牙龈卟啉单胞菌clpP基因缺失株和回补株的构建和鉴定

目的 构建并鉴定牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g）W83的丝氨酸蛋白酶(caseinolytic protease,Clp)基因缺失株和回补株,为探索clpP基因在P.g致病过程中的作用和机制奠定基础。方法 设计clpP基因的引物对,PCR扩增其上下游同源片段,克隆入质粒pUC18中,插入红霉素抗性基因ermB作为筛选标记,构建重组质粒,电转化入P.g W83构建缺失株;PCR扩增clpP基因片段与重组质粒pUC18-ΔclpP-ermB连接,电转化入P.g W83缺失株中构建回补株。采用PCR和酶切电泳鉴定序列的正确性,利用抗性培养基筛选高表达菌株。结果 clpP基因克隆成功并顺利导入质粒pUC18中,P.g W83的clpP基因缺失株和回补株构建成功,并能在体外稳定传代。结论 本研究运用同源重组技术构建了P.g W83的clpP基因缺失株,并建立了以pUC18质粒为载体的clpP基因回补方法,为进一步研究clpP基因在P.g致病过程中的作用打下了基础。     

RNA干扰Survivin对腺样囊性癌细胞株ACC-M生长的抑制作用

目的:探讨RNA干扰Survivin基因对腺样囊性癌细胞生长的抑制效应.方法:设计、合成siRNA(small interfering RNA),构建真核表达载体pGenesil-shRNA-Survivin,将重组质粒导入人腺样囊性癌ACC-M细胞株.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PcR)、Western-blot法分别检测转染后的ACC-M细胞中Survivin mRNA和蛋白表达的变化,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖,结果:测序证实真核表达载体构建成功,在pGenesil-shRNA-Survivin的ACCM细胞株中,Survivin mRNA及蛋白表达明显降低,ACC-M细胞生长受到抑制.结论:pGenesil-shRNA-Survivin重组质粒能有效抑制腺样囊性癌细胞生长.     

芦荟大黄素诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

芦荟大黄素是蓼科植物掌叶大黄的根和块茎中含有的一种活性成分。研究发现其对多种肿瘤细胞株具有抑制作用,文章综述了近年来有关芦荟大黄素诱导肿瘤细胞株凋亡的作用及其机理的研究进展。     

绞股蓝总皂甙对体外培养人口腔鳞癌颈淋巴结转移癌细胞抑制作用的研究

采用MTT法和电镜观察，研究了绞股蓝总皂甙（GP）对人体口腔鳞癌颈淋巴结转移癌细胞的抑制作用。结果表明，GP可抑制转移癌细胞的增殖，并对癌细胞内线粒体和粗面内质网有损伤作用。提示GP可用于口腔转移癌的治疗。     

高龋患者与无龋健康人口内变形链球菌蛋白表达差异的初步分析

目的:利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术,对来自高龋患者和无龋健康人口内变形链球菌临床株的蛋白组进行初步比较,分析二者蛋白表达的差异,以期进一步明确该菌菌株间致龋性存在差异的原因.方法:采用SDS-PAGE技术,比较分离自高龋患者的变形链球菌593号菌株和无龋健康人的变形链球菌18号菌株的菌体和菌外可溶性蛋白表达的差异.结果:菌体可溶性蛋白电泳图中见593号菌株在75 KDa左右存在特异表达的蛋白条带,且二者在85、60、50、40 KDa左右蛋白表达量上存在差异;菌外可溶性蛋白电泳图中见593号菌株在75、40 KDa左右有特异表达的蛋白条带,而18号菌株在50KDa左右有特异表达的蛋白条带,二者在60 KDa左右蛋白表达量上存在差异.结论:两菌株的菌体和菌外可溶性蛋白电泳图谱中均可见各自特异表达的蛋白条带,且部分相同位置的蛋白条带在蛋白表达量上也存在差异,表明两菌株的蛋白组存在明显差异,该差异可能是导致其致龋力差异的原因之一.     

