3)与空白组比较,模型对照组血清FSH、LH显著升高,而AMH显著降低(P<0.05);与模型对照组比较,阳性药组、中药组FSH、LH均显著降低,AMH均显著升高(P<0.05),且中药组较阳性药组FSH更低、AMH更高(P<0.05)。(4)与空白组比较,模型对照组卵巢组织SOD、GSH-Px显著下降,ROS、MDA显著上升(P<0.05);与模型对照组比较,阳性药、中药组卵巢组织SOD、GSH-Px均显著升高,ROS、MDA均显著下降(P<0.05),且中药组ROS显著低于阳性药组(P<0.05)。结论中药毓麟珠能通过上调抗氧化因子、下调缺氧相关因子改善卵巢微环境,促进卵泡发育,改善卵巢功能。     

溴氰菊酯对大鼠卵巢甾体激素合成的影响

目的探讨溴氰菊酯(Deltamethrin,DLT)对大鼠卵巢甾体激素合成的影响及相关的分子机制。方法不同剂量DLT暴露处理大鼠和原代颗粒细胞;取DLT暴露后的大鼠血清和培养上清液,电化学发光法测定雌二醇和孕酮的水平;Western Blot法检测DLT暴露后大鼠卵巢组织及原代培养颗粒细胞中甾体激素合成关键酶:甾体激素合成急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、芳香化酶的表达量,同时检测组蛋白去乙酰化酶Sirt1的蛋白表达。结果体、内外实验中,DLT各处理组大鼠血清、原代颗粒细胞培养上清液中雌二醇水平均显著升高(体内实验P<0.05,体外实验P<0.001);体内实验中DLT各处理组大鼠血清孕酮水平均显著降低(P<0.05),而体外实验中DLT各处理组原代颗粒细胞培养上清液孕酮水平无显著变化(P>0.05);体、内外实验中DLT各处理组大鼠卵巢组织、原代培养颗粒细胞中StAR、P450scc、芳香化酶以及Sirt1的表达量均显著升高(P<0.01)。结论 DLT能影响大鼠卵巢雌二醇和孕酮的合成,其机制可能与其关键酶表达的变化有关。     

GnRH拮抗剂联合来曲唑和米非司酮对体外培养的人颗粒细胞功能的影响

目的探讨促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-ant)联合来曲唑和米非司酮对体外培养的人卵巢颗粒细胞功能及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养人原代卵巢颗粒细胞及人卵巢颗粒细胞系KGN,根据所用药物不同分为GnRH-ant、来曲唑、米非司酮以及上述三种药物联合用药组,药物干预后检测细胞活力、细胞凋亡、培养液中雌二醇(E 2)及孕酮(P)水平及VEGF的表达。结果(1)GnRH-ant、来曲唑、米非司酮三种药物均可以不同程度地抑制原代颗粒细胞和KGN细胞的活力、促进颗粒细胞凋亡,其中联合用药组的作用最强(P<0.05);(2)GnRH-ant、来曲唑、米非司酮三种药物均可以不同程度地抑制原代颗粒细胞和KGN细胞E 2、P分泌水平,其中联合用药组E 2、P水平最低且差异有统计学意义(P<0.05);(3)GnRH-ant、来曲唑、米非司酮三种药物均可以不同程度地抑制原代颗粒细胞和KGN细胞VEGF表达,其中联合用药组VEGF mRNA及蛋白表达水平最低(P<0.05)。结论GnRH-ant联合来曲唑和米非司酮可以有效地抑制颗粒细胞活力、减少类固醇激素分泌及降低VEGF的表达水平。     

卵巢早衰实验动物模型的建立

目的探讨以透明带抗原建立自身免疫性卵巢早衰实验模型的方法。方法分别用合成的透明带的多肽片段、完全弗氏佐剂及三蒸水免疫实验组、佐剂对照组和空白对照组小鼠,并观察小鼠的性周期,用免疫荧光法检测小鼠外周血及卵巢中抗透明带抗体,在光镜及电镜下观察小鼠卵巢的组织学改变,观察小鼠的发病情况。结果实验组有70%小鼠表现为性周期紊乱,80%外周血、70%卵巢中出现抗透明带抗体,90%小鼠出现自身免疫性卵巢炎,均与对照组差异显著(P<0.01)。结论以透明带诱导自身免疫性卵巢早衰模型的发生率高,并且方法简单,是一种很好的实验方法。     

