骨碎补柚皮苷对人牙周膜细胞总蛋白合成及超微结构影响的实验研究

目的研究骨碎补柚皮苷对人牙周膜细胞总蛋白合成、超微结构的影响。方法采用酶消化法结合组织块法,体外培养人牙周膜细胞;采用考马斯亮蓝染色法,测定不同质量浓度骨碎补柚皮苷对人牙周膜细胞作用不同时间后,细胞内总蛋白质量浓度的变化;采用透射电镜观察骨碎补柚皮苷作用后人牙周膜细胞超微结构的变化。结果100、10、1、0.1 mg·L-1 4种质量浓度的骨碎补柚皮苷在第3、5、7天均能促进人牙周膜细胞内总蛋白的合成,其中以1 mg·L-1组促进作用最强。骨碎补柚皮苷作用于人牙周膜细胞后,细胞质内线粒体、粗面内质网、核糖体明显增多。结论骨碎补柚皮苷可促进人牙周膜细胞蛋白质合成,使细胞代谢更旺盛,功能更活跃。     

柚皮苷对人牙周膜细胞功能调节的作用

目的:通过研究中药有效成分柚皮苷对人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖、矿化成骨及骨保护素(OPG)表达的影响,探讨柚皮苷对人牙周膜细胞增殖及成骨功能的调节作用。方法:采用酶消化结合组织块法,体外原代培养hPDLCs,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、酶联免疫吸附法和半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,测定不同质量浓度(100、10、1.0、0.1、0.01mg/L)柚皮苷作用后,hPDLCs增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、Ⅰ型胶原蛋白、OPG表达的变化,采用SPSS16.0统计包对数据进行统计学处理。结果:原代培养的hPDLCs形态良好,1.0mg/L浓度组的柚皮苷对hPDLCs增殖、ALP活性和Ⅰ型胶原蛋白表达的促进作用最强,此浓度柚皮苷对细胞OPG mRNA的调节作用在测定时段内呈时间依赖性。结论:柚皮苷有促进hPDLCs增殖及向成骨方向转化的作用。     

联合应用柚皮苷及黄芩苷对人牙周膜细胞生物学活性的影响

目的:观察中药有效成分柚皮苷和黄芩苷联合应用对人牙周膜细胞(hPDLCs)生物学活性的作用。方法:用酶结合组织块法原代培养hPDLCs;通过MTT法、酶联免疫吸附法、诱导矿化实验测定二者配比之后对hPDLCs增殖、Ⅰ型胶原蛋白的表达、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙化结节形成的影响。结果:1.0 mg/L的柚皮苷与0.1 mg/L黄芩苷配伍对细胞增殖、Ⅰ型胶原蛋白表达、ALP活性以及矿化的促进作用明显。结论:柚皮苷与黄芩苷配伍组合可增强hPDLCs的成骨能力。     

不同浓度肿瘤坏死因子对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:观察不同浓度肿瘤坏死因子(TNF-α)对人牙周膜细胞增殖活性和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:取第4代体外培养人牙周膜细胞(hPDLCs),分别与0、1、5、10、20 ng/mL不同浓度TNF-α共同培养7 d,采用MTT法测定培养后0～7 d各时间点HPDLCs的增殖活力;用实时PCR检测不同浓度TNF-α刺激72 h后细胞周期蛋白(CyclinD1)mRNA的表达;检测ALP活性。结果:与对照组相比,1、5 ng/mL的TNF-α均可促进HPDLCs的增殖和Cyclin mRNA和ALP的表达(P<0.05);10、20 ng/mL浓度可抑制PDLCs的增殖和Cyclin D1 mRNA、ALP的表达(P<0.05)。结论:不同浓度的TNF-α刺激牙周膜细胞后可以影响细胞的增殖和分化。     