兔VX2舌鳞癌移植瘤模型3种建立方法的比较

目的采用3种不同移植瘤方法建立稳定的兔VX2舌鳞癌移植瘤模型,并对这3种方法建立的模型的生物学特性进行比较。方法将72只新西兰大白兔随机分成3组,每组24只,分别用瘤组织块植入法、改良瘤细胞悬液注入法及瘤细胞悬液注入法植于兔舌侧缘中1/3黏膜下,建立兔舌鳞癌的移植瘤模型。观察和比较3种方法所建立的模型的肿瘤生长状况、成瘤率和自发转移发生率。结果瘤组织块植入组、改良瘤细胞悬液注入组、瘤细胞悬液注入组的成瘤率分别为83.3%、91.7%、33.3%,局部淋巴结转移率分别为71.4%、100.0%、37.5%,肺转移率分别为35.7%、81.3%、0;3种方法建立的兔VX2舌鳞癌移植瘤模型的组织学形态均符合中分化鳞状细胞癌特征。结论3种方法建立的移植瘤模型均较接近人舌鳞癌自然生长过程。其中,改良瘤细胞悬液注入法建立的动物模型,因成瘤率高、转移率高、同期瘤体大小差异较小,更适合于舌鳞癌研究。     

沙培林对人舌鳞癌细胞株的抑制作用

沙培林(Sapylin)在临床上治疗口腔鳞癌具有一定效果。本文研究了 Sapylin 对舌鳞癌细胞株(Tca8113)细胞的抑制作用机理。实验证实:Sapylin 能抑制 Tca8113细胞的 DNA 合成;Sapylin 含量为0.015KE/ml～0.00375KE/ml,其抑制率为53.8%～61.3%。含量为1.0KE/ml时,培养8天后的Tca8113细胞集落形成率为0。提示 Sapylin 有抑制舌鳞癌细胞 Tca8113的作用。     

变异链球菌LuxS基因缺陷突变株的构建及其生物膜结构的初步观察研究

目的:通过同源重组法构建变异链球菌LuxS基因缺陷突变菌株,比较其与变异链球菌UA159标准株在生物膜形成上的差异。方法:运用基因同源重组方法将氯霉素抗性基因(Cmr)与LuxS基因上下游区域的2个基因片段按一定顺序重组到PUC载体的多克隆位点中,构建出带氯霉素抗性标志的重组质粒,将载体质粒转化到含完整LuxS基因的变异链球菌UA159中,利用氯霉素抗性筛选出LuxS基因缺陷的突变株,并利用聚合酶链式反应(PCR)和哈氏弧菌发光实验进行检测。以釉质磨片为载体,在扫描电镜下观察上述两菌株含有20 g/L葡萄糖、20 g/L蔗糖的乳酪消化胨酵母(TPY)液体培养基中形成24 h的生物膜。结果:PCR基因扩增结果显示:突变株LuxS基因已被Cmr基因完全替换,成功的构建了变异链球菌LuxS基因突变株,并且突变株不能诱导哈氏弧菌BB170的生物发光。当用葡萄糖作为补充糖源时,变异链球菌UA159标准株和LuxS基因突变株所形成的生物膜表现型未见明显差异;而用蔗糖作为补充糖源时,两菌株所形成的生物膜有明显不同,UA159生物膜相对平滑均质,而LuxS基因突变株生物膜呈松散的蜂房状,基质间有较大的间隙,形成较大的团簇状菌落。结论:成功构建出LuxS基因缺陷的变异链球菌突变株,与变异链球菌UA159标准株其生物膜结构发生改变,提示LuxS会影响变异链球菌生物膜的形成。     