早孕期补充戊酸雌二醇对雄性子代大鼠生殖系统发育的影响

目的:建立大鼠早孕期戊酸雌二醇用药模型,从肛门生殖器距离(AGD)、附睾、睾丸组织发育等方面评估戊酸雌二醇对雄性子代生殖系统发育的影响。方法:妊娠SD大鼠随机分对照组及低、中、高剂量组,孕6～15d每天分别给予戊酸雌二醇0、0.2、0.5、0.8mg/kg灌胃,分娩后正常喂养其雄性子代,出生3d、出生21d分别测量雄性子代AGD,出生60d测量附睾、睾丸的脏器系数(附睾、睾丸重量g/大鼠体重100g),进行睾丸组织学切片观察生精小管的形态学变化,测量生精小管直径和上皮高度。结果:对照组及各给药组雄性子代出生3d、出生21d的AGD比较,无明显差异(P>0.05);对照组及各给药组子代出生60d的附睾、睾丸脏器系数比较、睾丸生精小管直径及上皮高度比较,均无明显差异(P>0.05)。结论:早孕期大鼠补充一定剂量(0.2～0.8mg/kg)戊酸雌二醇,出生的雄性子代在生殖系统发育上未受明显影响,性成熟期的睾丸组织学未见明显改变。     

戊酸雌二醇对更年期大鼠脾细胞凋亡及卵巢功能的作用

目的了解戊酸雌二醇(E2)对更年期大鼠脾细胞凋亡的作用并观察卵巢组织形态学变化。方法SD雌性大鼠30只分为青年组(2.5月龄)、更年组(12月龄)、雌激素组(12月龄)3组。青年组、更年组均予蒸馏水1ml/d灌胃,雌激素组予戊酸E2800μg.kg-1.d-1灌胃。3个月后颈动脉放血处死。放射免疫法测定血清E2水平,AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞仪测定脾细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测相关凋亡基因Bcl-2、Bax的表达。光镜下对各组双卵巢切片进行组织形态学观察,IMS细胞自动图像分析系统对卵巢黄体数(个)、卵巢最大纵切面面积进行计量分析。结果更年组大鼠血清E2水平明显低于青年组而脾细胞凋亡率明显高于青年组,这与其促凋亡基因Bax表达明显升高有关。雌激素组血E2水平明显高于青年组和更年组,其脾细胞凋亡率也明显高于青年组,这与其抗凋亡基因Bcl-2表达降低及Bax表达升高有关。雌激素组抗凋亡基因Bcl-2表达也明显低于更年组。更年组与雌激素组都显示卵巢纵切面积缩小、黄体计数少等功能衰退表现。结论更年期大鼠脾细胞凋亡的增龄性改变与血清E2水平负相关;本研究中E2治疗未能逆转更年期大鼠脾细胞凋亡的增龄性变化,这与外源性雌激素导致的超生理浓度的E2水平有关。过高的E2浓度不能改善更年期大鼠衰退的卵巢功能。实验显示衰老与性腺功能衰退密切相关。     

人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2的表达与卵巢功能及反应性的相关性研究

目的探讨人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2（cyclin D2）的表达与卵巢功能及超排卵过程中卵巢反应性的相关性。方法收集48例行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）患者的卵巢黄素化颗粒细胞,根据取卵时卵泡发育数不同将卵巢反应性分为高反应组（12例）、中反应组（30例）及低反应组（6例）。采用免疫细胞化学方法检测颗粒细胞膜上eyclin D2及增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测颗粒细胞cyclin D2 mRNA的表达水平;化学发光法测定基础血清卵泡刺激素（FSH）,人绒毛膜促性腺激素（hCG）日E2水平。分析颗粒细胞eyelin D2 mRNA及蛋白的表达与IVF临床各项参数、卵巢反应性的关系以及和颗粒细胞增殖活性PCNA标记指数（PCNA-LI）的相关性。结果（1）黄素化颗粒细胞cyclinD2蛋白表达与年龄、基础FSH水平及促性腺激素（Gn）支数呈负相关（r=-0．547,P〈0．01;r=-0．456,P〈0．05;r=-0．451,P〈0．05）;cyclinD2蛋白表达与获卵数和hCG日E2水平呈正相关（r=0．592,P〈0．01;r=0．626,P〈0．01）;高、中和低反应三组cyclinD2蛋白表达有显著统计学差异（F=4．995,P〈0．05）。（2）黄素化颗粒细胞cyclin D2 mRNA表达与年龄、基础FSH水平呈负相关（r=-0．510,P〈0．05;r=-0．891,P〈O．01）;与获卵数和hCG日E2水平呈正相关（r=0．629,P〈0．01;r=0．524,P〈0．05）;高、中和低反应三组cyclin D2 mRNA的表达有显著统计学差异CF=8．843,P〈0．01）。（3）黄素化颗粒细胞cyclin D2蛋白及mRNA表达与PCNA-LI均呈显著正相关（r=0．696,P〈0．01;r=0．498,P〈0．0S）。结论黄素化颗粒细胞cyclin D2 mRNA及蛋白的表达可反映卵巢储备功能并与卵巢反应性正相关。cyclin D2可能通过调节颗粒细胞的增殖分化参与卵泡的发育。     

