猪釉基质蛋白的提取及N末端氨基酸序列分析

目的：从猪牙胚提取釉基质蛋白并做氨基酸测序,为进一步研究釉基质蛋白诱导牙周组织再生的生物活性奠定基础。方法：选择乙酸提取法获得釉基质蛋白,采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和印迹膜测序法分析Ｎ末端氨基酸序列。结果：提取的釉基质蛋白分子量条带主要位于２０ＫＤａ以下,优势条带为２０ＫＤａ、１３ＫＤａ、５ＫＤａ。２０ＫＤａ、５ＫＤａ釉基质蛋白Ｎ末端前１０个氨基酸残基均为：Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ。结论：乙酸提取法可获得典型的釉原蛋白。印迹膜测序法简易、快速、敏感。     

釉基质蛋白诱导牙周组织再生的量效实验研究

目的：探索釉基质蛋白（Ｅｎａｍｅｌ Ｍａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＥＭＰｓ）应用的最佳剂量和甲壳质作为载体的可行性。方法：采用乙酸提取法获得猪釉基质蛋白，选用甲壳质作为载体脂，分别选择４种剂量的釉基质蛋白做猴牙周骨缺损的再生实验研究。结果：１５ｍｇ剂量组可获得高达７８．３３％的牙骨质再生和７５％的牙槽骨再生，明显高于５，１０和２０ｍｇ组。结论：１５ｍｇ的ＥＭＰｓ为诱导牙周组织再生的最佳量，甲壳质     

牙菌斑中的蛋白水解酶及其生物学作用

蛋白水解酶在根面龋中的作用已逐渐得到证实 ,目前受到较多关注 ,本文介绍其种类、来源、性质和生物学作用等。一、蛋白水解酶的种类及来源蛋白水解酶是一大类作用于有机肽链的酶 ,分为外肽酶和内肽酶。最常见的外肽酶是亮氨酸氨基肽酶 (ＬｅｕｃｉｎｅＡｍｉｎｏＰｅｐｔｉｄａｓｅ ,ＬＡＰ) ,有机质的Ｎ -端氨基酸是其主要作用位置 ,在水解Ｌｅｕ为Ｎ末端的肽链时速度最快 ;甘氨酰脯氨酸二肽酶 (ＤｉｐｅｐｔｉｄｙｌＰｅｐｔｉｄａｓｅＩＶ ,ＤＰＰＩＶ)也是一种外肽酶 ,主要水解以Ｘ -Ｐｒｏ-Ｙ为Ｎ -端的肽链 ,其中Ｘ常为脯氨酸 ,Ｙ常…     

茸毛链球菌主要表面蛋白抗原的定性分析

目的：提取茸毛链球菌主要表面蛋白抗原（ＰＡｇ）对其性质进行初步鉴定。方法：用硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ－ｃｅｌ－ｌｕｌｏｓｅ离子交换和 Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６Ｂ凝胶过滤从茸毛链球菌 ６７１５培养上清中提取 ＰＡｇ,并对其分子量,蛋白质含量,氨基酸组成及免疫学特性进行检测。结果与结论：ＰＡｇ能与特异性抗血清发生反应,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ呈单一区带,分子量为２１０ＫＤ,蛋白质含量为６１．４％,氨基酸组成分析揭示其酸性和碱性氨基酸分别为２６．７％和１０．７％。     

Smad2基因MH2结构域表达载体的构建和其在大肠杆菌中的表达

目的：构建Ｓｍａｄ２基因ＭＨ２结构域原核融合表达载体,在大肠杆菌中表达ＭＨ２结构域,为制备抗ＭＨ２抗体,研究Ｓｍａｄ２基因和ＭＨ２结构域的功能奠定基础。方法：用ｐＧＥＸ－４Ｔ－２表达载体构建ｐＧＥＸ－４Ｔ－２／Ｓ２ＭＨ２原核融合表达载体,转化大肠杆菌ＤＨ５α,ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－ＭＨ２融合蛋白,１００ｇ／ＬＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达产物。结果：重组载体转化ＤＨ５α,经ＩＰＴＧ诱导４ｈ后,在１００ｇ／ＬＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新的蛋白条带,相对分子质量（Ｍｒ）约为４９×１０３。结论：构建成功ｐＧＥＸ－４Ｔ－２／Ｓ２ＭＨ２融合表达载体,在大肠杆菌ＤＨ５α内表达获得ＧＳＴ－ＭＨ２融合蛋白。     