LuxS基因缺失对变形链球菌耐酸性的影响

目的:探讨变形链球菌Ingbritt C (血清C型) 国际标准株与LuxS基因缺失的变形链球菌突变株之间耐酸能力的差异.方法:配制相同浓度的变形链球菌标准株与LuxS缺陷株菌悬液,分别在不同pH值(pH3.5～7.0)的BHI液体培养基中培养相同时间后,用紫外分光光度计测定吸光度,比较2 种菌株的生长情况;先在轻度酸性环境(pH5.5)中预酸化,再将2 种菌株于致死性pH值环境(pH3.0)中培养,比较其适应性耐酸能力.结果:①pH值为6.0～7.0时,2 种菌珠在相同pH值条件下生长情况间的差异无显著性(P>0.05), 且3 组不同pH值条件下细菌生长情况间的差异亦无显著性(P>0.05);②pH值为4.5～5.5时,2 种菌株的生长情况的差异有显著性(P<0.05);③在pH值为3.0时,LuxS缺陷株的生存率(0.006 5%)要明显低于标准株的生存率(0.078%),差异有显著性(P<0.05).④在pH值5.5环境下预酸化后,LuxS缺陷株的生存率(0.747%)约为标准株生存率(8.65%)的1/10.结论:在亚致死性pH值中,变形链球菌标准株与LuxS缺陷株的耐酸能力具有差异,标准株的耐酸能力强于LuxS缺陷株,2 种菌株均表现出了适应性耐酸的能力;变形链球菌LuxS缺陷株对酸的敏感性增加,而适应性耐酸能力仍然存在.     

健康老年人口腔念珠菌与义齿修复的相关研究

目的 研究健康老年人群中口腔念珠菌的定植状况,分析义齿修复对老年人口腔念珠菌定植的影响。方法 212例健康老年人分为4组：A1组（男性,有义齿）,B1组（男性,无义齿）,A2组（女性,有义齿）和B2组（女性,无义齿）。标准含潄法取样,样本接种于沙堡琼脂培养基培养念珠菌,CHROMagar CandidaTM鉴定培养基鉴定白色念珠菌,碳水化合物同化反应鉴定体系鉴定念珠菌菌种。培养基中念珠菌菌落计数为每个样本的念珠菌检出强度。比较4组健康老年人念珠菌检出率和检出强度有无统计学差异。结果 212例老年人中116例检出念珠菌,检出率为54.72％。检出念珠菌包括白色念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌等10个菌种。A1、B1、A2和B2组念珠菌检出率分别为66.67%,36.07%,64.15%和56.00%;白色念珠菌检出率分别为56.25%,21.31%,56.60%和38.00%。A1组念珠菌、白色念珠菌检出率高于B1组（P<0.05）。高念珠菌强度者在A1、A2组所占比例分别较B1、
B2组高（P<0.05）。结论 健康老年人口腔总念珠菌及白色念珠菌检出率和检出强度增高与义齿修复相关。老年人
口腔念珠菌检出率和检出强度的差异主要是白色念珠菌检出率和检出强度的差异所造成。     

粘性放线菌对牙面粘附机理的研究：Ⅲ.粘性放线菌变异株的鉴…

利用粘性放线菌的变异株制备全菌抗血清，采用免疫吸附、疏酸铵沉淀及离子交换层析制备了抗菌毛Ⅰ、ⅡＩｇＧ，并用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测定其分子量，ＥＬＩＳＡ证明其特异性，为确定菌毛Ⅰ、Ⅱ在粘附中的作用，筛选粘性放线菌的粘结素成份奠定基础。     

变形链球菌GTase高表达株免疫奶牛应用研究

目的 观察防龋疫苗免疫奶牛后，牛乳中特异性抗体的产生规律。方法：应用变链菌ＧＴａｓｅ－１高表达株免疫怀孕奶牛，收集牛乳，经间接ＥＬＩＳＡ检测牛乳中特异性抗变链球菌抗体。结果：抗变链菌特异性抗体出现于初服中，其含量于分娩后１０ｄ达到高峰，在末次免疫后，特异性抗体可在６０ｄ内维持在较高水平，巴氏消毒（６２．５℃，３０ｍｉｎ）对免疫牛乳ＩｇＧ活性无明显影响，结论：变链菌ＧＴａｓｅ高产株可诱导奶牛分泌高效     

