甲苯胺蓝染色在口腔潜在恶性疾患及口腔鳞状细胞癌早期诊断中的临床应用价值研究

 目的　综合评价甲苯胺蓝染色在口腔潜在恶性疾患（oral potential malignant disorders,OPMDs）及口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）早期诊断中的临床应用价值。方法　选取2016年8月至2018年5月于北京大学口腔医院口腔黏膜科就诊的OPMDs及OSCC患者533例。对所有患者进行临床检查、甲苯胺蓝染色和组织病理学检查。以组织病理学诊断为金标准,评价甲苯胺蓝染色的灵敏度、特异度和准确度;绘制受试者工作特征曲线（receiver operator characteristic curve,ROC）及计算曲线下面积（area under curve,AUC）,评价甲苯胺蓝染色的诊断价值;并对上皮异常增生或OSCC的影响因素进行logistic回归分析。结果　甲苯胺蓝染色诊断上皮异常增生或OSCC的灵敏度为75.32%,特异度为84.17%,准确度为81.61%;诊断OSCC的灵敏度为97.10%,特异度为76.51%,准确度为79.17%;诊断上皮异常增生的灵敏度为57.65%,特异度为84.17%,准确度为79.31%。随着上皮异常增生程度的加重,甲苯胺蓝染色诊断的灵敏度越高;且甲苯胺蓝染色诊断轻、中度上皮异常增生的灵敏度均高于临床危险度诊断,其差异均有统计学意义（均P < 0.05）。ROC曲线分析,甲苯胺蓝染色诊断上皮异常增生或OSCC的AUC值为0.797,高于临床危险度诊断的AUC值（0.721）;甲苯胺蓝染色诊断OSCC的AUC值为0.868,高于临床危险度诊断的AUC值（0.802）。logistics回归分析发现,年龄、病程、活检病损部位、临床危险度和甲苯胺蓝染色均与上皮异常增生或OSCC显著相关,甲苯胺蓝染色阳性者患有上皮异常增生或OSCC的风险是甲苯胺蓝染色阴性的13.655倍。结论　综合多项指标评估结果,甲苯胺蓝染色是一种诊断效力强的无创辅助检查技术,推荐应用于OPMDs及OSCC的早期诊断。     

细胞角蛋白19和间隙连接蛋白43在4-亚基硝氧喹啉诱发大鼠舌黏膜癌变过程中表达的研究

目的 研究4-亚基硝氧喹啉（4NQO）诱发大鼠口腔黏膜癌变过程中细胞角蛋白19（CK19）和间隙连接蛋白43（Cx43）的表达,探讨口腔黏膜癌变过程中CK19与Cx43的相关性。方法 利用4NQO诱导SD大鼠的口腔黏膜癌变,运用免疫组织化学的方法检测CK19、Cx43在口腔黏膜癌变过程中各阶段的动态变化。结果 在大鼠正常舌黏膜组织中,CK19阳性染色的细胞散在分布于黏膜基底层;随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,CK19表达于黏膜基底上层;在口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织中,CK19阳性染色细胞分布在黏膜各层。CK19在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中阳性表达率分别为30.00%、50.00%、58.33%、80.00%、91.67%,差异有统计学意义（P<0.05）。在正常舌黏膜中Cx43蛋白主要表达于大鼠舌黏膜上皮细胞的细胞膜上,上皮的基底层、棘层和颗粒层呈阳性染色。随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,Cx43的表达明显下降。Cx43在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中阳性表达率分别为100.00%、85.71%、66.67%、40.00%、33.33%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 在大鼠舌黏膜癌变过程中,CK19蛋白表达水平随病变程度加重显著升高,提示CK19与口腔上皮细胞的癌变有关;Cx43蛋白表达水平随病变程度加重显著下降,Cx43表达下降是口腔黏膜癌变的早期事件。CK19与Cx43蛋白表达呈负相关,CK19和Cx43的联合检测对OSCC的早期诊断有重要的作用,有利于提高OSCC早期诊断的灵敏度和特异性。     