釉基质蛋白对牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：探讨釉基质蛋白对于牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：采用细胞培养技术,噻唑盐比色测定（MTT）法和酶动力学方法,观察釉基质蛋白对牙周膜细胞的作用。结果：釉基质蛋白组的牙周膜细胞,其增殖活性显著提高,以50mg/L浓度为最佳;其ALP活性也较对照组明显增加,以200mg/L浓度的效果最佳。具有一个合适的剂量范围。结论：釉基质蛋白可促进人牙周膜细胞的增殖和ALP活性。     

黄芪多糖对牙周膜细胞增殖与结构的形态学影响

目的探讨黄芪多糖水溶液对人牙周膜细胞增殖、分化及结构的影响。方法体外培养人牙周膜细胞,检测在黄芪多糖质量浓度为0.08、0.1、0.2、0.4 mg·mL-1的培养基中细胞增殖与结构。结果当黄芪多糖质量浓度为0.2 mg·mL-1时,甲基噻唑基四唑（MTT）法所测吸光度值显著高于对照组（P<0.05）,而在这一质量浓度下,牙周膜细胞碱性磷酸酶的表达明显高于对照组,同时细胞能保持良好的表面结构和超微结构。结论适宜质量浓度黄芪多糖水溶液在短期内对体外牙周膜细胞的增殖具有一定的促进作用。     

淫羊藿苷对内毒素抑制牙周膜细胞ALP表达的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞（periodontal ligament cells,PDLC）增殖及对内毒素（Lipopolysaccha-ride,LPS）干扰下碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的影响。方法：原代培养PDLC,MTT法检测不同浓度（0、10^-5～10^-9mol／L）淫羊藿苷对PDLC增殖的影响;RT—PCR、对硝基苯酚法测定淫羊藿苷对LPS抑制PDLC的ALPmRNA表达和分泌的影响。结果：淫羊藿苷在一定浓度下（10^-6～10^-7mol／L）可促进PDLC增殖;10υg／mLLPS可抑制PDLC的ALP活性;加入10^-6mol／L淫羊藿苷干扰后,对LPS抑制PDLC的ALP有拮抗作用,可提高其mRNA表达和活性。结论：淫羊藿苷在一定浓度时可促进PDLC增殖;可能通过拮抗LPS抑制其ALP的活性。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响,为淫羊藿苷在治疗牙周病方面的应用提供一定依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝（MTT）比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果：作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）,10mg/L组抑制人牙周膜增殖（P〈0.05）;作用72h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜碱性磷酸酶（ALP）活性（P〈0.05）;作用72h,0.1～0.001mg/L组的BSP表达水平较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞增殖及骨向分化。     

不同浓度肿瘤坏死因子对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

取第4代体外培养人牙周膜细胞(hPDLCs),分别与0、1、5、10、20ng/mL不同浓度TNF-α共同培养7d,采用MTT法测定培养后0～7d各时间点HPDLCs的增殖活力;用实时PCR检测不同浓度TNF-α刺激72h后细胞周期蛋白(CyclinD1)mRNA的表达;检测ALP活性。结果:与对照组相比,1、5ng/mL的TNF-α均可促进HPDLCs的增殖和Cy-clin mRNA和ALP的表达(P<0.05);10、20ng/mL浓度可抑制PDLCs的增殖和CyclinD1 mRNA、ALP的表达(P<0.05)。结论:不同浓度的TNF-α刺激牙周膜细胞后可以影响细胞的增殖和分化。     

茶多酚对炎性牙周膜细胞生物活性的影响

目的观察茶多酚对内毒素脂多糖(LPS)作用的人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响,为茶多酚在牙周疾病的防治中提供一定依据。方法体外培养人牙周膜细胞,采用MTT比色法观察茶多酚对LPS作用的人牙周膜细胞增殖活性的影响,通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定法观察茶多酚对人牙周膜细胞的分化作用。结果100μg/ml LPS可抑制人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性。加入LPS同时分别给予50～1100μg/ml不同浓度茶多酚,能对抗LPS的抑制作用,增强人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性,其中在800μg/ml作用24h时促进作用达到最强。结论茶多酚可对抗内毒素对人牙周膜细胞的毒性作用,促进细胞的增殖和骨向分化。     