兔VX-2舌鳞癌移植瘤模型的建立及生物学特性观察

目的：建立可供实验研究的稳定的兔VX2舌鳞癌移植瘤模型,观察其主要生物学特性。方法：制备VX2肿瘤荷瘤种兔后,将荷瘤种兔新鲜鳞癌组织块移植于24只新西兰大白兔的舌侧缘中1/3黏膜下,制成兔VX2舌鳞癌移植瘤模型。荷瘤动物随机分为2组,第1组（n=6）不同时期分批处死,进行大体观察、组织病理及电镜检查;第2组（n=14）作为对照组,观察荷瘤动物的自然生存期。结果：成瘤率为83.3%（20/24）;移植瘤的组织学特征与移植于兔其他部位的VX2肿瘤基本一致,在舌体内浸润性生长并向周围侵袭、扩散,符合中分化鳞状细胞癌的特征。结论：成功建立了兔VX2舌鳞癌移植瘤模型。该模型成瘤率高,潜伏期短,生长迅速,生物学特性稳定,易于复制,接近人舌鳞癌的临床特征,较客观地反映了舌癌的生物学行为,为舌鳞癌的研究提供了较理想的大型动物模型。     

变形链球菌菌斑生物膜相关基因突变的研究进展

变形链球菌能生成菌斑生物膜,后者与龋病的发生密切相关.随着现代口腔医学和分子生物学的发展,菌斑生物膜相关基因的研究也越来越多,发现了许多与之相关的基因,主要包括与黏附力相关的基因、与群体感应信号系统相关的基因等.对变形链球菌菌斑生物膜相关基因的研究可以更深入地了解其致龋机制,并对寻找防龋新途径作出有益的探索.本文就近年来与变形链球菌菌斑生物膜相关的基因突变研究作一综述.     

粘性放线菌对牙面粘附机理的研究Ⅲ.粘性放线菌变异株的鉴定及兔抗菌毛Ⅰ及菌毛ⅡIgG的制备

利用粘性放线菌的变异株制备全菌抗血清 ,采用免疫吸附、硫酸铵沉淀及离子交换层析制备了抗菌毛 、 Ig G,并用 SDS- PAGE电泳测定其分子量 ,EL ISA证明其特异性 ,为确定菌毛 、 在粘附中的作用 ,筛选粘性放线菌的粘结素成份奠定基础     

LuxS基因缺失对变异链球菌生物学性状的影响

目的:观察LuxS基因突变对变异链球菌生物性状的影响。方法:将变链菌标准株和LuxS突变株分别培养于TSA、TSA-Cmr、BHI培养基培养48 h,通过菌落形态观察、常规生化检测、革兰染色涂片观察和生长曲线,比较两种菌株的生长特性;体外建立LuxS基因突变株和标准株的生物被膜模型,结晶紫染色,观察比较两菌株形成生物被膜的能力。结果:在含氯霉素的TSA-Cmr固体培养基中增塑,标准株基本不能生长,而突变株的生长状况基本正常。在不含氯霉素的TSA固体培养基中培养,两种菌株的菌落形态没有明显差别,革兰染色镜下观察,可见标准株菌体呈长链状排列且相互缠绕,而突变株菌体多呈短链状排列,形成长链的较少。生长曲线观察发现:两菌株在生长模式上基本一致,均呈典型的"S"型曲线,只是在进入生长的稳定期后,两者在细菌饱和度上有一定差异,即11.5～22.5 h之间各时间点标准株的A值均明显高于LuxS突变株(P<0.05)。在BHI培养基中两菌株均能形成生物被膜,但结构存在差异:标准株形成光滑且均匀分布的生物被膜,而突变株的生物被膜形态较粗糙。结论:LuxS基因突变对变异链球菌的生长以及生物被膜形成能力等生物学性状有一定影响。