表皮生长因子及其受体在口腔黏膜上皮异常增生和口腔鳞癌中的表达

目的 探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)与口腔黏膜癌变的关系.方法 ①以30例健康成年人唾液样本为对照,通过放射免疫法对12例上皮异常增生患者、40例口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者唾液EGF含量进行测定分析.②采用免疫组化法检测10例正常口腔黏膜,16例上皮异常增生,30例OSCC上皮组织中EGFR的表达水平.结果 ①上皮异常增生组唾液EGF含量[(5.12±4.30)μg/L]显著高于口腔鳞癌[(2.35±1.00)μg/L]和正常对照组[(2.18±1.02)μg/L](P<0.01),OSCC和正常对照组无显著性差异.②上皮异常增生组织中EGFR的表达高于正常黏膜(P<0.05).OSCC中EGFR的表达显著高于正常黏膜(P<0.01).OSCC组和上皮异常增生组织中EGFR的表达无显著性差异.结论 EGF和EGFR可能参与口腔黏膜癌变的早期阶段.     

口腔黏膜异常增生中基因甲基化研究现况

约90%口腔鳞状细胞癌(OSCC)在临床上都出现过癌前病变即口腔上皮异常增生(OED)。 OED的病因是多因素的,在不同肿瘤的癌前病变中,越来越多的研究发现肿瘤发生相关基因出现启动子甲基化。为了明确口腔癌前病变的甲基化的研究现状,本文针对口腔上皮异常增生中的启动子甲基化的研究进行概述与分析。     

细胞角蛋白19在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:研究细胞角蛋白19 (cytokeratin 19,CK19)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达,探讨两者之间的相关性.方法:收集正常口腔黏膜、单纯上皮增生、上皮异常增生和OSCC患者活检标本49例,采用免疫组织化学、蛋白质印迹比较各组织中CK19的表达;收集未接受过放疗和化疗的OSCC患者16例及健康人群17例的血清,采用ELISA方法检测血清中CK19的可溶性片段CYFRA21-1的水平.采用SPSS17.0软件包进行数据处理.结果:CK19表达于有上皮异常增生的复层鳞状上皮基底上层和OSCC尤其是低分化鳞癌的癌细胞中,随上皮异常增生程度加重,CK19表达的阳性率、表达强度显著增加.OSCC患者血清CYFKA21-1含量显著高于健康对照组(P＜0.01).结论:CK19表达增加是口腔黏膜癌变过程中的早期事件,其异常表达可作为早期诊断OSCC的辅助指标之一.     

PTEN、p53在口腔黏膜白斑和口腔鳞癌组织中的表达及意义

目的:探讨抑癌基因PTEN、p53在口腔黏膜白斑(oralleukoplakia,OLK)和口腔鳞癌(oralsquamouscellcancer,OSCC)组织中的蛋白表达及意义。方法:应用免役组化S-P法检测10例正常口腔黏膜、25例口腔黏膜白斑(其中白斑伴上皮异常增生15例,白斑不伴上皮异常增生10例)及32例口腔鳞癌组织中抑癌基因PTEN和p53的蛋白表达情况,分析两者之间的相互作用关系及其在口腔鳞癌发生、发展过程中的作用。结果:正常口腔黏膜和白斑不伴上皮异常增生组织中PTEN蛋白全部阳性表达;白斑伴上皮异常增生组织中PTEN蛋白阳性表达率为93. 3%;OSCC组织中PTEN蛋白的阳性表达率为71. 9%,其中高、中、低分化OSCC组织中PTEN蛋白的阳性表达率分别为85. 7%、75%和33. 3%,统计学分析表明PTEN在OSCC组织中的蛋白表达与组织分化程度明显相关(P<0. 05)。正常口腔黏膜组织中p53蛋白阴性表达;白斑组织中p53蛋白的阳性表达率为48%;OSCC组织中p53蛋白的阳性表达率为56. 3%,其中高、中、低分化OSCC组织中p53蛋白的阳性表达率分别为57. 1%、58. 3%和50%,统计学分析表明p53在OSCC组织中的蛋白表达与组织分化程度无明显相关(P>0. 05)。p53阴性表达的14例OSCC组织中有5例PTEN也阴性表达。结论:OSCC组织中PTEN和p53蛋白异常表达,说明PTEN和p53基因突变或缺失     