骨碎补提取液及柚皮甙对小鼠成骨细胞MC3T3-E1基质矿化作用影响的比较研究

目的比较骨碎补水、醇提取液及柚皮甙对小鼠成骨细胞MC3T3-E1基质矿化作用的影响。方法制备骨碎补的水、醇提取液。以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1为细胞模型,用Von kossa钙化染色法了解上述药物提取液对成骨细胞基质矿化作用的影响。结果1 mg/L骨碎补水提液及0.01 mg/L骨碎补醇提液均可提高MC3T3-E1细胞体外钙化点面积百分比(P<0.05)。三组柚皮苷溶液作用组与对照组相比无明显区别。结论骨碎补水相和醇相提取物中分别存在有较高活性的促成骨细胞基质矿化的物质。     

尼古丁对人成骨细胞生物学性能的影响

目的研究不同浓度尼古丁对人成骨细胞（MG63）生物学性能的影响。方法用含1×10-4 mol·L-1、1×10-3 mol·L-1尼古丁的DMEM高糖培养基体外培养MG63细胞,分别于第3、5、7、10、14天采用MTT比色法检测MG63细胞的增殖力;用PNPP偶氮法测定细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性;用逆转录聚合酶链式反应检测细胞Ⅰ型胶原（COL1）与骨钙素（OCN）基因的表达。结果对照组和1×10-4 mol·L-1尼古丁组ALP的表达在第10天出现峰值。对照组和1×10-4 mol·L-1尼古丁组COL1的表达在第10天出现峰值,1×10-3 mol·L-1尼古丁组COL1的表达在第10天降至最低,在第14天升高。对照组中OCN的表达在第10天达到峰值,1×10-4 mol·L-1尼古丁组OCN的表达持续增高,1×10-3 mol·L-1尼古丁组OCN的表达无明显变化。与对照组相比,尼古丁组对细胞增殖起抑制作用;并降低了细胞ALP活性;对COL1、OCN的基因表达有抑制作用。结论尼古丁通过抑制成骨细胞的ALP活性和COL1的分泌而抑制成骨细胞分化。     

Nd：YAG激光照射对提高人牙周膜成维细胞增殖力的作用

目的观察Nd：YAG激光对人牙周膜成纤维细胞增殖和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法采用酶消化组织块法原代培养人牙周膜成纤维细胞，并进行波形蛋白及角蛋白的免疫细胞化学染色，对所培养的细胞进行鉴定。将牙周膜成纤维细胞分组，接受不同能量密度的Nd：YAG激光照射。测定牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性并观察其生长情况。结果5个实验组的细胞增殖速度及碱性磷酸酶含量均高于对照组，其中能量密度为60j／cm^2组、80j／cm^2组、100i／cm^2组与对照组相比有统计学的差异。结论低能量密度，短时间的Nd：YAG激光照射能促进牙周膜成纤维细胞的增殖，提高碱性磷酸酶活性。     

低分子釉原蛋白的纯化及其对人牙髓细胞和牙周膜细胞作用的研究

目的：纯化低分子猪釉原蛋白（LMWPA）,并观察其对人牙髓细胞（HDPCs）和牙周膜细胞（HPLCs）增殖及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：取六月龄猪第二磨牙牙胚牙釉质,用液相色谱法分离纯化LMWPA,分别采用MTT法和酶动力学方法测定LMWPA对HDPCs和HPLCs的体外作用。结果：得到的LMWPA是分子量约为5.0KDa的单一组分;在50和100μg/mL时,能的显著促进HDPCs和HPLCs的增殖,ALP活性上调（P〈0.01）;而在≥150μg/mL时,能显著抑制细胞的增殖,ALP活性下调（P〈0.01）。结论：LMWPA影响HDPCs和HPLCs的增殖和碱性磷酸酶活性,并存在剂量和时间依赖性。     