末端种植体倾斜状况的应用研究——向舌侧倾斜

目的：研究了下颌种植舌倾斜时末端种植体应力分布情况，方法：下颌５个各植体，除左侧末端种植体舌倾斜１５°外余为垂直状态，以１００Ｎ分别垂直加载于距末端种植体０，１０，２０ｍｍ的悬臂梁上，在微机上用ＳＡＰ８４软件分析种植体周置应力分布，结果：加载于距末端种植体２０ｍｍ时其种植周围应力分布。结果：加载于距末端种植体２０ｍｍ时其各植周围应力均比加载于悬臂梁０，１０ｍｍ时为大，种植体舌侧倾斜时，在近中和舌侧     

EGFR在口腔粘膜鳞癌和癌有病变中的表达及意义

应用免疫组化ＳＰ法对２３例口腔鳞癌（ＳＣＣ）,２０例口腔粘膜白斑（ＬＫ）,２１例口腔粘膜扁平苔藓（ＬＰ）及１０例正常口服粘膜（ＮＭ）蜡块标本行表皮生长因子受体ＥＧＦＲ）的定性测定。结果发现：ＳＣＣ的阳性率为８２．６１％,ＬＫ４５．０％,ＬＰ３８．１０％,ＮＭ１１．１１％。ＳＣＣ与ＬＫ、ＬＰ、ＮＭ间均有显著差别、ＬＫ、ＬＰ与ＮＭ间的差别无显著性,提示：ＥＧＦＲ高度表达可能是口腔鳞癌的重要指征之一,对     

末端种植体倾斜状况的应力研究——向舌侧倾斜

目的：研究下颌种植体舌倾斜时末端种植体应力分布情况。方法：下颌５个种植体，除左侧末端种植体舌倾斜１５°外余为垂直状态。以１００Ｎ分别垂直加载于距末端种植体０、１０、２０ｍｍ的悬臂梁上，在微机上用ＳＡＰ８４软件分析种植体周围应力分布。结果：加载于距末端种植体２０ｍｍ时其种植周围应力均比加载于悬臂梁０、１０ｍｍ时为大。种植体舌侧倾斜时，在近中和舌侧骨界面应力亦较远中和颊侧骨界面的应力大。结论：种植义齿设计时应考虑种植体舌侧倾斜时骨界面舌侧和近中应力状况     

EGFR在口腔粘膜鳞癌和癌前病变中的表达及意义

应用免疫组化ＳＰ法对２３例口腔鳞癌（ＳＣＣ）,２０例口腔粘膜白斑（ＬＫ）,２１例口腔粘膜扁平苔藓（ＬＰ）及１０例正常口腔粘膜（ＮＭ）蜡块标本行表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）的定性测定．结果发现：ＳＣＣ的阳性率为８２．６１％,ＬＫ４５．０％,ＬＰ３８．１０％,ＮＭ１１．１１％．ＳＣＣ与ＬＫ、ＬＰ、ＮＭ间均有显著差别,ＬＫ、ＬＰ与ＮＭ间的差别无显著性,提示：ＥＧＦＲ高度表达可能是口腔鳞癌的重要指征之一,对癌变细胞的增殖有重要作用。     