口腔潜在恶性病变的无创筛查及管理

口腔潜在恶性病变（oral potential malignant disorders, OPMDs）是一类发生在口腔黏膜、具有癌变潜能的疾病总称,对OPMDs进行有效筛查及管理对于阻断其癌变进程和提高患者生活质量均具有重要意义。现就OPMDs的无（微）创筛查技术、管理理念以及笔者课题组的临床实践体会进行总结。     

口腔黏膜癌变过程中中心体的扩增及其意义

目的　了解口腔黏膜癌变过程中中心体的状况,探讨中心体的异常在口腔鳞状细胞癌(OSCC)发生发展中的作用及其在口腔黏膜癌变过程中的意义。方法　选取正常口腔黏膜(12例)、轻度上皮异常增生(2例)、中度上皮异常增生(8例)、重度上皮异常增生(12例),口腔高分化鳞癌(10例)、中分化鳞癌(15例)、低分化鳞癌(7例)的石蜡包埋组织,采用间接免疫荧光双重染色(γ-微管蛋白单克隆抗体及细胞角蛋白多克隆抗体)显示上皮细胞中的中心体,分析其在口腔黏膜癌变过程中的变化趋势及在各组间的差异。结果　正常口腔黏膜上皮表现为大小数目正常的中心体,但在72·73%(16/22)的上皮异常增生及84·38%(27/32)OSCC组织中观察到部分上皮或肿瘤细胞中出现异常中心体,表现为中心体直径的增加或数目的增多。具有异常中心体的细胞数目随上皮异常增生程度的增加及肿瘤分化程度的降低而增加,二者存在明显的正相关关系(P<0·01)。结论　中心体的扩增是口腔黏膜癌变过程中的早期事件并与口腔癌发生发展进程有关,口腔黏膜癌变过程中的细胞形态学改变与中心体扩增之间可能存在直接机制上的联系。从调控中心体循环入手治疗口腔癌前病损及OSCC,有可能成为口腔癌预防和治疗的新途径。     

口腔黏膜癌变相关基因研究

口腔黏膜癌变所导致的口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）是严重威胁人类健康的十大肿瘤之一。在全身恶性肿瘤中OSCC排第6位，在第三世界国家中OSCC排第3位．且呈逐年上升趋势。口腔黏膜癌变好发于亚洲的中部和南部，与病毒感染、理化刺激（吸烟、饮酒等）以及遗传等多种因素相关。随着基础医学及临床医学的发展．目前临床使用的口腔黏膜癌变及OSCC的诊断和治疗技术较前已有长足的进步，     

人乳头瘤病毒和口腔鳞癌关系的研究进展

人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）在口腔潜在性癌性病损（oral potential malignant disorder,OPMD）和口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）的检出率为0%~85%[1]。除了已知的饮酒、吸烟等危险因素外,越来越多的证据表明HPV感染也与OSCC的发生发展以及预后有着密切的关系,     

HERG1在口腔扁平苔藓和口腔鳞状细胞癌中的表达

目的：研究钾离子通道蛋白HERG1在正常口腔黏膜（normal oral mucosa,NOM）、口腔扁平苔藓（oral lichen planus,OLP）、口腔鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma,OSCC）中的表达及意义。方法：免疫组织化学技术检测16例NOM、20例OLP、30例OSCC组织中HERG1的表达。采用χ2检验,P〈0.05为差异具有统计学意义。结果：HERG1在OSCC中的表达强度高于OLP（P〈0.05）,HERG1在OLP组织的表达高于正常组织（P〈0.05）,且糜烂型OLP中的表达高于非糜烂型OLP（P〈0.05）,差异均具有统计学意义。结论：HERG1可能与OLP及OSCC的发生发展有一定的关系。     