柚皮苷协同骨形态发生蛋白-2促进小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖和分化的研究

目的 研究柚皮苷（NAR）联合骨形态发生蛋白（BMP）-2对体外培养的成骨前体细胞MC3T3-E1增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性及成骨相关基因ALP、骨钙素（OCN）、成骨特异性转录因子（Runx2）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）表达的影响。方法 以成骨细胞株MC3T3-E1为体外药效的试验模型,通过Alamar blue法检测第1、4和7天3种不同浓度NAR（10、100和1 000 μmol·L^-1）单独作用以及分别与50 ng·mL^-1 BMP-2联合诱导对MC3T3-E1细胞增殖能力的影响。同时在第4天和7天测定成骨细胞内ALP活性,采用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、ColⅠ的表达。结果 单纯NAR刺激及联合BMP-2刺激能够促进细胞增殖,在NAR浓度为100 μmol·L^-1时达到高峰（P<0.05）,且该浓度NAR与BMP-2联合作用时增殖效果大于两者单独作用（P<0.05）。单纯NAR刺激及联合BMP-2刺激4 d和7 d时均能促进细胞ALP活性,100 μmol·L^-1 NAR与BMP-2联合作用时ALP活性最强（P<0.05）。100~1 000 μmol·L^-1的NAR单独及联合作用在不同程度上能促进ALP、OCN、Runx2、ColⅠ成骨相关基因表达。结论 NAR能有效促进成骨细胞株MC3T3-E1增殖、分化,且适宜浓度的NAR和BMP-2有协同和促进作用。     

流体剪切力与17-β雌二醇对MC3T3-E1细胞增殖活性协同作用的研究

目的 探讨对体外培养的成骨细胞增殖活性促进作用最佳的17-β雌二醇的浓度及作用时间、流体剪切力（FSS）的力值及作用时间,以及此双因素共同作用对成骨细胞增殖活性的影响。方法 成骨细胞系MC3T3-E1细胞传代培养后,分别对其施加不同浓度的17-β雌二醇和不同力值的FSS,采用MTT法检测细胞的增殖情况,并检测ALP 活性,筛选出最佳的浓度及力值;再将二者共同作用于MC3T3-E1细胞,检测其增殖情况和ALP活性。结果 浓度为10-8 mol·L-1的17-β雌二醇作用5 d时,MC3T3-E1细胞的增殖及ALP活性优于其他17-β雌二醇处理组;FSS力值为12×10-5 N作用60 min时细胞的增殖及ALP活性大于其他FSS处理组。当二者同时作用于MC3T3-E1细胞时,细胞的增殖活性大于任一单因素处理组。结论 17-β雌二醇和FSS对成骨细胞活性的促进作用皆有一个适宜的阈值;二者具有协同作用,对成骨细胞分化及增殖功能的影响优于单一因素作用。     

黄芩苷对人牙周膜细胞功能活性调节的实验研究

目的：通过观察中药黄芩的有效成份黄芩苷对人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLCs）增殖、矿化成骨等功能活性的影响,研究黄芩对人牙周膜细胞的调节作用。方法：采用组织贴块联合胶原酶消化的方法,体外分离、培养、纯化和鉴定hPDLCs后,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、酶联免疫吸附、半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）等方法,检测不同浓度的黄芩苷（10、1.0、0.1、0.01mg/L）对hPDLCs增殖、矿化成骨、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、细胞核因子-κB受体活化因子配基（receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL）mRNA表达等方面的影响。结果：0.1mg/L的黄芩苷对于增加人牙周膜细胞的增殖活性、碱性磷酸酶活性和Ⅰ型胶原蛋白的表达作用最强;适宜浓度的黄芩苷可以降低RANKL/OPGmRNA比值。结论：黄芩苷能促进hPDLCs的增殖和成骨作用,该作用可能与RANKL/OPG信号通路相关。