小鼠牙本质涎磷蛋白在大肠杆菌的表达和纯化

目的：在大肠杆菌中表达牙本质涎磷蛋白,并对重组蛋白进行纯化,为进一步制备抗牙本质涎磷蛋白抗体和功能研究奠定基础。方法：构建ＤＳＰＰ－ ｐＰｒｏＥＸＨＴｃ 表达载体,重组子以大肠杆菌ＢＬ２１ 为宿主细胞进行诱导表达,表达产物经镍－ 次氮基三乙酸（Ｎｉ－ ＮＴＡ）柱进行亲和层析纯化。结果：工程菌经２０ｈ 诱导后,在ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ上出现一条新的蛋白带,Ｍｒ１０７ ×１０３ 左右,经Ｎｉ－ ＮＴＡ 柱纯化后获得纯度为９５ ％ 的小鼠牙本质涎磷蛋白。结论：获得Ｍｒ １０７×１０３ 的牙本质涎磷蛋白。     

细菌膜泡、外膜蛋白复合物的十二烷基磺酸钠－聚丙烯凝胶电泳分析

本实验用连续测定法观察了细菌的生长率的变化，结果表明：三株卟啉菌在３ｄ的生长率基本相似，均以指数方式生长，其中ＰｇＷ５０在以后的几天中仍基本保持平衡，Ｐｇ３８１在５～６ｄ后开始呈下降趋势，而Ｐｅ在３～４ｄ到达顶点后，即开始呈下降趋势。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示：ＥＣＶ的泳带要比同菌ＯＭＰＣ的泳带多，且大多集中在２０ＫＤ到１００ＫＤ之间．各带的含量（峰高）亦不相同。     

变形链球菌185—SA表面蛋白抗原的提取与鉴定

变形链球菌Ｃ血清型的１８５ＫＤ表面蛋白抗原，是变链的重要抗原。本文自变链ＭＴ６Ｒ（Ｃ血清型）的培养上清液中，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析电泳，制备电泳和透析电泳的方法，提取了变链１８５ＫＤ表面蛋白抗原。这种抗原与标准抗体具有免疫反应性，是一种类似于或相同ＳＡⅠ／Ⅱ的抗原。     

釉基质蛋白水解酶

釉质的发育是由成釉细胞分泌产生，釉质形成有两个过程：釉基质的形成和矿化。首先成釉细胞分泌有机基质，然后从生发中心开始，矿物质输入起始矿化。在釉质矿化过程中，大量釉基质蛋白被降解、吸收，留出空隙容纳增多、增大的矿物质结晶。７０年代末期，Ｓｕｇａ和Ｓｈｉｍｉｚｕ等［１，２］发现，在未成熟的釉质中存在蛋白水解酶，可降解釉基质蛋白。此后陆续有关于这方面的报道，但结果不完全一致。近十年来，各国学者在这方面作了较为深入的研究，多数学者认为釉基质中主要有两类蛋白水解酶，即：丝氨酸蛋白酶和基质金属蛋白酶，参与了…     

牛血浆纤维粘连蛋白对培养的人牙髓细胞ConA、WGA、SBA凝集素受体表达的影响

本文观察了不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ）和人工合成肽（ＲＧＤＳ．４０μｇ／ｍｌ）对人牙髓成纤维细胞ＣｏｎＡ、ＷＧＡ、ＳＢＡ凝集素受体的影响，培养液中ＦＮ的浓度分别为１０、２０、４０、８０μｇ／ｍｌ，ＲＧＤＳ的浓度为４０μｇ／ｍｌ．凝集素受体的表达情况通过图象分析仪进行半定量分析，培养的人牙髓细胞不表达ＳＢＡ受体，ＦＮ（４０、８０μｇ／ｍｌ）可显著地使人牙髓细胞ＣｏｎＡ受体表达增强，而ＷＧＡ的受体表达减弱，ＲＧＤＳ（４０μｇ／ｍｌ）组的细胞ＷＧＡ的受体表达弱于ＦＮ（１０、２０μｇ／ｍｌ）组。     