口腔鳞癌发展过程中抑癌基因PTEN的蛋白表达及意义

目的：探讨抑癌基因PTEN(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten)在口腔鳞癌(oral squamous cell cancer，OSCC)发展过程中的蛋白表达及临床病理意义。方法：应用免役组化S—P法检测10例正常口腔粘膜、10例上皮单纯增生、15例上皮异常增生及32例OSCC组织中抑癌基因PTEN的蛋白表达情况，同时结合患者的临床病理资料进行分析。结果：正常口腔粘膜和上皮单纯增生组织中VTEN蛋白全部阳性表达；上皮异常增生组织中PTEN蛋白阳性表达率为93．3％；OSCC组织中PTEN蛋白的阳性表达率为71．9％，其中高、中、低分化OSCC组织中PTEN蛋白的阳性表达率分别为85．7％、75％和33．3％。PTEN在OSCC组织中的蛋白表达与患者的性别、年龄无明显相关性，但与组织分化程度明显相关。结论：OSCC组织(尤其低分化)中PTEN蛋白的阴性表达率较高．说明PTEN基因突变或缺失在OSCC的发生、发展过程中起重要作用。     

口腔扁平苔藓及口腔鳞癌患者口腔黏膜组织中微小RNA-590表达研究

目的    研究口腔扁平苔藓（oral lichen planus,OLP）及口腔鳞癌（oral squamous carcinoma,OSCC）患者口腔黏膜组织中微小RNA-590（miR-590）的表达,探讨其在口腔黏膜细胞癌变中的作用及意义。方法    选择2014年3月至2015年12月间锦州市口腔医院收治且经病理学确诊的OLP患者32例（OLP组）和OSCC患者28例（OSCC组）,所有OLP患者均为初诊且经病理学确诊取材,OSCC患者均为术中病理确诊后开始取材。另选择20名健康志愿者作为对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测3组受试者口腔黏膜组织中miR-590的表达水平并进行统计学分析。结果    OSCC组患者的miR-590相对表达水平（2.75 ± 0.78）最高,OLP组的相对表达水平（1.96 ± 0.52）次之,均显著高于对照组（0.77 ± 0.34）,差异有统计学意义（P < 0.05）。OSCC组与OLP组的miR-590表达差异有统计学意义（P < 0.05）。结论    与正常对照比较,miR-590的表达在OSCC和OLP组中显著升高,miR-590可能参与了口腔黏膜细胞癌变过程。     

口腔鳞状细胞癌患者唾液中透明质酸酶的活性分析

目的 研究口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者唾液中透明质酸酶(HAase)活性的变化.方法 采用类似酶联免疫吸附原理(ELISA-like)方法,研究HAase在正常人、OSCC患者、口腔良性肿瘤及瘤样病变患者唾液中的活性变化.结果 OSCC患者唾液中HAase活性为良性肿瘤患者和正常人唾液中HAase活性的2～3倍,而正常个体与良性肿瘤及瘤样病变患者唾液中HAase活性之间差异无统计学意义(P>0.05).以5.0 U/L为界值,根据HAase的活性检测OSCC的灵敏度为79.17%,特异度为65.00%;HAase活性与OSCC临床分期和颈淋巴转移正相关(P<0.01),而与病理分级无关(P>0.05).结论 HAase与OSCC的生长和侵袭密切相关,以唾液中HAase的活性为标记物检测口腔鳞状细胞癌,目前尚不能作为OSCC诊断的独立指标.     

口腔黏膜癌变过程中丝氨酸/苏氨酸激酶15的表达及意义

目的了解丝氨酸/苏氨酸激酶15（STK15）在口腔黏膜癌变过程中的表达变化,探讨P53/STK15转激活-非依赖通路在口腔鳞癌（OSCC）发生发展中的作用及意义。方法正常口腔黏膜8例,上皮异常增生患者27例,OSCC患者43例, 石蜡包埋组织,采用免疫组化SABC法了解STK15及P53蛋白表达情况,分析二者的相关性及其临床病理学意义。结果STK15在正常口腔黏膜无表达,在上皮异常增生及OSCC中阳性率分别为40.74%（11/27） 和67.44%（29/43）,各组间差异均有统计学意义（P<0.05）;口腔鳞癌中STK15阳性率在P53阳性组高于P53阴性组,在OSCC有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论STK15过表达是口腔黏膜癌变过程的早期事件,口腔鳞癌STK15过表达可能与p53突变有关并与OSCC淋巴结转移密切相关,P53/STK15转激活-非依赖通路在OSCC发生发展中可能起重要作用。     