温肾固疏方干预绝经后骨质疏松药理研究

目的观察温肾固疏方对骨代谢造成的影响。方法将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、雌激素组、温肾固疏方高、中、低剂量组。假手术组仅切除卵巢周围脂肪组织,不切除卵巢,其余大鼠切除双侧卵巢,建立绝经后骨质疏松模型。造模1 m后,中药汤剂灌胃干预8 w,末次给药结束后放血处死。双能X射线法测定去势大鼠离体股骨、腰椎骨密度(bone mineral density,BMD)、骨矿含量(bone mineral content,BMC),电子式双柱万能材料试验机测定股骨弾性模型、最大承载力、刚性、最大应力,全自动生物仪测HDL-C、LDL-C、TG、TC,计算动脉粥样硬化指数(atherogen icindex,AI),采用酶联免疫吸附测定(Elisa)法测量大鼠血清OT/BGP、Lipid、Apo E、sRANKL、OPG、BMPs。结果与假手术组对比,模型组BMD、BMC下降(P0.05);股骨弾性模型、最大承载力、刚性、最大应力皆下(P0.05);OPG、BMPs下降(P0.05);Lip上升(P0.05);Apo E上升(P0.01);LDL-C上升(P0.05)。与模型组对比,雌激素、低、高剂量组大鼠股骨BMD、BMC上升(P0.05);雌激素组、中剂量组弾性模型增高(P0.05);雌激素组、高剂量组最大承载力增高(P0.05);低、高剂量组刚性增高(P0.05);雌激素组、低、高剂量组最大应力增高(P0.05);雌激素组、低、高剂量组血清OT/BGP上升(P0.05);低、高剂量组sRANKL下降(P0.05);雌激素组、低剂量组血清OPG上升(P0.05);雌激素组、低、高剂量组BMPs上升(P0.05);高、中、低剂量组血清Lip下降(P0.05);低剂量组Apo E下降(P0.05);低、高剂量组LDL-C下降;低剂量组TG下降(P0.05);低、高剂量组动脉粥样硬化指数下降(P0.05)。结论去势大鼠骨质疏松模型的脂代谢是重要调节点,温肾固疏方可以通过调控Apo E水平影响血清脂代谢与骨代谢,对绝经后骨质疏松有一定防治效果,不同剂量的温肾固疏方汤剂对绝经后骨质疏松症的防治效果不同,高剂量组较为明显。     

控制性促排卵中过早血清孕酮升高的原因

控制性促排卵(COS)中过早血清孕酮升高(PE)是指HCG注射前血清孕酮过早的轻度升高,PE并非颗粒细胞过早黄素化所致。虽然PE的原因和机制目前尚未完全阐明,但过多成熟卵泡/卵母细胞数、大剂量卵泡刺激素(FSH)促排卵、高雌二醇(E2)水平及促黄体生成素(LH)相对不足与PE呈明显相关。大量研究已发现PE明显降低COS鲜胚移植周期的妊娠率,其原因可能是PE负面影响了子宫内膜接受性。目前对PE阈值并无统一标准,通常以HCG注射前或HCG注射日血清孕酮的绝对值作为界定标准。最近Venetis CA等荟萃分析超过60 000个IVF周期结果显示,血清孕酮过早升高至0.8~1.1ng/ml(2.54~3.50nmol/L)即表现为鲜胚移植周期的妊娠率明显降低,且随着血清孕酮水平升高妊娠率下降,但当过早升高的孕酮≥1.2ng/ml(3.82nmol/L),妊娠率则稳定在低水平并未随血清孕酮水平的进一步上升而下降。