牛血浆纤维粘连蛋白对培养的人牙髓细胞增殖,表型的影响

目的：将传代的人牙髓细胞培养于加入１０％ＦＣＳ的ＤＭＥＭ液中，其中含５０μｇ／ｍｇＬ－ＶｉｔＣ、１０ｍｍｏｌ／Ｌβ－磷酸甘油钠，观察牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ，２０μｇ／ｍｌ）对细胞的增殖、表型的影响。方法：细胞培养，免疫组化染色，扫描电镜。结果：ＦＮ（２０μｇ／ｍｌ）在细胞增殖期可促进细胞增殖，但在静止期则无明显的促增殖作用，也不能改变细胞的形态、生长方式；两组细胞的ＣｏｎＡ、ＷＧＡ凝集素受体的表达也无差异。扫描电镜证实：两组细胞表面光滑。结论：ＦＮ（２０μｇ／ｍｌ）可促进含１０％ＦＣＳ的ＤＭＥＭ液中的人牙髓细胞的增殖，但不影响其表型。     

NMDA受体拮抗剂减少大鼠牙髓伤害性刺激诱导的延髓Fos蛋白表达

目的：探讨谷氨酸及其 Ｎ Ｍ Ｄ Ａ 受体是否参与牙髓伤害性刺激的传递,揭示它们与牙痛传递的内在关系。方法：随机分配为４ 组的２８ 只大鼠。一组单纯给予穿髓刺激,另一组在穿髓刺激前预先侧脑室分别给予３ 种浓度的谷氨酸 Ｎ Ｍ Ｄ Ａ 受体拮抗剂 Ｍ Ｋ－ ８０１ 。另设 Ｍ Ｋ－ ８０１ 对照组和正常对照组。存活相同时间后观察各组动物延髓 Ｆｏｓ 蛋白的表达。结果： Ｍ Ｋ－ ８０１ ＋ 穿髓组较单纯穿髓组延髓 Ｆｏｓ 蛋白表达量显著减少,且呈剂量依赖性。结论：谷氨酸可能参与了牙髓伤害性信息的传递过程,其中 Ｎ Ｍ Ｄ Ａ 受体具有重要作用。     

釉基质蛋白骨诱导作用的实验探讨

目的:观察提取的猪釉基质蛋白是否具有骨诱导作用。方法:采用大鼠腓肠肌肌袋内成骨模型观察釉基质蛋白是否具有骨诱导作用。实验分为2组,采用自体对照,实验组埋入以藻酸丙二醇酯为载体的釉基质蛋白,对照组埋入藻酸丙二醇酯。1个月后处死动物。结果:经大体及组织学观察,大鼠腓肠肌肌袋埋植处瘢痕愈合,未见有骨样或软骨样组织形成。结论:提取的猪釉基质蛋白未具有骨诱导作用。     

牙本质非胶原蛋白诱导兔修复性牙本质形成的实验研究Ⅰ兔牙本质非胶原蛋白的提取与初步分析

牙本质蛋白具有诱导及促进修复性牙本质形成的作用。本文以１０％ＥＤＴＡ溶液提取兔牙本质非胶原蛋白，应用ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳和氨基酸分析系统对其组分、分子量和氨基酸组成进行了分析。     

牛血浆纤维粘连蛋白对人牙髓成纤维细胞增殖,DNA合成,细胞…

采用四唑盐比色法（ＭＴＴ）、３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验、细胞大小测定的图象分析等方法，观察不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ）和人工合成肽段（ＲＧＤＳ，４０ｕｇ／ｍｌ）对外培养的人牙髓细胞的影响。ＦＮ（２０、４０ｕｇ／ｍｌ）可促进牙髓成纤维细胞增殖、刺激细胞ＤＮＡ合成，ＦＮ（１０、８０ｕｇ／ｍｌ）、ＲＧＤＳ（４０ｕｇ／ｍｌ）和空白组成对牙髓细胞无上述效应。４种浓度ＦＮ和ＲＧＤＳ（４０ｕｇ／ｍｌ）均使牙髓细     

3种口腔厌氧菌荚膜的氨基酸组成和SDS—PAGE

以酸水解法测定了３种口腔厌氧菌荚膜的氨基酸组成，结果显示：３种荚膜氨基酸组成基本相似，谷氨酸、丙氨酸和甘氨酸为主要氨基酸组成成份。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示多条带，说明３种荚膜的组成成份比较复杂。