口腔鳞癌与正常黏膜中T细胞分化蛋白mRNA的表达

目的：研究T细胞分化蛋白（T-cell differentiation protein,MAL）mRNA在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cellcarcinoma,OSCC）及配对正常口腔黏膜组织中的表达及意义。方法：采用RT-PCR方法检测30例OSCC患者肿瘤组织及其配对的正常口腔黏膜中MAL mRNA的表达,所得数据采用SAS6.12软件包进行χ2检验和t检验。结果：RT-PCR检测表明,MAL mRNA在30例OSCC和配对正常黏膜的阳性率分别为36.7%（11/30）和86.7%（26/30）（P〈0.001）;总表达水平分别为1.20±0.18和2.96±0.36,OSCC中表达水平较正常黏膜中表达下调2.47倍（P〈0.001）;MALmRNA在OSCC中表达下调与患者的性别、肿瘤的临床分期、有无颈淋巴结转移等临床参数无关,但与病理分化程度显著相关。结论：在OSCC的癌变过程中,MAL mRNA表达下调,表明MAL基因可能是OSCC的一个靶基因;MAL在OSCC诊断中具有潜在的应用价值。     

口腔黏膜癌前病变和口腔鳞状细胞癌中Stat3的表达及意义

目的研究口腔黏膜癌前病变和口腔鳞状细胞癌(OSCC)中细胞信号传导和转录激活因子(Stat3)的表达及意义。方法采用免疫组化方法分别检测9例正常口腔黏膜,口腔扁平苔藓(OLP)和白斑(OLK)共8例,OLP、OLK伴异常增生22例,OSCC19例中Stat3的表达。结果Stat3阳性表达分布于细胞质和细胞核内。正常口腔黏膜、单纯增生、异常增生和OSCC中Stat3阳性表达率分别为11.11%(1/9)、12.50%(1/8)、59.09%(13/22)和84.21%(16/19)。OSCC与正常口腔黏膜、单纯增生、异常增生相比,差异有显著性(P<0.05);异常增生与正常口腔黏膜、单纯增生相比,差异有显著性(P<0.05);而单纯增生和正常口腔黏膜相比差异无显著性(P>0.05)。结论Stat3与口腔黏膜癌变的发生发展有着密切关系,对Stat3表达的研究将有助于口腔黏膜癌前病变癌变的检测和OSCC的早期诊断。     

口腔鳞癌与正常黏膜中FAPA基因mRNA的表达

目的：研究成纤维细胞激活蛋白（（fibroblast activation protein alpha,FAPA）mRNA在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）及配对正常口腔黏膜组织中的表达。方法：采用RT-PCR方法检测30例OSCC患者肿瘤组织及其配对的正常口腔黏膜中FAPAmRNA的表达;所得数据用SAS6.12软件包进行χ^2检验和t检验。结果：RT-PCR检测结果表明,FAPAmRNA在30例OSCC和配对正常黏膜的阳性率分别为83%（25/30）和40%（12/30）（P〈0.001）;总表达水平分别为3.58±0.46和1.27±0.21,上调2.82倍（P〈0.0001）。结论：在OSCC的癌变过程中,FAPA基因过表达,可能是OSCC的一个靶基因;FAPA在OSCC诊断中具有应用价值。     

口腔黏膜下纤维性变癌变的研究进展

口腔黏膜下纤维性变（oral submucous fibrosis, OSF）是一种口腔潜在恶性疾患（oral potentially malignant disorder,OPMD）,可进展为口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）,其癌变率约为10.4%。OSF癌变的危险因素包括长时间咀嚼槟榔、合并白斑或扁平苔藓、吸烟、饮酒等。在OSF癌变进展中起作用的分子包括血管生成相关分子、免疫相关分子、细胞增殖黏附相关分子等。OSF随访中应重点关注其癌变风险。